Pneumografia de impedância para medição minimamente invasiva da freqüência cardíaca em invertebrados em estágio tardio

Resumo

Medir a freqüência cardíaca durante um desafio térmico fornece uma visão das respostas fisiológicas dos organismos como conseqüência de mudanças ambientais agudas. Usando a lagosta americana (Homarus americanus) como um organismo modelo, este protocolo descreve o uso da pneumografia de impedância como uma abordagem relativamente não invasiva e não letal para medir a freqüência cardíaca em invertebrados em estágio tardio.

Resumo

As temperaturas nos oceanos estão aumentando rapidamente como consequência de mudanças generalizadas nos climas mundiais. Como a fisiologia organisma é fortemente influenciada pela temperatura ambiental, isso tem o potencial de alterar o desempenho fisiológico térmico em uma variedade de organismos marinhos. Usando a lagosta americana (Homarus americanus) como organismo modelo, este protocolo descreve o uso da pneumografia de impedância para entender como o desempenho cardíaco em invertebrados em estágio tardio muda sob estresse térmico agudo. O protocolo apresenta uma técnica minimamente invasiva que permite a coleta em tempo real da freqüência cardíaca durante um experimento de rampa de temperatura. Os dados são facilmente manipulados para gerar uma parcela de Arrhenius que é usada para calcular a temperatura de ruptura de Arrhenius (ABT), a temperatura em que a freqüência cardíaca começa a diminuir com o aumento das temperaturas. Esta técnica pode ser usada em uma variedade de invertebrados em estágio tardio (ou seja, caranguejos, mexilhões ou camarões). Embora o protocolo se concentre apenas no impacto da temperatura no desempenho cardíaco, ele pode ser modificado para entender o potencial de estressores adicionais (por exemplo, hipóxia ou hipercapnia) interagirem com a temperatura para influenciar o desempenho fisiológico. Assim, o método tem potencial para aplicações abrangentes para entender melhor como os invertebrados marinhos respondem a mudanças agudas no ambiente.

Introdução

Nas últimas décadas, o aumento da entrada de gases de efeito estufa (isto é, dióxido de carbono, metano e óxido nitroso) na atmosfera resultou em padrões generalizados de mudança ambiental¹. Os oceanos do mundo estão aquecendo rapidamente²,^3,uma tendência que pode ter impactos severos na fisiologia organismal. A temperatura influencia fortemente as taxas fisiológicas, e os organismos têm uma faixa de temperatura ideal para o desempenho^4,5,6. Como tal, os indivíduos podem encontrar dificuldades em manter a entrega adequada de oxigênio aos tecidos à medida que as temperaturas se afastam dessa faixa. Isso tem o potencial de levar a declínios no desempenho aeróbico em face do aquecimento das temperaturas dos oceanos^5,7.

Em um ambiente laboratorial, um método para entender os impactos fisiológicos das mudanças ambientais é examinar o desempenho cardíaco no contexto do estresse térmico. Isso fornece uma visão de como a exposição às condições de aquecimento previstas pode alterar as curvas de desempenho^5,6, bem como o potencial de plasticidade de aclimatação⁸. Uma variedade de métodos foram implementados com sucesso para medir previamente a freqüência cardíaca em invertebrados marinhos. No entanto, muitas dessas técnicas envolvem remoção cirúrgica ou grande manipulação do exoesqueleto e implantação prolongada de dispositivos de medição^9,10,11, que introduz estresse adicional ao sujeito do teste e aumenta o tempo necessário para uma recuperação bem sucedida antes da experimentação. Além disso, técnicas menos invasivas (por exemplo, observação visual, videografia) podem ser restritas aos estágios iniciais da história da vida quando os organismos podem ser totalmente ou semitransparentes¹². Além disso, podem ser apresentados desafios adicionais aos pesquisadores que não são bem versados em metodologias tecnologicamente avançadas (por exemplo, observações via transdutores infravermelhos ou perfusão do Ppler^8,11).

