이 연구는 캐나다 자연 과학 및 공학 연구 위원회 디스커버리 그랜트, INNOVAIT 프로그램, 커밍 의학 연구 기금, 캐나다 혁신 재단(프로젝트 36703), 호치키스 뇌 연구소 CAPRI 보조금 및 앨버타 파킨슨 협회 기금의 일부 지원을 받았습니다. GBP는 Canadian Institutes for Health Research(FDN-143290) 및 Campus Alberta Innovates Chair Program의 지원을 인정합니다.

고정밀 TUS: 음향 및 열 시뮬레이션을 통한 계획 및 실행

저자는 선언할 이해 상충이 없습니다.

이 방법에서는 TUS를 뇌에 적용하여 발생할 수 있는 열적, 기계적 효과를 예측하고 평가하기 위해 대상별 시뮬레이션을 수행합니다. 참가자 간의 데이터 세트는 부정확한 시뮬레이션으로 이어질 수 있으므로 별도로 신중하게 문서화해야 합니다. 수많은 참가자 스캔이 수집되고 계획이 함께 수행되는 경우 이미지 및 폴더의 적절한 레이블을 확인하고 파일을 정렬 및 저장할 때 주의하여 진행하는 ?...

일반적으로 사용되는 비침습적 신경자극 기술에는 경두개 직류 자극(tDCS) 및 경두개 자기 자극(TMS)이 포함됩니다. 그러나 둘 다 침투 깊이가 제한적이고 정밀도가 낮습니다 1,2. 대조적으로, 경두개 초음파(TUS)는 신경 활동을 강화하거나 억제할 수 있는 새로운 비침습적 기술입니다 3,4,5 밀리미터 정밀도로 피질 또는 피질하 구조를 표적으로 삼을 수 있습니다 6,7. 설치류 4,8,9, 토끼10, 양 5,11, 돼지6 및 비인간 영장류 7,12,13,14를 사용한 동물 모델은 TUS의 효능과 안전성을 보여주었습니다. 연구에 따르면 다양한 뇌 영역을 표적으로 삼으면 쥐의 경우 사지 움직임8, 돼지의 경우 체성 감각 유발 전위(SSEP), 비인간 영장류의 시운동 활동12, 인지 및 동기 부여 의사 결정의 변화13를 유발할 수 있습니다. 인간의 경우, TUS는 1차 운동 피질(15,16)을 표적으로 할 때 반응 시간 과제에 대한 운동 유발 전위(MEPs)와 성능을 변화시키고, 체성 감각 피질(17)과 감각 시상(18)을 표적으로 할 때 촉각 구별 과제 및 SSEP에 대한 성능을 변화시키는 것으로 관찰되었습니다. 조직학적 분석에서 돼지 6, 양 5,11, 토끼10 및 비인간 영장류14에서 TUS와 관련된 총체적 또는 미세한 구조적 변화가 나타나지 않았으며, 다른 비침습적 신경자극 기법19과 유의하게 다른 부작용은 나타나지 않았다.
TUS는 200kHz에서 700kHz 사이의 주파수에서 펄스 저강도 집속 초음파를 사용하여 일시적인 신경 조절 효과를 생성합니다. 일반적인 제자리 공간 피크 펄스 평균 강도(Isppa)는 10W/cm2 이하이며, 보고된 듀티 사이클(초음파가 켜져 있는 시간의 백분율)은 인간 20,21,22,23,24에서 0.5%에서 70% 사이입니다. TUS 신경 조절의 메커니즘은 주로 이온 채널25,26,27의 개방으로 이어지는 지질막의 기계적 교반을 포함하는 것으로 제안되었지만, 가능한 열 및 캐비테이션 효과는 무시할 수 없습니다. 기계적(MI) 및 열(TI) 지수를 통해 평가됩니다. MI는 TUS에서 발생할 것으로 예측된 캐비테이션 관련 생체 효과를 설명하는 반면, TI는 초음파 적용 후 조직 내의 잠재적인 온도 상승을 설명합니다28,29. 또한 주파수와 입력 강도를 변경하면 MI와 TI도 변경됩니다. 주파수가 높을수록 공간 해상도가 향상되고 기계적 생체 효과의 가능성이 줄어듭니다. 그러나, 그들은 조직에서 더 강한 흡수력을 가지고 있으며, 이는 온도 상승의 가능성을 증가시킨다28. 또는 동일한 강도에서 더 낮은 주파수는 MI를 증가시킵니다. 유사하게, 강도를 증가시키는 것은 기계적, 열적 생체 효과(30)의 크기를 증가시키는 경향이 있다. 따라서 구현될 모든 TUS 매개변수에 대한 실험 세션 전에 신중한 계획과 시뮬레이션을 수행하는 것이 중요합니다.
TUS 실험을 계획하려면 관심 대상과 궤적을 식별하고 열 및 음향 시뮬레이션을 수행해야 합니다. 시뮬레이션은 기계적 효과를 최적화하고 TUS가 조직에 미치는 열적 효과를 완화하는 데 도움이 됩니다. 이를 위해서는 두개골 가열, 초점에서 초음파의 압력 진폭, 초점 보정 및 두개골과 피부 내의 기타 가열에 대한 예측을 이해해야 합니다. 적절한 시뮬레이션을 통해 초점이 관심 대상에 도달하고 FDA 및 캐나다 보건부(Health Canada)의 권장 사항을 기반으로 하는 ITRUSST(International Transcranial Ultrasonic Stimulation Safety and Standards Consortium)31에서 권장하는 생물물리학적 안전성에 대한 안전 지침에 명시된 초음파 사용에 대한 안전 매개변수를 따릅니다. 최근 연구는 또한 동물과 인간에서 TUS 32,33,34를 동반하는 청각 교란 효과를 강조했으며, TUS 자극은 뇌의 청각 경로를 활성화하여 반응을 유도 할 수 있습니다 32,33,34. 청각 신경(transsectionary nerves)32, 달팽이관액(cochlear fluid)32의 제거, 또는 설치류에서의 화학적 난청(chemical deafness)33이 동물에서의 이러한 영향을 감소시키기 위해 사용되어 왔다. 인간의 경우, 헤드폰을 통해 청각적 톤을 관리하는 것이 TUS로부터의 청각적 소음을 효과적으로 가리기 위해 사용되어, TUS에 의해 유발된 청각 활동을 제어한다34. 이는 가짜 자극 조건에서 청각 소음을 제어해야 할 필요성을 강조하며, 이는 프로토콜 계획, 설계 및 구현에 통합되어야 합니다.
여기에서는 인간을 대상으로 TUS 신경조절 실험을 수행하기 위해 필요한 준비(1단계, 2단계), 계획(3단계), 시뮬레이션(4단계) 및 TUS 전달(5단계)을 적절하게 완료하는 방법에 대한 가이드를 제공합니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>128-channel amplifier unit</td>
			<td>Image Guided Therapy</td>
			<td></td>
			<td>This unit drives the H-317 transducer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-channel head coil</td>
			<td>General Electric</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3D printer</td>
			<td>Raise3D</td>
			<td>Pro2</td>
			<td>Filament thickness of 1.75mm.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3T MRI scanner</td>
			<td>General Electric</td>
			<td>Discovery 750 HD</td>
