O financiamento para este projecto foi fornecido pelos fundos de ARRA de NINDS concessão NS045647.

1. Materiais necessários para Treinamento e Teste <ol><li> Testando câmara. Qualquer recipiente grande o suficiente para acomodar um animal e dois copos de perfume. Nosso laboratório utilizado modificados câmaras operante (Med Associates Inc.) com barras de chão removidas para dar espaço para copos perfume (Figura 1). </li><li> Copos de perfume e porta-copos. Chávenas suficientemente larga e profunda para permitir a escavação e algum mecanismo detentor / estabilizá-los (Figura 2). </li><li> Areias perfumadas. O protocolo de testes utilizado aromas previamente estabelecidas para não mostrar viés de resposta em ratos (cacau, manjericão, cominho, café) 4. Cada areia perfumada foi misturada à razão de 1 g de odorante 110 g unscented limpo recreio, areia &quot;caixa de areia&quot; e podem ser armazenados em recipientes hermeticamente fechados durante até 6 meses. </li><li> Reforçador. Utilizamos peças de fruta cereais laço como reforço. Recomendamos exposição dos animais ao reforçador (via colocação em suas gaiolas) 3 a 5 dias antes do traIning para superar as respostas neophobic. </li><li> Pare de relógio ou cronômetro. </li></ol> 2. Manuseio de animais antes do treino <ol><li> Manipulação. Como os animais serão colocados e removidos das câmaras repetidamente durante todo o treinamento / testes, recomenda cuidar dos animais três a cinco dias antes do treinamento, a fim de familiarizá-los com o contato humano. </li><li> Motivador. Para motivar animais para realizar esta tarefa, algum nível de privação de alimento é necessário. Restrição alimentar deve ser iniciada pelo menos três dias antes da formação e ambos os testes e os animais podem ser mantidos a 90% da alimentação livre de peso. Normalmente quantidades de 15-20 g de ração por dia são suficientes, mas pesos dos animais deve ser verificado a cada dois dias enquanto a comida restrição. </li></ol> 3. Dig Formação Treinar um animal para escavar a areia pode ser realizado de uma média de oito sessões ao longo de um período de quatro dias de tempo. Durante escavação traIning, a câmara deve ser criado colocando dois copos de perfume no mecanismo / suporte e colocar a configuração copo perfume para a câmara. O procedimento geral é detalhado a seguir, com o objectivo de moldar o animal de consumir completamente o reforçador de escavação em areia para a recuperar. <ol><li> Sessão 1 - habituação câmara e treinamento revista. Preencher completamente as xícaras perfume com o reforço (sem areia). Colocar o animal dentro do aparelho durante 30 minutos permitindo que o animal se livremente consumir o reforçador. </li><li> Sessão 2 - habituação areia. Preencher completamente as xícaras perfume com o reforço e despeje uma pequena quantidade de areia sem perfume em cada copo, enchendo não mais do que a metade do copo. Colocar o animal dentro do aparelho durante 30 minutos permitindo que o animal se livremente consumir o reforçador. </li><li> Sessão 3 - escavação superfície. Encha os copos com uma mistura de perfume mesmo de reforçador e areia sem perfume, deixando vários reforços expostos. Colocar o animal no aparelho para30 min permitir que o animal consumir livremente o reforçador. No processo de consumir os reforçadores expostos, o animal deve descobrir reforçadores adicionais abaixo da superfície da areia. O animal deve passar de usar a sua boca para usar as patas dianteiras para remover cada reforçador da areia. </li><li> Sessão 4 - cavar. Encher os copos de perfume com uma mistura de 1 parte reforçador para 3 partes de areia sem perfume, deixando 1-2 reforçadores exposta. Colocar o animal no interior da câmara durante 30 min permitindo que o animal se livremente consumir o reforçador. O animal deve começar a cavar com suas patas dianteiras para descobrir reforços adicionais e removê-los da areia. Animais que não começam a descobrir o reforço depois de um período de 10 minutos de tempo deve ser assistida (o pesquisador deve descobrir um reforçador em um tempo até que o animal aprende). </li><li> Sessão 5 - escavação integral. Encher os copos de perfume com uma mistura de 1 parte reforçador para 3 partes de areia sem perfume, sem deixar expostas reforçadores. Place o animal dentro do aparelho durante 30 minutos permitindo que o animal se livremente consumir o reforçador. Os animais devem ser assistida quando necessário. Alguns animais podem precisar de várias instâncias desta sessão, a fim de demonstrar a cavar comportamento. </li><li> Sessão 6 - habituação estrutura julgamento. Coloque três reforços em profundidade, posições médias, e raso na areia em cada copo perfume. Colocar o animal no interior da câmara até que todos os três são recuperados a partir de cada copo, auxiliando, conforme necessário. Uma vez que todos foram recuperados, colocar o animal num aparelho de fixação durante 15-30 segundos e repor os copos de perfume, tal como descrito neste passo. Em seguida, colocar o animal de volta para dentro da câmara e repetir o processo até que o animal tenha completado quatro ensaios totais. O animal deve habituado a ser colocada no aparelho de fixação e começa a procurar imediatamente quando colocado no interior da câmara. O animal deve também demonstram um comportamento de escavação completa e recuperar o reforçador, na parte inferior do copo perfume. </li><li>Sessão 7 - reforçadores individuais. Coloque um reforçador único a metade da profundidade da areia em cada copo. Colocar o animal no interior da câmara e permitir que ele para recuperar ambos os reforçadores, e, em seguida, colocá-lo dentro do aparelho de fixação durante 30 seg. Repita esse processo para quatro ensaios totais. O animal deve começar a cavar mais rápido e requer o mínimo de ajuda do pesquisador. </li><li> Sessão 8 - testes de discriminação mock. Encher copos, tal como descrito na sessão 7. Dar ao animal 30 segundos para recuperar os dois reforços. Colocar o animal no aparelho de fixação, quando ambos foram recuperados ou 30 seg tenha decorrido. Repetir este para o número de ensaios que irão ser utilizados na fase de teste. Os animais devem aprender a cavar rapidamente quando colocado de volta para a câmara. </li><li> Sessões adicionais. Dependendo testes de discriminação inicial, o experimentador pode desejar executar sessões adicionais para familiarizar o animal com os aromas dadas. Ratos tendem a apresentar inicialmente neofobia e preferem oaromas familiares anteriormente associado com reforço de 10. </li></ol> 4. Teste de discriminação <ol><li> O pesquisador deve escolher um emparelhamento cheiro, incluindo perfume que será iscadas com o reforçador (discriminação correta) e que não vai. Decisões adicionais, tais como o número de discriminações e reversões, o número máximo de dias e provações, e se a pré-teste antes da lesão vai ser em grande parte com base em questão experimental (ver notas adicionais abaixo). </li><li> Ratos podem ser testados e dados gravados à mão pelo pesquisador. O pesquisador deve registrar para cada ensaio: a escolha correta ou incorreta, a latência para iniciar a escavação, e ensaios em que um rato vezes para fora. <ol class="lalpha"><li> O número de ensaios devem ser administrados a critério do pesquisador (ver notas adicionais abaixo). </li><li> A duração do ensaio deve ser a critério do pesquisador (ver notas adicionais abaixo). </li><li> A pesquiCher deve embaralhar a estrutura julgamento (esquerda-direita localização dos copos perfume), com a ressalva de que não mais de três ensaios consecutivos está em um determinado lado. Isso vai ajudar a reduzir o viés lado. </li></ol></li><li> A fim de iniciar cada ensaio, colocar o animal no interior da câmara de frente para a traseira, equidistante de cada copo. Colocar um animal mais perto de um copo pode aumentar a chance de desenvolver um viés. </li><li> Se o animal corretamente discrimina, permitir que ele para recuperar e consumir o reforçador, e depois removê-lo para o aparelho segurando por 30 segundos. Se ele expira ou escolhe incorretamente, remova-a imediatamente, antes que ele &quot;corrige&quot; em si, e colocá-lo dentro do aparelho segurando por 30 segundos. </li><li> Repita esse processo para o número escolhido de ensaios. </li><li> Uma vez que o animal atinge um critério pré-determinado (isto é, exactidão&gt; 80% por dia durante três dias consecutivos), o animal pode passar para o lado de discriminação / reversão e repetir o processo acima. </li></ol&gt; 5. Notas adicionais <ol><li> Testar no nosso laboratório encontrou que o trabalho de formação e de ensaio utilizando melhor a metade de um pedaço de cereais circuito para evitar a saciedade. </li><li> Durante o treinamento, alguns animais podem precisar de mais ajuda do que outros. Recomendamos fazer o que é necessário para alcançar a cavar comportamento. No entanto, uma vez que o teste começa, nunca tentamos intervir e melhorar o comportamento de escavação de um rato. </li><li> Variando o número total de ensaios pode ser suficiente para laboratórios diferentes. Testes em nosso laboratório utilizado 6, 8 e 12 julgamentos por sessão, uma sessão por dia, e ter encontrado uma preferência para a configuração do julgamento 8. </li><li> Variando o comprimento do ensaio pode ser necessário em algumas configurações experimentais (por exemplo, os animais sob um paradigma de estresse podem necessitar de ensaios vezes maiores ou menos ensaios totais). </li><li> Um critério predefinido deve ser usado de modo a determinar quando um animal dominou a discriminação. Testes em nosso laboratório foi necessária uma Accuracy superior a 80% (5/6 ensaios, 7/8, ou ensaios 10/12 ensaios) por dia, durante 3 dias consecutivos. No entanto, uma maior critério (85%) poderia também ser usado. </li><li> / Limites predefinidos máximos devem ser utilizados para o número máximo de dias passados ​​sobre um aroma fornecido. Isso vai ser em grande parte ditada por questão de investigação. Por exemplo, os nossos estudos de laboratório TCE e, como de resultado da natureza progressiva do TCE, ratos que não atingiram critério são movidos a uma discriminação romance / reversão após 12 dias de testes. </li><li> Decidir se a pré-testa ou apenas pós-teste é uma questão que está em grande parte determinada pela direção experimental. O pré-teste permite efectuar uma avaliação da memória sobre a lesão pós animal, que possam ser relevantes dependendo do tipo de lesão. Entretanto, o teste pós permite examinar as diferenças na taxa de aquisição sobre as discriminações entre os grupos. Nosso laboratório tem e continuará a usar os dois. </li></ol>