Este protocolo usa a lagosta americana (Homarus americanus) como um modelo de invertebrado marinho em estágio tardio para demonstrar o uso de pneumografia de impedância para avaliar mudanças na freqüência cardíaca durante um experimento de rampa de temperatura. A pneumografia de impedância envolve a passagem de uma corrente elétrica oscilante (AC) através de dois eletrodos posicionados em ambos os lados do pericárdio para medir mudanças de tensão à medida que o coração contrai e relaxa^13,14. Esta técnica é minimamente invasiva, pois emprega o uso de pequenos eletrodos (ou seja, 0,10-0,12 mm de diâmetro) que são suavemente implantados logo abaixo do exoesqueleto. Finalmente, ele fornece avaliações em tempo real da freqüência cardíaca e temperatura da água durante a rampa através do uso de um data logger.

O protocolo também fornece instruções para calcular a temperatura de ruptura de Arrhenius (ABT), a temperatura em que a freqüência cardíaca começa a diminuir com o aumento das temperaturas^13,15. O ABT serve como um indicador não letal do limite térmico de capacidade em cobaias que podem ser favorecidos sobre a medição do máximo térmico crítico (CT_max, o limite superior da função cardíaca^5,6), pois os limites letais são muitas vezes extremos e raramente encontrados no ambiente natural⁵.

Protocolo

1. Configuração do equipamento

1. Enrole tubos claros e maleáveis em torno de si mesmo para criar uma bobina de troca de calor que tem aproximadamente 8-10 cm de diâmetro e tem extensões de 40-70 cm de comprimento. Fixar a bobina usando fita elétrica.
2. Conecte a bobina de troca de calor à fonte externa e retorne os encaixes de um banho de água circulante de resfriamento/aquecimento. Certifique-se de que a conexão está segura usando grampos de mangueira.
3. Encha o poço do banho de água circulante de resfriamento/aquecimento com água de osmose reversa (RO) e conecte o cabo de alimentação a uma tomada. Ligue o banho de água e certifique-se de que não há vazamentos em sua conexão com a bobina de troca de calor.
4. Configure o conversor de impedância conectando o cabo BNC preto à saída CA na unidade e conectando-o ao data logger(Tabela de Materiais)usando a porta do Canal 1.
5. Conecte a sonda termopar (gravador de temperatura) ao pod tipo T e, em seguida, conecte a cápsula do tipo T à porta do Canal 2 do data logger.
6. Conecte o cabo de alimentação do registro de dados a uma fonte de alimentação e conecte o registrador de dados a um computador de PC usando o conector de cabo USB.
7. Encha a câmara de aclimatação e a arena experimental com 7,5 L de água artificial do mar (salinidade = 35 ppt, pH = 8,1, temperatura = ~12 °C).
   NOTA: O volume, a temperatura e a química da água necessária para a câmara de aclimatação e as condições de partida na arena experimental dependem do projeto experimental. É importante ressaltar que esses recipientes devem ser grandes o suficiente para submergir confortavelmente o sujeito de teste.

