Este trabajo contó con el apoyo de la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (82000624), el Programa de Investigación Básica de Ciencias Naturales de Shaanxi (2022JQ-899 y 2021JM-268), el Programa de Apoyo a la Capacidad de Innovación de la Provincia de Shaanxi (2023KJXX-030), el Plan Clave de Investigación y Desarrollo de la Provincia de Shaanxi, el Proyecto Conjunto Universitario-Proyecto Clave (2021GXLH-Z-047), la Fundación Institucional del Primer Hospital Afiliado de la Universidad de Xi'an Jiaotong (2021HL-42 y 2021HL-21).

Este estudio fue aprobado por el Comité de Ética de los Experimentos con Animales de la Universidad de Xi'an Jiaotong y se llevó a cabo de acuerdo con las directrices para el cuidado y uso de animales de laboratorio.
1. Recolección de bazo
<ol><li>Utilice ratas Sprague Dawley macho que pesen entre 250 y 280 g. Aloje a las ratas en habitaciones con temperatura y humedad controladas, y bríndeles comida y agua ad libitum, excepto en ayunas antes de la cirugía.</li>
	<li>Inyectar buprenorfina por vía subcutánea (0,05 mL/kg) como analgésico 1 h antes de la operación. Anestesiar a la rata por inhalación de isoflurano. Utilice un caudal de 1,5 L/min de isoflurano al 5% para la anestesia de inducción en una caja de plexiglás y mantenga la anestesia con un caudal de 0,6-0,8 L/min de isoflurano al 2% a través de una mascarilla. Confirme la profundidad de la anestesia pellizcando los dedos de los pies.</li>
	<li>Usa una afeitadora eléctrica para afeitar la piel de todo el abdomen. Asegure la rata en posición supina sobre la mesa quirúrgica. Inyectar 2 mL de solución salina heparinizada (1.000 U de heparina) a través de la vena dorsal del pene para lograr la anticoagulación sistémica. Desinfecte la piel afeitada con una solución de povidona yodada y cúbrala con un paño estéril.</li>
	<li>Haga una incisión cruciforme con tijeras quirúrgicas en el abdomen, exponga la cavidad abdominal estirándola con las pinzas hemostáticas y voltee el hígado hacia el diafragma. Exteriorizar el tracto gastrointestinal hacia el lado derecho del abdomen y cubrirlo con una gasa húmeda.</li>
	<li>Separe y corte cuidadosamente el ligamento esplenogástrico para exponer el hilio esplénico. NOTA: En el abdomen izquierdo se puede identificar el bazo, que aparece como una estructura alargada de color rojizo, de aproximadamente 3,0 cm x 0,6 cm x 0,6 cm.</li>
	<li>Separe y exponga gradualmente la arteria hepática común, la arteria gastroduodenal y la arteria esplénica mediante disección a lo largo del hilio esplénico. Ligar y cortar la arteria gastroduodenal y la arteria hepática común mientras disocia progresivamente el tejido circundante.</li>
	<li>Voltea el bazo hacia el lado derecho para exponer la aorta abdominal. Realice suavemente una disección roma y exponga la aorta abdominal y el tronco celíaco con hisopos de algodón. Colocar una sutura de seda 3-0, de aproximadamente 3 cm de longitud, por encima y por debajo de las ramas del tronco celíaco, y colocar una sutura de seda 6-0, de aproximadamente 10 cm de longitud, en la rama del tronco celíaco.</li>
	<li>Ligadura de la aorta abdominal por debajo y por encima de las ramas del tronco celíaco. Haga una pequeña incisión en la rama arterial. Levante suavemente la sutura de seda 6-0, inserte un catéter venoso de 24 G en la arteria esplénica a lo largo del tronco celíaco, y látelo y asegúrelo.</li>
