Para começar, posicione o mouse anestesiado na mesa cirúrgica. Mantenha a temperatura corporal usando uma sonda retal conectada a uma almofada de aquecimento. Faça uma incisão na pele da cabeça na direção da sutura sagital, começando pelas orelhas até a área entre os olhos.
Retrair a pele e remover o periósteo do lado direito do crânio. Em seguida, encontre as coordenadas, 2,5 milímetros laterais do bregma. Aplicar cianoacrilato no suporte do doppler e fixá-lo para a fluxometria laser-doppler.
Depois que a cola secar, conecte a sonda doppler. Em seguida, verifique a leitura correta do sinal para avaliar o fluxo sanguíneo cerebral. Para realizar a oclusão da artéria, vire o mouse para a posição supina e fixe-o na mesa cirúrgica com fita adesiva.
Em seguida, faça uma incisão na linha média do pescoço. Puxar a pele lateralmente, em seguida, puxar as glândulas salivares usando afastadores. Isso expõe o território carotídeo.
Identificar a anatomia vascular da artéria carótida comum, ou ACC, a ACI e a ECA, bem como as diferentes artérias delas derivadas. Para facilitar o manuseio, desprenda a CCA, seguida da ECA do tecido conjuntivo. Em seguida, cauterizar a artéria tireoidiana superior e desprender a ACI do tecido conjuntivo.
Verifique novamente para se certificar de que as artérias principais estão totalmente descoladas do tecido conjuntivo. Em seguida, envolver pontos de seda 6-0 ao redor da ECA na bifurcação lingual maxilar. Em seguida, sutura ao redor da CCA.
Coloque um clipe vascular interrompendo a circulação sanguínea do ICA. Faça uma pequena incisão no ECA próximo à área onde o nó apertado está localizado. Insira o monofilamento até que o revestimento espesso tenha entrado completamente na luz arterial.
Aperte o segundo nó para segurar o monofilamento dentro da artéria e evitar que a pressão exercida pelo sangue o empurre para fora. Corte o ECA abaixo do primeiro nó e gire o coto para orientá-lo na direção do ICA. Avançar o monofilamento através do ICA até o ponto onde o MCA se ramifica.
A oclusão é refletida em uma queda abrupta do fluxo sanguíneo na leitura do LDF. Após 40 minutos, anestesiar novamente o camundongo e colocá-lo novamente na mesa cirúrgica. Retire os pontos do pescoço.
Após 45 minutos de oclusão, solte o nó mantendo o monofilamento no lugar. Puxe lenta e suavemente o filamento e verifique se ocorre a recanalização do tecido. Em seguida, puxe o filamento e aperte o nó para evitar a perda de sangue, limpe o sangue e desamarre o nó CCA.
Certifique-se de que não há danos na parede arterial. Remova os afastadores e reposicione os músculos, glândulas e pele. Sutura a pele com sutura 6-0 e aplicação de desinfetante.
Desconecte a sonda Doppler e desconecte o suporte. Por fim, suture e desinfete a pele da cabeça. O resultado do procedimento de oclusão transitória da artéria cerebral média foi avaliado por meio de neuroimagem por RM in vivo.
A evolução da lesão avaliada em diferentes momentos após a reperfusão mostrou que a progressão do volume da lesão leva aproximadamente dois dias para ser completada. Testes comportamentais, como o teste de força de preensão, mostraram perda de força em camundongos após 24 horas de oclusão transitória da artéria cerebral média. Além disso, ao serem estimulados no teste do canto, os camundongos mostraram preferência em virar para o lado direito, que era ipsilateral à lesão, indicando uma oclusão bem-sucedida da artéria cerebral média do lado direito.
