1 Para começar, obtenha o tecido tumoral2 dos pacientes e processe-o com um picador. 3 Incline a placa de Petri contendo o tumor picado 4 para cima a 45 graus e remova cuidadosamente 2,5 mililitros 5 do meio H-GPSA. 6 Para lavar os pedaços do tumor, adicione dois mililitros 7 de tampão de lise de hemácias e incube em um agitador orbital 8 em velocidade lenta.
9 Em seguida, descarte completamente o tampão de lise. 10 Em seguida, adicione quatro mililitros de meio organoide 11 derivado do paciente aos pedaços de tecido, 12 e transfira os pedaços de tecido para uma placa de seis poços de fixação ultrabaixa 13. 14 Incube a placa em um agitador orbital 15 por duas a quatro semanas.
16 A cada dois dias, troque metade do meio gasto 17 por um meio organoide fresco pré-aquecido derivado do paciente. 18 Para evitar a hipóxia tecidual, 19 transfira os organoides derivados do paciente 20 para uma placa de Petri de vidro estéril 21 e observe a morfologia do tecido ao microscópio. 22 Em seguida, usando um bisturi, corte o tecido adesivo.
23 Organoides derivados de pacientes obtidos usando o método chopper, 24 atingiram a forma arredondada desejada em uma semana 25 em comparação com os picados manualmente. 26 E o número de organoides formados 27 foi significativamente maior usando esse método.