이 연구는 중국국가자연과학재단(National Natural Science Foundation of China, 82000624), 산시성 자연과학 기초 연구 프로그램(2022JQ-899 & 2021JM-268), 산시성 혁신 역량 지원 프로그램(Shaanxi Province Innovation Capability Support Program, 2023KJXX-030), 산시성 중점 R&D 계획 대학 공동 프로젝트-중점 프로젝트(2021GXLH-Z-047), 시안교통대학교 제1부속병원 기관 재단(2021HL-42 & 2021HL-21)의 지원을 받았습니다.

이 연구는 Xi'an Jiaotong University의 동물 실험 윤리위원회의 승인을 받았으며 실험실 동물의 관리 및 사용에 대한 지침에 따라 수행되었습니다.
1. 비장 적출
<ol><li>무게가 250-280g인 수컷 Sprague Dawley 쥐를 사용하십시오. 온도와 습도가 조절되는 방에 쥐를 수용하고 수술 전 금식을 제외하고는 즉시 음식과 물을 제공하십시오.</li>
	<li>수술 1시간 전에 진통제로 부프레노르핀(0.05mL/kg)을 피하 주사합니다. 이소플루란 흡입으로 쥐를 마취시킵니다. 플렉시글라스 상자에서 유도 마취를 위해 5% 이소플루란의 1.5L/min의 유속을 사용하고 마스크를 통해 2% 이소플루란의 0.6-0.8L/min의 유속으로 마취를 유지합니다. 발가락을 끼워 마취의 깊이를 확인합니다.</li>
	<li>전기 면도기를 사용하여 복부 전체의 피부를 면도하십시오. 수술 테이블에 쥐를 누운 자세로 고정합니다. 음경 등쪽 정맥을 통해 헤파린화 식염수 2mL(헤파린 1,000U)를 주입하여 전신 항응고를 달성합니다. 포비돈 요오드 용액으로 면도한 피부를 소독하고 멸균 드레이핑 천으로 덮습니다.</li>
	<li>수술용 가위를 사용하여 복부를 십자형으로 절개하고, 지혈 겸자로 스트레칭하여 복강을 노출시키고, 간을 횡격막 쪽으로 뒤집습니다. 위장관을 복부 오른쪽으로 바깥쪽으로 펴고 촉촉한 거즈로 덮습니다.</li>
	<li>비장 위인대를 조심스럽게 분리하고 절단하여 비장 하부를 노출시킵니다. 참고: 약 3.0cm x 0.6cm x 0.6cm 크기의 붉은색을 띤 길쭉한 구조로 나타나는 비장은 왼쪽 복부에서 확인할 수 있습니다.</li>
	<li>비장 동맥을 따라 절개하여 총간동맥, 위십이지장 동맥, 비장 동맥을 점차적으로 분리하고 노출시킵니다. 위십이지장 동맥과 총간동맥을 결찰하고 절단하면서 주변 조직을 점진적으로 해리합니다.</li>
	<li>비장을 오른쪽으로 뒤집어 복부 대동맥을 노출시킵니다. 부드럽게 둔하게 절제하고 면봉을 사용하여 복부 대동맥과 복강 줄기를 노출시킵니다. 셀리악병 줄기의 가지 위와 아래에 약 3cm 길이의 3-0 실크 봉합사를 놓고 셀리악 줄기의 가지 위에 약 10cm 길이의 6-0 실크 봉합사를 놓습니다.</li>
	<li>복부 대동맥을 복강 줄기의 가지 아래와 위로 합자합니다. 동맥 가지를 작게 절개합니다. 6-0 실크 봉합사를 부드럽게 들어 올리고 24G 정맥 카테터를 복강 줄기를 따라 비장 동맥에 삽입한 다음 결찰하고 고정합니다.</li>