<ol>
	<li>Birrell, J. M., Brown, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medial+frontal+cortex+mediates+perceptual+attentional+set+shifting+in+the+rat.">Medial frontal cortex mediates perceptual attentional set shifting in the rat.</a> J. Neurosci. 20, 4320-4324 (2000).</li><li>Bunsey, M., Eichenbaum, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conservation+of+hippocampal+memory+function+in+rats+and+humans.">Conservation of hippocampal memory function in rats and humans.</a> Nature. 379, 255-257 (1996).</li><li>Eichenbaum, H., Fagan, A., Cohen, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+olfactory+discrimination+learning+set+and+facilitation+of+reversal+learning+after+medial-temporal+damage+in+rats:+Implications+for+an+account+of+preserved+learning+abilities+in+amnesia.">Normal olfactory discrimination learning set and facilitation of reversal learning after medial-temporal damage in rats: Implications for an account of preserved learning abilities in amnesia.</a> J. Neurosci. 6, 1876-1884 (1986).</li><li>Kaiser, D. H., Means, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Value+transfer+across+odor+stimuli+using+probability+of+reinforcement+in+the+rat.">Value transfer across odor stimuli using probability of reinforcement in the rat.</a> Behav. Processes. 73, 164-169 (2006).</li><li>Martens, K. M., Vonder Haar, C., Hutsell, B. A., Hoane, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Additional+options+for+behavioral+testing+in+rodent+models+of+traumatic+brain+injury:+A+simple+discrimination+task+used+as+a+novel+method+of+testing+decision-making+behavior.">Additional options for behavioral testing in rodent models of traumatic brain injury: A simple discrimination task used as a novel method of testing decision-making behavior.</a> J. Neurotrauma. , (2012).</li><li>Writing Group Members. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Executive+summary:+Heart+disease+and+stroke+statistics+-+2012+update.">Executive summary: Heart disease and stroke statistics - 2012 update.</a> Circulation. 125, 188-197 (2012).</li><li>Narayan, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+trials+in+head+injury.">Clinical trials in head injury.</a> J. Neurotrauma. 19, 503-557 (2002).</li><li>Fujimoto, S. T., Longhi, L., Saatman, K. E., McIntosh, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor+and+cognitive+function+evaluation+following+experimental+traumatic+brain+injury.">Motor and cognitive function evaluation following experimental traumatic brain injury.</a> Neurosci. Biobehav. Rev. 28, 365-378 (2004).</li><li>Mitchell, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experiments+on+neophobia+in+wild+and+laboratory+rats:+A+reevaluation.">Experiments on neophobia in wild and laboratory rats: A reevaluation.</a> J. Comp. Physiol. Psychol. 90, 190-197 (1976).</li><li>Baum, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+two+types+of+deviation+from+the+matching+law:+Bias+and+undermatching.">On two types of deviation from the matching law: Bias and undermatching.</a> J. Exp. Anal. Behav. 22, 231-242 (1974).</li><li>Swets, J. A., Dawes, R. M., Monahan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Psychological+science+can+improve+diagnostic+decisions.">Psychological science can improve diagnostic decisions.</a> Psychological Science in the Public Interest. 1, 1-26 (2000).</li><li>Stuss, D. T., Murphy, K. J., Binns, M. A., Alexander, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Staying+on+the+job:+The+frontal+lobes+control+individual+performance+variability.">Staying on the job: The frontal lobes control individual performance variability.</a> Brain. 126, 2363-2380 (2003).</li><li>Burkett, E. E., Bunnell, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Septal+lesions+and+the+retention+of+DRL+performance+in+the+rat.">Septal lesions and the retention of DRL performance in the rat.</a> J. Comp. Physiol. Psychol. 62, 468-471 (1966).</li><li>Porter, M. C., Burk, J. A., Mair, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+the+effects+of+hippocampal+or+prefrontal+cortical+lesions+on+three+versions+of+delayed+non-matching-to-sample+based+on+positional+or+spatial+cues.">A comparison of the effects of hippocampal or prefrontal cortical lesions on three versions of delayed non-matching-to-sample based on positional or spatial cues.</a> Behav. Brain Res. 109, 69-81 (2000).</li><li>Walton, M. E., Bannerman, D. M., Alterescu, K., Rushworth, M. F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+specialization+within+medial+frontal+cortex+of+the+anterior+cingulate+for+evaluating+effort-related+decisions.">Functional specialization within medial frontal cortex of the anterior cingulate for evaluating effort-related decisions.</a> J. Neurosci. 23, 6475-6479 (2003).</li></ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

