Depois de sacrificar o camundongo, disseque os músculos TA e GA de ambos os membros posteriores e coloque-os na tampa de uma placa de Petri. Use uma tesoura para cortar o tecido em uma pasta picada. Transfira o tecido picado para um tubo de 50 mililitros contendo cinco mililitros de tampão de dissociação gelado e mantenha-o no gelo.
Assim que os tubos de amostra forem aquecidos a 37 graus Celsius, incube-os por 45 minutos em rotação em uma incubadora. Adicione 10 mililitros de meio de lavagem aos tubos de amostra e os vortice. Centrifugue os tubos e aspire o conteúdo a quatro mililitros.
Em seguida, adicione 0,5 mililitros de colagenase e dispase às células. Em seguida, vórtice e incube-os. Após a incubação, centrifugue a amostra digerida e ressuspenda o pellet com uma pipeta de cinco mililitros.
Em seguida, pré-umedeça os filtros de células de 40 micrômetros colocados em tubos de 50 mililitros com cinco mililitros de meio de lavagem. Usando uma seringa de cinco mililitros com uma agulha de calibre 20, aspire e ejete a suspensão celular 10 vezes. Em seguida, coe a suspensão celular através do filtro de células pré-umedecido de 40 micrômetros.
Depois de coletar e coar as células restantes com 10 mililitros de meio de lavagem, pulverize a suspensão celular por centrifugação, aspire o sobrenadante do tubo e agite suavemente o pellet para soltá-lo.
