Preparação eletroquímica de camadas de poli (3,4-etilenodioxithiofene) em microelétricos de ouro para aplicações de sensoriamento de ácido úrico

Resumo

Descrevemos sistemas aquosos e orgânicos de solventes para a eletropolamilação de poli (3,4-etilenodioxithiophene) para criar camadas finas na superfície de microeletrodos de ouro, que são usados para detectar analitos de baixo peso molecular.

Resumo

São descritos dois métodos diferentes para a síntese de poli (3,4-ethylenodioxythiophene) (PEDOT) em eletrodos de ouro, utilizando eletropolimerização de 3,4-etilenodioxithiofene (EDOT) monômero em uma solução aquosa e orgânica. A voltametria cíclica (CV) foi utilizada na síntese de camadas finas PEDOT. O perclorato de lítio (LiClO₄) foi usado como dopant tanto em sistemas aquosos (aquos/acetonitrilo (ACN)) quanto orgânicos (carbonato de propileno (PC)). Depois que a camada PEDOT foi criada no sistema orgânico, a superfície do eletrodo foi aclimatada por ciclo sucessivo em uma solução aquosa para uso como sensor para amostras aquosas.

O uso de um método de eletropolimerização aquoso tem o benefício potencial de remover a etapa de aclimatação para ter um tempo de preparação do sensor mais curto. Embora o método aquoso seja mais econômico e ambientalmente correto do que o método de solvente orgânico, a formação superior de PEDOT é obtida na solução orgânica. As superfícies de eletrodos PEDOT resultantes foram caracterizadas pela microscopia eletrônica de varredura (SEM), que mostrou o crescimento constante de PEDOT durante a eletropolamite da solução orgânica do PC, com rápido crescimento fractal em microeletrodos de ouro (Au).

Introdução

Polímeros de condução elétrica são materiais orgânicos amplamente utilizados em dispositivos bioeletrônicos para melhorar as interfaces. Semelhante aos polímeros convencionais, a condução de polímeros é fácil de sintetizar e são flexíveis durante o processamento¹. A condução de polímeros pode ser sintetizada utilizando métodos químicos e eletroquímicos; no entanto, as abordagens de síntese eletroquímica são particularmente favoráveis. Isso se deve principalmente à sua capacidade de formar filmes finos, permitir o doping simultâneo, capturar moléculas no polímero condutor e, o mais importante, a simplicidade do processo de síntese¹. Além disso, a condução de polímeros formam nanoestruturas uniformes, fibrosas e esburacadas, firmemente aderidas à superfície do eletrodo, o que aumenta a área de superfície ativa do eletrodo².

Na década de 1980, foram desenvolvidos certos poliheterociclos, como polipiralina, polianilina, polithiofene e PEDOT, que mostraram boa condutividade, facilidade de síntese e estabilidade ^3,4. Embora o polipirolito seja melhor compreendido do que outros polímeros (por exemplo, derivados de polithiofeno), é propenso a oxidação irreversível⁵. Assim, a PEDOT tem certas vantagens sobre o resto, pois tem um estado oxidativo muito mais estável e retém 89% de sua condutividade em comparação com o polipiro em condições semelhantes⁶. Além disso, o PEDOT é conhecido por alta eletrocondutividade (~500 S/cm) e uma lacuna de banda moderada (ou seja, lacunas de banda ou lacunas de energia são regiões sem custo e referem-se à diferença de energia entre o topo de uma banda de valência e a parte inferior de uma banda de condução)⁷.

Além disso, a PEDOT tem propriedades eletroquímicas, precisa de potenciais menores para ser oxidada, e é mais estável ao longo do tempo do que o polipiro depois de ser sintetizado⁷. Também tem boa transparência óptica, o que significa que seu coeficiente óptico de absorção, especialmente na forma de sulfonato de poliestireno PEDOT-poliestireno (PEDOT-PSS), está na região visível do espectro eletromagnético em 400-700 nm⁷. Na formação de PEDOT eletroquimicamente, monômeros EDOT oxidam no eletrodo de trabalho para formar cations radicais, que reagem com outros cations radicais ou monômeros para criar cadeias PEDOT que se depositam na superfície do eletrodo¹.

