Para começar, coloque os instrumentos cirúrgicos autoclavados na mesa cirúrgica. Raspe o abdômen do rato anestesiado e coloque-o em decúbito dorsal na prancha cirúrgica. Limpe o abdômen com iodopovidona seguido de etanol a 70%.
Coloque pomada oftálmica sob os olhos do rato para evitar o ressecamento. Prenda o rato no lugar na placa cirúrgica. Inicie o software de aquisição de dados e comece a gravar.
Ligue o ventilador a quatro mililitros por quilograma e certifique-se de que a pressão expiratória final positiva seja de cerca de dois centímetros de água. Usando uma tesoura, execute uma laparotomia da linha média do apêndice xifóide até a sínfise púbica. Em seguida, com a ajuda de um instrumento rombudo, faça uma rotação visceral medial-lateral e visualize a veia cava inferior infra-hepática.
Injete heparina na veia cava inferior com uma agulha de calibre 20. Usando uma tesoura, corte a pele da incisura esternal até logo abaixo do ângulo da mandíbula e comece a dissecar em direção à traqueia. Em seguida, disseque sem rodeios os músculos necessários da cinta para expor a traqueia.
Faça uma incisão transversal na traqueia anterior entre os anéis cartilaginosos, certificando-se de não cortar a porção posterior da traqueia. Coloque uma sutura de seda 5-0 ao redor da traqueia. Insira o tubo endotraqueal nos anéis cartilaginosos e prenda-o com a sutura de seda 5-0.
Conecte o tubo endotraqueal ao ventilador e garanta a elevação adequada do tórax. Usando uma tesoura, faça uma esternotomia mediana e entre na cavidade torácica. Coloque afastadores da parede torácica para expor o coração e os pulmões, evitando qualquer manipulação inadvertida dos pulmões.
Com a combinação de dissecção aguda e romba, remova o timo do mediastino anterior. Identifique a artéria pulmonar e coloque uma sutura de seda 5-0 ao redor dela para se preparar para a canulação. Faça uma incisão de dois a três milímetros na via de saída do ventrículo direito usando uma tesoura para colocar a cânula arterial dentro da artéria pulmonar e prenda-a com a sutura 5-0.
Depois de sacrificar o rato, conecte rapidamente o fluido de preservação pulmonar desarejado à cânula arterial para liberar os pulmões por gravidade. Conecte a cânula arterial ao circuito EVLP. Ligue a bomba de rolos e deixe uma pequena quantidade de perfusato fluir através do pulmão e sair do ventrículo esquerdo para a cavidade torácica.
Assim que o perfusato começar a fluir para fora do átrio esquerdo, desligue a bomba do rolo. Em seguida, coloque uma pequena pinça no ventrículo esquerdo e estique suavemente o anel da válvula mitral. Coloque uma gravata de seda 5-0 ao redor do coração e amarre frouxamente.
Insira a cânula do átrio esquerdo no ventrículo esquerdo e avance a cânula até que possa ser vista dentro do átrio. Prenda o átrio esquerdo com a sutura 5-0 pré-amarrada. Identifique o esôfago e prenda-o com um hemostático o mais próximo possível do diafragma.
Em seguida, corte o esôfago abaixo do hemostático. Usando a coluna como guia, corte todas as inserções ligamentares que conectam o bloco coração-pulmão às estruturas circundantes com uma tesoura. Em seguida, disseque a traqueia do pescoço e corte a traqueia acima do tubo endotraqueal para liberar o bloqueio coração-pulmão.
Mova o bloqueio coração-pulmão para a jaqueta torácica dentro do circuito EVLP e conecte a cânula do átrio esquerdo ao circuito. Ligue a bomba de rolos e conecte o monitor do ventilador. Verifique a armadilha de bolhas para garantir que nenhum êmbolo de ar esteja sendo introduzido no sistema.
Altere lentamente as configurações de ventilação e perfusão para os níveis experimentais desejados durante os primeiros 15 minutos. Além disso, aumente a taxa de fluxo de perfusão para a taxa e pressão desejadas. Em pontos de tempo designados, verifique os níveis de gás perfusato e os testes de função pulmonar.
Todos os perfusato testados mostraram uma ligeira diminuição na pressão parcial de oxigênio do átrio esquerdo, com o perfusato baseado em hemácias diminuindo significativamente em uma hora. Nas horas seguintes, tanto o polyhHB quanto os perfusados de controle tiveram pressão parcial estável de oxigênio no átrio esquerdo. A pressão parcial delta de oxigênio diminuiu significativamente em uma hora no grupo perfusato de hemácias, enquanto permaneceu estável no grupo perfusato polihHB e controle com tendência não significativa.
A pressão parcial de dióxido de carbono no átrio esquerdo foi significativamente menor nas hemácias e no perfusato de controle em comparação com o polihHB após a primeira hora, e essa tendência continua nas horas seguintes. A pressão parcial delta de dióxido de carbono aumentou significativamente no perfusato de hemácias após uma hora e depois disso permaneceu estável tanto no polihHB quanto no perfusato controle. Dados fisiológicos pulmonares em tempo real demonstram que o perfusato de hemácias aumentou significativamente a resistência vascular pulmonar na primeira hora.
Embora os perfusados polihHB e controle tenham mantido resistência vascular pulmonar baixa e estável ao longo do período, a mudança no peso pulmonar foi significativa no perfusato eritrocitário inicialmente, com um aumento contínuo em todos os perfusados, um pouco mais no polihHB. A complacência diminuiu significativamente no perfusato de hemácias na primeira hora, enquanto diminuiu de forma não significativa em outros perfusatos. PolyhHB teve a maior adesão após quatro horas.