	<li>4mL/분의 속도로 주사기 펌프를 사용하여 헤파린화 생리식염수(25U/mL)를 50mL 부피로 주입합니다. 동시에 주입된 액체가 비장 밖으로 흐를 수 있도록 유출 채널로 문맥을 절단합니다. 동물은 exsanguination에 의해 안락사됩니다.</li>
	<li>비장의 주변 조직을 조심스럽게 절개하여 췌장이 손상되지 않도록 하면서 주요 부속 혈관을 보존합니다.</li>
	<li>비장 주변에 누출이 있는지 확인한 다음 비장과 췌장을 제거하고 생리식염수로 헹굽니다. 참고: 쥐의 비장과 췌장은 밀접하게 연결되어 있으며 췌장은 비장 동맥을 감싸고 있습니다. 비장을 따로 제거하면 수많은 작은 혈관을 결찰하는 것이 어려울 수 있습니다. 이 절차에서는 비장을 췌장과 함께 제거합니다. 탈세포화 후 비장과 췌장이 투명해지고 미세혈관이 보이게 되어 혈관이 온전한 비장의 보존을 용이하게 합니다.</li>
	<li>비장을 생리식염수로 채워진 50mL 원심분리 튜브에 넣고 -80°C 냉동고에 보관합니다. 알림: 비장 동맥에 삽입된 비장과 정맥 카테터는 관류 실험 중 편리한 연결을 위해 함께 냉동 보존됩니다.</li>
</ol>2. 비장 탈세포화
<ol><li>멸균 용기에서 동결-해동 과정을 3회 반복하여 비장 세포를 용해합니다. 참고: 동결-해동 사이클은 스캐폴드 탈셀룰라화에 사용되는 물리적 방법입니다. 비장 조직을 -80°C의 냉동고에 밤새 넣어 얼린 다음 저온 환경에서 제거하고 실온 또는 37°C 수조에 넣어 해동합니다. 이 동결 및 해동 과정이 3-6회 반복되어 세포막을 파괴하고 세포 용해를 일으킵니다.</li>
	<li>연동 펌프, 2L 리저버, 내경 2.4mm의 실리콘 튜브 및 버블 트랩으로 구성된 클린 벤치 내에 관류 시스템을 설정합니다(그림 1).</li>
	<li>관류 시스템에 탈이온수(ddH2O)를 채우고 10분 동안 계속 작동시킵니다.</li>
	<li>채취한 비장을 ddH2O 충전 용기에 조심스럽게 옮깁니다.</li>
	<li>비장 동맥에 삽입된 정맥 카테터에 실리콘 튜브를 연결합니다.</li>
	<li>30분 동안 2mL/분의 속도로 ddH2O로 관류를 시작합니다.</li>
	<li>30분 동안 4mL/분의 속도로 ddH2O로 계속 관류합니다.</li>
	<li>4시간 동안 0.1%(w/v) SDS 솔루션으로 관류.</li>
	<li>1%(v/v) Triton X-100 용액을 2시간 동안 관류합니다.</li>
	<li>DSM을 세척하기 위해 4시간 동안 4mL/분의 속도로 PBS를 관류합니다. 알림: 모든 액체의 단방향 관류를 위해 연동 펌프를 사용합니다.</li>
	<li>관류가 완료된 후 췌장과 비장 사이의 혈관 가지를 결찰하고 경절한 다음 췌장을 제거합니다. -20°C에서 10% 페니실린-스트렙토마이신이 함유된 PBS에 담근 깨끗하고 밀봉된 50mL 원심분리기 튜브에 DSM을 보관하여 향후 실험에 사용할 수 있습니다.</li>
</ol>