Diferentes fatores de controle estão envolvidos na formação eletroquímica de filmes PEDOT, como eletrólito, tipo de eletrólito, configuração de eletrodos, tempo de deposição, tipo dopante e temperatura do solvente¹ PEDOT pode ser gerado eletroquimicamente através de uma solução eletrólito apropriada. Podem^{ser utilizados} diferentes eletrólitos como aquoso (por exemplo, PEDOT-PSS), orgânicos (por exemplo, PC, acetonitrilo) e líquidos iônicos (por exemplo, 1-butil-3-metilimidazolium tetrafluoroborato (BMIMBF₄))

Uma das vantagens dos revestimentos PEDOT é que ele pode diminuir significativamente a impedância de um eletrodo Au na faixa de frequência de 1 kHz em duas ou três ordens de magnitude, o que torna útil aumentar a sensibilidade da detecção eletroquímica direta da atividade neural⁹. Além disso, a capacidade de armazenamento de carga dos eletrodos modificados pedot aumenta e resulta em respostas potenciais mais rápidas e menores quando a carga de estimulação é transferida através do PEDOT¹⁰. Além disso, quando o sulfonato de poliestireno (PSS) é usado como dopant para formação de PEDOT em matrizes de microeletrodo Au, ele cria uma superfície áspera e porosa com uma área de superfície ativa elevada, impedância de interface inferior e maior capacidade de injeção de carga¹¹. Para a etapa de eletropolimerização, EDOT-PSS geralmente faz uma dispersão em um eletrólito aquoso.

No entanto, EDOT é solúvel em clorofórmio, acetona, ACN e outros solventes orgânicos, como PC. Portanto, neste estudo, foi utilizada uma mistura de água com um pequeno volume de ACN em uma proporção de 10:1 para fazer uma solução EDOT solúvel antes do início da eletropolammerização. O objetivo de usar este eletrólito aquoso é omitir a etapa de aclimatação na preparação de microeletrodos modificados por PEDOT e encurtar os passos. O outro eletrólito orgânico usado para comparar com o eletrólito aquoso/ACN é o PC. Ambos os eletrólitos contêm LiClO₄ como um dopant para ajudar a oxidar o monômero EDOT e formar o polímero PEDOT.

Microeletrodos são eletrodos de trabalho voltammétricos com diâmetros menores do que macroeletros, aproximadamente dezenas de micrômetros ou menos na dimensão. Suas vantagens sobre macroeletrodos incluem um transporte de massa aprimorado da solução em direção à superfície do eletrodo, gerando um sinal de estado estável, uma menor queda potencial ócica, uma capacidade de camada dupla menor e uma maior relação sinal-ruído¹². Semelhante a todos os eletrodos sólidos, os microeletros precisam ser condicionados antes da análise. A técnica de pré-tratamento ou ativação adequada é o polimento mecânico para obter uma superfície lisa, seguido de uma etapa de condicionamento eletroquímico ou químico, como o ciclismo potencial sobre uma determinada faixa em um eletrólito^{adequado 13}.

Cv é muito comumente usado na polimerização eletroquímica de PEDOT inserindo eletrodos em uma solução monômera que envolve um eletrólito solvente e dopante adequado. Esta técnica eletroquímica é benéfica no fornecimento de informações de direção, como a reversibilidade da condução de processos de doping de polímeros e o número de elétrons transferidos, coeficientes de difusão de analitos e a formação de produtos de reação. Este artigo descreve como dois eletrólitos diferentes usados para a eletropolimerização do PEDOT podem gerar filmes finos de nanoestrutura com uma aplicação de sensoriamento potencial que depende da morfologia e outras propriedades intrínsecas.

