Isolamento de células epiteliais de superfície ovariana primária humana para obtenção de organoides para estudos de tecidos in vitro

Para começar, transporte ovários humanos para o laboratório em cloreto de sódio a 0,9% ou solução salina estéril semelhante em gelo. Lave os ovários com solução salina fresca e fria em uma placa de Petri. Transfira cada ovário para um tubo cônico de 50 mililitros e adicione dois a três mililitros de meio de digestão para cobrir o ovário.

Coloque o tubo em um banho de contas, temperado a 37 graus Celsius por 30 minutos. Em seguida, transfira cuidadosamente o ovário para uma placa de Petri de 60 milímetros contendo 10 mililitros de meio de coleta. Usando um raspador de células, raspe suavemente a superfície ovariana que contém as células epiteliais da superfície ovariana humana.

Lave o raspador no meio antes de raspar pelo menos mais duas vezes. Transfira as células epiteliais da superfície ovariana humana no meio de coleta para um tubo de 15 mililitros. Gire as células a 240G por cinco minutos.

Se o pellet mostrar uma cor vermelha indicativa de contaminação com glóbulos vermelhos, ressuspenda o pellet em um mililitro de tampão de lise de glóbulos vermelhos. Em seguida, adicione quatro mililitros de PBS com cálcio e magnésio e centrifugue a 240G por cinco minutos. Criopreservar o pellet de células epiteliais da superfície ovariana humana para uso futuro em cultura.