Agradecemos à Biofábrica Moscamed Brasil, à Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) e ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnologia (CNPq) pelo apoio financeiro.  Gostaríamos também de agradecer às seguintes pessoas pela ajuda; Miriam dos Santos, Gildeane Silva, Gessilane dos Santos, Fabio Gonçalves, João Paulo Oliveira, Luiza Garziera, José Carlos Valença.

Requisitos inseticidos
1. Visão geral
<ol><li>A criação em massa tem várias fases, cada uma das quais é realizada em uma área distinta da unidade de criação em massa. A Figura 1 mostra a fase principal da criação e onde ocorrem na instalação de criação em massa.</li>
</ol>2. Considerações de Biossegurança para o Insectary
<ol><li>O projeto foi aprovado pela comissão de ética animal da Universidade de São Paulo - Brasil e todas as autorizações e aprovações necessárias foram obtidas.</li>
	<li>O sistema RIDL usa letalidade condicional; um suplemento dietético (tetraciclina) impede a expressão do sistema RIDL permitindo que os insetos sejam criados em massa; sem tetraciclina, os mosquitos morrem. A tetraciclina não é encontrada nos criadouros de Ae. aegypti na natureza para que qualquer descendente produzido de fugitivos não sobreviva.  Isso adiciona um nível extra de segurança sobre o uso de insetos do tipo selvagem (WT) esterilizados por outros métodos (ou seja, radiação).</li>
	<li>Use entrada de porta dupla, placas "Somente pessoal autorizado" e telas de insetos no inseto. Qualquer janela deve ser selada para evitar a contaminação da colônia com insetos WT e ajudar a evitar fugas de dentro do inseto.</li>
	<li>Regulamentos e autoridades locais podem ter requisitos adicionais ou alternativos específicos. Entre em contato com as autoridades competentes para obter informações/orientações em um estágio inicial e garanta todas as licenças e aprovações necessárias antes de estabelecer a cepa RIDL em um inseto.</li>
	<li>O inseticário de criação em massa só deve ser usado para a criação ridl. Nenhuma outra cepa ou insetos deve estar presente. Isto é para evitar a contaminação da cepa RIDL e contaminação com patógenos que podem afetar o condicionamento físico e a sobrevivência, reduzindo a produtividade e a eficácia dos machos soltos.</li>
</ol>3. Design In insectário
<ol><li>
A Figura 2 mostra um plano do inseto utilizado na Biofábrica Moscamed no Brasil.</li>
	<li>A temperatura de todos os quartos foi de 26 °C ± 2) com umidade relativa de 70-80% e 12:12 hr luz: ciclo escuro usando tiras de luz fluorescentes.</li>
	<li>Este projeto pode ser modificado de acordo com requisitos específicos de espaço, por exemplo, a escala da versão determinará o tamanho geral. No entanto, a produção, criação e classificação de ovos, controle de qualidade (QC) e lançamentos devem ser separados em quatro áreas distintas: Colônia de Produção de Ovos, Geração de Lançamento, QC e Armazenamento Adulto para Lançamento.</li>
	<li>A sala colônia de produção de ovos (aproximadamente 20 m2) é usada para produzir ovos para a geração de lançamento.</li>
	<li>A área de Controle de Qualidade é onde são realizados experimentos para verificar procedimentos e a aptidão da linha RIDL, incluindo medidas de taxa de escotilha, números de pupas, tamanho de pupa e eficácia de medição de classificação e remoção de fêmeas. Também são realizados testes para contaminação por WT verificando a presença de marcador de fluorescência e fenótipo usando ensaios offset que medem a letalidade.</li>
	<li>A sala de Geração de Liberação (aproximadamente 36 m2) requer espaço adequado para bandejas e a triagem de larvas e pupas. As bandejas são mantidas em racks de alumínio construídos com propósito. Uma grande área de trabalho e pia são necessárias para a criação e triagem e outra pia grande é necessária para a lavagem de bandejas e gaiolas. Uma armadilha de captura de filtros foi incluída na saída de água residuais das pias para mitigar a fuga de mosquitos vivos através do esgoto.</li>
	<li>Toda a água utilizada para as bandejas é descartada através de um ralo, que possui um compartimento contendo uma malha que impede a fuga de insetos em qualquer estágio de desenvolvimento.</li>
	<li>Uma área é necessária para o armazenamento de adultos para lançamento (Adult Storage for Release, Figura 2) contendo racking para segurar os dispositivos de liberação enquanto os adultos amadurecem antes do lançamento.</li>
</ol>Métodos de produção para criação em massa RIDL:
A Colônia de Produção de Ovos produz os ovos que são utilizados na Geração de Liberação (Figura 1)para produzir adultos. Há muitas semelhanças nos dois métodos de criação, mas também algumas diferenças distintas. Os processos de criação que são os mesmos para ambos os procedimentos são descritos apenas na seção Colônia de Produção de Ovos.
Colônia de Produção de Ovos
4. Produção larval
A Colônia de Produção de Ovos gera ovos OX513A RIDL homozigos8 para a Geração de Liberação. O controle de alta qualidade garante viabilidade, condicionamento físico e integridade dos ovos fornecidos.
<ol><li>O estímulo para a eclosão é a submersão na água com um baixo nível de oxigênio dissolvido. Para reduzir o nível de oxigênio na água, aqueça a água até ferver e coloque imediatamente 400 ml em potes de vidro de 500 ml (circunferência de abertura de 74 mm), aperte a tampa com segurança e deixe à temperatura ambiente por várias horas para esfriar.</li>
	<li>Coloque 1 g de ovos em um pote de água fervida, sele e espere por uma hora. Transfira o conteúdo para uma bandeja com 2 L de água e deixe durante a noite em condições inseticida.</li>
	<li>Coloque as larvas eclodidas em um volume conhecido de água e mexa usando um agitador magnético e pulga por tempo suficiente para tomar alíquotas; mexer vigorosamente ou por tempo prolongado danifica larvas e deve ser mantido ao mínimo. O volume padrão usado para chocar larvas é de 1 L, porém densidades de mais de 300 larvas/ml são difíceis de contar e podem ser prejudiciais. Portanto, não eclodam mais de 300.000 ovos/L de água.</li>
	<li>Determine a taxa de escotilha tomando três alíquotas de 1 ml e colocando em uma folha de papel absorvente, com uma grade de 1 cm quadrados, em cima de uma esponja absorvente para absorver qualquer excesso de água.  Conte o número de ovos eclodidos e nãotched de três quadrados procurando a tampa faltante de um ovo eclodido. Uma taxa de escotilha em torno de 80-90% é esperada.</li>
	<li>Pegue quatro alíquotas de 1 ml cada e coloque em quatro barcos de pesagem pretos (larvas são brancas e, portanto, mais facilmente visíveis contra um fundo preto) e conte o número de larvas vivas presentes pelos olhos; recomenda-se o uso de um contador. O número médio de larvas por ml é então usado para calcular o volume de água para adicionar em cada bandeja para obter o número desejado de larvas por bandeja.</li>