Protocolo

1. Preparação de soluções analíticas

1. Preparando 0,1 M EDOT em uma solução orgânica
   1. Pese 0,213 g de LiClO₄ e transfira para um frasco volumoso de 20 mL.
   2. Use um cilindro de medição para tirar 20 mL de PC da garrafa.
   3. Adicione o PC ao frasco volumoso de 20 mL contendo LiClO₄. Misture a solução colocando o frasco em um banho ultrassônico por 30 minutos. Transfira a solução para um frasco de vidro de 20 mL.
   4. Cubra o frasco com papel alumínio e insira uma agulha longa presa a um tubo de nitrogênio na solução para desgas por 10 minutos. Em seguida, remova a folha de alumínio e tampe o frasco firmemente.
      NOTA: Prepare LiClO₄ fresco no dia do experimento.
   5. Antes do teste eletroquímico, transfira 1 mL da solução LiClO₄ preparada (0,1 M) para uma célula eletroquímica (ver a Tabela de Materiais).
   6. Use uma micropipette (10-100 μL) para adicionar 10,68 μL de monômero EDOT (densidade: 1,331 g/mL) à célula eletroquímica contendo a solução LiClO₄ preparada.
   7. Execute o método CV (ver seção 3.4 para parâmetros CV) para iniciar a eletropolimerização do EDOT na superfície nu de microeletroder au depois de inserir todas as configurações de eletrodos na solução. Use este eletrodo modificado para caracterizar a superfície por meio da microscopia eletrônica de varredura (SEM).
   8. Para usar este eletrodo modificado para fins de detecção, aclimate sua superfície primeiro a uma solução aquosa executando varreduras cv na solução de perclorato de sódio (NaClO₄) solução (ver seção 3.4 para parâmetros CV).
   9. Use este microelerode organicamente modificado e aclimatado (de 1.1.8) para executar cv (ver seção 3.4 para seus parâmetros cv) de uma solução tampão fosfato a ser usada como uma varredura de fundo.
      NOTA: Enxágüe o eletrodo após cada passo.
   10. Por fim, retire o eletrodo da solução tampão sem enxaguar e insira-o imediatamente em soluções de ácido úrico ou amostras de leite para a execução de varreduras cv (ver seção 3.4 para parâmetros cv).
2. Preparando 0,01 M EDOT em uma solução aquosa
   1. Use uma micropipette para tomar 10,68 μL de EDOT e adicionar a 1 mL de ACN em um frasco de vidro.
   2. Adicione 9 mL de água deionizada (18,2 MΩ/cm a 25 °C) ao frasco para preparar 10 mL de solução EDOT de 0,01 M.
   3. Adicione 0,11 g de LiClO₄ em pó à solução EDOT preparada para obter a solução 0.1 M LiClO₄ e misture delicadamente.
      NOTA: Prepare as soluções de eletrólitos recentemente no dia do experimento.
   4. Transfira a solução preparada para a célula eletroquímica e inicie a eletropolamoização de 0,01 M EDOT na superfície do eletrodo pelo método CV (ver seção 3.4 para parâmetros CV) após inserir o eletrodo na solução aquosa/ACN.
   5. Caracterize a superfície deste eletrodo modificado pela SEM.
3. Preparando solução de perclorato de sódio de 0,1 M
   1. Pesar 0,245 g de NaClO₄ e transferi-lo para um frasco de vidro contendo 20 mL de água deionizada (18,2 MΩ/cm a 25 °C).
   2. Use esta solução para aclimatar a superfície da microeleroda Au modificada por PEDOT organicamente para uma solução aquosa e para remover o excesso de EDOT. Para isso, enxágüe o eletrodo e insira-o na solução NaClO₄ ; em seguida, execute cv para 10 ciclos (ver seção 3.4 para parâmetros cv).