간 조직 공학을 위한 탈세포화된 쥐 비장 매트릭스 준비

<ol>
	<li>Xu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=State+of+the+art+and+perspectives+in+liver+transplantation.">State of the art and perspectives in liver transplantation.</a> Hepatobiliary Pancreat Dis Int. 22 (1), 1-3 (2023).</li><li>Hautz, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+cell+dynamics+deconvoluted+by+single-cell+RNA+sequencing+in+normothermic+machine+perfusion+of+the+liver.">Immune cell dynamics deconvoluted by single-cell RNA sequencing in normothermic machine perfusion of the liver.</a> Nat Commun. 14 (1), 2285 (2023).</li><li>Cardini, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+confocal+imaging+as+a+novel+tool+to+assess+liver+quality:+insights+from+a+murine+model.">Live confocal imaging as a novel tool to assess liver quality: insights from a murine model.</a> Transplantation. 104 (12), 2528-2537 (2020).</li><li>Ding, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cell-derived+exosomes:+a+promising+therapeutic+agent+for+the+treatment+of+liver+diseases.">Mesenchymal stem cell-derived exosomes: a promising therapeutic agent for the treatment of liver diseases.</a> Int J Mol Sci. 23 (18), 10972 (2022).</li><li>Yaghoubi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prednisolone+and+mesenchymal+stem+cell+preloading+protect+liver+cell+migration+and+mitigate+extracellular+matrix+modification+in+transplanted+decellularized+rat+liver.">Prednisolone and mesenchymal stem cell preloading protect liver cell migration and mitigate extracellular matrix modification in transplanted decellularized rat liver.</a> Stem Cell Res Ther. 13 (1), 36 (2022).</li><li>Uygun, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+reengineering+through+development+of+a+transplantable+recellularized+liver+graft+using+decellularized+liver+matrix.">Organ reengineering through development of a transplantable recellularized liver graft using decellularized liver matrix.</a> Nat Med. 16 (7), 814-820 (2010).</li><li>Xiang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+riboflavin/UVA+cross-linking+on+anti-degeneration+and+promoting+angiogenic+capability+of+decellularized+liver+matrix.">The effect of riboflavin/UVA cross-linking on anti-degeneration and promoting angiogenic capability of decellularized liver matrix.</a> J Biomed Mater Res A. 105 (10), 2662-2669 (2017).</li><li>Liu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implantation+strategy+of+tissue-engineered+liver+based+on+decellularized+spleen+matrix+in+rats.">Implantation strategy of tissue-engineered liver based on decellularized spleen matrix in rats.</a> J South Med Univ. 38 (6), 698-703 (2018).</li><li>Xiang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularized+spleen+matrix+for+reengineering+functional+hepatic-like+tissue+based+on+bone+marrow+mesenchymal+stem+cells.">Decellularized spleen matrix for reengineering functional hepatic-like tissue based on bone marrow mesenchymal stem cells.</a> Organogenesis. 12 (3), 128-142 (2016).</li><li>Gao, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatocyte+culture+in+autologous+decellularized+spleen+matrix.">Hepatocyte culture in autologous decellularized spleen matrix.</a> Organogenesis. 11 (1), 16-29 (2015).</li><li>Liu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemocompatibility+improvement+of+decellularized+spleen+matrix+for+constructing+transplantable+bioartificial+liver.">Hemocompatibility improvement of decellularized spleen matrix for constructing transplantable bioartificial liver.</a> Biomed Mater. 14 (2), 25003 (2019).</li><li>Somuncu, &. #. 2. 1. 4. ;. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularization+concept+in+regenerative+medicine.">Decellularization concept in regenerative medicine.</a> Adv Exp Med Biol. 1212, 71-85 (2020).</li><li>Neishabouri, A., Soltani, K. A., Daghigh, F., Kajbafzadeh, A. M., Majidi, Z. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularization+in+tissue+engineering+and+regenerative+medicine:+evaluation,+modification,+and+application+methods.">Decellularization in tissue engineering and regenerative medicine: evaluation, modification, and application methods.</a> Front Bioeng Biotech. 10, 805299 (2022).</li><li>Brown, M., Li, J., Moraes, C., Tabrizian, M., Li-Jessen, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularized+extracellular+matrix:+New+promising+and+challenging+biomaterials+for+regenerative+medicine.">Decellularized extracellular matrix: New promising and challenging biomaterials for regenerative medicine.</a> Biomaterials. 289, 121786 (2022).</li><li>Gui, L., Muto, A., Chan, S. A., Breuer, C. K., Niklason, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+decellularized+human+umbilical+arteries+as+small-diameter+vascular+grafts.">Development of decellularized human umbilical arteries as small-diameter vascular grafts.</a> Tissue Eng Pt A. 15 (9), 2665-2676 (2009).</li><li>Li, T., Javed, R., Ao, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xenogeneic+decellularized+extracellular+matrix-based+biomaterials+For+peripheral+nerve+repair+and+regeneration.">Xenogeneic decellularized extracellular matrix-based biomaterials For peripheral nerve repair and regeneration.</a> Curr Neuropharmacol. 19 (12), 2152-2163 (2021).</li><li>Crapo, P. M., Gilbert, T. W., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+overview+of+tissue+and+whole+organ+decellularization+processes.">An overview of tissue and whole organ decellularization processes.</a> Biomaterials. 32 (12), 3233-3243 (2011).</li></ol>

저자는 이해 상충이 없다고 선언했습니다.

BAL은 말기 간 질환의 치료를 위한 효과적인 접근법이며, 특히 현재 기증 장기의 부족으로 인해 간 이식이 방해를 받는 경우에 효과적이다6. BAL을 생성하기 위한 유망한 옵션은 고유 간의 자연적인 ECM과 혈관 구조를 보존하는 DLM을 활용하는 것입니다. 그러나 인간 DLM의 희소성과 동물 DLM과 관련된 감염 및 면역원성의 잠재적 위험은 상당한 한계를 제시합니다. 이 문제를 해결하기 ...