	<li>Pode haver grandes diferenças na densidade em que as larvas podem ser criadas entre cepas e espécies. Também é desejável comparar o tamanho masculino adulto RIDL com os machos do tipo selvagem; idealmente você quer semelhante a machos RIDL de tamanho maior que podem competir com sucesso com machos selvagens. Portanto, para cada cepa RIDL, a densidade ideal de larvas precisa ser determinada e é uma troca contra as restrições de espaço para a criação e a escala de produção. Densidades que variam de 0,1-2,5 larva/ml que encontramos como uma boa combinação de produção e qualidade; também discutido por Medici23.</li>
	<li>Adicione as larvas às bandejas. Em nossa instalação usamos bandejas medindo cerca de 53 cm x 37 cm x 8 cm (L x W x H) e a quantidade necessária de água para alcançar a densidade de larvas para produção.</li>
	<li>Adicione uma solução de estoque de tetraciclina (3 mg/ml em água) às bandejas a uma diluição de 1:100 para obter a concentração final necessária de 30 μg/ml.</li>
	<li>Alimente larvas com alimentos de peixe floco<a href="http://www.sera.de">(www.sera.de)</a>diariamente, que foi esmagada em pó fino. A Tabela 1 mostra o regime típico de alimentação em mg de alimentos por larvas por dia. Alimentar larvas até o dia apropriado de triagem sob as condições insetíduas descritas acima.</li>
</ol>5. Classificação de Larvas de Pupae e Pupae Macho/Fêmea
<ol><li>Classifique larvas de pupas 8 dias após a eclosão separando as larvas da pupa. Então, sexo tipo a pupae para machos. Um dispositivo conhecido como separador deplacas 24,25 pode classificar larvas de pupas machos e de pupas fêmeas. A Figura 3 ilustra o uso deste separador de placas para separar larvas do macho e da pupa fêmea.</li>
	<li>Usando uma colher de medição com uma malha na parte inferior, calibra-a com 500 pupas ou mais e use-a para montar gaiolas e estimar a quantidade total de pupas machos e fêmeas produzidas.</li>
	<li>No primeiro dia de triagem (dia 8) a maioria das pupas são machos, então coloque as larvas classificadas de volta em uma bandeja e volte até o dia seguinte, quando a maioria das pupas são fêmeas(Figura 4).</li>
	<li>Repita o processo de triagem a cada dia, conforme descrito nas etapas 2.1-2.3 até que todas as larvas tenham filhote ou até o final de uma semana de trabalho.</li>
	<li>Coloque 1.000 pupas machos (usando a colher de medida) em uma gaiola e no dia 9 adicione 3.000 pupas fêmeas à mesma gaiola (usamos tubos de PVC de 30 cm de altura e 30 cm de diâmetro adaptados com topo de malha e um orifício de acesso líquido, mas 30 cm x 30 cm x 30 cm de gaiolas plásticas também estão disponíveis no BugDorm).</li>
	<li>Permitir que os adultos acasalem por pelo menos 2 dias e forneçam-lhes solução de sacarose (10%) em algodão molhado ad libitum antes da alimentação sanguínea. Coletar ovos por duas semanas (~dois ciclos gonotróficos) com duas rações de sangue por semana. Isso rende uma média de 143.000 ovos de uma gaiola de 3.000 fêmeas (uma média de 48 ovos/fêmea). Para a produção de 4 milhões de ovos por semana, cerca de 28 gaiolas precisam ser montadas a cada semana.</li>
</ol>6. Alimentação sanguínea
<ol><li>Um sistema de alimentação de placas de alumínio fornece gaiolas com sangue duas vezes por semana. Um bolsão de sangue é criado na lateral de uma placa de alumínio (10 cm x 10 cm x 3 mm) com Parafilm(Figura 5). Para incentivar a alimentação, o sangue é aquecido colocando um saco de feijão aquecido em cima do alimentador de pratos. O saco de feijão consistia de aproximadamente 250 g de grãos de trigo em um saco de pano, que é aquecido por cerca de 10 segundos em um micro-ondas. O sangue que usamos para alimentação é de um matadouro local; como esses animais (principalmente cabras e ovinos) são para consumo humano, eles são testados para evitar a presença de patógenos.</li>
	<li>Três dias após a alimentação sanguínea, um local de oviposição para as fêmeas colocarem seus ovos é fornecido. O local de oviposição é um recipiente de plástico redondo cheio de cerca de 1/4 com água e papel filtro cobrindo o interior. Dois dias depois, o local da oviposição é removido. Para a produção máxima de ovos, certifique-se de que o papel do filtro cubra toda a superfície disponível dentro do recipiente e permaneça molhado.</li>
	<li>Remova o papel do ovo e coloque no papel absorvente para secar em condições insetívias; ovos requerem um período de condicionamento em alta umidade (mais de 70%) de pelo menos 48 horas após ser colocado. Os ovos podem ser deixados no inseto por até 3 meses com redução mínima na taxa de escotilha, desde que a umidade seja mantida alta25.</li>
	<li>A colônia de produção de ovos precisa ser de tamanho suficiente para fornecer o número de ovos necessários semanalmente para o programa de liberação. A instalação descrita acima pode produzir aproximadamente 4 milhões de ovos com 28 gaiolas criadas semanalmente. Recomenda-se manter ovos suficientes armazenados para garantir pelo menos 4 semanas de ovos para a Geração de Sol e Colônia de Produção de Ovos.</li>
</ol>Geração de Lançamento
7. Produção larval
Os processos de eclosão, criação e triagem para a geração de lançamento são idênticos ao método descrito anteriormente para a colônia de produção de ovos. No entanto, a escala de produção é muito maior e isso requer mais bandejas e mais esforço.
8. Triagem larvas, pupas machos e pupas fêmeas
<ol><li>A classificação de larvas, pupas machos e pupas fêmeas é idêntica ao método descrito para produção de ovos.</li>
	<li>Após a triagem da pupa macho é importante verificar se há contaminação feminina antes da liberação; não deve haver mais de 1% de mulheres presentes. Pegue três alíquotas de 500 pupas (três colheres de medição aleatórias de pupas) e conte o número de pupas fêmeas presentes. As fêmeas podem ser identificadas, pois são geralmente maiores que os machos e por diferenças na forma do lobo genital(Figura 6)27. Se houver mais de 1% de fêmeas, elas devem ser recorrer e verificar novamente.</li>
	<li>Use apenas os machos dos dias 8 e 9 para liberação; autoclave qualquer larva restante e pupae. No Brasil, esse resíduo deve ser tratado da mesma forma que o lixo médico, mas as regulamentações podem diferir em outros países. Não utilize pupas e larvas fêmeas da Geração de Liberação para a Colônia de Produção de Ovos devido a diferenças no controle de qualidade, na criação e na contaminação de números maiores e menor controle de qualidade.</li>
</ol>Armazenamento adulto para lançamento: Coloque os machos em dispositivos de liberação para emergir e amadurecer antes do lançamento. Os detalhes dos dispositivos de liberação não estão cobertos neste método. No entanto, a capacidade dos dispositivos de liberação que usamos é de cerca de 1.000 homens. Os detalhes do método de liberação (dispositivo de liberação e sistema de liberação) não estão cobertos neste método.

