Agradecemos a Beth Rauch e da Universidade de Wisconsin Facility Imagem de Pequenos Animais de ressonância magnética. O Departamento de Cirurgia Neurológica da Universidade de Wisconsin-Madison forneceu o financiamento para este trabalho.

MCAO modelo Rat Os preparativos pré-cirúrgica Técnica asséptica deve ser usado para todos os procedimentos cirúrgicos de sobrevivência. Desinfetar a superfície de trabalho cirúrgico com desinfectante comercial e preparar pacotes cirúrgicos estéreis de instrumentos, cortinas, gazes, compressas, suturas, e lâminas de bisturi em autoclave. A máscara cirúrgica, gorro cabelo e luvas estéreis devem ser usados. A Germinator seca talão de esterilização também é usado para reesterilize instrumentos cirúrgicos entre os procedimentos de cirurgias de ratos se vários será feito durante uma sessão. Pré-aquecer um cobertor jaqueta de água homeotérmicos e colocar sob um pano absorvente para evitar a hipotermia do rato durante a cirurgia. <ol><li> Lugar espontaneamente ratos hipertensos (ou tensão outro rato de escolha) em uma câmara de indução e induzir a anestesia com 5% de isoflurano (aparelho de anestesia deve ser ajustado para 1,0 L / min O 2 e 1,0 L / min N 2 O). Inferior a 1-2% de isoflurano para manter a anestesia. </li><li> Aplicar pomada lágrimas artificiais para ambos os olhos. </li><li> Raspar a garganta e região do pescoço esquerda, além do local da incisão prospectivos usando cortadores (Oster A5 com lâmina # 10). </li><li> Aplicar a Betadine uma gaze e desinfectar a pele a partir do centro da região cirúrgica, em espiral para fora. Enxágüe com gaze estéril, contendo etanol 70%, passando pad em um padrão similar. Repita os passos para um total de três ciclos. </li><li> Injetar 0,2 mL de bupivacaína a 0,5% por via subcutânea ao longo do local da incisão em perspectiva. </li><li> Rat lugar na meia estéril ou cobrir com uma cortina cirúrgica estéril. </li></ol> Oclusão transitória da MCA <ol start="7"><li> Sob um microscópio cirúrgico, uma incisão mediana ventral é realizada e da fáscia superficial é dissecado. </li><li> Abaixo da fáscia superficial, não há tecido glandular para a esquerda e três músculos que formam um triângulo: o esterno-hióideo, que se situa na linha média sobre a traquéia, o digástrico (facilmente identificada com sua porção tendinosa branco brilhante) e, por último, o músculo esternocleidomastóideo. </li><li> Dissecção cortante e contundente cuidado é realizado dentro do triângulo para identificar a artéria carótida (dissecção romba exclusiva pode ser preferido por alguns para minimizar os danos dos tecidos acidental). As artérias externa, interna e carótida comum (ECA, ICA, CCA) são expostos. A artéria carótida é grande e visivelmente pulsos. O nervo vago é visto correndo ao longo da face lateral de ambos comum e artérias carótidas internas e é fortemente dissecadas as artérias carótidas comum e interna. </li><li> Dois ramos ECA são, então, dissecados acentuadamente, o ramo medial e primeiro título do segundo ramo título lateralmente. Ambos os ramos são cauterizados e corte, que permite maior facilidade na mobilização dos navios de maior porte. </li><li> O ECA é agora dissecado mais rostralmente. O osso hióide pode ser encontrado e isso vai limitar a extensão da dissecção rostral. A artéria carótida externa é amarrado como distalmente possível com um fio de seda 6-0. </li><li> Outro fio de seda 6-0 é colocado frouxamente em torno do ECA, perto da bifurcação com a ICA. Certifique-se de não obstruir o vaso como a sutura intraluminal para ser usado para a oclusão estará passando por aqui em uma etapa posterior. </li><li> Clips microcirúrgicas são colocados em comum e artérias carótidas internas, perto da bifurcação. </li><li> Uma arteriotomia parcial inicial é criada entre os dois laços de seda de sutura na artéria carótida externa. </li><li> Introduzir um 2,2 cm de comprimento -3,0 de sutura 4-0 monofilamento nylon, com um centímetro de sua kink 2,0 arredondado, ponta de silício revestido, no lúmen ECA em direção ao CCA, onde o clipe está localizado microcirúrgica. Estes pontos são disponíveis comercialmente (Doccol Corp, Redlands, CA, EUA). Corte a porção restante da ECA (no local da arteriotomia parcial) para libertar o coto ea posição do tronco abaixo da bifurcação da ECA e ICA, o que irá permitir mais facilmente a sutura intraluminal para deslizar no ICA. </li><li> Aperte o fio de seda ao redor do coto ECA para proteger o fio de náilon intraluminal e prevenir o sangramento, e depois remover o clipe microvascular do ICA. Abra o clipe lentamente antes de removê-lo para verificar se há sangramento. </li><li> Continuar avançando a sutura de nylon do ECA para ICA lúmen da artéria cerebral média (MCA). Este comprimento é tipicamente 18-20 mm e é a razão para colocar uma torção na sutura antes da inserção. Depois de um comprimento variável de sutura nylon é inserido, a resistência pode ser sentida. Se isso ocorre com grande parte do fio de náilon ainda presente no exterior do navio, isso indica que a sutura é provável entrada da artéria