	<li>Utilizando una bomba de jeringa a una velocidad de 4 mL/min, infunda solución salina normal heparinizada (25 U/mL) a un volumen de 50 mL. Al mismo tiempo, corte la vena porta como un canal de salida para permitir que el líquido infundido fluya fuera del bazo. El animal es sacrificado por exanguinación.</li>
	<li>Diseccionar cuidadosamente el tejido circundante del bazo, evitando dañar el páncreas, al tiempo que se conservan los principales vasos accesorios.</li>
	<li>Verifique si hay fugas alrededor del bazo, luego retire el bazo y el páncreas y enjuáguelos con solución salina normal. NOTA: El bazo y el páncreas de las ratas están estrechamente conectados, con el páncreas envolviendo la arteria esplénica. Si el bazo se extirpa por separado, puede ser difícil ligar numerosos vasos sanguíneos pequeños. En este procedimiento, se extirpa el bazo junto con el páncreas. Después de la descelularización, el bazo y el páncreas se vuelven transparentes y la microvasculatura es visible, lo que facilita la preservación del bazo con vasos sanguíneos intactos.</li>
	<li>Transfiera el bazo a un tubo de centrífuga de 50 ml lleno de solución salina normal y guárdelo en un congelador a -80 °C. NOTA: El bazo y el catéter venoso insertados en la arteria esplénica se criopreservarán juntos para una conexión conveniente durante los experimentos de perfusión.</li>
</ol>2. Descelularización del bazo
<ol><li>Repita el ciclo de congelación-descongelación 3 veces en un recipiente estéril para lisar las células del bazo. NOTA: El ciclo de congelación-descongelación es un método físico utilizado para la descelularización del andamio. El tejido del bazo se coloca en un congelador a -80 °C durante la noche para su congelación, luego se retira del ambiente a baja temperatura y se coloca en un baño de agua a temperatura ambiente o 37 °C para descongelar. Este proceso de congelación y descongelación se repite de 3 a 6 veces, lo que altera las membranas celulares y conduce a la lisis celular.</li>
	<li>Configure un sistema de perfusión dentro de un banco limpio compuesto por una bomba peristáltica, un depósito de 2 L, un tubo de silicona con un diámetro interior de 2,4 mm y una trampa de burbujas (Figura 1).</li>
	<li>Llene el sistema de perfusión con agua desionizada (ddH2O) y manténgalo en funcionamiento durante 10 min.</li>
	<li>Transfiera con cuidado el bazo extraído al recipiente lleno de ddH2O.</li>
	<li>Conecte el tubo de silicona al catéter venoso que se ha insertado en la arteria esplénica.</li>
	<li>Iniciar la perfusión con ddH2O a una velocidad de 2 mL/min durante 30 min.</li>
	<li>Continuar la perfusión con ddH2O a una velocidad de 4 mL/min durante 30 min.</li>
	<li>Perfundir con una solución SDS al 0,1% (p/v) durante 4 h.</li>
	<li>Perfundir con una solución Triton X-100 al 1% (v/v) durante 2 h.</li>
	<li>Perfundir con PBS a una velocidad de 4 mL/min durante 4 h para lavar el DSM. NOTA: Uso de la bomba peristáltica para la perfusión unidireccional de todos los líquidos.</li>
	<li>Una vez completada la perfusión, ligar y seccionar las ramas vasculares entre el páncreas y el bazo, y luego extirpar el páncreas. Guarde el DSM en un tubo de centrífuga limpio y sellado de 50 mL, empapado en PBS que contenga un 10% de penicilina-estreptomicina a -20 °C, hasta que esté listo para su uso en futuros experimentos.</li>
</ol>