<ol>
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P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analyzing+the+control+of+mosquito-borne+diseases+by+a+dominant+lethal+genetic+system.">Analyzing the control of mosquito-borne diseases by a dominant lethal genetic system.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 104, 9540-9545 (2007).</li><li>Bargielowski, I., Nimmo, D., Alphey, L., Koella, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+life+history+characteristics+of+the+genetically+modified+OX513A+line+and+a+wild+type+strain+of+Aedes+aegypti.">Comparison of life history characteristics of the genetically modified OX513A line and a wild type strain of Aedes aegypti.</a> PLoS One. 6 (e20699), (2011).</li><li>Bargielowski, I., Alphey, L., Koella, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cost+of+mating+and+insemination+capacity+of+a+genetically+modified+mosquito+Aedes+aegypti+OX513A+compared+to+its+wild+type+counterpart.">Cost of mating and insemination capacity of a genetically modified mosquito Aedes aegypti OX513A compared to its wild type counterpart.</a> PLoS One. 6 (26086), (2011).</li></ol>

Os autores afiliados à Oxitec possuem participação em emprego e/ou participação acionária na Oxitec Ltd. A Oxitec Ltd e a Universidade de Oxford possuem propriedade intelectual relacionada ao tema deste artigo.

RIDL é um método eficaz e ambientalmente seguro de controle de mosquitos3,29-31. A técnica é aplicável a um programa integrado de manejo de pragas e a maioria dos métodos de controle atuais, incluindo larvicidas, redução de criadouros e adulticicidas são compatíveis com essa tecnologia. Este método descreve como produzir até 570.000 pupas machos RIDL por semana para uso no controle de Ae. Aegypti e até onde sabemos esta é a primeira descrição da produção de mosquitos transgênicos nesta escala. Alguns sistemas de produção comparáveis foram desenvolvidos para o tipo selvagem Ae. aegypti nas décadas de 1960 e 197025, porém não houve produção comparável nesta escala desde então. No Brasil, cerca de 11 milhões de homens foram soltos de fevereiro de 2011 até fevereiro de 2012. O número de machos necessários para que uma determinada área seja controlada depende de uma série de fatores, incluindo o tamanho da população selvagem, dispersão de machos soltos, sobrevivência e competitividade do acasalamento dos machos após a liberação e condições ambientais.  Estudos anteriores mostraram que o RIDL pode reduzir uma população de mosquitos em pelo menos 80%9.
É necessário um equilíbrio entre a otimização da criação em massa para escala de produção e custo versus qualidade dos machos. Por exemplo, o aumento da densidade larval pode aumentar a capacidade de produção reduzindo o espaço necessário, o trabalho e o tempo para a pupação32. No entanto, densidades muito altas de larvas podem resultar em machos de vida menor e mais curta com capacidade de acasalamento reduzida32,33. A qualidade dos machos em relação a um programa SIT será avaliada pela capacidade dos machos soltos de acasalar com fêmeas em campo. Uma avaliação extensiva de campo é necessária para avaliar a competitividade do acasalamento em relação às contrapartes selvagens9,10. Isso muitas vezes torna impraticável avaliar exatamente quais fatores fazem um mosquito macho de "alta qualidade". No entanto, manter a produção e a qualidade consistentes (na medida em que pode ser avaliado rotineiramente) na criação em massa em larga escala é primordial. Isso requer um alto nível de vigilância e padronização de todo o processo com pequenas flutuações potencialmente tendo um impacto significativo. A alíquota das larvas L1 é um passo crítico e ilustra este ponto. Aliquotar o número correto de larvas em bandejas é essencial para uma produção de boa qualidade. O regime alimentar é precisamente adaptado para o número específico de larvas. Poucas/muitas larvas resultarão em excesso/sob alimentação, o que influencia a sobrevivência larval, o tamanho da pupae e o tempo para a pupação. Se há um segredo para a arte da criação em massa é garantir que os muitos pequenos passos no ciclo de produção sejam conduzidos de forma consistente, precisa e com um alto nível de controle de qualidade, como descrito neste artigo.

Mosquitos transmitem muitos patógenos que podem causar uma série de doenças em humanos e controlar esses mosquitos tem sido uma batalha contínua há séculos. Estratégias de controle de insetos baseadas em métodos químicos e biológicos tiveram alguns sucessos notáveis, mas em muitos casos o controle não tem sido sustentável a longo prazo. Por exemplo, o Brasil conseguiu a erradicação do Ae. aegypti na década de 50, mas o mosquito reinvadiu nos últimos 40-50 anos. Isso pode ser atribuído a muitas causas, incluindo resistência a inseticidas, danos ambientais, implementação de programas de controle ruim15-20e a rápida reinvasão sem monitoramento ou resposta adequados.
Novas técnicas e métodos estão sendo procurados para tentar vencer esta batalha contra mosquitos.  Os recentes avanços nas técnicas moleculares levaram ao desenvolvimento de novos e inovadores métodos de controle de mosquitos baseados em torno da Técnica de Insetos Estéreis (SIT)1-3. Um método de controle conhecido como RIDL (Liberação de Insetos portadores de uma Letal Dominante)4 é baseado em torno de SIT, mas usa métodos genéticos para remover a necessidade de esterilização por radiação. Cepas RIDL foram construídas para várias espécies de pragas, incluindo Ae. aegypti 5-8, Uma cepa RIDL de Ae. aegypti foi testada com sucesso no campo em Grand Cayman9,10; o uso adicional do campo está planejado ou em andamento em outros países ao redor do mundo.  Suprimir populações de mosquitos usando RIDL exigirá um grande número de adultos do sexo masculino de alta qualidade para serem criados3,14.
Para um programa SIT é considerado desejável liberar apenas homens; mosquitos fêmeas mordem e transmitem doenças. Além disso, os machos estéreis liberados podem ser 'distraídos' pelas fêmeas liberadas reduzindo a eficácia do programa. A liberação somente para homens mostrou-se 3-5 vezes mais eficaz do que a liberação de sexo misto em experimentos de campo grande com moscas de frutas irradiadas do Mediterrâneo21.
Em um programa de criação em massa RIDL, existem várias etapas para produzir os machos para lançamento.  O primeiro é produzir os ovos necessários para a geração de liberação(Figura 1). A próxima etapa é criar os ovos através de pupas ou adultos, separando larvas de pupas e pupas machos da pupa fêmea. A separação em larga escala dos machos das fêmeas requer uma diferença entre os sexos em um determinado estágio de vida adequado para a triagem em massa22. No Ae. aegypti (e em outras espécies de mosquitos) há uma diferença significativa de tamanho entre as pupas machos e fêmeas que podem ser exploradas para técnicas de separação sexual. Os machos RIDL classificados são então liberados em um programa de controle como pupas ou como adultos11,12.
O seguinte descreve os métodos para a criação em massa de OX513A, uma cepa RIDL de Ae. Aegypti, para liberação. Os métodos descritos abrangem as técnicas necessárias para a produção de ovos e machos RIDL para um programa de controle.