pterigopalatina (ver nota abaixo). Puxar para trás e curva a sutura ligeiramente para continuar ao longo do ICA, que será executado mais medialmente. Além disso, a dissecção da origem do PPA pode ser feito para melhor visualizar o caminhodo filamento intraluminal. Continue a inserir o fio de náilon até sentir resistência durante e após a posição cm 2 torcida. Neste ponto, a sutura intraluminal bloqueou a origem do MCA. MCA oclusão pode ser confirmada através do monitoramento da redução do fluxo sanguíneo cerebral regional através de um laser fluxômetro Doppler (ver tabela Materiais para uma fonte de equipamento). Observe também que a origem da artéria pterigopalatina fora do ICA pode estar diretamente ligada off, se preferir, a fim de evitar a intubação acidental deste navio com o fio intraluminal. </li><li> Iniciar o cronômetro e registrar o tempo começar a oclusão. </li><li> Remover o microclip do CCA. </li><li> Fechar a incisão (derme, panículo carnosus, camadas de tecido subcutâneo) rapidamente com fio de seda 3-0 (um padrão simples contínuo irá facilitar a reabertura de reperfusão) e cuidadosamente coloque o rato em uma gaiola de recuperação. Verifique se o piso da gaiola em volta do nariz e da boca estão livres de material de cama e recuperação monitor da anestesia. </li></ol> Restauração do fluxo sanguíneo MCA (reperfusão) <ol start="21"><li> Pouco antes do período de oclusão deve terminar, re-anestesiar o rato, desinfectar o local da incisão com Betadine e etanol a 70% (3 ciclos, como antes) e reabrir a incisão através da remoção das suturas de fechamento. </li><li> Coloque um microclip no CCA, como antes. </li><li> Retirar a sutura parcialmente a oclusão da ACI até o final de sutura é visível através do ICA. NÃO remover completamente a sutura do ICA / ECA! </li><li> Coloque um microclip na ICA acima da extremidade do fio intraluminal. </li><li> Remover completamente a sutura oclusão e amarrar firmemente o coto ECA. Fim registro de oclusão (start reperfusão) tempo. </li><li> Remover o microclip do ICA. </li><li> Remover o microclip do CCA. </li><li> Umedecer a região com algumas gotas de solução salina estéril e fechar a incisão camadas (derme, panículo carnosus, tecido subcutâneo) com fio de seda 3-0 com um padrão simples interrompido. </li><li> Administrar a buprenorfina 0,05 mg / kg (ou outro analgésico pós-operatório adequado na sequência de suas diretrizes institucionais) para o espaço peritoneal. </li><li> Injetar 5cc de solução salina intraperitoneal pré-aquecido. Isto irá fornecer a hidratação durante a fase de recuperação. </li><li> Monitorar a recuperação de ratos da anestesia. </li><li> Depois de o rato se recuperou, teste comportamental para indicação de infarto mantendo o rato pelo rabo e observando se o rato pode girar para ambos os lados. Curling para um lado só é esperado. Escalas de classificação simples pode ser usado para gravar funcionamento pós-infarto inicial Behavorial (ver Discussão). </li><li> Injeções adicionais de buprenorfina (mesma dosagem acima) deve ser administrada a cada 6 a 8 horas para 24 horas de alívio da dor. Estender analgesia se o animal está mostrando sinais de desconforto. </li></ol> Resultados representante <img src="/files/ftp_upload/1978/1978fig1.jpg" alt="Figura 1" /> Figura 1. Oclusão da artéria cerebral média por sutura endovascular. Um diagrama simplificado do sistema circulatório do crânio do rato é mostrado com uma sutura de silício revestido intraluminal ocluindo a origem da MCA. A OA e ramos ST fora do ECA esquerda têm sido ligada e uma gravata de sutura ao redor do coto ECA detém a sutura intraluminal no lugar. ACA, artéria cerebral anterior; BA, artéria basilar; CCA, artéria carótida comum; ECA, da artéria carótida externa; ICA, artéria carótida interna; MCA, artéria cerebral média; OA, artéria occipital; PCA, artéria cerebral posterior; PComA, comunicante posterior artéria; PPA artéria, pterigopalatina; ST, artéria tireóidea superior. Figura adaptada de Sasaki et al. 4 e Lee 3. <img src="/files/ftp_upload/1978/1978fig2.jpg" alt="Figura 2" /> Figura 2. Ressonância magnética representante de cortes coronais de cérebro de rato, 24 horas após uma hora MCAO transitória. Edema cerebral que acompanha a isquemia focal é visualizado em T2 de ressonância magnética. A zona de infarto aparece hiperintenso (claro) em imagens de T2. Padrões de infarto semelhante pode ser visto com mais avançadas técnicas de ressonância magnética, como imagem ponderada em difusão e coeficiente de difusão aparente mapeamento 5. <img src="/files/ftp_upload/1978/1978fig3.jpg" alt="Figura 3" /> Figura 3. Representante cortes coronais do cérebro de ratos corados com TTC 24 horas após uma hora MCAO transitória. Coloração TTC revela branco (sem manchas) regiões de infarto do córtex cerebral e estriado em ratos mesmo que é mostrado na Figura 2. Note-se que o padrão geral de lesões isquêmicas focais é semelhante à observada na ressonância magnética T2, embora a área de infarto final determinado histologicamente pode ser ligeiramente menor do que a lesão T2.