			<td>MR Console version DV26.0_R05_2008</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BabelBrain</td>
			<td>Samuel Pichardo (University of Calgary)</td>
			<td>Version 0.3.0</td>
			<td>Accessible at https://github.com/ProteusMRIgHIFU/BabelBrain. Executes thermal and acoustic simulations.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blender</td>
			<td>Blender Foundation</td>
			<td>Version 3.4.1</td>
			<td>Accessible at https://www.blender.org. Blender is called automatically by BabelBrain.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brainsight</td>
			<td>Rogue Research</td>
			<td>Version 2.5.2</td>
			<td>Used for target identification, trajectory planning, and execution of TUS delivery sessions.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chair and chin/head holder</td>
			<td>Rogue Research</td>
			<td></td>
			<td>To be used during TUS delivery session to ensure stability of participant&#8217;s head for optimized targeting.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Custom-made coupling cone</td>
			<td>University of Calgary team</td>
			<td></td>
			<td>3D printed cone in acrylonitrile butadiene styrene (ABS), only required for H-317 transducer.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dcm2niix</td>
			<td>Chris Rorden (University of South Carolina)&#160;</td>
			<td>Version 1.0.20220720</td>
			<td>Accessible at https://github.com/rordenlab/dcm2niix/releases. Used for pre-processing subject MR images.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiducials and headband or glasses</td>
			<td>Brainsight, Rogue Research&#160;</td>
			<td>ST-1325 (subject tracker), LCT-583 (large coil tracker)</td>
			<td>Headband or glasses can be interchangeably used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Headphones</td>
			<td>Beats</td>
			<td>Fit Pro True Wireless Earbuds</td>
			<td>Wireless Bluetooth earbuds with disposable tips.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MacBookPro</td>
			<td>Apple</td>
			<td>M2 Max, 16&#8221;, 64GB RAM</td>
			<td>Computer for completing trajectory planning and simulations</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SimNIBS</td>
			<td>Axel Thielscher (Technical University of Denmark)</td>
			<td>Version 4.0.0</td>
			<td>Accessible at https://simnibs.github.io/simnibs/build/html.index.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe(s)</td>
			<td></td>
			<td>10 mL, 60 mL</td>
			<td>Used to add additional ultrasound gel to fill air pockets.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transducer</td>
			<td>Sonicconcepts</td>
			<td>H-317</td>
			<td>Other supported transducers include CTX_500 (NeuroFUS, Sonicconcepts), Single element, H-246 (Sonicconcepts), and Bsonix (Brainsonix)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transducer film</td>
			<td>Sonicconcepts</td>
			<td>Polyurethane membrane</td>
			<td>Interface between transducer and the subject</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasound gel</td>
			<td>Wavelength</td>
			<td>Clear Ultrasound Gel</td>
			<td>Coupling medium.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Windows Laptop</td>
			<td>Acer</td>
			<td>Aspire A717-71G, Intel Core i7-7700HQ, 16 GB RAM</td>
			<td>System used to control 128-channel amplifier and generate sound through the headphones</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