<table align="left" border="1" cellpadding="0" cellspacing="0" width="100%">
	<tbody>
		<tr>
			<td style="width:15.92%;height:38px;">
			Vipan Premium
			</td>
			<td style="width:15.06%;height:38px;">
			Sera GmbH
			</td>
			<td style="width:12.64%;height:38px;">
			190
			</td>
			<td style="width:40.2%;height:38px;">
			<a href="http://www.sera.de/uk/pages/products/product/sera-vipan-3.html">http://www.sera.de/uk/pages/products/product/sera-vipan-3.html</a>
			</td>
			<td style="width:16.16%;height:38px;">
			Required for rearing RIDL larvae
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:15.92%;height:58px;">
			Tetracycline
			</td>
			<td style="width:15.06%;height:58px;">
			Sigma Aldrich
			</td>
			<td style="width:12.64%;height:58px;">
			T7660
			</td>
			<td style="width:40.2%;height:58px;">
			<a href="http://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?D7=0&amp;N5=SEARCH_CONCAT_PNO|BRAND_KEY&amp;N4=T7660|SIGMA&amp;N25=0&amp;QS=ON&amp;F=SPEC">http://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?D7=0&#38;N5=SEARCH_CONCAT_PNO|BRAND_KEY&#38;N4=T7660|SIGMA&#38;N25=0&#38;QS=ON&#38;F=SPEC</a>
			</td>
			<td style="width:16.16%;height:58px;">
			Required for rearing RIDL larvae
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:15.92%;height:38px;">
			Plate separator
			</td>
			<td style="width:15.06%;height:38px;">
			J.W. Hock
			</td>
			<td style="width:12.64%;height:38px;">
			5412
			</td>
			<td style="width:40.2%;height:38px;">
			<a href="http://www.johnwhock.com/download/manuals/instr_5412_separator.pdf">http://www.johnwhock.com/download/manuals/instr_5412_separator.pdf</a>
			</td>
			<td style="width:16.16%;height:38px;">
			Separating larvae and pupae
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:15.92%;height:38px;">
			Parafilm M
			</td>
			<td style="width:15.06%;height:38px;">
			Pechiney Plastic packing
			</td>
			<td style="width:12.64%;height:38px;">
			PM-996
			</td>
			<td style="width:40.2%;height:38px;">
			<a href="http://www.parafilm.com">www.parafilm.com</a>
			</td>
			<td style="width:16.16%;height:38px;">
			Cover plate for blood feeding system
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:15.92%;height:38px;">
			Rearing pans for Release generation (53 cm x 38 cm x 8 cm)
			</td>
			<td style="width:15.06%;height:38px;">
			Pleion
			</td>
			<td style="width:12.64%;height:38px;">
			0757
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:40.2%;height:38px;">
			<a href="http://pleion.actcenter.com.br/produtos.asp?opcao=1">http://pleion.actcenter.com.br/produtos.asp?opcao=1</a>
			</td>
			<td style="width:16.16%;height:38px;">
			Larval rearing Release generation
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:15.92%;height:19px;">
			Fluorescent scope
			</td>
			<td style="width:15.06%;height:19px;">
			Leica&#160;Microsystems
			</td>
			<td style="width:12.64%;height:19px;">
			MZ FLIII
			
			</td>
			<td style="width:40.2%;height:19px;">
			<a href="http://www.leica-microsystems.com/fileadmin/downloads/Leica%20MZ%20FLIII/Brochures/M1-160-0de.pdf">http://www.leica-microsystems.com/fileadmin/downloads/Leica%20MZ%20FLIII/Brochures/M1-160-0de.pdf</a>
			</td>
			<td style="width:16.16%;height:19px;">
			Viewing fluorescent RIDL larvae
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:15.92%;height:38px;">
			Adult cages
			</td>
			<td style="width:15.06%;height:38px;">
			BugDorm
			</td>
			<td style="width:12.64%;height:38px;">
			DP1000
			</td>
			<td style="width:40.2%;height:38px;">
			<a href="http://bugdorm.megaview.com.tw/bugdorm-1-insect-rearing-cage-30x30x30-cm-pack-of-one-p-29.html">http://bugdorm.megaview.com.tw/bugdorm-1-insect-rearing-cage-30x30x30-cm-pack-of-one-p-29.html</a>
			</td>
			<td style="width:16.16%;height:38px;">
			Cages for Egg production&#160; colony
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:15.92%;height:38px;">
			Filter paper
			</td>
			<td style="width:15.06%;height:38px;">
			CELAB
			</td>
			<td style="width:12.64%;height:38px;">
			
			</td>
			<td style="width:40.2%;height:38px;">
			<a href="http://www.casadolaboratorio.com.br/subpage118.html">http://www.casadolaboratorio.com.br/subpage118.html</a>
			</td>
			<td style="width:16.16%;height:38px;">
			Filter paper for egg laying
			</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mass production of genetically modified aedes aegypti for field releases in brazil

Novas técnicas e métodos estão sendo procurados para tentar vencer a batalha contra mosquitos. Os recentes avanços nas técnicas moleculares levaram ao desenvolvimento de novos e inovadores métodos de controle de mosquitos baseados em torno da Técnica de Insetos Estéreis (SIT)1-3. Um método de controle conhecido como RIDL (Liberação de Insetos portadores de uma Letal Dominante)4, é baseado em torno de SIT, mas usa métodos genéticos para remover a necessidade de esterilização por radiação5-8. Uma cepa RIDL de Ae. aegypti foi testada com sucesso no campo em Grand Cayman9,10; o uso adicional do campo está planejado ou em andamento em outros países ao redor do mundo.
A criação em massa de insetos foi estabelecida em várias espécies de insetos e em níveis de bilhões por semana. No entanto, nos mosquitos, a criação tem sido geralmente realizada em escala muito menor, com a maior parte da criação em larga escala sendo realizada nas décadas de 1970 e 1980. Para um programa RIDL é desejável liberar o menor número possível de fêmeas que mordam e transmitam doenças. Em um programa de criação em massa há várias etapas para produzir os machos a serem liberados: produção de ovos, criação de ovos até a pupação e, em seguida, classificação de machos de fêmeas antes da liberação. Esses machos são então usados para um programa de controle RIDL, lançado como pupas ou adultos11,12.
Para suprimir uma população de mosquitos que utilizam ridl um grande número de adultos do sexo masculino de alta qualidade precisa ser criado13,14. Descreve os métodos para a criação em massa do OX513A, uma cepa RIDL de Ae. aegypti 8, para liberação e abrange as técnicas necessárias para a produção de ovos e criação em massa de machos RIDL para um programa de controle.