<ol>
	<li>van Gijn, J., Dennis, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Issues+and+answers+in+stroke+care.">Issues and answers in stroke care.</a> Lancet. 352, SIII23-27 (1998).</li><li>Macrae, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+models+of+focal+cerebral+ischaemia.">New models of focal cerebral ischaemia.</a> British Journal of Clinical Pharmacology. 34, 302-302 (1992).</li><li>Lee, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphology+of+cerebral+arteries.">Morphology of cerebral arteries.</a> Pharmacol Ther. 66, 149-173 (1995).</li><li>Sasaki, M., Honmou, O., Kocsis, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rat+middle+cerebral+artery+occlusion+model+and+intravenous+cellular+delivery.">A rat middle cerebral artery occlusion model and intravenous cellular delivery.</a> Methods Mol Biol. 549, 187-195 (2009).</li><li>Br&#229;tane, B. T., Bastan, B., Fisher, M., Bouley, J., Henninger, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemic+lesion+volume+determination+on+diffusion+weighted+images+vs.+apparent+diffusion+coefficient+maps.">Ischemic lesion volume determination on diffusion weighted images vs. apparent diffusion coefficient maps.</a> Brain Res. 1279, 182-188 (2009).</li><li>Chen, S. T., Hsu, C. Y., Hogan, E. L., Maricq, H., Balentine, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+focal+ischemic+stroke+in+the+rat:+reproducible+extensive+cortical+infarction.">A model of focal ischemic stroke in the rat: reproducible extensive cortical infarction.</a> Stroke. 17, 738-743 (1986).</li><li>Dogan, A., Ba&#351;kaya, M. K., Rao, V. L., Rao, A. M., Dempsey, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraluminal+suture+occlusion+of+the+middle+cerebral+artery+in+Spontaneously+Hypertensive+rats.">Intraluminal suture occlusion of the middle cerebral artery in Spontaneously Hypertensive rats.</a> Neurol Res. 20, 265-270 (1998).</li><li>Ogata, J., Fujishima, M., Morotomi, Y., Omae, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+infarction+following+bilateral+carotid+artery+ligation+in+normotensive+and+spontaneously+hypertensive+rats:+a+pathological+study.">Cerebral infarction following bilateral carotid artery ligation in normotensive and spontaneously hypertensive rats: a pathological study.</a> Stroke. 7, 54-60 (1976).</li><li>Brint, S., Jacewicz, M., Kiessling, M., Tanabe, J., Pulsinelli, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focal+brain+ischemia+in+the+rat:+methods+for+reproducible+neocortical+infarction+using+tandem+occlusion+of+the+distal+middle+cerebral+and+ipsilateral+common+carotid+arteries.">Focal brain ischemia in the rat: methods for reproducible neocortical infarction using tandem occlusion of the distal middle cerebral and ipsilateral common carotid arteries.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 8, 474-485 (1988).</li><li>Duverger, D., MacKenzie, E. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+quantification+of+cerebral+infarction+following+focal+ischemia+in+the+rat:+influence+of+strain,+arterial+pressure,+blood+glucose+concentration,+and+age.">The quantification of cerebral infarction following focal ischemia in the rat: influence of strain, arterial pressure, blood glucose concentration, and age.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 8, 449-461 (1988).</li><li>Coyle, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+susceptibilities+to+cerebral+infarction+in+spontaneously+hypertensive+(SHR)+and+normotensive+Sprague-Dawley+rats.">Different susceptibilities to cerebral infarction in spontaneously hypertensive (SHR) and normotensive Sprague-Dawley rats.</a> Stroke. 17, 520-525 (1986).</li><li>Slivka, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypertension+and+hyperglycemia+in+experimental+stroke.">Hypertension and hyperglycemia in experimental stroke.</a> Brain Res. 562, 66-70 (1991).</li><li>Bouley, J., Fisher, M., Henninger, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+between+coated+vs.+uncoated+suture+middle+cerebral+artery+occlusion+in+the+rat+as+assessed+by+perfusion/diffusion+weighted+imaging.">Comparison between coated vs. uncoated suture middle cerebral artery occlusion in the rat as assessed by perfusion/diffusion weighted imaging.</a> Neurosci Lett. 412, 185-190 (2007).</li><li>Schmid-Elsaesser, R., Zausinger, S., Hungerhuber, E., Baethmann, A., Reulen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+reevaluation+of+the+intraluminal+thread+model+of+focal+cerebral+ischemia:+evidence+of+inadvertent+premature+reperfusion+and+subarachnoid+hemorrhage+in+rats+by+laser-Doppler+flowmetry.">A critical reevaluation of the intraluminal thread model of focal cerebral ischemia: evidence of inadvertent premature reperfusion and subarachnoid hemorrhage in rats by laser-Doppler flowmetry.</a> Stroke. 29, 2162-2170 (1998).</li><li>Shimamura, N., Matchett, G., Tsubokawa, T., Ohkuma, H., Zhang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+silicon-coated+nylon+suture+to+plain+nylon+suture+in+the+rat+middle+cerebral+artery+occlusion+model.">Comparison of silicon-coated nylon suture to plain nylon suture in the rat middle cerebral artery occlusion model.</a> J Neurosci Methods. 156, 161-165 (2006).</li><li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats.">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20, 84-91 (1989).</li><li>Shigeno, T., McCulloch, J., Graham, D. I., Mendelow, A. D., Teasdale, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pure+cortical+ischemia+versus+striatal+ischemia.+Circulatory,+metabolic,+and+neuropathologic+consequences.">Pure cortical ischemia versus striatal ischemia. Circulatory, metabolic, and neuropathologic consequences.</a> Surgical neurology. 24, 47-51 (1985).</li><li>Bederson, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+middle+cerebral+artery+occlusion:+evaluation+of+the+model+and+development+of+a+neurologic+examination.">Rat middle cerebral artery occlusion: evaluation of the model and development of a neurologic examination.</a> Stroke. 17, 472-476 (1986).</li></ol>