간 이식은 말기 간 질환에 대한 유일한 최종 치료법으로 남아있습니다 1,2,3. 그러나 기증 장기의 심각한 부족과 품질 저하로 인해 대체 치료법의 필요성이 높아졌다4. 재생 의학 분야에서는 탈세포화 간 매트릭스(DLM)를 활용하는 생체 인공 간(BAL)이 유망한 솔루션으로 부상했습니다 5,6,7. DLM은 복잡한 미세혈관 네트워크와 ECM의 구성 요소를 포함한 원래의 간 구조를 보존하여 간 질환을 완화할 수 있는 이식 가능한 BAL을 만들기 위한 골격을 제공합니다.
이러한 약속에도 불구하고 이 기술의 채택은 특히 적합한 DLM을 소싱하는 데 어려움을 겪고 있습니다. 인간 유래 DLM은 공급이 부족한 반면 동물에서 유래한 DLM은 질병 전염 및 면역 거부 반응의 위험이 있습니다. 혁신적인 접근 방식으로, 우리의 연구는 BAL 8,9,10,11의 기초로 탈세포화 비장 매트릭스(DSM)의 사용을 탐구했습니다. 비장은 문맥 고혈압, 외상성 파열, 특발성 혈소판 감소성 자반증, 심장사 후 헌혈과 같은 다양한 의료 상황에서 더 쉽게 사용할 수 있습니다. 따라서 비장은 연구 목적으로 간보다 더 널리 이용할 수 있습니다. 비장 절제술을 받은 환자는 심각한 질환을 앓고 있지 않아 비장의 불필요 가능성을 더욱 확인시켜줍니다. 비장의 미세환경, 특히 세포외 기질과 정현파는 간의 미세환경과 유사합니다. 따라서 비장은 간세포 이식 연구에서 세포 접착 및 증식에 적합한 장기입니다. 이러한 연구 결과를 바탕으로 이전 연구에서 DSM은 DLM과 유사한 미세 구조 및 구성 요소를 공유하고 알부민 및 요소 생성을 포함한 간세포의 생존 및 기능을 지원할 수 있음을 입증했습니다. 또한 DSM은 골수 중간엽 줄기 세포의 간 분화를 향상시켜 개선되고 일관된 기능을 제공하는 것으로 나타났습니다.
헤파린으로 처리된 DSM을 사용함으로써 효과적인 단기 항응고 및 부분적인 간 기능 보상을 입증할 수 있는 기능성 BAL을 설계했습니다11. 결과적으로 이 3차원 DSM은 간 조직 공학 및 세포 치료의 발전에 중요한 가능성을 가지고 있습니다. 이 연구에서는 ECM의 미세 구조와 구성 요소를 보존하는 쥐 비장을 채취하고 DSM을 준비하는 자세한 방법을 제시합니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anesthesia Machine</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>tabletop</td>
			<td>animal anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>bubble trap</td>
			<td>Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd.</td>
			<td>pore diameter: 5 &#956;m</td>
			<td>prevent air bubbles</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td>TIPR Pharmaceutical Responsible Co.,Ltd</td>
			<td></td>
			<td>an analgesic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostatic Forceps</td>
			<td>Shanghai Medical Instruments&#160; Co., Ltd</td>
			<td>J31020</td>
			<td>surgical tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparinized Saline</td>
			<td>SPH No.1 Biochemical &#38; Pharmaceutical Co., LTD&#160;</td>
			<td></td>
			<td>prevent the formation of thrombosis&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>RWD life Science Co.</td>
			<td></td>
			<td>anesthetic:for the induction and maintenanceof anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin&#160;</td>
			<td>Beyotime Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>C0222</td>
			<td>antibiotics in vitro to prevent microbial contamination</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic Pump</td>
			<td>Baoding Longer Precision Pump Co., Ltd.</td>
			<td>BT100-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-Buffered Saline</td>
			<td>Shanghai Titan Scientific Co., Ltd.</td>
			<td>4481228</td>
			<td>phosphoric acid buffer salt solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone Tube</td>
			<td>Baoding Longer Precision Pump Co., Ltd.</td>
			<td>2.4&#215;0.8mm</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silk Suture</td>
			<td>Yangzhou Jinhuan Medical Instrument Factory</td>
			<td>6-0 and 3-0</td>
			<td>ligate blood vessels</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Dodecyl Sulfate</td>
			<td>Shanghai Titan Scientific Co., Ltd.</td>
			<td>151-21-3</td>
			<td>ionic detergent, dissolves both cell and nuclear membranes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe Pump</td>
			<td>Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd</td>
			<td>BeneFusion SP5</td>
			<td>intravenous infusion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Shanghai Titan Scientific Co., Ltd.</td>
			<td>9002-93-1</td>
			<td>non-ionic detergent, disrupts lipid-lipid, lipid-protein, and DNA-protein interactions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Venous Catheter</td>
			<td>B. Braun Company</td>
			<td>24G</td>
			<td>inserting the spleen artery</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fabrication of decellularized spleen matrix derived from rats