Os resultados esperados para a produção são mostrados na Figura 4. Os machos filhotes primeiro, atingindo o pico no dia 8 e as fêmeas atingem o pico no dia 9 após a eclosão. É importante medir essa curva de pupação para saber o melhor momento para classificar os machos das fêmeas.
Os resultados de mais de 6 meses de triagem de pupas masculinas e femininas mostram que a contaminação feminina, em média, é de 0,02% (Figura 5; SEM = 0,004%). Essa taxa de contaminação representa apenas 400 mulheres liberadas ao longo de um mês de lançamentos (aproximadamente dois milhões de homens). A produção atual de ovos por semana é de 4 milhões. Destes, 3,5 milhões são hatched para colônia de ovos e produção com o restante armazenado para backup. Aproximadamente 11% dos ovos são usados para colônia de produção de ovos e restante para geração de liberação. Taxa de escotilha de ovos é de 87,3% (SEM = 0,5%) e rendimento de pupas machos de larvas L1 é em média 29,5% (SEM = 1,2). Dois milhões de larvas são criadas toda semana para a colônia Geração de Libertação produzindo cerca de 571.000 pupas machos (SEM = 14.000). Pupae e mortalidade adulta durante o surgimento e liberação em média 5%, resultando em aproximadamente 543.000 (SEM = 13.000) liberados mosquitos machos adultos por semana. Espera-se que a produção atual de 4 milhões de ovos/semana possa ser reduzida para ~3 milhões/semana, com maior otimização para reduzir a perda de desperdício e armazenamento. No total, são necessários 6 funcionários para a produção descrita; quatro trabalhando na geração de liberação e os dois restantes na colônia de ovos.

Controle de Qualidade

O controle de qualidade é essencial para manter a qualidade dos adultos, eficiência da criação, mão-de-obra e custos. 

Controle de fenótipo transgênico
A fim de verificar a expressão genética RIDL são realizados dois controles, primeiro para verificar a expressão do marcador de fluorescência e, em segundo lugar, verificar a expressão do traço de letalidade RIDL na ausência de tetraciclina. Todas as larvas devem expressar o marcador fluorescente. Para verificar se o marcador fluorescente está sendo expresso como esperado, 2.000 primeiras larvas instar são verificadas sob um estereótipo Leica MZFLIII com filtro DsRed2 (Texas Red) para determinar se algum indivíduo não fluorescente está presente. Sem tetraciclina, o gene RIDL é expresso e esperamos 3-4% de sobrevivência para adultos8. Para verificar isso, uma bandeja extra é configurada para cada lote de liberação sem tetraciclina. A única diferença para a criação normal é que o alimento é reduzido em 2/3 a partir do dia 6, porque o acúmulo de alimentos em excesso devido a larvas mortas pode resultar em crescimento bacteriano em excesso.

Controle de rearmamento
Quatro bandejas da geração de lançamento são escolhidas aleatoriamente para serem classificadas e contadas separadamente. O número de pupas machos e fêmeas é registrado a partir de cada bandeja todos os dias(Figura 4). Qualquer desvio do número esperado de machos e fêmeas indica um problema potencial que pode afetar a produção e/ou a aptidão e pode ser comparado à colônia de ovos para ajudar a determinar a origem dos problemas.

Medidas de pupae
O tamanho do pupae mostrou-se correlacionado com o tamanhoadulto 28. Como um controle de qualidade para tamanho adulto, a largura cefalóxe é medida de pelo menos 30 pupas machos para cada dia de classificação da Geração de Lançamento; para a Colônia de Produção de Ovos pupas fêmeas também são medidas. A largura média do cefalóxe foi de 1,05 mm (SEM 0,005) para homens soltos e 1,04 mm (SEM = 0,006) e 1,29 mm (SEM = 0,006) para homens e mulheres, respectivamente, Produção de Ovos, Colônia; resultados semelhantes foram obtidos para a criação de massa Ae. albopictus 24.
<img alt="Figure 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/3579/3579fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/3579/3579fig1.jpg"> Figura 1. Estágios de criação de massa de mosquitos para uso em um programa RIDL/SIT. A Colônia de Produção de Ovos possui um alto nível de controle de qualidade para garantir a qualidade dos ovos fornecidos à geração de liberação.  Os ovos são criados até pupas na colônia de libertação, onde os machos são classificados das fêmeas.  Os adultos do sexo masculino são então usados para o programa de controle RIDL.
<img alt="Figure 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/3579/3579fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/3579/3579fig2.jpg"> Figura 2. Esquema da instalação de criação para a produção de machos RIDL para um programa de lançamento. Ovos de alta qualidade são continuamente produzidos na sala da Colônia de Produção de Ovos e, em seguida, são criados através de pupas na sala Geração de Liberação. As larvas e as pupas são então separadas e as pupas classificadas para os machos. Os machos são então colocados em dispositivos de liberação e autorizados a amadurecer para adultos para liberação na sala de armazenamento e liberação de adultos. 
<img alt="Figure 3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/3579/3579fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/3579/3579fig3.jpg"> Figura 3. Separando larvas, pupas machos e pupas fêmeas usando um separador deplacas 26.  O separador de placas usa a diferença de tamanho entre larvas, pupas machos e pupas fêmeas para classificar essas três diferentes fases de vida; larvas tendem a ser menores do que pupas machos que por sua vez são menores do que pupas fêmeas.  O instrumento é composto por duas placas de vidro; um é fixado em uma estrutura metálica inclinada e o outro fica em cima da primeira placa e pode ser movido em relação ao primeiro usando quatro parafusos de ajuste(A).  Os quatro parafusos de ajuste permitem que a placa externa seja fixada em um ângulo para a placa traseira para que um espaço em forma de cunha seja formado entre as placas, afunilando para baixo.  Larvas e pupas são derramadas entre as placas de vidro(B)e lavadas suavemente usando uma mangueira de água(C).  Ajustando o ângulo da placa, larvas, pupas machos e pupas fêmeas podem ser separadas(D).  Com a descarga contínua e o aumento do ângulo da placa, as larvas podem ser lavadas primeiro (em uma peneira), seguidas pela pupae macho e, finalmente, a pupa fêmea. 
<img alt="Figure 4" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/3579/3579fig4highres.jpg" src="/files/ftp_upload/3579/3579fig4.jpg"> Figura 4. Curvas de pupação para ae. aegyptide criação em massa .  Este gráfico mostra a porcentagem média de pupação para pupas de massa criadas ridl macho e fêmea durante 23 semanas de observação com ~135.000 pupas recuperadas por semana.  Barras de erro = erro padrão de média, n = 23. Na primeira coleta (dia 8) recuperamos em média 59% de pupas machos e 30% fêmeas do total de pupas recuperadas de bandejas ao longo de 5 dias. 
<img alt="Figure 5" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/3579/3579fig5highres.jpg" src="/files/ftp_upload/3579/3579fig5.jpg"> Figura 5. Contaminação feminina média de pupas machos classificadas. Este gráfico mostra a porcentagem média mensal de contaminação feminina durante a triagem masculina no dia 8 após a eclosão durante um período de seis meses. 
<img alt="Figure 6" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/3579/3579fig6highres.jpg" src="/files/ftp_upload/3579/3579fig6.jpg"> Figura 6. Sistema de alimentador de sangue de placa de alumínio. A placa (B) é coberta com Parafilm (A) e sangue pipetado em um bolso e, em seguida, selado(D). A placa é colocada em uma gaiola e aquecida colocando um saco de feijão aquecido(C)em cima(E). 
<img alt="Figure 7" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/3579/3579fig7highres.jpg" src="/files/ftp_upload/3579/3579fig7.jpg"> Figura 7. Distinguindo pupas machos e fêmeas Ae. aegypti. Ae. aegypti pupae pode ser alimentado de forma confiável pelas diferenças na forma do lobo genital (no final dos segmentos abdominais pupais logo abaixo das pás). Além disso, os machos também tendem a ser menores que as fêmeas.   
<img alt="Table 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/3579/3579table1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/3579/3579table1.jpg"> Mesa 1. Regime geral de alimentação para larvas Ae. aegypti RIDL (mg de alimento por larva por dia). Para calcular a quantidade real de alimentos necessários multiplique pelo número total de larvas por bandeja.