Os autores não têm interesses conflitantes de divulgar. Este protocolo foi aprovado pelo Institutional Animal Care e do Comitê Use na Universidade de Wisconsin-Madison School of Medicine e da Saúde Pública e age de acordo com os Institutos Nacionais de Saúde diretrizes para o uso de animais experimentais.

Modelos de roedores de isquemia cerebral pode ser classificado como global ou focal e como reversível ou irreversível. Nós usamos um modelo de isquemia focal reversível, a fim de imitar a lesão de reperfusão, que pode ocorrer em humanos após recanalização pacientes com AVC. Enquanto as ações de ratos a vantagem de circulação cranial semelhante ao humano, a extensa circulação colateral intracraniana devido ao Círculo de Willis e os resultados leptomeníngea anastomoses em volumes incompatíveis infarto 6. Nós usamos o rato espontaneamente hipertensos (SHR) tensão por causa do tamanho do infarto é maior em SHRs expostos a isquemia cerebral focal em comparação com ratos normotensos 70-10. Indução de acidente vascular cerebral em SHRs também é mais consistente e pode gerar menor mortalidade do que em outras cepas comumente usados ​​11. Além disso, parâmetros fisiológicos devem ser monitorados durante toda a cirurgia, porque as flutuações pode adicionar à variabilidade nos volumes de infarto; estes parâmetros incluem pressão arterial O 2 e CO 2 níveis, hipotermia e hiperglicemia, que pode agravar a lesão isquêmica 2,12 . A hipotermia é particularmente preocupante, pois pode diminuir o grau de lesão neuronal isquêmica e, portanto, colocando o rato sobre uma almofada de aquecimento de termorregulação durante a cirurgia é essencial. Nós empregamos comercialmente preparado de silício revestido suturas neste procedimento, na tentativa de aumentar a consistência no tamanho do infarto 13-15. Tradicionalmente, suturas intraluminal usado para ocluir o MCA foram preparados pelo fogo-de arredondamento uma ponta de sutura 3-0 nylon ou usando uma pistola de cola quente para cobrir a ponta de sutura com uma cola pequena pérola 16. Tais procedimentos produzem suturas com diâmetros variando ponta e, assim, pode exigir várias tentativas de oclusão antes de encontrar uma sutura que coincide com o diâmetro do vaso de um rato dado. Variações adicionais sobre o método MCAO descritos neste vídeo incluem oclusão mais distal, poupando os ramos lenticulostriate a fim de ter um infarto puro cortical 17, e oclusão simultânea do MCA e artéria carótida comum ipsilateral para reduzir o fluxo de sangue colateral 6,9. Os efeitos funcionais de acidente vascular cerebral pode ser avaliado usando uma variedade de testes comportamentais, em que os déficits em tarefas específicas se refletem em uma escala de pontuação simples. Por exemplo, Bederson et al. 18 desenvolveu uma classificação neurológica ratos pontuação do grau de flexão do membro anterior em uma posição corporal elevada, resistência assimétrica para um empurrão lateral, e comportamento em campo aberto circulando. Ratos estendendo ambos os membros anteriores para o chão quando elevado e que não apresentam déficits de outras foram classificadas &quot;Normal (0)&quot;, enquanto os ratos com a flexão do membro anterior contralateral só foram classificados com &quot;déficits moderados (1)&quot;. &quot;Grave grau 2&quot; ratos diminuiu a resistência exibida no lado contralateral a uma força lateral e &quot;grave grau 3&quot; ratos circulando adicionalmente envolvidos em comportamentos. Menor grau de déficits comportamentais foram sempre observadas no grau imediatamente superior (por exemplo, grau 2 e 3 os animais também exibido flexão forelimb) e os escores foram preditivos de diferenças no tamanho do infarto 18. Assim, como um sistema de pontuação simples permite uma rápida avaliação semi-quantitativa consistente dos déficits funcionais de acidente vascular cerebral. A medida da extensão do infarto cerebral é comumente realizada por coloração histológica de dano tecidual utilizando TTC, violeta cresil (Nissl mancha) ou hematoxilina e eosina. Técnicas de ressonância magnética, incluindo a difusão ponderada MRI para visualizar o infarto em momentos iniciais após a oclusão, permitem a determinação de um volume de infarto em cada rato individuais sem a necessidade de colheita de tecidos. Isto é especialmente valioso em estudos destinados a determinar a eficácia de um tratamento neuroprotetor após o AVC; imagem do rato após administração do tratamento MCAO mas antes dá a confiança investigador que todos os animais experimentais e controle experientes cursos semelhantes para começar, reduzindo os efeitos de confusão de variabilidade na indução de acidente vascular cerebral.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td> 4-0 Nylon suture</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Doccol Corporation</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>2-3 mm silicon coating length, 0.39 mm tip diameter</td>
</tr>
<tr>
<td>Spontaneously hypertensive rats</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Charles River Laboratories</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>290-300 g, male</td>
</tr>
<tr>
<td>Gaymar T/Pump thermoregulatory pump and pads</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gaymar Industries</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vetroson V-10 bipolar electrosurgical unit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Summit Hill Laboratories</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Germinator 500 glass bead sterilizer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>CellPoint Scientific </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vasamedics Bpm2Laserflo blood perfusion monitor</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>TSI Inc.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