Neste vídeo, mostramos como a tarefa Dig podem ser realizados utilizando relativamente materiais de baixo custo e, com alguma experiência, o teste pode ser realizado de forma bastante rápida (~ 10 min / animal). Isto permite que a tarefa a ser facilmente incorporado em baterias de testes existentes para TCE, lesões cerebrais, AVC e outros. A tarefa Dig também é robusto no que se pode avaliar a vários aspectos diferentes de cognição, incluindo avaliação de aprendizagem anterior, inversões e aquisições novas (por exemplo, conjunto de deslocamento). Mais importante ainda, a tarefa Dig foi demonstrado ser eficaz na avaliação da função frontal após danos cerebrais. Além disso, um paradigma escavação semelhante tem sido utilizada para estudar a transferência de valor, em ratos, após dano do hipocampo 4, e, portanto, pode ser facilmente estudado após TBI. Os principais benefícios de tarefas como este são a capacidade de avaliar outras formas de cognição do que o que normalmente é testado em mais garanhão lesão cerebrals. Neste momento existe uma falta de tarefas simples e rapidamente adquiridas para avaliar a cognição frontalmente mediada após dano cerebral. No campo da TBI experimental, há uma forte dependência labirintos como a avaliação da cognição sola 9. Discriminação e comportamento de escolha são aspectos importantes do frontalmente mediada cognição, que devem ser avaliados danos no cérebro a seguir. Estes têm sido estudados sob muitos paradigmas diferentes (atrasado correspondência da amostra de reforço diferencial, de baixa taxa de resposta, baseada em esforço tomada de decisão, etc) no campo da análise experimental do comportamento, mas não existem estudos de lesão cerebral 14-16. O desenvolvimento de novas terapêuticas para o tratamento de danos cerebrais requer validação em várias modalidades de motora, sensorial, e a função cognitiva. Tarefas como isso poderia se tornar vital para avaliar completamente a função cognitiva em tratamento terapêutico. Enquanto a tarefa de re Digapresenta um passo na direção certa para avaliar a função cerebral após a lesão, ainda existem limitações a ela. A intenção é ser simples de construir, administrar e analisar, mas isso significa que há limites superiores para o que se pode medir. Atualmente, duas opções são tudo o que pode ser avaliado sob o paradigma dado. Além disso, a tarefa de escavação não é sensível o suficiente para lidar com outros aspectos de disfunção frontal, como impulsividade, que podem interferir com a capacidade de um animal de tomada de decisão. Enquanto a tarefa Dig Foi demonstrado ser bem sucedida por nós na avaliação da lesão cerebral em animais jovens, ainda existem muitas coisas que podem ser feitas com a tarefa de aperfeiçoar e melhorar. Estes incluem a avaliação de populações especiais (idade, sexo, tensão), comparando-o diretamente com os paradigmas operantes é adaptado a partir, realizando uma comparação direta desta tarefa com outras tarefas que avaliam disfunção frontal após lesão, e explorar additional maneiras de analisar e comparar os dados gerados a partir da tarefa. Esta tarefa é projetado para lidar com algumas das questões em nosso campo, testando função frontal de várias maneiras da lesão cerebral. No entanto, uma tarefa não pode medir todos os processos cognitivos que são afetadas por uma lesão cerebral. Assim, defendemos que as pessoas continuam a desenvolver e aperfeiçoar tarefas como o descrito neste protocolo para avaliar mais completamente deficiências funcionais após lesões cerebrais. Ao fazê-lo, pode-se aumentar a eficácia do desenvolvimento de medicamentos e terapia para a lesão cerebral, avaliando através de múltiplas medidas.