Preparación de la matriz de bazo de rata descelularizada para la ingeniería de tejido hepático

<ol>
	<li>Xu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=State+of+the+art+and+perspectives+in+liver+transplantation.">State of the art and perspectives in liver transplantation.</a> Hepatobiliary Pancreat Dis Int. 22 (1), 1-3 (2023).</li><li>Hautz, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+cell+dynamics+deconvoluted+by+single-cell+RNA+sequencing+in+normothermic+machine+perfusion+of+the+liver.">Immune cell dynamics deconvoluted by single-cell RNA sequencing in normothermic machine perfusion of the liver.</a> Nat Commun. 14 (1), 2285 (2023).</li><li>Cardini, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+confocal+imaging+as+a+novel+tool+to+assess+liver+quality:+insights+from+a+murine+model.">Live confocal imaging as a novel tool to assess liver quality: insights from a murine model.</a> Transplantation. 104 (12), 2528-2537 (2020).</li><li>Ding, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cell-derived+exosomes:+a+promising+therapeutic+agent+for+the+treatment+of+liver+diseases.">Mesenchymal stem cell-derived exosomes: a promising therapeutic agent for the treatment of liver diseases.</a> Int J Mol Sci. 23 (18), 10972 (2022).</li><li>Yaghoubi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prednisolone+and+mesenchymal+stem+cell+preloading+protect+liver+cell+migration+and+mitigate+extracellular+matrix+modification+in+transplanted+decellularized+rat+liver.">Prednisolone and mesenchymal stem cell preloading protect liver cell migration and mitigate extracellular matrix modification in transplanted decellularized rat liver.</a> Stem Cell Res Ther. 13 (1), 36 (2022).</li><li>Uygun, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+reengineering+through+development+of+a+transplantable+recellularized+liver+graft+using+decellularized+liver+matrix.">Organ reengineering through development of a transplantable recellularized liver graft using decellularized liver matrix.</a> Nat Med. 16 (7), 814-820 (2010).</li><li>Xiang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+riboflavin/UVA+cross-linking+on+anti-degeneration+and+promoting+angiogenic+capability+of+decellularized+liver+matrix.">The effect of riboflavin/UVA cross-linking on anti-degeneration and promoting angiogenic capability of decellularized liver matrix.</a> J Biomed Mater Res A. 105 (10), 2662-2669 (2017).</li><li>Liu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implantation+strategy+of+tissue-engineered+liver+based+on+decellularized+spleen+matrix+in+rats.">Implantation strategy of tissue-engineered liver based on decellularized spleen matrix in rats.</a> J South Med Univ. 38 (6), 698-703 (2018).</li><li>Xiang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularized+spleen+matrix+for+reengineering+functional+hepatic-like+tissue+based+on+bone+marrow+mesenchymal+stem+cells.">Decellularized spleen matrix for reengineering functional hepatic-like tissue based on bone marrow mesenchymal stem cells.</a> Organogenesis. 12 (3), 128-142 (2016).</li><li>Gao, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatocyte+culture+in+autologous+decellularized+spleen+matrix.">Hepatocyte culture in autologous decellularized spleen matrix.</a> Organogenesis. 11 (1), 16-29 (2015).</li><li>Liu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemocompatibility+improvement+of+decellularized+spleen+matrix+for+constructing+transplantable+bioartificial+liver.">Hemocompatibility improvement of decellularized spleen matrix for constructing transplantable bioartificial liver.</a> Biomed Mater. 14 (2), 25003 (2019).</li><li>Somuncu, &. #. 2. 1. 4. ;. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularization+concept+in+regenerative+medicine.">Decellularization concept in regenerative medicine.</a> Adv Exp Med Biol. 1212, 71-85 (2020).</li><li>Neishabouri, A., Soltani, K. A., Daghigh, F., Kajbafzadeh, A. M., Majidi, Z. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularization+in+tissue+engineering+and+regenerative+medicine:+evaluation,+modification,+and+application+methods.">Decellularization in tissue engineering and regenerative medicine: evaluation, modification, and application methods.</a> Front Bioeng Biotech. 10, 805299 (2022).</li><li>Brown, M., Li, J., Moraes, C., Tabrizian, M., Li-Jessen, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularized+extracellular+matrix:+New+promising+and+challenging+biomaterials+for+regenerative+medicine.">Decellularized extracellular matrix: New promising and challenging biomaterials for regenerative medicine.</a> Biomaterials. 289, 121786 (2022).</li><li>Gui, L., Muto, A., Chan, S. A., Breuer, C. K., Niklason, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+decellularized+human+umbilical+arteries+as+small-diameter+vascular+grafts.">Development of decellularized human umbilical arteries as small-diameter vascular grafts.</a> Tissue Eng Pt A. 15 (9), 2665-2676 (2009).</li><li>Li, T., Javed, R., Ao, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xenogeneic+decellularized+extracellular+matrix-based+biomaterials+For+peripheral+nerve+repair+and+regeneration.">Xenogeneic decellularized extracellular matrix-based biomaterials For peripheral nerve repair and regeneration.</a> Curr Neuropharmacol. 19 (12), 2152-2163 (2021).</li><li>Crapo, P. M., Gilbert, T. W., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+overview+of+tissue+and+whole+organ+decellularization+processes.">An overview of tissue and whole organ decellularization processes.</a> Biomaterials. 32 (12), 3233-3243 (2011).</li></ol>

Los autores han declarado no tener conflictos de intereses.

