Alimento do mosquito: <ol><li> Um alimento: comida de peixe aterrado (Aquaricare). Uma pitada pequena pode ser adicionada. </li><li> Alimentos B: aterrado alimentos CAT (Purina). Uma pitada pequena pode ser adicionada. </li><li> Alimentos C: cat alimentos (Purina). Dois comprimidos pode ser adicionada. </li></ol> Sangue: Sangue animal ou humano pode ser usado para mosquitos traseira. Sangue fresco é coletado com uma seringa e colocar em um tubo de 15 ml estéril Falcon contendo 1ml de CPD (anticoagulante) para cada 10 ml de sangue, então misturado delicadamente e centrifugado à temperatura ambiente a 2000 rpm por 5 min. O sobrenadante é descartado, tendo o cuidado de remover o revestimento buffy que compreende outras células sanguíneas (por exemplo WBC). O pellet RBC é então suspenso em um volume igual de meio RPMI por pipetagem, e novamente lavado nesse meio três vezes. Após a lavagem final, os eritrócitos são peletizadas ressuspenso em um volume igual de meio RPMI e armazenados a 4 ° C (pode ser mantida por 80-10 dias). Antes da alimentação, o RBC (em RPMI) é centrifugado (2000 rpm por 5 min) para pellet as células, ea RBC embalado é ressuspenso no soro (O + soro humano) para obter um hematócrito de 40%. O sangue deve ser mantida a 37 ° C sempre para a alimentação. DIA 1: <ol><li> O dia 05/03 mosquitos adultos do sexo feminino, são alimentados com sangue para botar ovos. </li><li> Para a alimentação de sangue, uma membrana artificial método de alimentação (parafilme) é usado como segue: <ol><li> Células vermelhas do sangue (ver acima para a preparação de sangue) são misturadas com soro inactivado pelo calor para obter um hematócrito ~ 40% (embalado RBC 40% e 60% de soro). Este é adicionado ao alimentador de vidro. </li><li> O alimentador é ligado a uma jaqueta de água quente (37 ° C), e colocado na gaiola para permitir o acesso de mosquitos na superfície da membrana. </li><li> Os mosquitos são permitidos aos alimentos para ~ 30 minutos. </li></ol></li></ol> DIA 3: <ol><li> As fêmeas põem ovos dois dias depois que eles se alimentam de sangue. Um pequeno papel filtro envolto em um formato cônico é colocado em um pequeno copo contendo água destilada, tornando-se o papel filtro fica úmido. O copo é mantido dentro da gaiola durante a noite para os mosquitos botar ovos. </li></ol> DIA 4: <ol><li> O filtro de papel contendo os ovos do mosquito é colocado em uma bandeja de plástico com ~ 300 ml de água destilada. Uma pitada de alimento A é adicionado à bandeja e os ovos são autorizados a escotilha para larvas durante os próximos dias. </li></ol> DIAS 5-8: <ol><li> Larvas em crescimento são alimentados todos os dias com dois comprimidos de comida C, e monitorados para a densidade e população. No oitavo dia (cinco dias as larvas de idade), a população de larvas é diluída a partir de 1 bandeja para ~ 10 bandejas, com uma pitada de alimentos A e dois comprimidos de C alimentos em cada bandeja. (~ 30 mins) </li></ol> DIAS 9-12: <ol><li> As larvas são alimentados todos os dias com alimentos C. No 12 º dia (9 larvas dias de idade), a água é trocada com água fresca e alimento é adicionado (uma pitada de alimentos B e dois comprimidos de comida C). As pupas começa a desenvolver nesta fase. As bandejas são cobertas com redes para evitar a fuga dos adultos. (~ 8-10 minutos) </li></ol> DIA 13 - 15: As pupas podem surgir para os adultos para os próximos 2 - 3 dias. O alimento é dado todos os dias para as larvas / pupas, removendo cuidadosamente o líquido para evitar a fuga dos adultos. DIA 16: <ol><li> Os adultos são coletados em uma gaiola por meio de um aspirador ligado à vácuo. A gaiola é composto por uma garrafa pequena ml 100 com um chumaço de algodão que é encharcada com sacarose 10% (autoclavado) e um forro de papel toalha no fundo para absorver todos os derramamentos de açúcar em potencial que podem ocorrer durante o manuseio gaiola. (~ 30-40 minutos) </li></ol> DIA 17-21: <ol><li> Os adultos (machos e fêmeas) são então mantidos na sala de insetário por 4-5 dias, alimentados com sacarose 10% antes de serem novamente sangue-fed para iniciar o próximo ciclo. Os mosquitos mesmo pode ser usado para desovar mais de uma vez. </li><li> Os mosquitos que não são necessários para a criação de experiências ou pode ser morto por colocar a gaiola em um freezer. As bandejas usadas e gaiolas devem ser limpas e secas antes de serem utilizados novamente. </li></ol> NOTA: Pode haver algumas variações no método de criação do mosquito e laboratórios diferentes podem ter diferentes técnicas.

