Para começar a preparar as grades de microscopia eletrônica para criotomografia celular, coloque a grade, carregada com filme de suporte de carbono perfurado, em um dispositivo de descarga de brilho com o lado de carbono da grade voltado para cima. Em seguida, descarrega a grade a 15 miliamperes, sob pressão atmosférica de 0,39 milibar por 45 segundos. Feito isso, coloque a grade em um recipiente limpo, forrado com papel filtro.
Em seguida, transfira a grade juntamente com fibronectina, solução salina tamponada com fosfato ou PBS, placas e pinças para um gabinete de biossegurança. Usando uma micropipeta, lance dois pontos de fibronectina bovina de tamanho generoso em uma superfície estéril como uma tampa de placa de seis poços. Verifique se os pontos são grandes o suficiente para envolver toda a grade.
Em seguida, obter cinco por 15 pinças e tratar ambos os lados da grade com a solução de aderência à fibronectina. Uma vez tratada com fibronectina bovina, a grade ficará pegajosa. Toque suavemente a superfície não carbônica da grade no fundo de um poço vazio em uma placa de seis poços e solte a pinça para prender a grade à nova superfície.
Em seguida, incubar a grade por 30 minutos na solução de aderência à fibronectina. Para evitar que as grades sequem, adicione de uma a duas gotas de solução de aderência em cima das grades, usando uma micropipeta a cada 15 minutos. Após a incubação, remova o excesso de aderência da solução com uma micropipeta.
Lave as grades adicionando gotas de PBS diretamente sobre as grades, usando a micropipeta de duas a três vezes. Esterilizar as grades sob luz UV em um armário de biossegurança por uma hora. Posicione as grades o mais próximo possível do UV para máxima esterilização.
Evite que as grades sequem durante a esterilização por micropipetagem de uma a duas gotas de PBS no topo da grade a cada 10 minutos.
