Preparação de meio líquido anaeróbio em garrafão para cultivo de microrganismos anaeróbios ambientais em biorreator

Para preparar a configuração do Carboy, abra a válvula de uma bola de farpa de mangueira de 6,4 centímetros. Conecte dois centímetros de comprimento de tubulação de silicone em cada extremidade da válvula de esfera de farpa da mangueira. Conecte um adaptador de farpa de mangueira de 7,9 a 6,4 milímetros em uma extremidade do conjunto.

Fixe a outra extremidade do conjunto à farpa da mangueira de um garrafão de oito litros. Use uma gravata zip para proteger a conexão entre a farpa da mangueira do Carboy e a tubulação e a conexão entre o encaixe do adaptador da mangueira e a tubulação. Meça e adicione os componentes de mídia necessários ao garrafão de oito litros.

Depois de ajustar o pH necessário, misture os componentes até homogeneizar mexendo em uma placa quente e deixe o líquido ferver por 30 minutos. Em seguida, conecte uma pipeta de vidro estéril de 10 mililitros a uma configuração de coletor de gás nitrogênio. Abra o coletor para ventilar o oxigênio e permitir que o gás nitrogênio flua.

Depois de desligar o fogo, coloque a ponta da pipeta no líquido e lave-o com gás nitrogênio por 30 minutos, moderadamente vigoroso, mas sem transbordar. Em seguida, puxe a ponta da pipeta para cima no headspace do Carboy. Adicione dois gramas de bicarbonato de sódio e 4,8 gramas de sulfeto de sódio nonahydrate e aguarde até que a resazurina fique incolor.

Quando a resazurina estiver incolor, remova a pipeta de vidro e cubra imediatamente o Carboy com uma rolha número 10. Torça um fio sobre a rolha e ao redor do lábio do garrafão para prender a rolha.