focal cerebral ischemia model by endovascular suture occlusion of the middle cerebral artery in the rat

AVC é a principal causa de incapacidade e terceira causa de morte em adultos no mundo inteiro 1. Em tempos humanos, existe um estado altamente variáveis ​​clínicas; no desenvolvimento de modelos animais de isquemia focal, no entanto, conseguir reprodutibilidade de volume de infarto induzida experimentalmente é essencial. O rato é um modelo animal amplamente utilizado para acidente vascular cerebral devido a seus custos relativamente baixos criação de animais e à semelhança de sua circulação cranial ao dos humanos 2,3. Em humanos, a artéria cerebral média (MCA) é mais comumente afetados em acidente vascular cerebral e síndromes múltiplos métodos de MCA oclusão (MCAO) têm sido descritos para imitar essa síndrome clínica em modelos animais. Porque recanalização comumente ocorre após um acidente vascular cerebral na reperfusão, humana depois de um período de oclusão foi incluído em muitos desses modelos. Neste vídeo, demonstramos o transitório endovascular de sutura modelo MCAO em ratos espontaneamente hipertensos (SHR). Um filamento com um revestimento de ponta de silicone é colocado na origem intraluminalmente MCA por 60 minutos, seguida de reperfusão. Note que o período de oclusão ideal pode variar em linhagens de ratos, tais como Wistar ou Sprague-Dawley. Vários indicadores comportamentais de acidente vascular cerebral em ratos são mostrados. Isquemia focal é confirmada usando T2 imagens de ressonância magnética e pela coloração seções cérebro com 2,3,5-cloreto de trifeniltetrazólio (TTC) 24 horas após MCAO.

Watch this Scientific Journal Video about Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat at JoVE.com

Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat

Indução cirúrgica de uma lesão cerebral isquêmico no rato é um modelo amplamente utilizado para a pesquisa acidente vascular cerebral. Aqui nós demonstram a indução de isquemia cerebral focal por oclusão da artéria cerebral média. Visualização do infarto resultantes de coloração histológica e ressonância magnética também é mostrada.

Modelo de isquemia focal cerebral por oclusão Suture Endovascular da artéria cerebral média no Rat

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable ...

focal-cerebral-ischemia-model-endovascular-suture-occlusion-middle

Research

JoVE Journal

Neuroscience

79.2K visualizações.  University of Wisconsin-Madison. Indução cirúrgica de uma lesão cerebral isquêmico no rato é um modelo amplamente utilizado para a pesquisa acidente vascular cerebral. Aqui nós demonstram a indução de isquemia cerebral focal por oclusão da artéria cerebral média. Visualização do infarto resultantes de coloração histológica e ressonância magnética também é mostrada.