2. Implantação de eletrodos

1. Coloque a lagosta em uma grade de plástico que se encaixa facilmente na arena experimental de tal forma que o corpo confortavelmente faça uma forma de Y em uma extremidade do retângulo.
2. Fixe cuidadosamente as garras e o abdômen da lagosta na grade plástica usando pequenas amarras de cabo. Os cabos devem ser apertados o suficiente para evitar o movimento, mas permitem espaço para a tesoura cirúrgica removê-las após a conclusão do experimento.
3. Seque a carapaça com uma toalha de papel e limpe-a com uma bola de algodão encharcada em 70% de etanol.
4. Crie os buracos para os eletrodos.
   1. Usando uma pequena broca (por exemplo, 1,6 mm), faça a broca devagar e cuidadosamente dois pequenos furos (quase) através da carapaça em ambos os lados do pericárdio.
   2. Termine cada orifício inserindo suavemente uma agulha de dissecação estéril.
   3. Se a agulha não passar facilmente pela carapaça, continue a perfurar lentamente antes de tentar a agulha novamente.
      NOTA: Para minimizar o estresse em animais experimentais, é altamente recomendável praticar essa técnica antes da experimentação. Com o tempo, os usuários podem facilmente determinar sentindo quando a broca está quase na carapaça e mudar para a agulha. A perfuração manual é apropriada para lagostas e caranguejos, especialmente se o exoesqueleto é macio (ou seja, o animal foi recentemente fundido). No entanto, se o sujeito de teste tiver um exoesqueleto ou concha mais espesso (ou seja, uma biválvula), uma ferramenta Dremel é mais apropriada.
5. Obtenha os eletrodos (fio magnético de 36-38 G, 0,10-0,12 mm de diâmetro) e raspe um pouco de isolamento na ponta do fio usando uma lâmina de faca dissecando. Dobre cuidadosamente a ponta de cada fio em um pequeno gancho usando fórceps e insira um em cada um dos furos recém-perfurados.
6. Fixar cada fio usando uma pequena gota de cola cianoacrilato e deixá-lo secar por 5-10 min.
   NOTA: É crucial usar a cola com moderação, pois adicionar muito irá resisolar o fio e evitar que o sinal seja gravado.
7. Uma vez que a cola esteja seca, conecte o fio ao conversor de impedância e ligue-o. Coloque a lagosta na câmara de aclimatação e deixe-a se adaptar aos eletrodos implantados por 15-20 min.
   NOTA: Movimentos rápidos ou de, bem como cola seca incompletamente, podem fazer com que os eletrodos se sedem da carapaça. Se isso acontecer, retorne ao passo 2.6.
8. Ligue o data logger e abra o software LabChart no computador. Clique em Novo Experimento e deixe a tela Chart View aberta.
9. Em Chart View,localize o menu Função do Canal 1 a partir da seção à direita da tela. Escolha o amplificador de entrada no menu e selecione Acoplamento CA. O sinal de entrada da cobaia será agora exibido na tela em tempo real.
   NOTA: A sensibilidade do canal pode ser ajustada selecionando o menu pop-up Range. Ajuste o intervalo até que os picos de sinal sejam de 25%-75% da escala completa. Feche o amplificador de entrada clicando em OK.
10. No conversor de impedância, ajuste o Ganho (tamanho) e o Equilíbrio até que um sinal forte seja observado na saída do data logger, visando manter o Saldo perto de zero.
11. No Canal 2, selecione o pod T-Type para gravar dados de temperatura em tempo real.
12. Quando ambos os canais estiverem configurados corretamente, clique no botão Iniciar e o registrador de dados começará a registrar dados.

3. Rampa de temperatura

1. Após o período de aclimatação, coloque a grade plástica com a lagosta presa cuidadosamente na arena experimental e coloque a bobina de troca de calor no topo da grade.
2. Coloque a sonda termopar perto da lagosta, garantindo que ela esteja totalmente submersa antes de colocar a tampa na arena experimental para reduzir o estresse visual ao sujeito do teste.
3. Ajuste o equilíbrio conforme necessário e coloque um comentário sobre a saída afirmando que o julgamento já começou.
4. A saída pode e deve ser salva periodicamente durante todo o experimento.
   1. Clique em 'Arquivo' e selecione Salvar como para salvar inicialmente a saída no computador.
   2. Ao salvar durante o experimento, clique em 'Arquivo' e selecione Salvar.
      NOTA: Embora o software LabChart possa recuperar arquivos no caso de um desligamento acidental do programa (por exemplo, uma queda de energia), recomenda-se salvar arquivos ativos a cada 15-20 min durante o experimento para evitar a perda de dados.
5. Aumente a temperatura da água da arena experimental a uma taxa de ~1,5 °C a cada 15 min para obter uma rampa de 12 °C a 30 °C durante um período de 2,5 h, ajustando a temperatura do banho de água que recircula.
   NOTA: A distribuição geográfica da lagosta americana abrange um gradiente térmico de 25 °C, e os indivíduos podem se adaptar e sobreviver a temperaturas de até 30 °C¹⁶. Como tal, 30 °C foi escolhido como o limite superior para esta rampa de temperatura, pois garante que as lagostas experimentem um cenário estressante que não atinja o máximo térmico crítico^{de 13}, o que poderia levar à mortalidade. A taxa específica de aquecimento foi selecionada porque se enquadra em uma faixa de taxas de aquecimento implementadas em estudos utilizando outras espécies^8,14 bem como pesquisas anteriores sobre a lagosta americana^13,27. Antes de implementar este protocolo, é importante determinar a faixa de temperatura apropriada para um determinado experimento e 2) realizar uma rampa de temperatura pré-julgamento com uma arena experimental vazia, pois isso ajudará a determinar o ajuste de temperatura necessário do banho de água para alcançar a rampa desejada. Isso também pode diferir dependendo do volume de água na arena.
6. Ao longo da rampa de temperatura, registre sempre que ocorrer um ajuste que possa afetar a saída.
   1. Observe que o equilíbrio no conversor de impedância provavelmente precisará ser ajustado ao longo do experimento, e isso pode causar um pico não intencional na saída.
   2. À medida que a temperatura na arena experimental começa a atingir níveis fora da faixa térmica preferida do sujeito do teste, contrações musculares involuntárias podem resultar em um "pico" errôneo na saída. Se isso ocorrer, faça um comentário para identificar áreas da saída que devem ser removidas durante o processo de conversão de dados.
7. Quando a rampa estiver concluída, retire a lagosta da arena experimental e coloque-a em um banho de recuperação (12 °C) por ~20 min. Se desejar, continue monitorando a freqüência cardíaca da lagosta até que ela retorne aos níveis basais.
8. Depois de 20 min, aperte o botão Stop na saída do PowerLab e salve o arquivo. Remova cuidadosamente os eletrodos e corte os laços do cabo com uma tesoura cirúrgica antes de retornar o teste sujeito ao seu tanque de retenção.
   NOTA: Em vez de colocar uma lagosta diretamente no banho de recuperação, outra opção é retornar lentamente a arena experimental à sua temperatura inicial. Isso é feito resfriando a arena experimental em ~1,5 °C a cada 15 min ao longo de 2,5 h adicionais.

