Comece posicionando um camundongo anestesiado em seu lado direito em um suporte cirúrgico aquecido para expor seu abdome esquerdo. Fixe os membros dianteiros e posteriores do mouse com fita adesiva de papel, garantindo a visibilidade do baço. Em seguida, desinfete a pele no local da cirurgia aplicando antisséptico generosamente.
Confirme se o rato está totalmente anestesiado administrando uma pinça do dedo do pé. Usando pinças, levante a pele do abdome superior esquerdo e faça uma incisão circular de 10 milímetros na pele e na camada muscular usando uma tesoura de castroviejo. Localize o pâncreas preso ao baço para determinar a direção em que o ponto cruz deve ser colocado.
Use uma sutura de seda 5/0 para colocar o primeiro ponto na camada muscular no local identificado. Garanta o final com três a cinco nós. Continue a costurar diretamente através da incisão.
Em seguida, corte e deixe uma cauda de aproximadamente cinco centímetros. Repita a costura, desta vez perpendicular ao ponto original. Em seguida, levante e posicione cuidadosamente o pâncreas sobre o ponto cruz.
Coloque um ponto de corda de bolsa a aproximadamente um milímetro do buraco, entrelaçando a pele e a camada muscular. Posicione a moldura da janela de modo que as bordas circulares da incisão estejam localizadas dentro do sulco da janela. Agora, prenda a janela implantada amarrando firmemente a seda 5/0.
Coloque 100 microlitros de adesivo líquido de cianoacrilato em uma seringa de 10 milímetros. Aplique uma delicada corrente de ar comprimido em direção ao tecido por cerca de 10 segundos para secá-lo. Usando pinças, prenda a moldura da janela por sua borda externa e levante cuidadosamente para garantir a separação do pâncreas da base da moldura da janela.
Dispense uma fina camada de adesivo líquido de cianoacrilato ao longo do recesso da janela, evitando o tecido pancreático. Em seguida, use captadores a vácuo para levantar o deslizamento da tampa de cinco milímetros. Posicione suavemente a tampa deslizante no centro da moldura da janela óptica e mantenha a pressão leve por aproximadamente 25 segundos para permitir que o adesivo se fixe.
Usando pinças, retire a tampa dos captadores a vácuo. Em seguida, aperte as suturas de ponto cruzado para fixar o pâncreas ao deslizamento da tampa e corte as extremidades da sutura. Finalmente, remova a fita do mouse.
Desligue o vaporizador de isoflurano e realoque o mouse para uma gaiola limpa. Observou-se aumento da estabilidade lateral e axial do tecido pancreático após o período de colonização. As imagens com o SWIP mostraram menores níveis de deriva em comparação com as janelas abdominal e pancreática.
Imagens seriadas do pâncreas murino foram realizadas após o tratamento com ceruleína. A relocação do lóbulo foi observada após dois dias consecutivos. O SWIP também pode ser usado para imagens de longo prazo, permitindo a visualização e quantificação da motilidade do vacúolo.
Por exemplo, a velocidade média dos vacúolos no pâncreas murino aumentou aproximadamente 10% após o tratamento com ceruleína, em relação à PBS. O tratamento com ceruleína também aumentou a frequência média de giro das estruturas subcelulares em 10%No entanto, não houve diferença significativa na velocidade líquida, direcionalidade ou distância cumulativa entre os tratamentos. O SWIP permite a visualização e captura da migração de células tumorais.
A migração coletiva de células tumorais foi observada em curtos períodos de tempo. Migração unicelular de células tumorais e macrófagos também foi observada.