Vídeo: Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat

Lateral Chronic Cranial Window Preparation Enables In Vivo Observation Following Distal Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Focal cerebral ischemia (i.e., ischemic stroke) may cause major brain injury, leading to a severe loss of neuronal function and consequently to a host of motor and cognitive disabilities. Its high prevalence poses a serious health burden, as stroke is among the principal causes of long-term disability and death worldwide1. Recovery of neuronal function is, in most cases, only partial. So far, treatment options are very limited, in particular due to the narrow time window for thrombolysis2,3. Determining methods to accelerate recovery from stroke remains a prime medical goal; however, this has been hampered by insufficient mechanistic insights into the recovery process. Experimental stroke researchers frequently employ rodent models of focal cerebral ischemia. Beyond the acute phase, stroke research is increasingly focused on the sub-acute and chronic phase following cerebral ischemia. Most stroke researchers apply permanent or transient occlusion of the MCA in mice or rats. In patients, occlusions of the MCA are among the most frequent causes of ischemic stroke4. Besides proximal occlusion of the MCA using the filament model, surgical occlusion of the distal MCA is probably the most frequently used model in experimental stroke research5. Occlusion of a distal (to the branching of the lenticulo-striate arteries) MCA branch typically spares the striatum and primarily affects the neocortex. Vessel occlusion can be permanent or transient. High reproducibility of lesion volume and very low mortality rates with respect to the long-term outcome are the main advantages of this model. Here, we demonstrate how to perform a chronic cranial window (CW) preparation lateral to the sagittal sinus, and afterwards how to surgically induce a distal stroke underneath the window using a craniotomy approach. This approach can be applied for sequential imaging of acute and chronic changes following ischemia via epi-illuminating, confocal laser scanning, and two-photon intravital microscopy.

Lateral Chronic Cranial Window Preparation Enables In Vivo Observation Following Distal Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Surgical occlusion of a distal middle cerebral artery branch (MCAo) is a frequently used model in experimental stroke research. This manuscript describes the basic technique of permanent MCAo, combined with the insertion of a lateral cranial window, which offers the opportunity for longitudinal intravital microscopy in mice.

Lateral Crônica Cranial Janela Preparação Ativa<em&gt; In Vivo</em&gt; Observação Após Distal Middle Cerebral Oclusão da Artéria em Ratos

Focal cerebral ischemia (i.e., ischemic stroke) may cause major brain injury, leading to a severe loss of neuronal function and consequently to a host of ...

Neurociência

A Rat Model of Mild Intrauterine Hypoperfusion with Microcoil Stenosis

Intrauterine hypoperfusion/ischemia is one of the major causes of intrauterine/fetal growth restriction, preterm birth, and low birth weight. Most studies of this phenomenon have been performed in either models with severe intrauterine ischemia or models with gradient degree of intrauterine hypoperfusion. No study has been performed in a model on uniform mild intrauterine hypoperfusion (MIUH). Two models have been used for studies of MIUH: a model based on suture ligation of either side of the arterial arcade formed with the uterine and ovarian arteries, and a transient model based on clipping the bilateral ovarian arteries and aorta having patency. Those two rodent models of MIUH have some limitations, e.g., not all fetuses are subjected to MIUH, depending on their position in the uterine horn. In our MIUH model, all fetuses are subjected to a comparable level of intrauterine hypoperfusion. MIUH was achieved by mild stenosis of all four arteries feeding the uterus, i.e., the bilateral uterine and ovarian arteries.
Arterial stenosis was induced by metal microcoils wrapped around the feeding arteries. Producing arterial stenosis with microcoils allowed us to control, optimize, and reproduce decreased blood flow with very little inter-animal variability and a low mortality rate, thus enabling accurate evaluation. When microcoils with an inner diameter of 0.24 mm were used, the blood flow in both the placenta and fetus was mildly decreased (approximately 30% from the pre-stenosis level in the placenta). The offspring of our MIUH model clearly demonstrates long-lasting alterations in neurological, neuroanatomical and behavioral test results.

Mild intrauterine hypoperfusion was produced by artery stenosis with metal microcoils wrapped around the uterine and ovarian arteries in rats at embryonic day 17. This procedure produced prenatal hypoperfusion and intrauterine growth restriction.

Um modelo do rato de leve hipoperfusão intra-uterino com estenose Microcoil

Intrauterine hypoperfusion/ischemia is one of the major causes of intrauterine/fetal growth restriction, preterm birth, and low birth weight. Most studies ...