4. Conversão de dados

1. Abrir data pad. Defina a coluna A a tempo clicando duas vezes na Coluna A e clicando em Seleção e Ponto Ativo no lado esquerdo do menu Configuração da Coluna data pad. Selecione Tempo no lado direito do menu e feche a janela clicando em OK.
2. Defina a Coluna B à temperatura média clicando duas vezes na Coluna B e selecionando a opção Estatísticas do lado esquerdo do menu de configuração da Coluna B do Data Pad. Selecione Mean do lado direito do menu e canal 2 como a fonte de cálculo na parte inferior da janela do menu. Clique em OK para fechar a janela.
3. Convertendo a tensão gravada em batidas por minuto
   1. Clique duas vezes na Coluna C e selecione Seleção e Ponto Ativo no lado esquerdo do menu. Selecione Duração de seleção do lado direito do menu e clique em OK para fechar a janela.
   2. Clique duas vezes na Coluna D e selecione Medidas Cíclicas no lado esquerdo do menu. Selecione Contagem de eventos do lado direito do menu e canal 1 como fonte de cálculo. Clique em OK para fechar a janela. Isso contará os picos dos dados para determinar a freqüência cardíaca em uma parte selecionada dos dados.
      NOTA: Se necessário, selecione o botão Opções na parte inferior do menu e ajuste as Configurações de detecção para ler com mais precisão os dados. Escaneie o arquivo de dados e determine se as opções de forma "Sine" ou "Spikey" resultam em contagens apenas dos picos principais da saída de batimentos cardíacos. Além disso, ajuste o limiar de ajuste de detecção no lado direito do menu para ignorar o ruído no arquivo de saída.
   3. Clique duas vezes na Coluna E e selecione Medidas Cíclicas no lado esquerdo do menu. Selecione Taxa Cíclica Médiae Canal 1 como fonte de cálculo. Ajuste as configurações de detecção e ajuste de detecção para corresponder às configurações da Coluna D (se manipulada na etapa 4.4.2). Clique em OK para fechar a janela. Isso fornece a estimativa final da freqüência cardíaca (como batidas por minuto) sobre uma parte selecionada dos dados.
4. Quando as colunas estiverem configuradas, retorne ao arquivo de dados e destaque as seções desejadas da saída, omitindo áreas de dados errôneos identificadas por comentários na seção 3.6.
   1. Selecione comandos e adicionar múltiplos ao data pad.
   2. Selecione Tempo no Find usando menu suspenso e puxe dados a cada 30 s, verificando a caixa Cada e digitando "30" no menu Selecionar.
   3. Clique na opção Corrente de seleção no menu Passo a passo e clique em Adicionar.
5. Retorne à tela do Data Pad e selecione Arquivo e Salvar como para salvar a saída como um arquivo Excel.
   NOTA: Aqui, a freqüência cardíaca é relatada (em batimentos por minuto) a cada 30 s, em oposição a cada minuto com base na pesquisa anterior^8,27. Isso também ajuda a capturar com mais precisão as alterações nos dados de tensão coletados em tempo real. É possível selecionar dados em intervalos de tempo mais curtos ou mais longos com base na preferência individual.