pipeline for planning and execution of transcranial ultrasound neuromodulation experiments in humans

경두개 초음파 자극(TUS)은 대뇌 피질 및 피질 하부 구조를 매우 정밀하게 조작할 수 있는 새로운 비침습적 신경 조절 기술입니다. 인간과 관련된 실험을 수행하려면 음향 및 열 시뮬레이션을 신중하게 계획해야 합니다. 이 계획은 초음파 빔의 모양과 궤적에 대한 뼈 간섭을 조정하고 TUS 매개변수가 안전 요구 사항을 충족하는지 확인하는 데 필수적입니다. 두개골 재건 및 시뮬레이션을 위해 1mm 등방성 해상도의 제로 타임 에코(ZTE) 자기 공명 영상(MRI) 스캔과 함께 T1 및 T2 가중치를 획득합니다(또는 컴퓨터 단층 촬영 X선(CT) 스캔). 표적 및 궤적 매핑은 신경 항행 플랫폼을 사용하여 수행됩니다. SimNIBS는 두개골, 피부 및 뇌 조직의 초기 분할에 사용됩니다. TUS의 시뮬레이션은 ZTE 스캔을 사용하여 두개골의 합성 CT 이미지를 생성하여 음향 특성으로 변환하는 BabelBrain 도구로 이어집니다. 우리는 전기 조향 기능이 있는 위상 배열 초음파 변환기를 사용합니다. 목표 수심에 도달하도록 Z-스티어링이 조정됩니다. 다른 변환기 구성도 계획 도구에서 지원됩니다. 열 시뮬레이션은 온도 및 기계적 지수 요구 사항이 FDA에서 권장하는 인간 피험자의 TUS에 대한 음향 지침 내에 있는지 확인하기 위해 실행됩니다. TUS 전달 세션 동안 기계 팔은 프레임리스 정위 위치 파악 시스템을 사용하여 트랜스듀서를 필요한 위치로 이동하는 데 도움을 줍니다.