Effects of Blast-induced Neurotrauma on Pressurized Rodent Middle Cerebral Arteries

Though there have been studies on the histopathological and behavioral effects of blast exposure, fewer have been dedicated to blast&#39;s cerebral vascular effects. Impact (i.e., non-blast) traumatic brain injury (TBI) is known to decrease pressure autoregulation in the cerebral vasculature in both humans and experimental animals. The hypothesis that blast-induced traumatic brain injury (bTBI), like impact TBI, results in impaired cerebral vascular reactivity was tested by measuring myogenic dilatory responses to reduced intravascular pressure in rodent middle cerebral arterial (MCA) segments from rats subjected to mild bTBI using an Advanced Blast Simulator (ABS) shock tube. Adult, male Sprague-Dawley rats were anesthetized, intubated, ventilated and prepared for Sham bTBI (identical manipulation and anesthesia except for blast injury) or mild bTBI. Rats were randomly assigned to receive Sham bTBI or mild bTBI followed by sacrifice 30 or 60 min post-injury. Immediately after bTBI, righting reflex (RR) suppression times were assessed, euthanasia at the time points post-injury was completed, the brain was harvested and the individual MCA segments were collected, mounted and pressurized. As the intraluminal pressure perfused through the arterial segments was reduced in 20 mmHg increments from 100 to 20 mmHg, MCA diameters were measured and recorded. With decreasing intraluminal pressure, MCA diameters steadily increased significantly above baseline in the Sham bTBI groups while MCA dilator responses were significantly reduced (p &#60; 0.05) in both bTBI groups as evidenced by the impaired, smaller MCA diameters recorded for the bTBI groups. In addition, RR suppression in the bTBI groups was significantly (p &#60; 0.05) higher than in the Sham bTBI groups. MCA&#39;s collected from the Sham bTBI groups exhibited typical vasodilatory properties to decreases in intraluminal pressure while MCA&#39;s collected following bTBI exhibited significantly impaired myogenic vasodilatory responses to reduced pressure that persisted for at least 60 min after bTBI.

Here, we present a protocol to describe methods for ex vivo vascular reactivity determination following a primary blast traumatic brain injury (bTBI) using isolated, pressurized, rodent middle cerebral arterial (MCA) segments. bTBI induction is accomplished using a shock tube, also known as an Advanced Blast Simulator (ABS) device.

Efeitos de Neurotrauma induzida por explosão em roedores pressurizado artérias cerebrais de médio

Though there have been studies on the histopathological and behavioral effects of blast exposure, fewer have been dedicated to blast&#39;s cerebral ...

Modeling Stroke in Mice: Transient Middle Cerebral Artery Occlusion via the External Carotid Artery

Stroke is the third most common cause of mortality and the leading cause of acquired adult disability in developed countries. To date, therapeutic options are limited to a small proportion of stroke patients within the first hours after stroke. Novel therapeutic strategies are being extensively investigated, especially to prolong the therapeutic time window. These current investigations include the study of important pathophysiological pathways after stroke, such as post-stroke inflammation, angiogenesis, neuronal plasticity, and regeneration. Over the last decade, there has been increasing concern about the poor reproducibility of experimental results and scientific findings among independent research groups. To overcome the so-called &#8220;replication crisis&#8221;, detailed standardized models for all procedures are urgently needed. As an effort within the &#8220;ImmunoStroke&#8221; research consortium (https://immunostroke.de/), a standardized mouse model of transient middle cerebral artery occlusion (MCAo) is proposed. This model allows the complete restoration of the blood flow upon removal of the filament, simulating the therapeutic or spontaneous clot lysis that occurs in a large proportion of human strokes. The surgical procedure of this &#8220;filament&#8221; stroke model and tools for its functional analysis are demonstrated in the accompanying video.

Different models of middle cerebral artery occlusion (MCAo) are used in experimental stroke research. Here, an experimental stroke model of transient MCAo via the external carotid artery (ECA) is described, which aims to mimic human stroke, in which the cerebrovascular thrombus is removed due to spontaneous clot lysis or therapy.

Modelagem de AVC em Camundongos: Oclusão da Artéria Cerebral Média Transitória através da Artéria Carótida Externa

Stroke is the third most common cause of mortality and the leading cause of acquired adult disability in developed countries. To date, therapeutic options ...

A Model for Encephalomyosynangiosis Treatment after Middle Cerebral Artery Occlusion-Induced Stroke in Mice

There is no effective treatment available for most patients suffering with ischemic stroke, making development of novel therapeutics imperative. The brain's ability to self-heal after ischemic stroke is limited by inadequate blood supply in the impacted area. Encephalomyosynangiosis (EMS) is a neurosurgical procedure that achieves angiogenesis in patients with moyamoya disease. It involves craniotomy with placement of a vascular temporalis muscle graft on the ischemic brain surface. EMS has never been studied in the setting of acute ischemic stroke in mice. The hypothesis driving this study is that EMS enhances cerebral angiogenesis at the cortical surface surrounding the muscle graft. The protocol shown here describes the procedure and provides initial data supporting the feasibility and efficacy of the EMS approach. In this protocol, after 60 min of transient middle cerebral artery occlusion (MCAo), mice were randomized to either MCAo or MCAo + EMS treatment. The EMS was performed 3-4 h after occlusion. The mice were sacrificed 7 or 21 days after MCAo or MCAo + EMS treatment. Temporalis graft viability was measured using nicotinamide adenine dinucleotide reduced-tetrazolium reductase assay. A mouse angiogenesis array quantified angiogenic and neuromodulating protein expression. Immunohistochemistry was used to visualize graft bonding with brain cortex and change in vessel density. The preliminary data here suggest that grafted muscle remained viable 21 days after EMS. Immunostaining showed successful graft implantation and increase in vessel density near the muscle graft, indicating increased angiogenesis. Data show that EMS increases fibroblast growth factor (FGF) and decreases osteopontin levels after stroke. Additionally, EMS after stroke did not increase mortality suggesting that protocol is safe and reliable. This novel procedure is effective and well-tolerated and has the potential to provide information of novel interventions for enhanced angiogenesis after acute ischemic stroke.

