11.24 : Cromatografia de Afinidade

A cromatografia de afinidade é uma técnica poderosa amplamente utilizada para separar e purificar biomoléculas específicas de misturas complexas. Ela aproveita a ligação altamente seletiva entre um analito e sua contraparte, como interações anticorpo-antígeno. A contraparte é imobilizada na fase estacionária, formando uma coluna de afinidade. A fase estacionária normalmente consiste em um suporte sólido, como agarose ou esferas de vidro porosas, imobilizando o ligante de afinidade. A fase móvel serve a um propósito duplo - suportar a forte ligação entre o analito e o ligante e, subsequentemente, enfraquecer a interação para eluir o analito. Somente o analito se liga quando a mistura contendo o analito desejado é passada pela coluna, enquanto outras substâncias são lavadas. O analito ligado pode então ser eluído alterando condições como pH ou força iônica, o que enfraquece sua ligação.

Este método é particularmente valioso em bioquímica por sua especificidade e aplicação no isolamento de proteínas, enzimas, substratos, anticorpos, antígenos, receptores e hormônios. A cromatografia de afinidade também pode ser empregada para isolar isômeros ópticos individuais de medicamentos, que podem exibir diferentes efeitos terapêuticos. Este processo envolve o uso de anticorpos monoclonais específicos para cada estereoisômero.

A principal vantagem da cromatografia de afinidade é sua especificidade excepcional, o que a torna ideal para o isolamento rápido de biomoléculas em trabalho preparatório.