Danos cerebrais resultantes do trauma cranioencefálico (TCE) e acidente vascular cerebral é uma das principais causas de morte e incapacidade nos Estados Unidos. Juntas, essas desordens resultam em um total de quase 2,5 milhões de incidências, com cerca de 500.000, resultando em morte ou prejuízo 6-7. Apesar deste forte impacto na sociedade, poucos tratamentos foram desenvolvidos para tratar tanto o TCE ou AVC. Em certa medida, a falta de opções de tratamento disponíveis pode ser atribuída a avaliação comportamental inadequados de novas drogas e terapias 8. Em particular, há uma falta de tarefas a precisão e sensibilidade avaliar os efeitos dos tratamentos sobre os deficits cognitivos diferentes após lesão cerebral na literatura pré-clínica. Actualmente a maioria das avaliações cognitivas que são executadas avaliar memória espacial utilizando uma tarefa do labirinto de água, tais como o labirinto Morris 9. Existem várias razões para esta falta de testes incluindo o tempo que demora atotalmente caracterizar e avaliar os déficits cognitivos, a dependência pesada em cima de equipamentos caros e conhecimento para utilizar tarefas operantes, ea velocidade com que essas avaliações podem ser realizadas. Para este fim, nós adaptamos uma tarefa de discriminação de base perfume, a tarefa de escavação, para avaliar a cognição lesão cerebral a seguir. A tarefa Dig é projetado para ser uma ferramenta barata e rápida, e eficaz para avaliar disfunção cognitiva lesão cerebral seguinte de um TCE ou AVC. A tarefa Dig depende dos princípios básicos operantes de aprendizagem e de tomada de decisão. Como se trata apenas de um paradigma decisão dois escolha, esta tarefa representa uma das mais simples discriminações que podem ser feitas. No protocolo a seguir os detalhes para a configuração da tarefa, bem como a metodologia de formação será descrito. Descobrimos que esta tarefa é mais forte quando se avalia frontalmente mediadas défices cognitivos em comparação com déficits parietais unilaterais, no entanto, ainda não foi testado com um modelo dedano do hipocampo 5. Idealmente, esta tarefa seria adequado para a avaliação da eficácia de um tratamento ou a terapia de recuperação dos défices frontais após uma lesão. No entanto, é possível que, com modificações esta tarefa também pode ser usada para explorar mais complexo comportamento de tomada de decisão, tais como impulsividade e correspondência generalizada.

<table border="1"><tr><td> Nome de material </td><td> Companhia </td><td> Número de Catálogo </td><td> Comentários </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> EQUIPAMENTOS </td></tr><tr><td> Câmara operante </td><td> Med Associates </td><td> ENV-008CT </td><td> Quantidade: 1 câmara padrão operante, há dispositivos externos. </td></tr><tr><td> Plexiglas </td><td> Loja local </td><td> N / A </td><td> Quantidade: 1 folha Corte em tamanho adequado para caber na câmara. </td></tr><tr><td> End Caps de PVC para tubos </td><td> Loja local </td><td> N / A </td><td> Valor: 2 instalação de copo / cheiro. </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> REAGENTES</td></tr><tr><td> Areia </td><td> Loja local </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Diversas especiarias </td><td> Mercearia local </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Reforçador </td><td> Mercearia local </td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> * Equipamento está listado para a construção por câmara. </td></tr></table>

the dig task: a simple scent discrimination reveals deficits following frontal brain damage

Comprometimento cognitivo é a causa mais freqüente de deficiência em humanos após a lesão cerebral, mas as tarefas comportamentais utilizados para avaliar a cognição em modelos de roedores de lesão cerebral é inexistente. Empréstimos da literatura operante nosso laboratório utilizou um paradigma discriminação básica cheiro 1-4 , a fim de avaliar os déficits em ratos frontalmente lesado. Anteriormente descrevemos rapidamente a tarefa Dig e demonstrou que ratos com lesão cerebral frontal apresentar déficits graves em toda a vários testes na tarefa 5. Aqui apresentamos um protocolo mais detalhado para esta tarefa. Os ratos são colocados numa câmara e permitiu a discriminação entre duas areias perfumadas, um dos quais contém um reforçador. O julgamento termina após o rato ou discrimina corretamente (definido como cavar na areia correta perfumado), incorretamente discrimina, ou decorrido 30 seg. Os ratos que discriminam corretamente são permitidos para se recuperar e consumir o reforço. Os ratos que discriminate incorrectamente são imediatamente removidos da câmara. Isso pode continuar através de uma variedade de reversões e aromas da novela. A análise primária é a precisão para cada par cheiro (proporção acumulada correto para cada perfume). Os resultados gerais da tarefa Dig sugerem que é uma preparação experimental simples que pode avaliar défices em ratos com lesão frontal bilateral cortical em comparação com os ratos com lesão unilateral parietal. A tarefa Dig também podem ser facilmente incorporados em uma bateria de teste existente cognitiva. O uso de mais tarefas como esta pode levar a um teste mais preciso da lesão frontal seguinte função, o que pode levar a opções terapêuticas para tratamento. Todo uso de animais foi conduzido de acordo com os protocolos aprovados pelo Animal Care Institucional e Comitê de uso.