5. Cálculo da temperatura de ruptura de Arrhenius

1. Abra o arquivo de dados no Excel e manipule a saída do software LabChart.
   1. Converta a temperatura de Celsius para a recíproca de Kelvin usando a seguinte equação: [1000/(temperatura °C + 273,15 K)].
   2. Obter o registro natural da freqüência cardíaca: In (BPM).
2. Gerar um enredo de Arrhenius plotando a freqüência cardíaca em função da temperatura, expressa como Ln(BPM) vs. recíproco (K)^13,15.
3. Em SigmaPlot, encaixe os dados com uma regressão em pedaços e determine o ponto de intersecção, que é o ABT.
   1. Copie e cole os dados transformados em uma nova pasta de trabalho. Selecione a opção Estatísticas no menu principal e o Assistente de Regressão na lista suspenso.
   2. Na janela Equação, selecione em parte no menu Categoria equação e 2 segmentos lineares sob a caixa Nome da equação. Clique em Next.
   3. Na janela Variáveis, selecione os dados de temperatura transformada para serem a variável t e os dados de freqüência cardíaca transformados para serem a variável y, usando as opções suspensas no menu Colunas Variáveis. Certifique-se de que o XY Pair esteja selecionado no menu Dados De antes de clicar em Next.
   4. Depois de revisar a janela 'Resultados de ajuste', clique em 'Avançar' e verifique a caixa para Criar relatório na janela Opções de saída numérica. Clique em Next.
   5. Na janela Opções de gráfico, verifique a opção Criar novo gráfico na seção Gráfico de resultados de ajuste e adicione a equação ao título do gráfico na Seção De Características do Gráfico. Clique em Concluir.
   6. Na página de saída de Resultados, recupere as equações e os valores dos parâmetros para as duas regiões da regressão em parte, bem como a produção estatística para a regressão (por exemplo, R², F-statistic e p-value).
   7. Utilizando os valores e equações dos parâmetros gerados, defina os dois segmentos iguais entre si e resolva a variável "t" para determinar o ABT. Converta este valor de volta para Celsius usando a seguinte equação: °C = (1000/t) - 273,15.
      NOTA: O ABT também pode ser calculado no ambiente de computação estatística R utilizando o pacote "segmentado"¹⁷ no programa SAS¹⁸, ou utilizando a rotina de "regressão linear segmental" no Prisma8¹⁹.

Resultados

Este protocolo descreve o uso de pneumografia de impedância para obter dados em tempo real para freqüência cardíaca (em tensão) e temperatura durante um experimento de rampa de temperatura. Ao perforar esta técnica, a amplitude das tensões e temperaturas registradas variará com base no desenho experimental e espécies focais. No entanto, a saída de tensão exibida em tempo real segue uma distribuição seno genérica quando o protocolo é implementado corretamente (Figura 1A). À me...

Discussão

Este protocolo descreve o uso de pneumografia de impedância para medir alterações na freqüência cardíaca de invertebrados de estágio tardio durante um experimento de rampa de temperatura. O principal benefício dessa técnica em comparação com outras abordagens baseadas em laboratório^9,10,11 é que ela é minimamente invasiva e não envolve grande manipulação cirúrgica do exoesqueleto, reduzindo assim o tempo de rec...