4. Preparando solução tampão
   1. Pesar 13,8 g de fosfato de dihidrogênio de sódio (NaH₂PO₄. 1H₂O) em um barco de pesagem. Transfira para um frasco volumoso de 500 mL (ou seja, o volume final necessário) e cubra-o até a linha com água desionizada (18,2 MΩ/cm a 25 °C).
   2. Coloque o frasco em um banho ultrassônico até que o pó se dissolva completamente na água, resultando em uma solução de 0,2 M.
   3. Em um novo barco de pesagem, pese 17,8 g de fosfato de hidrogênio dissódico (Na₂HPO₄. 2H₂O) e transfira-o para outro frasco volumoso de 500 mL. Cubra-o com água deionizada para obter uma solução de 0,2 M. Coloque o frasco em um banho ultrassônico para dissolver corretamente.
   4. Misture 62,5 mL de solução de fosfato de didrogênio de sódio com 37,5 mL de solução de fosfato de hidrogênio dissódico em um cilindro de medição e transfira a mistura para uma garrafa de vidro de 250 mL (veja a Tabela de Materiais). Cubra-o com mais 100 mL de água deionizada para obter 200 mL de 0,1 M de solução tampão fosfato, pH 6.6. Leve à geladeira o tampão fosfato para uso a longo prazo.
      NOTA: Leve o tampão à temperatura ambiente antes de cada experimento.
5. Preparando soluções de analito de alvo
   1. Pesar 0,0084 g de ácido úrico (UA) em um barco de pesagem, e dissolvê-lo em 50 mL de tampão fosfato (pH 6.6) em um frasco volumoso para obter uma solução UA de 1 mM.
   2. Degas a solução por purificação de nitrogênio por 10 minutos.
      NOTA: É aconselhável preparar a solução UA fresca no dia do experimento.
6. Preparando amostras de leite para análise
   1. Obtenha uma amostra de leite integral e algumas amostras de leite com diferentes sabores (por exemplo, leite expresso, leite de chocolate caramelo/branco e leite de chocolate belga) de um supermercado local para eletroanálise. Não pré-tre ou dilua as amostras de leite.
   2. Use uma micropipette de 5 mL para colher 5 mL de cada amostra de leite das garrafas recém-abertas.
   3. Primeiro, execute cv de tampão fosfato, pH 6.6, como um sinal de fundo. Em seguida, adicione a amostra de leite de 5 mL na célula eletroquímica, e insira microelerodia Au modificada recente e organicamente, modificada por PEDOT e outros eletrodos nas amostras de leite e execute CV. Consulte a seção 4 do protocolo para analisar os dados coletados.
7. Preparação de soluções de pré-tratamento de eletrodos
   1. Pese 0,2 g de hidróxido de sódio (NaOH) em pó e transfira-o para um frasco volumoso de 50 mL para preparar uma solução de 0,1 M.
   2. Use a solução NaOH de 0,1 M para remover o resíduo de PEDOT formado na superfície da microeletrísmo após cada execução.
   3. Use uma pipeta de vidro para retirar 27,2 mL de uma garrafa de ácido sulfúrico de 98%. Adicione-o muito lentamente a um frasco volumoso de 1 L meio cheio de água deionizada.
   4. Cubra o frasco até a linha com água deionizada para preparar 1 L de uma solução 0,5 M H₂SO₄ .
      NOTA: Prepare a solução H₂SO₄ sob um capô de fumaça para segurança. Use a solução H₂SO₄ na etapa final de limpeza eletroquímica da microeletrônica.

