Para começar, instrua o paciente a fazer jejum durante a noite antes da coleta da amostra. No dia seguinte, abra o kit de teste de string. Pegue a cápsula e segure o laço na extremidade da corda.
Tape a corda na bochecha do paciente. Em seguida, oriente o paciente a colocar a cápsula em sua língua perto da parte de trás da garganta e engoli-la com um gole de água. Depois que a cápsula tiver sido dissolvida no estômago do paciente por uma hora, instrua um assistente treinado a puxar cuidadosamente a corda do paciente.
Em seguida, coloque a extremidade embebida no líquido gástrico em uma solução de preservação da amostra de EET e corte a extremidade inferior da corda. Coloque o espécime rotulado que transporta tubos de coleta em um rack de tubo de ensaio e vórtice por 10 segundos. Vire a placa de 32 poços de cabeça para baixo várias vezes para ressuspender as contas magnéticas, vórtice por 10 segundos.
Em seguida, remova cuidadosamente o teto de folha de alumínio da placa. Transferir 200 microlitros de líquido gástrico de cada amostra e DNA do helicobacter pylori como controle positivo para os poços separados. Colocar a placa de 32 poços na ranhura de amostra correspondente da máquina extractora de ácido nucleico para extracção automática de ADN, após extracção e confirmação do ADN.
Colocar o excesso de líquido gástrico e as amostras de ADN extraídas a menos 20 graus Celsius até à utilização, descongelar a mistura de reacção qPCR no gelo e misturá-la agitando e girando para evitar a perda de reagentes Para cada amostra em uma placa de 32 poços, misturar 20 microlitros da mistura de reação de PCR com primers de ureia para frente e para trás, uma sonda de ureia e cinco microlitros do DNA extraído. Coloque a placa na máquina qPCR e ajuste o programa termociclador. Ajuste a aquisição do sinal fluorescente para FAM a aquisição de dados, para o período de extensão da amplificação e inicie a corrida, após a conclusão da reação.
Salve os dados para análise. Analise os dados com um software especializado para qPCR, pois o instrumento seleciona automaticamente os limiares basais. Se o resultado do teste for h.
pylori são positivos, substitua o kit de reagentes por reagentes de detecção para o gene 23S rRNA e mutação do gene gyrA no kit h. pylori e inicie o teste de resistência à droga na amostra. Este estudo mostra a detecção de h.
pylori e sua resistência a antibióticos no fluido gástrico por qPCR. Entre as amostras positivas para H. pylori.
S2 apresentou valores de TC dentro da faixa de detecção, indicando dupla resistência à claritromicina e à levofloxacina. Os valores de S3 CT estavam dentro da detecção para infecção por H. pylori e resistência à levofloxacina, mas não para resistência à claritromicina, indicando resistência à levofloxacina.
Da mesma forma, S4 apresentou valores detectáveis de TC para infecção por H. pylori e resistência à claritromicina, mas não para resistência à levofloxacina, sugerindo resistência à claritromicina. O S5 apresentou valores de TC detectáveis apenas para h.
infecção por pylori indicando sensibilidade a ambos os antibióticos e permitindo o tratamento com qualquer uma das drogas.