Los LBA representan un enfoque eficaz para el tratamiento de la enfermedad hepática terminal, especialmente en los casos en que el trasplante hepático se ve obstaculizado por la escasez actual de órganos de donantes6. Una opción prometedora para la creación de BAL es la utilización de DLM, que preserva la MEC natural y la estructura vascular del hígado nativo. Sin embargo, la escasez de DLM humana y los riesgos potenciales de infección e inmunogenicidad asociados con la DLM animal plantean...

El trasplante hepático sigue siendo el único tratamiento definitivo para la enfermedad hepática terminal 1,2,3. Sin embargo, la escasez crítica y la disminución de la calidad de los órganos de los donantes han aumentado la necesidad de tratamientos alternativos4. En el ámbito de la medicina regenerativa, los hígados bioartificiales (BAL) que utilizan matriz hepática descelularizada (DLM) han surgido como soluciones prometedoras 5,6,7. El DLM conserva la estructura hepática original, incluida su intrincada red microvascular y los componentes de la MEC, lo que ofrece un andamio para crear BAL trasplantables que podrían aliviar las enfermedades hepáticas.
A pesar de la promesa, la adopción de esta tecnología se enfrenta a desafíos, especialmente en el abastecimiento de DLM adecuados. Los DLM derivados del ser humano son escasos, mientras que los de origen animal conllevan riesgos de transmisión de enfermedades y rechazo inmunológico. En un enfoque innovador, nuestra investigación ha explorado el uso de una matriz de bazo descelularizada (DSM) como base para las LBA 8,9,10,11. El bazo está más disponible en diversas situaciones médicas, como la hipertensión portal, la ruptura traumática, la púrpura trombocitopénica idiopática y la donación después de la muerte cardíaca. Por lo tanto, el bazo está más ampliamente disponible que el hígado para fines de investigación. Los pacientes que se han sometido a esplenectomías no sufren afecciones graves, lo que confirma aún más la prescindibilidad del bazo. El microambiente del bazo, particularmente la matriz extracelular y los sinusoides, es similar al del hígado. Esto hace que el bazo sea un órgano adecuado para la adhesión y proliferación celular en la investigación del trasplante de hepatocitos. Sobre la base de estos hallazgos, nuestras investigaciones anteriores han demostrado que los DSM comparten microestructuras y componentes comparables con los DLM y pueden apoyar la supervivencia y la función de los hepatocitos, incluida la producción de albúmina y urea. Además, se ha demostrado que los DSM mejoran la diferenciación hepática de las células madre mesenquimales de la médula ósea, lo que conduce a una funcionalidad mejorada y consistente.
Mediante el empleo de DSMs tratados con heparina, hemos diseñado BALs funcionales capaces de demostrar una anticoagulación efectiva a corto plazo y una compensación parcial de la función hepática11. En consecuencia, este DSM tridimensional es muy prometedor para el avance de la ingeniería de tejidos hepáticos y la terapia celular. En este trabajo, presentamos los métodos detallados de recolección de bazo de rata y preparación de DSM que preservan las microestructuras y componentes de la MEC.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anesthesia Machine</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>tabletop</td>
			<td>animal anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>bubble trap</td>
			<td>Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd.</td>
			<td>pore diameter: 5 &#956;m</td>
			<td>prevent air bubbles</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td>TIPR Pharmaceutical Responsible Co.,Ltd</td>
			<td></td>
			<td>an analgesic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostatic Forceps</td>
			<td>Shanghai Medical Instruments&#160; Co., Ltd</td>
			<td>J31020</td>
			<td>surgical tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparinized Saline</td>
			<td>SPH No.1 Biochemical &#38; Pharmaceutical Co., LTD&#160;</td>
			<td></td>
			<td>prevent the formation of thrombosis&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>RWD life Science Co.</td>
			<td></td>
			<td>anesthetic:for the induction and maintenanceof anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin&#160;</td>
			<td>Beyotime Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>C0222</td>
			<td>antibiotics in vitro to prevent microbial contamination</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic Pump</td>
			<td>Baoding Longer Precision Pump Co., Ltd.</td>
			<td>BT100-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-Buffered Saline</td>
			<td>Shanghai Titan Scientific Co., Ltd.</td>
			<td>4481228</td>
			<td>phosphoric acid buffer salt solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone Tube</td>
			<td>Baoding Longer Precision Pump Co., Ltd.</td>
			<td>2.4&#215;0.8mm</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silk Suture</td>
			<td>Yangzhou Jinhuan Medical Instrument Factory</td>
			<td>6-0 and 3-0</td>
			<td>ligate blood vessels</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Dodecyl Sulfate</td>
			<td>Shanghai Titan Scientific Co., Ltd.</td>
			<td>151-21-3</td>
			<td>ionic detergent, dissolves both cell and nuclear membranes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe Pump</td>
			<td>Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd</td>
			<td>BeneFusion SP5</td>
			<td>intravenous infusion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Shanghai Titan Scientific Co., Ltd.</td>
			<td>9002-93-1</td>
			<td>non-ionic detergent, disrupts lipid-lipid, lipid-protein, and DNA-protein interactions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Venous Catheter</td>
			<td>B. Braun Company</td>
			<td>24G</td>
			<td>inserting the spleen artery</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fabrication of decellularized spleen matrix derived from rats