Commonly used non-invasive neurostimulation techniques include transcranial direct current stimulation (tDCS) and transcranial magnetic stimulation (TMS). However, both have limited penetration depth and low precision1,2. By contrast, transcranial ultrasound (TUS) is an emerging non-invasive technique capable of enhancing or suppressing neuronal activity3,4,5 and targeting cortical or subcortical structures at millimeter precision6,7. Animal models using rodents4,8,9, rabbits10, sheep5,11, swine6, and nonhuman primates7,12,13,14 have shown the efficacy and safety of TUS. Studies have demonstrated that targeting various brain regions can elicit limb movements8 in rats, somatosensory evoked potentials (SSEPs) in swine6, and changes in visuomotor activity12, cognitive, and motivational decision-making in nonhuman primates13 among other changes in behavior. In humans, TUS has been observed to change motor evoked potentials (MEPs)&#160;and performance on a reaction time task when targeting the primary motor cortex15,16 and altered performance on a tactile discrimination task and SSEPs when targeting the somatosensory cortex17 and sensory thalamus18. Histological analyses have revealed no gross or microscopic structural changes associated with TUS in swine6, sheep5,11, rabbits10, and nonhuman primates14, and no side effects have been seen that significantly differ from other non-invasive neurostimulation techniques19.
TUS uses pulsed low-intensity focused ultrasound at a frequency between 200 kHz and 700 kHz to produce a transient neuromodulatory effect. The typical spatial-peak pulse-average intensity (Isppa) in situ is 10 W/cm2 or less, with reported duty cycles (percentage of time when ultrasound is on) ranging from 0.5% to 70% in humans20,21,22,23,24. Although the mechanisms of TUS neuromodulation have been proposed to mainly involve mechanical agitation of lipid membranes leading to the opening of ion channels25,26,27, possible thermal and cavitation effects cannot be ignored. They are assessed through mechanical (MI) and thermal (TI) indices. The MI describes the predicted cavitation-related bioeffects that will occur with TUS, whereas the TI describes the potential temperature increase within tissues following ultrasound application28,29. Furthermore, changing the frequency and input intensity also causes the MI and TI to change. Higher frequencies have better spatial resolution and decrease the probability of mechanical bio-effects; however, they have stronger absorption in the tissue, which increases the potential for temperature rise28. Alternatively, lower frequencies at the same intensity increase the MI. Similarly, increasing the intensity tends to increase the magnitude of mechanical and thermal bio-effects30. It is, therefore, imperative that careful planning and simulation be performed before experimentation sessions for all TUS parameters that will be implemented.
Planning a TUS experiment requires the identification of the target and trajectory of interest and the performance of thermal and acoustic simulations. Simulations assist in optimizing mechanical effects and mitigating the thermal effects of TUS on tissues. They require understanding the prediction of skull heating, pressure amplitude of the ultrasound at the focal point, focal correction, and other heating within the skull and skin. Adequate simulation ensures the focal point will reach the target of interest and safety parameters for ultrasound use set out by the safety guidelines on biophysical safety as recommended by the International Transcranial Ultrasonic Stimulation Safety and Standards Consortium (ITRUSST)31, which are based on FDA and Health Canada recommendations, are followed. Recent studies have also highlighted an auditory confounding effect accompanied by TUS32,33,34 in animals and humans, whereby TUS stimulation can activate auditory pathways in the brain to elicit responses32,33,34. Transection of the auditory nerves32, removal of cochlear fluid32, or chemical deafness33 in rodents have been employed to diminish these effects in animals. In humans, administering an auditory tone through headphones has been used to effectively mask auditory noise from TUS, controlling for the TUS-induced auditory activity confound34. This highlights the need to control for auditory noise in sham stimulation conditions, which must be incorporated into protocol planning, design, and implementation.
Here, we present a guide on how to appropriately complete the preparation (step 1, step 2), planning (step 3), simulations (step 4), and TUS delivery (step 5) required to perform TUS neuromodulation experiment in humans.

저자 스포트라이트: 인간 뇌 조절의 발전 - 경두개 초음파 자극 실험에 최적화된 프로토콜

인간에 대한 경두개 초음파 신경조절 실험의 계획 및 실행을 위한 파이프라인

Our research aims to understand the details of transcranial ultrasound stimulation to cause measurable effects in humans, including parameter specifications and its ability to modulate deep brain structures. Our protocol streamlines the planning steps required to complete transcranial ultrasound stimulation experiments in humans. It is efficient, easy to use, and involves using open source accessible planning tools.Our recent findings have shed light on the effect of optimal parameter selection in transcranial ultrasound stimulation to achieve neuronal inhibition. This will help in developing and designing future experiments in humans, significantly contributing to our understanding and advancement of this technology.