2. Pré-tratamento da microeletrínda de ouro

1. Polir a microeletrídrica Au (10 μm de diâmetro, 3,5 mm de largura x 7 cm de comprimento) em uma almofada de polimento de alumina colocada em uma placa de polimento de vidro (dimensões: quadrados de 3" x 3") usando um chorume de alumina para 30 s com movimentos circulares e de oito em forma de mão durante o polimento.
2. Enxágüe o microeletrodo Au com água deionizada, insira-a em um frasco de vidro contendo 15 mL de etanol absoluto (grau LR) e ultrassonicar por 2 min.
3. Enxágüe a microeletrônica Au com etanol e água e, novamente, ultrassonize-a por 4 minutos em água deionizada para remover o excesso de alumina da superfície do eletrodo.
4. Finalmente, remova impurezas adicionais pedalando em 0,5 M H₂SO₄ para 20 segmentos entre potenciais de 0,4 e 1,6 V (vs. Ag/AgCl) a uma taxa de varredura de 50 mV/s. Certifique-se de que há dois picos claros devido à formação e redução do óxido de ouro em potenciais anodódicos e catódicos consistentes cada vez que o eletrodo é limpo em H₂SO₄.

3. Técnica de voltammemetria cíclica

1. Use um potencial de potencialização adequado para executar cv como a técnica eletroquímica de interesse.
2. Ligue o potencialiostat e o computador ligado a ele. Certifique-se de que o sistema está conectado.
3. Para testar a comunicação entre o computador e o instrumento, inicie o software e ligue o instrumento. Use o comando Teste de hardware no menu Configuração . Se aparecer um erro de falha de link , verifique as configurações de conexão e porta.
4. Abra o software de potencialiostat no computador e, no menu Configuração, escolha Técnica. Na janela de abertura, escolha a voltametria cíclica (CV). Novamente, volte para o menu Configuração e clique em Parâmetros para inserir os parâmetros experimentais para a execução cv.
   1. Use os seguintes parâmetros cv para executar a eletropoliomerização PEDOT em um eletrólito orgânico na microeletrância Au nua: potencial inicial: -0,3 V, potencial final: -0,3 V, alto potencial: 1,2 V, número de segmentos: 8, taxas de varredura: 100 mV/s, direção: positiva.
   2. Use os seguintes parâmetros cv para executar a eletropoliomerização PEDOT em um eletrólito aquoso/ACN no microeletrônio Au nu: potencial inicial: -0,3 V, potencial final: -0,3 V, alto potencial: 1,2 V, número de segmentos: 20, taxas de varredura: 100 mV/s, direção: positivo.
   3. Use os seguintes parâmetros cv para executar a etapa de aclimatação da microeleroda Au modificada por PEDOT organicamente: potencial inicial: -0,2 V, potencial final: -0,2 V, alto potencial: 0,8 V, número de segmentos: 20, taxas de varredura: 100 mV/s, direção: positivo.
   4. Use os seguintes parâmetros cv para soluções padrão UA e tampão fosfato (pH 6.6) com o microeletrodo Au nu: potencial inicial: 0 V, potencial final: 0 V, alto potencial: 1 V, número de segmentos: 2, taxas de varredura: 100 mV/s, e direção: positiva.
   5. Use os seguintes parâmetros cv para soluções padrão UA e tampão de fosfato (pH 6.6) no microeletrodo Au feito organicamente, modificado por PEDOT: potencial inicial: 0 V, potencial final: 0 V, alto potencial: 0,6 V, número de segmentos: 2, taxas de varredura: 100 mV/s, e direção: positiva.
   6. Utilize os seguintes parâmetros cv para as amostras de leite e tampão fosfato (pH 6.6) no microeletrodo Au organicamente feito, modificado por PEDOT: potencial inicial: 0 V, potencial final: 0 V, alto potencial: 0,8 V, número de segmentos: 2, taxas de varredura: 100 mV/s, direção: positivo.
5. Prepare três configurações de eletrodo em uma célula eletroquímica de vidro, incluindo um eletrodo de trabalho (microeletrodo Au (10 μm de diâmetro)), um eletrodo de referência (por exemplo, cloreto de prata/prata (Ag/AgCl) em cloreto de sódio de 3 M (NaC) e um eletrodo de fio de platina.
6. Passe estes eletrodos limpos e secos através dos orifícios de um suporte de eletrodos presos a um suporte. Em seguida, coloque o suporte acima da célula eletroquímica para inserir os eletrodos na solução ou amostra alvo.
7. Certifique-se de que não há bolhas nas superfícies do eletrodo.
   1. Se houver bolhas, remova os eletrodos, enxágue com água deionizada novamente e seque com um tecido. Coloque os eletrodos de volta no suporte do suporte e na solução.
   2. Se houver bolhas ao redor do eletrodo de referência, toque suavemente na ponta.
   3. Se houver bolhas ao redor do eletrodo do contador depois que ele começar a funcionar, limpe o eletrodo do contador. Se a varredura CV ficar ruidosa, limpe a superfície do eletrodo e verifique as conexões, fios e clipes do sistema.
8. Certifique-se de que todas as três conexões de fio para referência, trabalho e eletrodos de contador estejam corretamente conectados e, em seguida, inicie o experimento clicando em Executar na parte inferior.
9. Executar todos os experimentos à temperatura ambiente. Para amostras de leite, deixe que a temperatura das amostras de leite atinja a temperatura ambiente antes de funcionar cv.

4. Coleta e análise de dados

1. Depois de executar cv, salve os dados no formato desejado (CSV ou Bin) em uma pasta e, em seguida, use um cartão de memória USB para recolhê-los. Analise os dados usando software apropriado. Converta arquivos CSV em planilhas para facilitar a análise.
   NOTA: Se os dados forem salvos no formato de um arquivo Binário, converta-os para o formato de Círio de Texto antes da coleta de dados em um cartão de memória USB.
2. Para analisar o CV das amostras de leite, subtrair o CV do cv de fundo (ou seja, CV de tampão fosfato (pH 6.6) tomado antes de executar cada amostra de leite) para produzir curvas devido à oxidação do perfil do leite.

5. Técnicas para caracterizar PEDOT

1. Use um tipo específico de SEM de alto desempenho para caracterizar as camadas PEDOT feitas em diferentes eletrólitos.
   NOTA: Aqui, foi utilizado o FEI Quanta 200 ESEM FEG; é equipado com uma pistola de emissão de campo Schottky (FEG) para melhor resolução espacial. Este instrumento fornece diferentes modos de trabalho, como modos SEM de vácuo alto, baixo vácuo e ambiental e é equipado com um detector SiLi (Lithium drifted) Super Ultra-Thin Window EDS.
2. Verifique a morfologia superficial de microeletrodos au (PEDOT-Au) nus e modificados pedot pela SEM após a eletropolomerização PEDOT em soluções orgânicas e aquosas. Realize a eletropolimerização PEDOT em microeletrodos Au nus em soluções aquosas/ACN imediatamente antes de checá-las pela SEM.
3. Coloque os eletrodos recém-preparados (uma microeletrídra Au nua e duas das microeletrodos PEDOT-Au) no palco SEM horizontalmente, com a cabeça acima do palco em um determinado ângulo.