El trasplante de hígado es el tratamiento primario para la enfermedad hepática en etapa terminal. Sin embargo, la escasez y la calidad inadecuada de los órganos de los donantes hacen necesario el desarrollo de terapias alternativas. Los hígados bioartificiales (BAL) que utilizan matriz hepática descelularizada (DLM) han surgido como soluciones prometedoras. Sin embargo, el abastecimiento de DLM adecuados sigue siendo un reto. Se ha explorado el uso de una matriz de bazo descelularizada (DSM) como base para las LBA, ofreciendo una alternativa fácilmente disponible. En este estudio, se recolectaron bazos de rata y se descelularizaron utilizando una combinación de ciclos de congelación-descongelación y perfusión con reactivos de descelularización. El protocolo preservó las microestructuras y componentes de la matriz extracelular (MEC) dentro del DSM. El proceso completo de descelularización duró aproximadamente 11 h, lo que dio como resultado un ECM intacto dentro del DSM. El análisis histológico confirmó la eliminación de componentes celulares conservando la estructura y composición de la MEC. El protocolo presentado proporciona un método integral para la obtención de DSM, ofreciendo aplicaciones potenciales en ingeniería de tejido hepático y terapia celular. Estos hallazgos contribuyen al desarrollo de enfoques alternativos para el tratamiento de la enfermedad hepática en etapa terminal.

Liver transplantation remains the only definitive treatment for end-stage liver disease1,2,3. However, the critical shortage and declining quality of donor organs have heightened the need for alternative treatments4. In the realm of regenerative medicine, bioartificial livers (BALs) utilizing decellularized liver matrix (DLM) have emerged as promising solutions5,6,7. The DLM preserves the original liver structure, including its intricate microvascular network and components of the ECM, offering a scaffold for creating transplantable BALs that could potentially alleviate liver diseases.
Despite the promise, the adoption of this technology faces challenges, particularly in sourcing suitable DLMs. Human-derived DLMs are in short supply, while those from animal sources carry the risks of disease transmission and immune rejection. In an innovative approach, our research has explored the use of a decellularized spleen matrix (DSM) as a foundation for BALs8,9,10,11. Spleens are more readily available in various medical situations, such as portal hypertension, traumatic rupture, idiopathic thrombocytopenic purpura, and donation after cardiac death. Therefore, spleens are more widely available than livers for research purposes. Patients who have undergone splenectomies do not suffer from severe conditions, further confirming the dispensability of the spleen. The microenvironment of the spleen, particularly the extracellular matrix and sinusoids, is similar to that of the liver. This makes the spleen a suitable organ for cell adhesion and proliferation in hepatocyte transplantation research. Based on these findings, our previous investigations have demonstrated that DSMs share comparable microstructures and components with DLMs and can support the survival and function of hepatocytes, including albumin and urea production. Furthermore, DSMs have been shown to enhance the hepatic differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells, leading to improved and consistent functionality.
By employing DSMs treated with heparin, we have engineered functional BALs capable of demonstrating effective short-term anticoagulation and partial liver function compensation11. Consequently, this three-dimensional DSM holds significant promise for the advancement of liver tissue engineering and cell therapy. In this work, we present the detailed methods of harvesting rat spleens and preparing DSM that preserve the microstructures and components of the ECM.