그림 7은 특정 초음파 매개변수(기본 주파수 250kHz, 초음파 처리 지속 시간 120초, 펄스 반복 주파수(PRF) 100Hz, 듀티 사이클 10% 및 5W/cm²의 ISPPA)를 사용하는 두 명의 별개의 참가자를 특징으로 하는 연구중 하나의 비교 세션 샘플을 보여줍니다. 이 연구에서는 신경학적으로 건강한 피험자로부터 1mm 등방성 해상도의 T1-, T2-w 및 ZTE MRI 스캔을 얻었습니다. T...

경두개 초음파 자극(TUS)은 음향 및 열 시뮬레이션에 대한 신중한 계획이 필요한 새로운 비침습적 신경 조절 기술입니다. 이 방법론은 인간 TUS 실험을 위한 효율적이고 사용자 친화적이며 간소화된 계획을 위한 이미지 처리 및 초음파 시뮬레이션 파이프라인을 설명합니다.

Transcranial ultrasound stimulation (TUS) is an emerging non-invasive neuromodulation technique capable of manipulating both cortical and subcortical ...

pipeline-for-planning-execution-transcranial-ultrasound

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Pipeline for Planning and Execution of Transcranial Ultrasound Neuromodulation Experiments in Humans

621 조회수.  University of Calgary. 우리의 연구는 매개변수 사양 및 뇌 심부 구조를 조절하는 능력을 포함하여 인간에게 측정 가능한 효과를 일으키기 위한 경두개 초음파 자극의 세부 사항을 이해하는 것을 목표로 합니다. 당사의 프로토콜은 인간에 대한 경두개 초음파 자극 실험을 완료하는 데 필요한 계획 단계를 간소화합니다. 효율적이고 사용하기 쉬우며 오픈 소스 액세스 가능?...

비디오: 저자 스포트라이트: 인간 뇌 조절의 발전 - 경두개 초음파 자극 실험에 최적화된 프로토콜

Transcranial ultrasound stimulation (TUS) is an emerging non-invasive neuromodulation technique capable of manipulating both cortical and subcortical structures with high precision. Conducting experiments involving humans necessitates careful planning of acoustic and thermal simulations. This planning is essential to adjust for bone interference with the ultrasound beam's shape and trajectory and to ensure TUS parameters meet safety requirements. T1- and T2-weighted, along with zero-time echo (ZTE) magnetic resonance imaging (MRI) scans with 1 mm isotropic resolution, are acquired (alternatively computed tomography x-ray (CT) scans) for skull reconstruction and simulations. Target and trajectory mapping are performed using a neuronavigational platform. SimNIBS is used for the initial segmentation of the skull, skin, and brain tissues. Simulation of TUS is carried over with the BabelBrain tool, which uses the ZTE scan to produce synthetic CT images of the skull to be converted into acoustic properties. We use a phased array ultrasound transducer with electrical steering capabilities. Z-steering is adjusted to ensure that the target depth is reached. Other transducer configurations are also supported in the planning tool. Thermal simulations are run to ensure temperature and mechanical index requirements are within the acoustic guidelines for TUS in human subjects as recommended by the FDA. During TUS delivery sessions, a mechanical arm assists in the movement of the transducer to the required location using a frameless stereotactic localization system.

Transcranial ultrasound stimulation (TUS) is an emerging non-invasive neuromodulation technique that requires careful planning of acoustic and thermal simulations. The methodology describes an image processing and ultrasound simulation pipeline for efficient, user-friendly, streamlined planning for human TUS experimentation.