간 이식은 말기 간 질환의 주요 치료법입니다. 그러나 기증 장기의 부족과 불충분한 품질로 인해 대체 요법의 개발이 필요합니다. 탈세포화된 간 기질(DLM)을 활용하는 생체 인공 간(BAL)이 유망한 솔루션으로 부상하고 있습니다. 그러나 적절한 DLM을 소싱하는 것은 여전히 어려운 과제입니다. 탈세포화 비장 기질(DSM)의 사용은 BAL의 기초로 연구되어 쉽게 사용할 수 있는 대안을 제공합니다. 이 연구에서는 쥐의 비장을 채취하고 동결-해동 주기와 탈세포화 시약을 사용한 관류를 조합하여 탈세포화했습니다. 이 프로토콜은 DSM 내에서 세포외 기질(ECM)의 미세 구조와 구성 요소를 보존했습니다. 완전한 탈세포화 공정에는 약 11시간이 소요되어 DSM 내에서 온전한 ECM을 얻을 수 있었습니다. 조직학적 분석을 통해 ECM의 구조와 조성을 유지하면서 세포 성분이 제거되는 것을 확인했습니다. 제시된 프로토콜은 DSM을 획득하기 위한 포괄적인 방법을 제공하여 간 조직 공학 및 세포 치료에 잠재적인 응용 분야를 제공합니다. 이러한 발견은 말기 간 질환 치료를 위한 대체 접근법 개발에 기여합니다.

Liver transplantation remains the only definitive treatment for end-stage liver disease1,2,3. However, the critical shortage and declining quality of donor organs have heightened the need for alternative treatments4. In the realm of regenerative medicine, bioartificial livers (BALs) utilizing decellularized liver matrix (DLM) have emerged as promising solutions5,6,7. The DLM preserves the original liver structure, including its intricate microvascular network and components of the ECM, offering a scaffold for creating transplantable BALs that could potentially alleviate liver diseases.
Despite the promise, the adoption of this technology faces challenges, particularly in sourcing suitable DLMs. Human-derived DLMs are in short supply, while those from animal sources carry the risks of disease transmission and immune rejection. In an innovative approach, our research has explored the use of a decellularized spleen matrix (DSM) as a foundation for BALs8,9,10,11. Spleens are more readily available in various medical situations, such as portal hypertension, traumatic rupture, idiopathic thrombocytopenic purpura, and donation after cardiac death. Therefore, spleens are more widely available than livers for research purposes. Patients who have undergone splenectomies do not suffer from severe conditions, further confirming the dispensability of the spleen. The microenvironment of the spleen, particularly the extracellular matrix and sinusoids, is similar to that of the liver. This makes the spleen a suitable organ for cell adhesion and proliferation in hepatocyte transplantation research. Based on these findings, our previous investigations have demonstrated that DSMs share comparable microstructures and components with DLMs and can support the survival and function of hepatocytes, including albumin and urea production. Furthermore, DSMs have been shown to enhance the hepatic differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells, leading to improved and consistent functionality.
By employing DSMs treated with heparin, we have engineered functional BALs capable of demonstrating effective short-term anticoagulation and partial liver function compensation11. Consequently, this three-dimensional DSM holds significant promise for the advancement of liver tissue engineering and cell therapy. In this work, we present the detailed methods of harvesting rat spleens and preparing DSM that preserve the microstructures and components of the ECM.

저자 스포트라이트: 생체 인공 간을 위한 탈세포화된 비장 매트릭스의 활용

Rats에서 유래한 Decellularized Spleen Matrix의 제작

We purpose a novel strategy that involves employing a decellularized spleen matrix as an alternative scaffold to bioartificial livers. We showed the detailed procedure of harvesting rat spleen and preparing decellularized spleen matrix that preserves the macrostructures and the components of the extracellular matrix. Our protocol provides a readily available spleen matrix as an alternative to scarce donor livers.Our protocol present a method for the preparation of decellularized spleen matrices. Demonstrating efficiency, stability, and minimal invasiveness, this method maintains the spleen inherent architecture, composition, and the natural vascular network. It offers the scaffold for cell implantation and three-dimensional dynamic culture, thereby establishing a basis for advancing investigations in tissue-engineered liver.