Existem duas principais variáveis ​​que podem ser gravadas na tarefa Dig: Correto / Incorreto e latência. No entanto, não respostas também podem ser registrados e analisados ​​como elas podem ser importantes quando se considera a motivação. Estes podem ser usados ​​para gerar medidas de análise, tais como a precisão (ensaios # correctos / total), desvio de resposta 11, e de latência. Estas medidas podem ser utilizadas para avaliar vários tipos diferentes de aprendizagem, dependendo da concepção da experiência (ver notas adicionais acima). O pré-teste dos animais permite que um pesquisador para avaliar a memória para uma discriminação aprendido. Reversões de discriminações aprendidas permitir que um investigador para ver o quão bem um animal pode adaptar-se a uma contingência de mudança. Aprendizagem de novas discriminações permite aos pesquisadores comparar o aprendizado ao longo pares aroma diferentes, bem como avaliar a capacidade para a aprendizagem romance. Dependendo do desenho do estudo (ver notas adicionais acima), estas medidas podem seranalisados ​​em um delineamento de medidas repetidas ou podem ser recolhidas em uma única variável. Anteriormente, desabou precisão em uma medida de proporção acumulada correta, a fim de analisar cada discriminação perfume separadamente 5. Isto ocorreu através da soma do número de discriminações corretos e dividindo-se pelo número total de ensaios para cada discriminação. Uma série de one-way entre sujeitos a análise de variância (ANOVAs) foram então usados ​​para examinar as diferenças de grupo para cada odor discriminação pós-lesão. No entanto, mais energia pode ser obtida por análise através da utilização de técnicas estatísticas avançadas, tais como a modelização de efeitos mistos. Uma outra alternativa é utilizar o sinal de detecção de teoria para a análise de dados. Esta é uma abordagem popular na literatura de tomada de decisão humana e permite ao pesquisador examinar a maioria dos dados a partir de um determinado assunto em um único gráfico e rapidamente avaliar o grau de precisão, preconceito, e os déficits 12. Escolha da abordagem analítica será largely impulsionado por questão experimental, quer um quer a comparação entre os tipos de aprendizagem, avaliar um único tipo de aprendizagem, ou aplicar uma abordagem de tomada de decisão para os dados. Após lesão cerebral frontal bilateral, nosso laboratório descobriu que ratos sofrem grandes déficits em praticamente todos os tipos de aprendizagem nesta tarefa. Animais frontalmente lesado apresentou um défice na memória para uma discriminação aprendido anteriormente, bem como dificuldade de aprendizagem a reversão de que o emparelhamento perfume (Figura 3). Animais frontais também tinha dificuldade para aprender novas discriminações (Figura 3). De acordo com a pesquisa anterior 13, houve também um grande aumento na variabilidade entre os animais lesionados frontalmente (Figura 3). Em contraste, as lesões parietais unilaterais em nosso laboratório demonstraram que não existem déficits em todas as discriminações nesta tarefa. Unilaterais ratos não apresentaram déficits em mimmory para uma discriminação previamente aprendido e também adquirida a discriminação inversão muito rapidamente (Figura 4). Aprenderam emparelhamentos novos perfume muito rapidamente assim (Figura 4). Além disso, a variabilidade no interior do grupo de forma unilateral-ferido foi muito baixa, com a maioria dos ratos com um desempenho perfeito na tarefa. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/50033/50033fig1.jpg" /> Figura 1. Testes em nosso laboratório foi realizado em um banco de padrão câmaras operante (Med Associates Inc.), que foram adaptadas para uso nesta tarefa, eliminando quatro consecutivos piso barras de abrir espaço para duas xícaras de cheiro. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/50033/50033fig2.jpg" /> Figura 2. Teste no nosso laboratório utilizado PVC extremidade de tubo tampas (6 cm de altura e 5,5 cm de diâmetro), como o aroma cups e um pedaço de acrílico (10 x 22 cm) com dois perfurados orifícios circulares (5,5 cm de diâmetro), como o suporte de copo cheiro. <img alt="Figura 3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50033/50033fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50033/50033fig3.jpg" /> 3 Figura. Este gráfico mostra o desempenho típico de simulação (azul) vs frontalmente lesado (vermelho) ratos através de várias fases diferentes de teste em dois formatos diferentes. No painel A, os dados são representados como um gráfico de barras com pontos brancos que representam pontos de dados para os ratos individuais em cada grupo. No painel B, os mesmos dados são representados graficamente num gráfico linear. Não houve diferença na aquisição discriminação pré-lesão. No entanto, após uma lesão e sobre a mesma discriminação, ratos sham realizar em 93% por cento acumulada correta enquanto ratos lesionados realizar a 65% por cento acumulada correta. Quando uma inversão da discriminação foi administrado, injratos figurada cair para abaixo do desempenho chance. Da mesma forma, em uma discriminação cheiro romance ratos frontalmente lesado teve dificuldade em aprender o emparelhamento novela e ficou abaixo do desempenho chance. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50033/50033fig3large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver maior figura</a> . <img alt="Figura 4" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50033/50033fig4highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50033/50033fig4.jpg" /> Figura 4. Este gráfico mostra o desempenho típico de simulação (azul) versus unilaterais parietalmente-ratos lesionados (verde) em diversas fases de testes em dois formatos diferentes. No painel A, os dados são representados como um gráfico de barras com pontos brancos que representam pontos de dados para os ratos individuais em cada grupo. No painel B, os mesmos dados são representados graficamente num gráfico linear. Não há nenhuma diferença entre os grupos em qualquer um dos discriminações. Unilateralmente emjured realizado em ratos, ou, em alguns casos, ligeiramente mais elevado do que os níveis sham após lesão. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50033/50033fig4large.jpg" target="_blank">para ver figura maior</a> .