연구

신경과학

Image Processing and Ultrasound Simulation Pipeline for Human Transcranial Ultrasound Neuromodulation Experimentation

After performing the high-resolution magnetic resonance imaging, convert T1 weighted, T2 weighted, and zero time echo DICOM scan files from DICOM to NIfTI format using the dcm2niix tool. Using SimNIBS Charm tool, execute co-registration and tissue mask extraction. Next, open Brainsight.Click on New Empty Project, and load the participant's T1 weighted NIfTI image. Click on the Reconstructions tab, then on the New Reconstruction dropdown menu. Click on Skin, followed by Compute Skin in the new window.Once complete, click on the Close button in the top left corner of the window. Within the Reconstructions tab, click on the New Reconstruction dropdown menu, followed by Full Brain Curvilinear. Now adjust the position of the green box on the sagittal, coronal, and transverse planes by dragging its edges to tightly surround the brain.Scroll through all the slices to ensure no tissue edges overlap. Click on Compute Curvilinear, and adjust the peel depth to four millimeters. Then click on the Landmarks tab on Brainsight, followed by Configure Landmarks.Place the crosshairs on the tip of the nose, and in the name field, label the landmark Nose. Then place the crosshairs between the eyes above the bridge of the nose, and label the landmark Nasion. Next, place the crosshairs on the left ear, and label the landmark L Ear.Then place the crosshairs on the right ear, and label the landmark R Ear. Afterward, click on the Targets tab, followed by Configure Targets. Place the crosshairs on the location of the desired target, and use the angle toggles on the right side of the screen to set the trajectory angle.Once the desired target and trajectory are selected, click on the new dropdown menu and choose Trajectory. To name the target, type into the text box next to name. Click on Export to export the target, and save it in the appropriate subject folder.Open BabelBrain, and select the required files for acoustic and thermal simulations. To select the text file previously exported from Brainsite, click on Select Trajectory, and choose the appropriate participant file. Click on select SimNIBS, to choose the SimNIBS file created earlier.Click on Select T1W, and choose the T1 weighted image produced and used previously for target and trajectory mapping. Now choose Real CT for CT scans, CTE for CTE scans, or no to use a simplified mask generated by the Charm tool. When using a CT or CTE image, click on the Coreg dropdown menu, followed by CT to MR.Click on Select, and choose the corresponding image from the appropriate participant file.Click Select Thermal Profile, and choose the thermal profile file that describes the experiment sonication parameters in terms of duration on, duration off, and duty cycle. Then click on the dropdown menu beside Transducer, and select the transducer used for experimentation. Click on the dropdown menu beside computing backend, and choose the computing backend of the computer running the simulations.Once all information is entered, click on Continue to complete the rest of the simulations. Now select the transducer's ultrasound frequency, and the appropriate points per wavelength. Click on Calculate Planning Mask.Inspect the image to ensure the bounds for the skin, skull, and brain were accurately recognized. For acoustic simulation, click on the Step 2 AC Sim tab to open. Adjust the distance from the cone to the focal spot by typing in the appropriate distance.To execute the simulation, click on the Calculate Fields button. Adjust the ZSteering value so the crosshairs are in the center of the focal point. Press the up or down arrows or manually enter the required value.Then click on Calculate Fields. For thermal simulation, click on the Step 3 Thermal Sim tab, then click on Calculate Thermal Fields.

인간 경두개 초음파 신경조절 실험을 위한 이미지 처리 및 초음파 시뮬레이션 파이프라인

Performing Transcranial Ultrasound Neuromodulation Experiment in Humans

After performing the skull reconstruction and simulations using the acquired MRI scans, open Brainsight and click on Open Existing Project. Select the Brainsight file created and saved during trajectory and target mapping. Click on Sessions to begin a new experimentation session.Click on the dropdown and select New, followed by Online Session. Then, click on the target name followed by Add a Next Step to add the target to the experiment session and continue to the experimentation window. Click on Window and Tool Calibration.Select the tools to be used and then click Recalibrate. Attach the subject tracker to the participant's head using a headband placed above the ears and eyebrows. Next, click on the registration tab in Brainsight.Place the pointer on the first landmark, stabilizing it with both hands. Then click on Sample and go to next landmark. Click on the Validation tab to validate the participant registration.Lightly place the pointer on various positions along the scalp and ensure all points are less than three millimeters. Then secure the participant's head with the chin rest and stabilizer placed on the back of the head to prevent movement. Ensure they are seated comfortably in the chair for the duration of the experiment.Click on Perform. Use the mechanical arm to position the transducer over the target of interest along the selected trajectory.