Autor destacado: Utilización de la matriz de bazo descelularizada para hígados bioartificiales

Fabricación de matriz de bazo descelularizada derivada de ratas

We purpose a novel strategy that involves employing a decellularized spleen matrix as an alternative scaffold to bioartificial livers. We showed the detailed procedure of harvesting rat spleen and preparing decellularized spleen matrix that preserves the macrostructures and the components of the extracellular matrix. Our protocol provides a readily available spleen matrix as an alternative to scarce donor livers.Our protocol present a method for the preparation of decellularized spleen matrices. Demonstrating efficiency, stability, and minimal invasiveness, this method maintains the spleen inherent architecture, composition, and the natural vascular network. It offers the scaffold for cell implantation and three-dimensional dynamic culture, thereby establishing a basis for advancing investigations in tissue-engineered liver.

Este protocolo utilizó una combinación de ciclos repetidos de congelación-descongelación y perfusión con reactivos de descelularización para la descelularización del bazo de rata. La descelularización completa del bazo se logró en aproximadamente 11 h (Figura 2A). A lo largo del proceso de descelularización, el color del bazo pasó gradualmente de un rojo intenso a un rojo claro moteado y, finalmente, a una apariencia blanca translúcida (Figura 2B). L...

Watch this Scientific Journal Video about Utilization of Decellularized Spleen Matrix for Bioartificial Livers at JoVE.com

La matriz de bazo descelularizada (DSM) tiene aplicaciones prometedoras en el campo de la ingeniería de tejidos hepáticos. Este protocolo describe el procedimiento para preparar el DSM de rata, que incluye la recolección de bazo de rata, la descelularización de los mismos mediante perfusión y la evaluación del DSM resultante para confirmar sus características.

Liver transplantation is the primary treatment for end-stage liver disease. However, the shortage and inadequate quality of donor organs necessitate the ...

Proponemos una estrategia novedosa que consiste en emplear una matriz de bazo descelularizada como andamiaje alternativo a los hígados bioartificiales. Mostramos el procedimiento detallado de recolección de bazo de rata y preparación de matriz de bazo descelularizada que preserva las macroestructuras y los componentes de la matriz extracelular. Nuestro protocolo proporciona una matriz de bazo fácilmente disponible como alternativa a los escasos hígados de donantes.Nuestro protocolo presenta un método para la preparación de matrices de bazo descelularizadas. Al demostrar eficiencia, estabilidad y mínima invasividad, este método mantiene la arquitectura inherente del bazo, la composición y la red vascular natural. Ofrece el andamiaje para la implantación celular y el cultivo dinámico tridimensional, estableciendo así una base para avanzar en las investigaciones en el hígado modificado por tejidos.

fabrication-of-decellularized-spleen-matrix-derived-from-rats

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Fabrication of Decellularized Spleen Matrix Derived from Rats

443 vistas.  The First Affiliated Hospital of Xi'an Jiaotong University. Proponemos una estrategia novedosa que consiste en emplear una matriz de bazo descelularizada como andamiaje alternativo a los hígados bioartificiales. Mostramos el procedimiento detallado de recolección de bazo de rata y preparación de matriz de bazo descelularizada que preserva las macroestructuras y los componentes de la matriz extracelular. Nuestro protocolo proporciona una matriz de bazo fácilmente disponible como alternativa a los escasos hígados de donantes.Nuestro protocol...

Video: Autor destacado: Utilización de la matriz de bazo descelularizada para hígados bioartificiales

Liver transplantation is the primary treatment for end-stage liver disease. However, the shortage and inadequate quality of donor organs necessitate the development of alternative therapies. Bioartificial livers (BALs) utilizing decellularized liver matrix (DLM) have emerged as promising solutions. However, sourcing suitable DLMs remains challenging. The use of a decellularized spleen matrix (DSM) has been explored as a foundation for BALs, offering a readily available alternative. In this study, rat spleens were harvested and decellularized using a combination of freeze-thaw cycles and perfusion with decellularization reagents. The protocol preserved the microstructures and components of the extracellular matrix (ECM) within the DSM. The complete decellularization process took approximately 11 h, resulting in an intact ECM within the DSM. Histological analysis confirmed the removal of cellular components while retaining the ECM's structure and composition. The presented protocol provides a comprehensive method for obtaining DSM, offering potential applications in liver tissue engineering and cell therapy. These findings contribute to the development of alternative approaches for the treatment of end-stage liver disease.

The decellularized spleen matrix (DSM) holds promising applications in the field of liver tissue engineering. This protocol outlines the procedure for preparing rat DSM, which includes harvesting rat spleens, decellularizing them through perfusion, and evaluating the resulting DSM to confirm its characteristics.