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
1.6 mm (1/16 in) drill bit	Milwaukee Tool at Home Depot	1001294900	This is for a 1.6 mm (1/16 in) diameter drill bit. This item can be found at most home-improvement stores.
38 AWG Copper Magnet Wire	TEMCo	MW0093	This wire is used to make the wire electrode leads that are implanted into the test subjects. This listing is for a 4 oz coil of 38-gauge magnetic wire. TemCo also has 36-gauge magnetic wire that is also suitable for use in constructing wire electrodes.
Cyanoacrylate glue	Loctite	852882	This item includes a brush tip, which makes it easier to control the amount of glue used to secure electrodes to the carapace.
Ethanol, 70% Solution, Molecular Biology Grade	Fisher BioReagents	BP82931GAL	This reagent is used in combination with the sterile cotton balls to disinfect the carapace prior to electrode implantation.
Excel	Microsoft	N/A	This program is used in the protocol for organizing, manipulating, and analyzing data. It is compatible with both PC and Mac operating systems.
Fisherbrand 8-Piece Dissection Kit	Fisher Scientific	08-855	This kit includes the forceps, scissors, dissecting knife (and blades), and dissecting needle needed to accomplish the electrode implantation steps in the protocol.
Fisherbrand Isotemp Refrigerated/Heated Bath Circulators: 5.4-6.5L, 115V/60Hz	Fisher Scientific	13-874-180	This is a complete system that consists of an immersion circulator and a bath. It can be used as a temperature controlled bath or to circulate fluid externally to an application. Temperature range of this water bath is -20 to +100 °C, and the unit heats/cools rapidly and is easy to drain upon conclusion of use.
Fisherbrand Sterile Cotton Balls	Fisher Scientific	22-456-885	These swabs should be soaked in 70% ethanol before being used to disinfect the carapace prior to electrode implantation.
Fork Terminal, Red Vinyl, Butted Seam, 22 to 16 AWG, 100 PK	Grainger	5WHE6	Terminals are soldered to the magnetic wire to construct the wire electrodes. These can be purchased from a variety of home-improvement vendors.
Impedance converter	UFI	Model 2991	Measures impedance changes correlated with very small voltage changes, ranging from 0.2 ohm to over 5 ohms. This model can convert impedance changes that stem from resistance, capacitance, or inductance variations, as well as a combination of all three.
LabChart software	ADInstruments	N/A	Purchase of the PowerLab datalogger includes the LabChart software, but a license for the software can also be directly downloaded online. LabChart allows the user to record data, open and read LabChart files, analyze data, as well as save and export files. There is a free version of the software, LabChart Reader, but users can only open and read LabChart files and analyze them (i.e., it cannot be used to record, save, or export data files). One also has the option of selecting LabChart Pro, which includes LabChart teaching modules that can be used for educational purposes.
LED Soldering Iron	Grainger	28EA35	This is a generic soldering iron that can be used to solder the magnetic wire to the fork terminals to create the wire electrodes.
PowerLab datalogger	ADInstruments	ML826	There are a variety of models of the PowerLab. This catalog number is for the 2/26 model that is a 2 channel, 16 bit resolution recorder with two analog input channels, independently selectable input sensitivities, two independent analog outputs for stimulation or pulse generation and a trigger input. The PowerLab features a wide range of low-pass filters, AC or DC coupling and adaptive mains filter. This unit has a USB interface for connection to Windows or Mac OS computers and a sampling rate of 100,000 samples/s per channel.
Prism8	GraphPad	N/A	This program provides an additional option for calculating the Arrhenius Break Temperature through its “Segmental linear regression” data analysis option. This program does not require any programming and is compatible with both Mac and Windows operating systems.
R	R Project	N/A	This is free software for statistical computing that is compatible with UNIX platforms, as well as Windows and Mac operating systems. This program can also be used to calculate the Arrhenius Break Temperature using the “segmented” package. There are a number of tutorials and user guides available online through the r-project.org website.
Rosin Core Solder	Grainger	331856	This product has a diameter of 0.031 in (0.76 mm) and is ideal for use in soldering speaker wire (similar gauge as magnetic wire used for electrodes).
SAS	SAS Institute	N/A	This program provides an additional option for calculating the Arrhenius Break Temperature. However, it does require programming and is not compatible with Mac operating systems.
SigmaPlot	Systat Software, Inc.	N/A	This is the authors’ preferred program for statistical determination of the Arrhenius Break Temperature. The “Regression Wizard” is easy to use and does not require any programming. One can obtain a free 30-day trial license before purchase. However, it is compatible only with PC computers.
T-type Pod	ADInstruments	ML312	Suitable for measurement of temperatures from 0-50 °C using T-type thermocouples.
T-type Thermocouple Probe	ADInstruments	MLT1401	Compatible with the T-type Pod for connection. Measures temperature up to 150 °C, and is suitable for immersion in various solutions, semi-solids, and tissue (includes a needle for implantation). This product is a 0.6 mm diameter isolated probe that is sheathed in chemical-resistant Teflon and a lead length of 1.0 m.
UV Cable Tie, Black	Home Depot	295813	This is for a 100-pack of 8-inch (20.32 cm), black cable ties. However, based on the size of test subjects, smaller or larger cable ties may be needed. This item, and others like it, can be purchased at any home-improvement store.