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The Dig Task: A Simple Scent Discrimination Reveals Deficits Following Frontal Brain Damage

Neste protocolo, uma nova aplicação de discriminação perfume é descrito. A tarefa Dig é uma tarefa razoavelmente barata que pode ser usado para avaliar a cognição frontalmente mediada após danos cerebrais.

A tarefa Dig: Um Discriminação Scent simples revela déficits da lesão cerebral frontal

Cognitive impairment is the most frequent cause of disability in humans following brain damage, yet the behavioral tasks used to assess cognition in ...

the-dig-task-simple-scent-discrimination-reveals-deficits-following

Research

JoVE Journal

Neuroscience

13.5K visualizações.  Southern Illinois University at Carbondale. Neste protocolo, uma nova aplicação de discriminação perfume é descrito. A tarefa Dig é uma tarefa razoavelmente barata que pode ser usado para avaliar a cognição frontalmente mediada após danos cerebrais.

Vídeo: The Dig Task: A Simple Scent Discrimination Reveals Deficits Following Frontal Brain Damage

The Vermicelli and Capellini Handling Tests: Simple quantitative measures of dexterous forepaw function in rats and mice

Previous characterizations of rodent eating behavior have revealed that they use coordinated forepaw movements to manipulate food pieces. We have extended upon this work to develop a simple quantitative measure of forepaw dexterity that is sensitive to lateralized impairments and age-dependent changes. Rodents learn skillful forepaw and digit movements to manage thin pasta pieces, which they eagerly consume. We have previously described methods for quantifying vermicelli handling in rats and showed that the measures are very sensitive to forelimb impairments resulting from unilateral ischemic lesions, middle cerebral artery occlusions and unilateral striatal dopamine depletion [Allred, R.P., Adkins, D.L., Woodlee, M.T., Husbands, L.C., Maldonado M.A., Kane, J.R., Schallert, T. &amp; Jones, T.A. The Vermicelli Handling Test: a simple quantitative measure of dexterous forepaw function in rats. J. Neurosci. Methods 170, 229-244 (2008)]. Here we present a more detailed protocol for this test in rats and compare it with a newly developed version for mice, the Capellini Handling Test. Rats and mice are videotaped while handling short lengths of uncooked vermicelli or capellini pasta, respectively, with a camera positioned to optimize the view of paw movements. Slow motion video playback allows for the identification of forepaw adjustments, defined as any distinct removal and replacement of the paw, or of any number of digits, on the pasta piece after eating commences. Forepaw adjustments per piece are averaged over trials per each testing session. Repeated testing permits sensitive quantitative analysis of changes in forepaw dexterity over time. Protocols for pre-testing habituation and handling practice, as well as procedures for characterizing atypical handling patterns, are described. Because rats and mice perform the pasta handling tests slightly differently, species-specific differences in administration and scoring of these tests are highlighted. All animal use was in accordance with protocols approved by the University of Texas at Austin Animal Care and Use Committee.

The Vermicelli and Capellini Handling Tests of forepaw dexterity take advantage of the natural inclination of rodents to manipulate food items using skillful forepaw and digit movements. Animals are videotaped while handling short strands of uncooked dry pasta. Slow motion video playback allows for the quantification of forepaw adjustments.

O Vermicelli e Testes Handling Capellini: Simple medidas quantitativas da função forepaw dexterous em ratos e camundongos

Previous characterizations of rodent eating behavior have revealed that they use coordinated forepaw movements to manipulate food pieces. We have extended ...

Neurociência

Chromatin Immunoprecipitation from Dorsal Root Ganglia Tissue following Axonal Injury

Axons in the central nervous system (CNS) do not regenerate while those in the peripheral nervous system (PNS) do regenerate 
to a limited extent after injury (Teng et al., 2006). It is recognized that transcriptional programs essential for neurite and axonal outgrowth are 
reactivated upon injury in the PNS (Makwana et al., 2005). However the tools available to analyze neuronal gene regulation in vivo are limited and 
often challenging.
The dorsal root ganglia (DRG) offer an excellent injury model system because both the CNS and PNS are innervated by a 
bifurcated axon originating from the same soma. The ganglia represent a discrete collection of cell bodies where all transcriptional events occur, 
and thus provide a clearly defined region of transcriptional activity that can be easily and reproducibly removed from the animal. Injury of nerve 
fibers in the PNS (e.g. sciatic nerve), where axonal regeneration does occur, should reveal a set of transcriptional programs that are distinct from 
those responding to a similar injury in the CNS, where regeneration does not take place (e.g. spinal cord). Sites for transcription factor binding, 
histone and DNA modification resulting from injury to either PNS or CNS can be characterized using chromatin immunoprecipitation (ChIP). 
Here, we describe a ChIP protocol using fixed mouse DRG tissue following axonal injury. This powerful combination provides a means for characterizing the pro-regeneration chromatin environment necessary for promoting axonal regeneration.

We present a method for chromatin immunoprecipitation from dorsal root ganglia tissue following axonal injury. The approach can be used to identify specific transcription factor binding sites and epigenetic modification of histone and DNA important for the regeneration of injured axons in both the peripheral and central nervous system.

Cromatina imunoprecipitação de Tissue Dorsal Root Gânglios seguintes Lesão Axonal

Axons in the central nervous system (CNS) do not regenerate while those in the peripheral nervous system (PNS) do regenerate 
to a limited extent after ...

Morris Water Maze Test for Learning and Memory Deficits in Alzheimer&#39;s Disease Model Mice

The Morris Water Maze (MWM) was first established by neuroscientist Richard G. Morris in 1981 in order to test hippocampal-dependent learning, including acquisition of spatial memoryand long-term spatial memory 1. The MWM is a relatively simple procedure typically consisting of six day trials, the main advantage being the differentiation between the spatial (hidden-platform) and non-spatial (visible platform) conditions 2-4. In addition, the MWM testing environment reduces odor trail interference 5. This has led the task to be used extensively in the study of the neurobiology and neuropharmacology of spatial learning and memory. The MWM plays an important role in the validation of rodent models for neurocognitive disorders such as Alzheimer&#x2019;s Disease 6, 7. In this protocol we discussed the typical procedure of MWM for testing learning and memory and data analysis commonly used in Alzheimer&#x2019;s disease transgenic model mice.

