Para iniciar a semeadura celular, conte as células depois de separá-las usando métodos mecânicos ou enzimáticos. Usando uma micropipeta, adicione o número calculado de células por poço na placa de seis poços contendo grades de microscopia eletrônica pré-preparadas, evitando bolhas. Certifique-se de manter 1,5 a 2,0 mililitros de suspensão celular por poço.
Para a transfecção de clones moleculares do HIV, incubar as células por 16 a 24 horas a 37 graus Celsius. Adicione 50 microlitros de DMEM livre de soro e um micrograma de DNA a um tubo de microcentrífuga limpo. Para cada um, diluir bem três microlitros de reagente de transfecção em DMEM livre de soro em um tubo de microcentrífuga limpo separado.
Homogeneizar a mistura separadamente usando uma micropipeta. Em seguida, adicione a mistura de reagentes de transfecção à mistura de DNA via micropipeta e incube por 15 minutos à temperatura ambiente. Depois disso, adicione 100 microlitros do reagente de transfecção e a mistura de DNA caia em cada poço diretamente em cima das grades.
Substitua o meio de crescimento 16 a 24 horas após a transfecção. 24 horas após a fase de co-transfecção como microscopia e fluorescente como microscopia, mostrou que todas as grades tinham rasgos mínimos na camada de carbono. As células nas grades simuladas e nas grades co-transfectadas continham células viáveis em vários quadrados de grade.