The protocol aims to provide methods for encephalomyosynangiosis-grafting of a vascular temporalis muscle flap on the pial surface of ischemic brain tissue-for the treatment of non-moyamoya acute ischemic stroke. The approach's efficacy in increasing angiogenesis is evaluated using a transient middle cerebral artery occlusion model in mice.

Um modelo para o tratamento da encefalomiossinangiose após acidente vascular cerebral induzido pela oclusão da artéria cerebral média em camundongos

There is no effective treatment available for most patients suffering with ischemic stroke, making development of novel therapeutics imperative. The ...

Estabelecendo um modelo de camundongos com oclusão transcraniana da artéria cerebral média

A Modified Transcranial Middle Cerebral Artery Occlusion Model to Study Stroke Outcomes in Aged Mice

In experimental stroke research, middle cerebral artery occlusion (MCAO) with an intraluminal filament is widely used to model ischemic stroke in mice. The filament MCAO model typically exhibits a massive cerebral infarction in C57Bl/6 mice that sometimes includes brain tissue in the territory supplied by the posterior cerebral artery, which is largely due to a high incidence of posterior communicating artery atresia. This phenomenon is considered a major contributor to the high mortality rate observed in C57Bl/6 mice during long-term stroke recovery after filament MCAO. Thus, many chronic stroke studies exploit distal MCAO models. However, these models usually produce infarction only in the cortex area, and consequently, the assessment of post-stroke neurologic deficits could be a challenge. This study has established a modified transcranial MCAO model in which the MCA at the trunk is partially occluded either permanently or transiently via a small cranial window. Since the occlusion location is relatively proximal to the origin of the MCA, this model generates brain damage in both the cortex and striatum. Extensive characterization of this model has demonstrated an excellent long-term survival rate, even in aged mice, as well as readily detectable neurologic deficits. Therefore, the MCAO mouse model described here represents a valuable tool for experimental stroke research.

Autor em destaque: técnicas inovadoras e direções futuras na pesquisa de AVC 

This protocol demonstrates a unique mouse stroke model with a medium-sized infarct and an excellent survival rate. This model allows preclinical stroke researchers to extend the ischemia duration, use aged mice, and assess long-term functional outcomes.

Modelo de Oclusão Transcraniana da Artéria Cerebral Média Modificada para Estudo de Resultados de Acidente Vascular Cerebral em Camundongos Idosos

In experimental stroke research, middle cerebral artery occlusion (MCAO) with an intraluminal filament is widely used to model ischemic stroke in mice. ...

Um modelo de isquemia cerebral transitória por oclusão da artéria cerebral média

Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Model of Stroke

Stroke stands as a major cause of death or chronic disability globally. Nevertheless, existing optimal treatments are limited to reperfusion therapies during the acute phase of ischemic stroke. To gain insights into stroke physiopathology and develop innovative therapeutic approaches, in vivo rodent models of stroke play a fundamental role. The availability of genetically modified animals has particularly propelled the use of mice as experimental stroke models.
In stroke patients, occlusion of the middle cerebral artery (MCA) is a common occurrence. Consequently, the most prevalent experimental model involves intraluminal occlusion of the MCA, a minimally invasive technique that doesn't require craniectomy. This procedure involves inserting a monofilament through the external carotid artery (ECA) and advancing it through the internal carotid artery (ICA) until it reaches the branching point of the MCA. After a 45 min arterial occlusion, the monofilament is removed to allow reperfusion. Throughout the process, cerebral blood flow is monitored to confirm the reduction during occlusion and subsequent recovery upon reperfusion. Neurological and tissue outcomes are evaluated using behavioral tests and magnetic resonance imaging (MRI) studies.

Autor em destaque: Avaliando o dano isquêmico do AVC por meio do modelo de oclusão da artéria cerebral média 

This protocol describes the model of transient focal cerebral ischemia in mice through intraluminal occlusion of the middle cerebral artery. Additionally, examples of outcome assessment are shown using magnetic resonance imaging and behavioral tests.

Modelo de Oclusão Transitória da Artéria Cerebral Média do Acidente Vascular Encefálico

Stroke stands as a major cause of death or chronic disability globally. Nevertheless, existing optimal treatments are limited to reperfusion therapies ...