Morris Water Maze Test for Learning and Memory Deficits in Alzheimer&#039;s Disease Model Mice

The Morris Water Maze is a behavioral task to test hippocampal-dependent learning and memory. It has been widely used in the study of neurobiology, neuropharmacology and neurocognitive disorders in rodent models.

Morris Teste Maze Água para déficits de aprendizagem e memória em camundongos Alzheimer Disease Modelo

The Morris Water Maze (MWM) was first established by neuroscientist Richard G. Morris in 1981 in order to test hippocampal-dependent learning, including ...

Investigations on Alterations of Hippocampal Circuit Function Following Mild Traumatic Brain Injury

Traumatic Brain Injury (TBI) afflicts more than 1.7 million people in the United States each year and even mild TBI can lead to persistent neurological impairments 1. Two pervasive and disabling symptoms experienced by TBI survivors, memory deficits and a reduction in seizure threshold, are thought to be mediated by TBI-induced hippocampal dysfunction 2,3. In order to demonstrate how altered hippocampal circuit function adversely affects behavior after TBI in mice, we employ lateral fluid percussion injury, a commonly used animal model of TBI that recreates many features of human TBI including neuronal cell loss, gliosis, and ionic perturbation 4-6.
	Here we demonstrate a combinatorial method for investigating TBI-induced hippocampal dysfunction. Our approach incorporates multiple ex vivo physiological techniques together with animal behavior and biochemical analysis, in order to analyze post-TBI changes in the hippocampus. We begin with the experimental injury paradigm along with behavioral analysis to assess cognitive disability following TBI. Next, we feature three distinct ex vivo recording techniques: extracellular field potential recording, visualized whole-cell patch-clamping, and voltage sensitive dye recording. Finally, we demonstrate a method for regionally dissecting subregions of the hippocampus that can be useful for detailed analysis of neurochemical and metabolic alterations post-TBI.
	These methods have been used to examine the alterations in hippocampal circuitry following TBI and to probe the opposing changes in network circuit function that occur in the dentate gyrus and CA1 subregions of the hippocampus (see Figure 1). The ability to analyze the post-TBI changes in each subregion is essential to understanding the underlying mechanisms contributing to TBI-induced behavioral and cognitive deficits. 
	The multi-faceted system outlined here allows investigators to push past characterization of phenomenology induced by a disease state (in this case TBI) and determine the mechanisms responsible for the observed pathology associated with TBI.

A multi-faceted approach to investigating functional changes to hippocampal circuitry is explained. Electrophysiological techniques are described along with the injury protocol, behavioral testing and regional dissection method. The combination of these techniques can be applied in similar fashion for other brain regions and scientific questions.

Investigações sobre alterações da função Circuito Hippocampal Após lesão cerebral traumática leve

Traumatic Brain Injury (TBI) afflicts more than 1.7 million people in the United States each year and even mild TBI can lead to persistent neurological ...

A Simple Alternative to Stereotactic Injection for Brain Specific Knockdown of miRNA

MicroRNAs (miRNAs) are key regulators of gene expression. In the brain, vital processes like neurodevelopment and neuronal functions depend on the correct expression of microRNAs. Perturbation of microRNAs in the brain can be used to model neurodegenerative diseases by modulating neuronal cell death. Currently, stereotactic injection is used to deliver miRNA knockdown agents to specific location in the brain. Here, we discuss strategies to design antagomirs against miRNA with locked nucleotide modifications (LNA). Subsequently describe a method for brain specific delivery of antagomirs, uniformly across different regions of the brain. This method is simple and widely applicable since it overcomes the surgery, associated injury and limitation of local delivery in stereotactic injections. We prepared a complex of neurotropic, cell-penetrating peptide Rabies Virus Glycoprotein (RVG) with antagomir against miRNA-29 and injected through tail vein, to specifically deliver in the brain. The antagomir design incorporated features that allow specific targeting of the miRNA and formation of non-covalent complexes with the peptide. The knock-down of the miRNA in neuronal cells, resulted in apoptotic cell death and associated behavioural defects. Thus, the method can be used for acute models of neuro-degeneration through the perturbation of miRNAs.

MicroRNAs play crucial roles in the brain and are potential targets for modeling neuro-degeneration. However, perturbing miRNA levels is challenging due to the short length of miRNA and inaccessibility of the brain tissue. This video presents a method for antagomir design and brain specific delivery using a neuropeptide in mice.

Uma alternativa simples para injeção estereotáxica para Brain Knockdown específico de miRNA

MicroRNAs (miRNAs) are key regulators of gene expression.  In the brain, vital processes like neurodevelopment and neuronal functions depend on the ...

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We demonstrate a simple way to tap into the fly reward system, modify experiences related to natural reward, and use voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states. The approach serves as a relevant tool to study the neurons and genes that play a role in experience-mediated changes of internal state. The protocol is composed of two discrete parts: exposing the flies to rewarding and nonrewarding experiences, and assaying voluntary ethanol consumption as a measure of the motivation to obtain a drug reward. The two parts can be used independently to induce the modulation of experience as an initial step for further downstream assays or as an independent two-choice feeding assay, respectively. The protocol does not require a complicated setup and can therefore be applied in any laboratory with basic fly culture tools.

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for inducing rewarding and nonrewarding experiences in fruit flies (Drosophila melanogaster) using voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states.

Uma maneira simples para medir alterações na Recompensa comportamento de busca Usando<em&gt; Drosophila melanogaster</em

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We ...