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Mass Production of Genetically Modified Aedes aegypti for Field Releases in Brazil

Para alcançar a supressão populacional do Aedes aegypti usando o sistema RIDL® (Liberação de Insetos portadores de uma Letal Dominante), um grande número de mosquitos machos precisa ser liberado. Isso requer o uso de técnicas de criação em massa e tecnologia para fornecer sistemas confiáveis para obter o número máximo de mosquitos machos de alta qualidade.

Produção em massa de Aedes aegypti geneticamente modificado para lançamentos de campo no Brasil

New techniques and methods are being sought to try to win the battle against mosquitoes. Recent advances in molecular techniques have led to the ...

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Research

JoVE Journal

Environment

Mass Production of Genetically Modified Aedes aegypti for Field Releases in Brazil

22.8K visualizações.  Oxitec Ltd. Para alcançar a supressão populacional do Aedes aegypti usando o sistema RIDL® (Liberação de Insetos portadores de uma Letal Dominante), um grande número de mosquitos machos precisa ser liberado. Isso requer o uso de técnicas de criação em massa e tecnologia para fornecer sistemas confiáveis para obter o número máximo de mosquitos machos de alta qualidade.

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Evaluation of Integrated Anaerobic Digestion and Hydrothermal Carbonization for Bioenergy Production

Lignocellulosic biomass is one of the most abundant yet underutilized renewable energy resources. Both anaerobic digestion (AD) and hydrothermal carbonization (HTC) are promising technologies for bioenergy production from biomass in terms of biogas and HTC biochar, respectively. In this study, the combination of AD and HTC is proposed to increase overall bioenergy production. Wheat straw was anaerobically digested in a novel upflow anaerobic solid state reactor (UASS) in both mesophilic (37 &#176;C) and thermophilic (55 &#176;C) conditions. Wet digested from thermophilic AD was hydrothermally carbonized at 230 &#176;C for 6 hr for HTC biochar production. At thermophilic temperature, the UASS system yields an average of 165 LCH4/kgVS&#160;(VS: volatile solids) and 121 L CH4/kgVS&#160;at mesophilic AD over the continuous operation of 200 days. Meanwhile, 43.4 g of HTC biochar with 29.6 MJ/kgdry_biochar was obtained from HTC of 1 kg digestate (dry basis) from mesophilic AD. The combination of AD and HTC, in this particular set of experiment yield 13.2 MJ of energy per 1 kg of dry wheat straw, which is at least 20% higher than HTC alone and 60.2% higher than AD only.

A novel Upflow Anaerobic Solid State (UASS) reactor was used for biogas production from fibrous feedstock. Digestate from UASS reactor was hydrothermally carbonized into HTC biochar in a pressurized batch reactor. The integration of the two bioenergy concepts was applied in this study to increase overall bioenergy production.

Avaliação Integrada Digestão Anaeróbia e carbonização hidrotérmica para Bioenergy Production

Lignocellulosic biomass is one of the most abundant yet underutilized renewable energy resources. Both anaerobic digestion (AD) and hydrothermal ...

Ambiente

Integrated Field Lysimetry and Porewater Sampling for Evaluation of Chemical Mobility in Soils and Established Vegetation

Potentially toxic chemicals are routinely applied to land to meet growing demands on waste management and food production, but the fate of these chemicals is often not well understood. Here we demonstrate an integrated field lysimetry and porewater sampling method for evaluating the mobility of chemicals applied to soils and established vegetation. Lysimeters, open columns made of metal or plastic, are driven into bareground or vegetated soils. Porewater samplers, which are commercially available and use vacuum to collect percolating soil water, are installed at predetermined depths within the lysimeters. At prearranged times following chemical application to experimental plots, porewater is collected, and lysimeters, containing soil and vegetation, are exhumed. By analyzing chemical concentrations in the lysimeter soil, vegetation, and porewater, downward leaching rates, soil retention capacities, and plant uptake for the chemical of interest may be quantified. Because field lysimetry and porewater sampling are conducted under natural environmental conditions and with minimal soil disturbance, derived results project real-case scenarios and provide valuable information for chemical management. As chemicals are increasingly applied to land worldwide, the described techniques may be utilized to determine whether applied chemicals pose adverse effects to human health or the environment.

Field lysimetry and porewater sampling allow researchers to evaluate the fate of chemicals applied to soils and established vegetation. The goal of this protocol is to demonstrate how to install required instrumentation and collect samples for chemical analysis during integrated field lysimetry and porewater sampling experiments.

Integrado Campo Lysimetry e Porewater Amostragem para Avaliação de Química Mobilidade em Solos e Vegetação Fundada

Potentially toxic chemicals are routinely applied to land to meet growing demands on waste management and food production, but the fate of these chemicals ...

