Para começar, prepare a mesa cirúrgica com os instrumentos estéreis apropriados. Após realizar a antissepsia do campo cirúrgico no animal anestesiado, posicione o campo cirúrgico sobre o penúltimo par de glândulas mamárias inguinais. Usando uma tesoura, crie uma abertura retangular em uma cortina cirúrgica e coloque quatro grampos traseiros para prender a cortina cirúrgica sobre a pele do animal.
Com um bisturi, faça uma incisão de aproximadamente 10 centímetros de comprimento. Obter hemostasia dos vasos subcutâneos com pinça hemostática e sutura absorvível tamanho dois. Usando tesouras ou dedos pontiagudos, disseque o tecido subcutâneo, aprofundando a incisão para alcançar a linha alba na musculatura abdominal.
Com a pinça Alice, segure e levante a musculatura para fazer uma incisão na linha alba com um bisturi. Insira o dedo indicador na incisão para avaliar a presença de aderências. Estenda a incisão sobre a linha alba caudal e cranialmente, evitando lesões em outros órgãos e estruturas subjacentes.
Insira uma mão na cavidade abdominal para localizar e exteriorizar os ovários. Se um dos cornos uterinos estiver localizado, siga-o suavemente até chegar à ponta do corno uterino e ao ovário ipsilateral. Depois de localizar o ovário, puxe-o suavemente e exponha-o com cuidado.
Avalie a presença de folículos pré-ovulatórios, corpos lúteos hemorrágicos, corpos lúteos cíclicos e corpos albicans para avaliar se a sincronização das leitoas é a esperada. Remova suavemente as fímbrias da tuba uterina que cobre o ovário e desvie sua mucosa para localizar o ósteo da tuba uterina. Em seguida, insira cuidadosamente um cateter tomcat contendo os embriões no ósteo das fímbrias até atingir a ampola da tuba uterina.
Conecte uma seringa de um mililitro ao cateter Tomcat para empurrar o embrião contendo fluido para dentro do tubo uterino. Cubra o ovário com as fímbrias e devolva-o à cavidade abdominal. Se for difícil identificar o ósteo, use uma agulha de sutura de corpo redondo para criar uma bolsa nas ampolas do oviduto.
Em seguida, insira o cateter tomcat contendo os embriões. Em seguida, reposicione as estruturas dentro da cavidade abdominal. Para evitar aderências, adicione um litro de solução salina ou de lactato de ringer, temperado a 39 graus Celsius, na cavidade abdominal.
Em seguida, suturar a musculatura abdominal com sutura absorvível tamanho dois em X pontos interrompidos. Feche a pele com adesivo de cianoacrilato de etila. Após a limpeza da ferida cirúrgica, aplique rapamicina ou pomada de Pearson e cubra a área com gaze.
Por fim, aplique o adesivo cirúrgico. Nove leitoas foram submetidas à cirurgia com uma média de 185 embriões clonados transferidos por leitoa, totalizando 1.664 embriões transferidos bilateralmente. Nenhum animal apresentou sinais de dor intensa após a cirurgia, com escore médio de dor variando entre 0,33 a 4,67 na escala de dor de zero a 18, realizada ao longo dos três dias de pós-operatório para cada uma das leitoas.