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	<li>Bangs, M. J., Soelarto, T., Barodji, B. P., Wicaksana, D. T., Boewono, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colonization+of+Anopheles+maculatus+from+Central+Java,+Indonesia.">Colonization of Anopheles maculatus from Central Java, Indonesia.</a> J Am Mosq Control Assoc. 18, 359-363 (2002).</li><li>Beier, M. S., Beier, J. C., Merdan, A. A., el Sawaf, B. M., Kadder, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+rearing+techniques+and+adult+life+table+parameters+for+Anopheles+sergentii+from+Egypt.">Laboratory rearing techniques and adult life table parameters for Anopheles sergentii from Egypt.</a> J Am Mosq Control Assoc. 266, 266-270 (1987).</li><li>Benedict, M. Q., Crampton, J. M., Beard, C. B., Louis, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Care and maintenance of anopheline mosquitoes, The molecular biology of disease vectors: A methods manual. , 3-12 (1997).</li><li>Casanges, A. H., Mcgovran, E. R., Chiles, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rearing+of+Anopheles+quadrimaculatus+Say+and+Aedes+aegypti+(L.)+in+the+laboratory.">Rearing of Anopheles quadrimaculatus Say and Aedes aegypti (L.) in the laboratory.</a> Mosq News. 9, 112-117 (1949).</li><li>Merritt, R. W., Dadd, R. H., Walker, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeding+behavior,+natural+food+and+nutritional+relation+ships+of+larval+mosquitoes.">Feeding behavior, natural food and nutritional relation ships of larval mosquitoes.</a> Annual Rev. Entomol. 37, 349-376 (1992).</li><li>Nasirian, H., Ladonni, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Artificial+bloodfeeding+of+Anopheles+stephensi+on+a+membrane+apparatus+with+human+whole+blood.">Artificial bloodfeeding of Anopheles stephensi on a membrane apparatus with human whole blood.</a> J Am Mosq Control Assoc. 22, 54-56 (2006).</li><li>Ng'habi, K. R., John, B., Nkwengulila, G., Knols, B. G., Killeen, G. F., Ferguson, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+larval+crowding+on+mating+competitiveness+of+Anopheles+gambiae+mosquitoes.">Effect of larval crowding on mating competitiveness of Anopheles gambiae mosquitoes.</a> Malar J. 30 (4), 49 (2005).</li><li>Stobart, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+affecting+the+control+of+body+volume+in+the+larvae+of+the+mosquitoes+Aedes+aegypti+and+Aedes+detritus.">Factors affecting the control of body volume in the larvae of the mosquitoes Aedes aegypti and Aedes detritus.</a> Edw. J. Exp. Boil. 54, 67-82 (1971).</li></ol>

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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Food A</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Aquaricare</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Grounded fish food. A small pinch needs to be added.</td>
</tr>
<tr>
<td>Food B</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Purina</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Grounded cat food. A small pinch needs to be added.</td>
</tr>
<tr>
<td>Food C</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Purina</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cat food. Two tablets needs to be added</td>
</tr>
<tr>
<td>RBC</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>prepared red blood cells: 40% hematocrit in human serum</td>
</tr>
<tr>
<td>RPMI</td>
<td>Medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CPD</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>anticoagulant</td>
</tr>
<tr>
<td>serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>O+ human serum</td>
</tr>
<tr>
<td>Mosquito feeder</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>parafilm</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Anopheles gambiae</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>mosquitos</td>
</tr>
<tr>
<td>10% sucrose</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>mosquito food</td>
</tr>
<tr>
<td>insectary</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

protocol for mosquito rearing (a. gambiae)

Este protocolo descreve a criação do mosquito no insetário. Os quartos são mantidos em insetário 28 ° C e ~ 80% humidade, com um hr 12. ciclo de dia / noite. Para este procedimento, você precisará de gaiolas mosquito, solução de sacarose 10% estéril, toalhas de papel, copo, papel de filtro Whatman, alimentadores de vidro, sangue humano e banho de água do soro, parafilme, água destilada, limpa bandejas de plástico, comida mosquito (descrita abaixo), mosquiteiro para cobrir as bandejas, a vácuo, e uma câmara de coleta para coletar adultos.

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Protocol for Mosquito Rearing A. gambiae

Este vídeo ilustra as técnicas gerais usadas para a retaguarda Anopheles gambiae em laboratório. Os métodos para cuidar dos mosquitos laboratório são demonstrados por todos os estágios do ciclo de vida do organismo a partir de larvas de pupas a sangue-alimentação adultos.

Protocolo para a Criação Mosquito (A. gambiae)

This protocol describes mosquito rearing in the insectary. The insectary rooms are maintained at 28&deg;C and ~80% humidity, with a 12 hr. day/night ...

Research

JoVE Journal

Biology

Protocol for Mosquito Rearing (A. gambiae)

23.0K visualizações.  Johns Hopkins University. Este vídeo ilustra as técnicas gerais usadas para a retaguarda Anopheles gambiae em laboratório. Os métodos para cuidar dos mosquitos laboratório são demonstrados por todos os estágios do ciclo de vida do organismo a partir de larvas de pupas a sangue-alimentação adultos.