Extraction and Analysis of Microbial Phospholipid Fatty Acids in Soils

Phospholipid fatty acids (PLFAs) are key components of microbial cell membranes. The analysis of PLFAs extracted from soils can provide information about the overall structure of terrestrial microbial communities. PLFA profiling has been extensively used in a range of ecosystems as a biological index of overall soil quality, and as a quantitative indicator of soil response to land management and other environmental stressors.
The standard method presented here outlines four key steps: 1. lipid extraction from soil samples with a single-phase chloroform mixture, 2. fractionation using solid phase extraction columns to isolate phospholipids from other extracted lipids, 3. methanolysis of phospholipids to produce fatty acid methyl esters (FAMEs), and 4. FAME analysis by capillary gas chromatography using a flame ionization detector (GC-FID). Two standards are used, including 1,2-dinonadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (PC(19:0/19:0)) to assess the overall recovery of the extraction method, and methyl decanoate (MeC10:0) as an internal standard (ISTD) for the GC analysis.

Phospholipid fatty acids provide information about the structure of soil microbial communities. We present methods for extraction from soil samples with a single-phase chloroform mixture, fractionation of extracted lipids using solid phase extraction columns, and methanolysis to produce fatty acid methyl esters, which are analyzed by capillary gas chromatography.

Extração e Análise de Microbial Phospholipid Fatty Acids em solos

Phospholipid fatty acids (PLFAs) are key components of microbial cell membranes. The analysis of PLFAs extracted from soils can provide information about ...

A Gusseted Thermogradient Table to Control Soil Temperatures for Evaluating Plant Growth and Monitoring Soil Processes

Thermogradient tables were first developed in the 1950s primarily to test seed germination over a range of temperatures simultaneously without using a series of incubators. A temperature gradient is passively established across the surface of the table between the heated and cooled ends and is lost quickly at distances above the surface. Since temperature is only controlled on the table surface, experiments are restricted to shallow containers, such as Petri dishes, placed on the table. Welding continuous aluminum vertical strips or gussets perpendicular to the surface of a table enables temperature control in depth via convective heat flow. Soil in the channels between gussets was maintained across a gradient of temperatures allowing a greater diversity of experimentation. The gusseted design was evaluated by germinating oat, lettuce, tomato, and melon seeds. Soil temperatures were monitored using individual, battery-powered dataloggers positioned across the table. LED lights installed in the lids or along the sides of the gradient table create a controlled temperature chamber where seedlings can be grown over a range of temperatures. The gusseted design enabled accurate determination of optimum temperatures for fastest germination rate and the highest percentage germination for each species. Germination information from gradient table experiments can help predict seed germination and seedling growth under the adverse soil conditions often encountered during field crop production. Temperature effects on seed germination, seedling growth, and soil ecology can be tested under controlled conditions in a laboratory using a gusseted thermogradient table.

Traditional thermogradient tables create a range of temperatures across the surface. Welding gussets perpendicular to the surface of a thermogradient table will control temperature in depth increasing possible research applications.

A Tabela Gusseted Thermogradient para controlar a temperatura do solo para avaliar o crescimento da planta e monitoramento de processos do solo

Thermogradient tables were first developed in the 1950s primarily to test seed germination over a range of temperatures simultaneously without using a ...

Modification and Application of a Leaf Blower-vac for Field Sampling of Arthropods

Rice fields host a large diversity of arthropods, but investigating their population dynamics and interactions is challenging. Here we describe the modification and application of a leaf blower-vac for suction sampling of arthropod populations in rice. When used in combination with an enclosure, application of this sampling device provides absolute estimates of the populations of arthropods as numbers per standardized sampling area. The sampling efficiency depends critically on the sampling duration. In a mature rice crop, a two-minute sampling in an enclosure of 0.13 m2 yields more than 90% of the arthropod population. The device also allows sampling of arthropods dwelling on the water surface or the soil in rice paddies, but it is not suitable for sampling fast flying insects, such as predatory Odonata or larger hymenopterous parasitoids. The modified blower-vac is simple to construct, and cheaper and easier to handle than traditional suction sampling devices, such as D-vac. The low cost makes the modified blower-vac also accessible to researchers in developing countries.

Assessment of arthropod abundance in crops is critical for investigating population dynamics and species interactions. Here we describe the modification and application of a leaf blower-vac for suction sampling of arthropods in rice.

Modificação e Aplicação de uma Folha Blower-vac para Campo Amostragem de Artrópodes

Rice fields host a large diversity of arthropods, but investigating their population dynamics and interactions is challenging. Here we describe the ...

The Plant Infection Test: Spray and Wound-Mediated Inoculation with the Plant Pathogen Magnaporthe Grisea

Plants possess a powerful system to defend themselves against potential threats by pathogenic fungi. For agriculturally important plants, however, current measures to combat such pathogens have proved too conservative and, thus, not sufficiently effective, and they can potentially pose environmental risks. Therefore, it is extremely necessary to identify host-resistance factors to assist in controlling plant diseases naturally through the identification of resistant germplasm, the isolation and characterization of resistance genes, and the molecular breeding of resistant cultivars. In this regard, there is need to establish an accurate, rapid, and large-scale inoculation method to breed and develop plant resistance genes. The rice blast fungal pathogen Magnaporthe grisea causes severe disease symptoms and yield losses. Recently, M. grisea has emerged as a model organism for studying the mechanisms of plant-fungal pathogen interactions. Hence, we report the development of a plant virulence test method that is specific for M. grisea. This method provides for both spray inoculation with a conidial suspension and wounding inoculation with mycelium cubes or droplets of conidial suspension. The key step of the wounding inoculation method for detached rice leaves is to make wounds on plant leaves, which avoids any interference caused by host penetration resistance. This spray/wounding protocol contributes to the rapid, accurate, and large-scale screening of the pathotypes of M. grisea isolates. This integrated and systematic plant infection method will serve as an excellent starting point for gaining a broad perspective of issues in plant pathology.

The Plant Infection Test: Spray and Wound-Mediated Inoculation with the Plant Pathogen Magnaporthe Grisea

Here, we present a protocol to test plant virulence with the plant pathogen Magnaporthe grisea. This report will contribute to the large-scale screening of the pathotypes of fungi isolates and serve as an excellent starting point for understanding the resistant mechanisms of plants during molecular breeding.

O teste de infecção da planta: Spray e inoculação mediada por ferimento com o de patógeno vegetal Magnaporthe Grisea

Plants possess a powerful system to defend themselves against potential threats by pathogenic fungi. For agriculturally important plants, however, current ...