High Resolution Quantitative Synaptic Proteome Profiling of Mouse Brain Regions After Auditory Discrimination Learning

The molecular synaptic mechanisms underlying auditory learning and memory remain largely unknown. Here, the workflow of a proteomic study on auditory discrimination learning in mice is described. In this learning paradigm, mice are trained in a shuttle box Go/NoGo-task to discriminate between rising and falling frequency-modulated tones in order to avoid a mild electric foot-shock. The protocol involves the enrichment of synaptosomes from four brain areas, namely the auditory cortex, frontal cortex, hippocampus, and striatum, at different stages of training. Synaptic protein expression patterns obtained from trained mice are compared to na&#239;ve controls using a proteomic approach. To achieve sufficient analytical depth, samples are fractionated in three different ways prior to mass spectrometry, namely 1D SDS-PAGE/in-gel digestion, in-solution digestion and phospho-peptide enrichment. 
High-resolution proteomic analysis on a mass spectrometer and label-free quantification are used to examine synaptic protein profiles in phospho-peptide-depleted and phospho-peptide-enriched fractions of synaptosomal protein samples. A commercial software package is utilized to reveal proteins and phospho-peptides with significantly regulated relative synaptic abundance levels (trained/na&#239;ve controls). Common and differential regulation modes for the synaptic proteome in the investigated brain regions of mice after training were observed. Subsequently, meta-analyses utilizing several databases are employed to identify underlying cellular functions and biological pathways.

The identification of molecules and pathways controlling synaptic plasticity and memory is still a major challenge in neuroscience. Here, a workflow is described addressing the relative quantification of synaptic proteins supposedly involved in the molecular reorganization of synapses during learning and memory consolidation in an auditory learning paradigm.

Alta resolução quantitativa Synaptic Proteome Profiling de rato regiões cerebrais Depois Auditivo Discriminação Aprendizagem

The molecular synaptic mechanisms underlying auditory learning and memory remain largely unknown. Here, the workflow of a proteomic study on auditory ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful analysis of synaptic transmission modulation when performing field potential or intracellular recordings. This manuscript describes methodological aspects that might be helpful in improving experimental conditions for the maintenance of acute brain slices and for recording field excitatory postsynaptic potentials in a commercially available submersion chamber with an outflow-carbogenation unit. The outflow-carbogenation helps to stabilize the oxygen level in experiments that rely on the recycling of a small buffer reservoir to enhance the cost-efficiency of drug experiments. In addition, the manuscript presents representative experiments that examine the effects of different carbogenation modes and stimulation paradigms on the activity-dependent synaptic plasticity of synaptic transmission.

This protocol describes the stabilization of the oxygen level in a small volume of recycled buffer and methodological aspects of recording activity-dependent synaptic plasticity in submerged acute hippocampal slices.

Gravação de plasticidade sináptica em fatias Hippocampal agudas, mantidas em um pequeno volume reciclagem - perfusão- e sistema de câmara de submersão-tipo

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Measurement &amp; Analysis of the Temporal Discrimination Threshold Applied to Cervical Dystonia

The temporal discrimination threshold (TDT) is the shortest time interval at which an observer can discriminate two sequential stimuli as being asynchronous (typically 30-50 ms). It has been shown to be abnormal (prolonged) in neurological disorders, including cervical dystonia, a phenotype of adult onset idiopathic isolated focal dystonia. The TDT is a quantitative measure of the ability to perceive rapid changes in the environment and is considered indicative of the behavior of the visual neurons in the superior colliculus, a key node in covert attentional orienting. This article sets out methods for measuring the TDT (including two hardware options and two modes of stimuli presentation). We also explore two approaches of data analysis and TDT calculation. The application of the assessment of temporal discrimination to the understanding of the pathogenesis of cervical dystonia and adult onset idiopathic isolated focal dystonia is also discussed.

Methods for the measurement and analysis of the temporal discrimination threshold are presented, and its application to the study of the pathogenesis of cervical dystonia are discussed.

Medição e análise do limiar discriminação Temporal aplicado a distonia Cervical

The temporal discrimination threshold (TDT) is the shortest time interval at which an observer can discriminate two sequential stimuli as being ...

A Simple and Reproducible Method to Prepare Membrane Samples from Freshly Isolated Rat Brain Microvessels

The blood-brain barrier (BBB) is a dynamic barrier tissue that responds to various pathophysiological and pharmacological stimuli. Such changes resulting from these stimuli can greatly modulate drug delivery to the brain and, by extension, cause considerable challenges in the treatment of central nervous system (CNS) diseases. Many BBB changes that affect pharmacotherapy, involve proteins that are localized and expressed at the level of endothelial cells. Indeed, such knowledge on BBB physiology in health and disease has sparked considerable interest in the study of these membrane proteins. From a basic science research standpoint, this implies a requirement for a simple but robust and reproducible method for isolation of microvessels from brain tissue harvested from experimental animals. In order to prepare membrane samples from freshly isolated microvessels, it is essential that sample preparations be enriched in endothelial cells but limited in the presence of other cell types of the neurovascular unit (i.e., astrocytes, microglia, neurons, pericytes). An added benefit is the ability to prepare samples from individual animals in order to capture the true variability of protein expression in an experimental population. In this manuscript, details regarding a method that is utilized for isolation of rat brain microvessels and preparation of membrane samples are provided. Microvessel enrichment, from samples derived, is achieved by using four centrifugation steps where dextran is included in the sample buffer. This protocol can easily be adapted by other laboratories for their own specific applications. Samples generated from this protocol have been shown to yield robust experimental data from protein analysis experiments that can greatly aid the understanding of BBB responses to physiological, pathophysiological, and pharmacological stimuli.

Here, a method for isolation of rat brain microvessels and for the preparation of membrane samples is described. This protocol has the clear advantage of producing enriched microvessel samples with acceptable protein yield from individual animals. Samples can then be used for robust protein analyses at the brain microvascular endothelium.

Um método simples e reprodutível para preparar amostras de membrana de Microvessels de cérebro de rato recém isoladas

The blood-brain barrier (BBB) is a dynamic barrier tissue that responds to various pathophysiological and pharmacological stimuli. Such changes resulting ...