Resultados

Voltametria cíclica é uma técnica fácil de formar uma fina camada PEDOT em uma superfície de microeletrodes Au para aumentar a condutividade e sensibilidade do eletrodo durante o sensoriamento eletroquímico de analitos de alvo. Este protocolo demonstra o método de eletropolimerização de 0,1 M EDOT de uma solução orgânica em comparação com 0,01 M EDOT de uma solução de eletrólito aquoso. A execução de 10 ciclos em solução aquosa/ACN resulta em um crescimento moderado de PEDOT comparável ao observado ...

Discussão

O método CV permite a medição rápida e simples de diferentes analitos em alimentos, vinhos e bebidas, extratos vegetais e até amostras biológicas. Esta técnica produz uma grande variedade de dados, incluindo potenciales de pico de oxidação/redução, valores de pico de corrente do analito alvo (proporcional à concentração) e todos os outros valores atuais e potenciais após cada cv executado. Embora o uso de CV seja relativamente fácil, os dados coletados às vezes precisam ser convertidos de arquivos binár...

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
Acetonitrile	Baker Analyzed HPLC Ultra Gradient Solvent	75-05-8	HPLC grade
Alumina polishing pad	BASi, USA	MF-1040	tan/velvet color
Belgian chocolate milk	Puhoi Valley dairy company, Auckland, NZ	_	Buy from local supermarket
Caramel/white chocolate milk	Puhoi Valley dairy company, Auckland, NZ	_	Buy from local supermarket
CH instrument	CH instruments, Inc. USA	_	Model CHI660E
Counter electrode	BASi, USA	MW-1032	7.5 cm long platinum wire (0.5 mm diameter) auxiliary/counter electrode, 99.95% purity
Disodium hydrogen phosphate (Na2HPO4, 2H2O)	Scharlau Chemie SA, Barcelona, Spain	10028-24-7	Weigh 17.8 g
DURAN bottle	University of Auckland	_	The glasswares were made locally at the University of Auckland
Electrochemical cell	BASi, USA	MF-1208	5-15 mL volume, glass
Electrode Polishing Alumina Suspension	BASi, USA	CF-1050	7 mL of 0.05 µm particle size alumina polish
Espresso milk	Puhoi Valley dairy company, Auckland, NZ	_	Buy from local supermarket
3,4-Ethylenedioxythiophene (EDOT), 97%	Sigma-Aldrich	126213-50-1	Take 10.68 μL from bottle
FEI ESEM Quanta 200 FEG	USA	_	SEM equipped with a Schottky field emission gun (FEG) for optimal spatial resolution. The instrument can be used in high vacuum mode (HV), low-vacuum mode (LV) and the so called ESEM (Environmental SEM) mode.
Gold microelectrode	BASi, USA	MF-2006	Working electrode (10 μm diameter)
Lithium perchlorate, ACS reagent, ≥95%	Sigma-Aldrich	7791-03-9	Make 0.1 M solution
Micropipettes	Eppendorf	_	10-100 μL and 100-1000 volumes
MilliQ water	Thermo Scientific, USA	_	18.2 MΩ/cm at 25°C, Barnstead Nanopure Diamond Water Purification System
Propylene carbonate, Anhydrous, 99.7%	Sigma-Aldrich	108-32-7	Take 20 mL from bottle
Reference electrode	BASi, USA	MF-2052	Silver/silver chloride (Ag/AgCl) electrode to be kept in 3 M sodium chloride
Replacement glass polishing plate	BASi, USA	MF-2128	Glass plate as a stand to attach the polishing pad on it
Sodium dihydrogen phosphate  (NaH2PO4, 1H2O)	Sigma-Aldrich	10049-21-5	Weigh 13.8 g
Sodium hydroxide pearls, AR	ECP-Analytical Reagent	1310-73-2	Make 0.1 M solution
Sodium perchlorate, ACS reagent, ≥98%	Sigma-Aldrich	7601-89-0	Make 0.1 M solution
Sulfuric acid (98%)	Merck	7664-93-9	Make 0.5 M solution
Uric acid	Sigma-Aldrich	69-93-2	Make 1 mM solution
Whole milk	Anchor dairy company, Auckland, NZ		Blue cap milk, buy from local supermarket