Laboratory and Field Protocol for Estimating Sheet Erosion Rates from Dendrogeomorphology

Sheet erosion is among the crucial drivers of soil degradation. Erosion is controlled by environmental factors and human activities, which often lead to severe environmental impacts. The understanding of sheet erosion is, consequently, a worldwide issue with implications for both environment and economies. However, the knowledge on how erosion evolves in space and time is still limited, as well as its effects on the environment. Below, we explain a new dendrogeomorphological protocol for deriving eroded soil thickness (Ex) by acquiring accurate microtopographic data using both terrestrial laser scanning (TLS) and microtopographic profile gauges. Additionally, standard dendrogeomorphic procedures, dependent on anatomical variations in root rings, are utilized to establish the timing of exposure. Both TLS and microtopographic profile gauges are used to obtain ground surface pro&#64257;les, from which Ex is estimated after the threshold distance (TD) is determined, i.e., the distance between the root and the sediment knickpoint, which allows de&#64257;ning the lowering of the ground surface caused by sheet erosion. For each profile, we measured the height between the topside of the root and a virtual plane tangential to the ground surface. In this way, we intended to avoid small-scale impacts of soil deformation, which may be due to pressures exerted by the root system, or by the arrangement of exposed roots. This may provoke small amounts of soil sedimentation or erosion depending on how they physically affect the surface runoff. We demonstrate that an adequate microtopographic characterization of exposed roots and their associated ground surface is very valuable to obtain accurate erosion rates. This finding could be utilized to develop the best management practices designed to eventually halt or perhaps, at least, lessen soil erosion, so that more sustainable management policies can be put into practice.

Characterizing erosion from dendrogeomorphology has usually focused on accurately finding the starting time of root exposure, by examining macroscopic or cell level changes caused by exposure. Here, we offer a detailed description of different novel techniques to obtain more precise erosion rates from highly accurate microtopographic data.

Laboratório e campo protocolo para estimar as taxas de erosão folha de Dendrogeomorphology

Sheet erosion is among the crucial drivers of soil degradation. Erosion is controlled by environmental factors and human activities, which often lead to ...

Construction of a Compact Low-Cost Radiation Shield for Air-Temperature Sensors in Ecological Field Studies

Low cost temperature sensors are increasingly used by ecologists to assess climatic variation and change on ecologically relevant scales. Although cost-effective, if not deployed with proper solar radiation shielding, the observations recorded from these sensors will be biased and inaccurate. Manufactured radiation shields are effective at minimizing this bias, but are expensive compared to the cost of these sensors. Here, we provide a detailed methodology for constructing a compact version of a previously described custom fabricated radiation shield, which is more accurate than other published shielding methods that attempt to minimize shield size or construction costs. The method requires very little material: corrugated plastic sheets, aluminum foil duct tape, and cable ties. One 15 cm and two 10 cm squares of corrugated plastic are used for each shield. After cutting, scoring, taping and stapling of the sheets, the 10 cm squares form the bottom two layers of the solar radiation shield, while the 15 cm square forms the top layer. The three sheets are held together with cable ties. This compact solar radiation shield can be suspended, or placed against any flat surface. Care must be taken to ensure that the shield is completely parallel to the ground to prevent direct solar radiation from reaching the sensor, possibly causing increased warm biases in sun-exposed sites in the morning and afternoon relative to the original, larger design. Even so, differences in recorded temperatures between the smaller, compact shield design and the original design were small (mean daytime bias = 0.06 &#176;C). Construction costs are less than half of the original shield design, and the new design results in a less conspicuous instrument that may be advantageous in many field ecology settings.

With the advent of small, low-cost environmental sensors, it is now possible to deploy high-density networks of sensors to measure hyper localized temperature variation. Here, we provide a detailed methodology for constructing a compact version of a previously described custom-fabricated radiation shield for use with inexpensive thermochrons.

Construção de um escudo de radiação compacto de baixo custo para sensores de temperatura do ar em estudos ecológicos

Low cost temperature sensors are increasingly used by ecologists to assess climatic variation and change on ecologically relevant scales. Although ...

Visualizing Efficacy of Pesticides Against Disease Vector Mosquitoes in the Field

Efficacy of public health pesticides targeting nuisance and disease-vector insects such as mosquitoes, sand flies, and filth-breeding flies is not uniform across ecological zones. To best protect public and veterinary health from these insects, the environmental limitations of pesticides need to be investigated to inform effective use of the most appropriate pesticide formulations and techniques. We have developed a research program to evaluate combinations of pesticides, pesticide application equipment, and application techniques in hot-arid desert, hot-humid tropical, warm and cool temperate, and urban locations to derive pesticide use guidelines specific to target insect and environment. To these ends we designed a system of protocols to support efficient, cost-effective, portable, and standardized evaluation of a diverse range of pesticides and equipment across multiple environments. At the core of these protocols is the use of an array of small cages with colony-reared sentinel mosquitoes (adults and immatures) and sand flies (adults), strategically arranged in natural habitats and exposed to pesticide spray. Spatial and temporal patterns of pesticide efficacy are derived from percent mortality in sentinel cages, then mapped and visualized in a geographic information system. Maps of sentinel mortality data may be statistically compared to evaluate relative efficacy of a pesticide across multiple environments, or to study multiple pesticides in a single environment. Protocols may be modified to accommodate a variety of scenarios, including, for example, the vertical orientation of sentinels in canopy habitats or simultaneous testing of ground and aerial application methods.

The efficacy of public health pesticides targeting nuisance and disease-vector insects is not uniform across different ecological zones. Here we present a system of techniques using captive vector insects as sentinels for pesticide efficacy to derive electronic maps supporting the standard evaluation of pesticides across multiple environments.

Visualizando a eficácia de pesticidas contra mosquitos vetores de doenças no campo

Efficacy of public health pesticides targeting nuisance and disease-vector insects such as mosquitoes, sand flies, and filth-breeding flies is not uniform ...

Construction of a Low-cost Mobile Incubator for Field and Laboratory Use

Incubators are essential for a range of culture-based microbial methods, such as membrane filtration followed by cultivation for assessing drinking water quality. However, commercially available incubators are often costly, difficult to transport, not flexible in terms of volume, and/or poorly adapted to local field conditions where access to electricity is unreliable. The purpose of this study was to develop an adaptable, low-cost and transportable incubator that can be constructed using readily available components. The electronic core of the incubator was first developed. These components were then tested under a range of ambient temperature conditions (3.5 &#176;C - 39 &#176;C) using three types of incubator shells (polystyrene foam box, hard cooler box, and cardboard box covered with a survival blanket). The electronic core showed comparable performance to a standard laboratory incubator in terms of the time required to reach the set temperature, inner temperature stability and spatial dispersion, power consumption, and microbial growth. The incubator set-ups were also effective at moderate and low ambient temperatures (between 3.5 &#176;C and 27 &#176;C), and at high temperatures (39 &#176;C) when the incubator set temperature was higher. This incubator prototype is low-cost (&lt; 300 USD) and adaptable to a variety of materials and volumes. Its demountable structure makes it easy to transport. It can be used in both established laboratories with grid power or in remote settings powered by solar energy or a car battery. It is particularly useful as an equipment option for field laboratories in areas with limited access to resources for water quality monitoring.

This paper describes a method for building an adaptable, low-cost and transportable incubator for microbial testing of drinking water. Our design is based on widely available materials and can operate under a range of field conditions, while still offering the advantages of higher-end laboratory-based models.

Construção de uma incubadora móvel de baixo custo para o campo e uso em laboratório

Incubators are essential for a range of culture-based microbial methods, such as membrane filtration followed by cultivation for assessing drinking water ...