이 프로토콜은 쥐 비장의 탈세포화를 위해 반복적인 동결-해동 주기와 탈세포화 시약을 사용한 관류의 조합을 활용했습니다. 비장의 완전한 탈세포화는 약 11시간 내에 달성되었습니다(그림 2A). 탈세포화 과정을 통해 비장의 색은 점차 짙은 빨간색에서 얼룩덜룩하고 밝은 빨간색으로 변하고 결국에는 흰색 반투명 모양으로 변했습니다(그림 2B). 전체적...

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탈세포화된 비장 매트릭스(DSM)는 간 조직 공학 분야에서 유망한 응용 분야를 보유하고 있습니다. 이 프로토콜은 쥐 비장 채취, 관류를 통한 탈세포화, 결과 DSM을 평가하여 특성을 확인하는 것을 포함하는 쥐 DSM을 준비하는 절차를 간략하게 설명합니다.

Liver transplantation is the primary treatment for end-stage liver disease. However, the shortage and inadequate quality of donor organs necessitate the ...

우리는 생체 인공 간의 대체 골격으로 탈세포화된 비장 매트릭스를 사용하는 것과 관련된 새로운 전략을 목표로 합니다. 쥐의 비장을 채취하고 세포외 기질의 거시구조와 구성 요소를 보존하는 탈세포화된 비장 기질을 준비하는 자세한 절차를 보여주었습니다. 당사의 프로토콜은 부족한 기증자 간의 대안으로 쉽게 사용할 수 있는 비장 매트릭스를 제공합니다.우리의 프로토콜은 탈세포화된 비장 매트릭스의 준비를 위한 방법을 제시합니다. 효율성, 안정성 및 최소 침습성을 입증하는 이 방법은 비장 고유의 구조, 구성 및 자연 혈관 네트워크를 유지합니다. 이는 세포 이식 및 3차원 동적 배양을 위한 골격을 제공하여 조직 공학 간의 연구를 발전시키기 위한 기반을 마련합니다.

fabrication-of-decellularized-spleen-matrix-derived-from-rats

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Fabrication of Decellularized Spleen Matrix Derived from Rats

443 조회수.  The First Affiliated Hospital of Xi'an Jiaotong University. 우리는 생체 인공 간의 대체 골격으로 탈세포화된 비장 매트릭스를 사용하는 것과 관련된 새로운 전략을 목표로 합니다. 쥐의 비장을 채취하고 세포외 기질의 거시구조와 구성 요소를 보존하는 탈세포화된 비장 기질을 준비하는 자세한 절차를 보여주었습니다. 당사의 프로토콜은 부족한 기증자 간의 대안으로 쉽게 사용할 수 있는 비장 매트릭스를 제공합니다.우리의 ?...

비디오: 저자 스포트라이트: 생체 인공 간을 위한 탈세포화된 비장 매트릭스의 활용

Liver transplantation is the primary treatment for end-stage liver disease. However, the shortage and inadequate quality of donor organs necessitate the development of alternative therapies. Bioartificial livers (BALs) utilizing decellularized liver matrix (DLM) have emerged as promising solutions. However, sourcing suitable DLMs remains challenging. The use of a decellularized spleen matrix (DSM) has been explored as a foundation for BALs, offering a readily available alternative. In this study, rat spleens were harvested and decellularized using a combination of freeze-thaw cycles and perfusion with decellularization reagents. The protocol preserved the microstructures and components of the extracellular matrix (ECM) within the DSM. The complete decellularization process took approximately 11 h, resulting in an intact ECM within the DSM. Histological analysis confirmed the removal of cellular components while retaining the ECM's structure and composition. The presented protocol provides a comprehensive method for obtaining DSM, offering potential applications in liver tissue engineering and cell therapy. These findings contribute to the development of alternative approaches for the treatment of end-stage liver disease.

The decellularized spleen matrix (DSM) holds promising applications in the field of liver tissue engineering. This protocol outlines the procedure for preparing rat DSM, which includes harvesting rat spleens, decellularizing them through perfusion, and evaluating the resulting DSM to confirm its characteristics.