Para começar, prepare o inóculo para estudar a cinética de crescimento de Chlorella sorokiniana e Haematococcus pluvialis Prepare o volume necessário de meio de cultura estéril de acordo com os procedimentos laboratoriais padrão. Configure a fonte de luz para o fotobiorreator e o frasco para o espectro de cores desejado. Cubra ambos os sistemas para evitar interferência de luz externa.
Depois de ajustar as configurações do fotoperíodo, conecte o sistema de duração do dióxido de carbono ao fotobiorreator para fornecer dióxido de carbono por 12 horas à chlorella. Em seguida, inocule o vaso de cultura para atingir uma densidade celular inicial de 300.000 células por mililitro ou uma densidade óptica de 0,180 a 550 nanômetros. Coletar amostras da cultura em intervalos regulares de 12 horas para Chlorella sorokiniana e oito horas para Haematococcus pluvialis.
Coloque 40 mililitros da amostra em um tubo de centrifugação cônico de plástico. Centrifugue o tubo a 3000 G por 20 minutos a 15 graus Celsius. Transvase o sobrenadante e adicione três mililitros de solução de acetona pura a 90% para ressuspender as células, depois transfira as células para um tubo de vidro coberto com papel alumínio para evitar a oxidação e misture usando um vórtice.
Sonicar a amostra suspensa em banho de gelo durante dois ciclos de cinco minutos cada e deixar repousar a amostra a quatro graus Celsius durante 16 horas. Após repouso, sonicar novamente a amostra durante dois ciclos de cinco minutos cada nas mesmas condições e centrifugar a amostra a 3000 G durante 20 minutos a 15 graus Celsius. Separe o extrato de pigmento usando uma pipeta Pasteur e transfira-o para outro tubo limpo e protegido da luz.
Em seguida, coloque o extrato de pigmento em uma célula de quartzo e leia-o em um espectrofotômetro a 600, 647 e 664 nanômetros. Calcule as concentrações de clorofila usando a equação. O teor de clorofila de Chlorella sorokiniana foi maior no tratamento quatro, sob condições de alta adição de dióxido de carbono, luz roxa e alta intensidade de luz.
O gráfico de efeitos principais mostrou que a intensidade da luz teve um efeito menor em comparação com os efeitos de dióxido de carbono e luz roxa. Em Chlorella sorokiniana, um aumento consistente nas clorofilas A e B foi observado ao longo do experimento, com a clorofila A superando a clorofila B em 50 horas. Uma diminuição na concentração de clorofila foi observada em Haematococcus pluvialis em 50 horas, com a clorofila B diminuindo significativamente enquanto a clorofila A permaneceu mais alta.
