Este trabalho foi apoiado pelo Instituto Nacional de Bolsas de Saúde R01HL089462 para SP.

1. Os lipossomas catiônicos Preparação <ol><li> Autoclave um balão de fundo redondo limpo para ser usado para a preparação lipososmes. </li><li> Preparar soluções estoque: <ol class="lalpha"><li> - Dissolve-se 200 mg de dimetil dioctadecil brometo de amónio (Doab) em 10 ml de clorofórmio, usando um pequeno frasco de vidro. </li><li> - Dissolve-se 200 mg de colesterol em 10 ml de clorofórmio através de um pequeno frasco de vidro. </li><li> - Preparar e autoclave para esterilizar a 5% de glucose em 100 ml de DNA / RNA-ase livre de água destilada. </li></ol></li><li> Lavar o balão de fundo redondo com clorofórmio. Adicionar 5-10 ml para o frasco, redemoinho, e deixe descansar por alguns minutos. Manter o frasco coberto com folha de alumínio em todas as vezes. Esvaziar o clorofórmio, a partir do balão. </li><li> Preparação de lipossomas: <ol class="lalpha"><li> - Adicionar 315 ml de solução estoque Doab ao balão de fundo redondo. </li><li> - Adicionar 200 ul de solução de estoque de colesterol para o balão. </li><li> - Adicionar 9,5 ml de clorofórmio a um frascoª misture redemoinho. </li></ol></li><li> Definir o evaporador rotativo a 37 ° C, 100 rotações por minuto (rpm) ou superior (100-120 rpm). O evaporador rotativo deve estar conectado a um controlo no vácuo da bomba de água com um tubo de sucção conectado correctamente. </li><li> Conecte o tanque de gás argônio e do evaporador rotativo. </li><li> Fixe o balão ao evaporador rotativo e ajustar as configurações ideais antes de baixá-lo em banho-maria. Abra a primeira válvula para o argônio completamente, transformando-horário. Sempre abrir e fechar esta válvula em primeiro lugar. A segunda válvula controla a pressão de árgon de sopro para o balão. A pressão deve ser sempre suave. </li><li> Baixar o rotavapor em banho de água, suficiente para que o balão ao tocar na água sem ser completamente submerso e girar sobre a velocidade. </li><li> Espere até que todos os clorofórmio evapora, cerca de 10 min. Em seguida, parar a máquina. </li><li> Desligue a velocidade rotavapor e as válvulas do tanque de argônio. Agora, o frasco deve ser removido. </li><li> Adicionar 2 ml de glicose a 5% para pofrasco e para dissolver os lípidos. </li><li> Raspe o fundo do balão, cuidadosamente, com ponta de pipeta de 1 ml para dissolver todos os lípidos. Depois de riscar, remover qualquer lípido remanescente a partir de 1 ml de ponta para o balão, se necessário, com uma segunda ponta. </li><li> Incubar a solução obtida em banho-maria a 42 ° C enquanto lentamente vórtice (15 rpm) ao balão. </li><li> Encha a cuba de ultra-sons com água fria. Sonicate a solução para pelo menos 20-30 min com o frasco levantou e inferior apenas mal contato com a água. </li><li> Aquecer o balão num banho de água do evaporador rotativo durante 20 minutos a 42 ° C, à velocidade zero, com o fundo redondo, imersa em água, este tempo. </li><li> Filtrar os lipossomas através de uma 0,47 micron e, subsequentemente, filtros de seringa de 0,22 micron. </li><li> Usando um pequeno extrusor, filtrar os lipossomas através de uma membrana de 50 nm para gerar uma população homogénea de vesículas lipossómicas unilamelares. </li><li> Transfira os lipossomas para um tubo Eppendorf e colocá-lo em gelo. </li></ol><html> 2. Preparar os lipossomas: siRNA ITSN-1 Complexos <ol><li> Ressuspender o rato no alvo ITSN siRNA siRNA em tampão contendo HEPES 20 mM e cloreto de sódio 150 mM, pH 7,4, para uma concentração final de 2 mg / mL. Mantê-lo no gelo antes de misturar. </li><li> Preparar os complexos de lipossomas: ITSN siRNA na proporção de 8 nmol de lipossomas: 2 ug de RNA (ou 400 nmol de lipossomas: 100 ug ITSN siRNA). No presente estudo, foram adicionados 50 ul de ITSN siRNA a partir da solução de estoque (50 mM) a 100 ul de lipossomas preparados de fresco utilizando um DNA / RNA-ase livre do tubo de Eppendorf. Note-se que a concentração de ITSN siRNA é muito importante, porque um máximo de 150 ul de mistura pode ser bilateralmente e retro-orbital injectado no rato de uma só vez. </li><li> Manter a mistura em gelo, enquanto espera para injectar os ratinhos. </li></ol> 3. Rato retro-orbital Injection Veia (ângulo interno do soquete do olho) jove_content &quot;&gt; foram aprovados e realizados todos os experimentos com camundongos, de acordo com as diretrizes da Rush University Animal Care Institucional e Comitê de uso. <ol><li> Anestesiar o rato através de injecção intra-peritoneal de um mg / kg de peso 50 corporal de cetamina e 5 mg / kg de peso corporal de xilazina (mistura comercialmente disponível). Dependendo da idade e do peso do animal, ajustar o volume e concentração de anestésicos. Os ratinhos utilizados no estudo os ratinhos são ratinhos CD1 machos, de 6-8 semanas de idade e pesam cerca de 25 gramas. As seringas são um tipo tuberculina ml com agulha acoplada. </li><li> Segurar orelhas de rato com uma mão e transformar o mouse de um lado para expor o ângulo interno do olho. Aponte medial à prega semilunar, evite tocar no globo ocular. </li><li> Approach as caruncle lacrimal do olho, segurando a seringa contendo a mistura em um ângulo de 45 graus em todos os três eixos. </li><li> Injecte lentamente a mistura e deixe o mouse para se recuperar com o lado injetado up. Se um grande líquidaformas de gotas no local de inserção da agulha, retirar a agulha de sucção, de volta a gota dentro da seringa e tente novamente. Injeções repetidas são o melhor feito pela alternância dos olhos, para permitir a recuperação perfeita. Em caso de dúvida, esta técnica pode ser verificada por injecção de tinta azul (50 ul, 0,5% de violeta de cristal em metanol) e expondo os pulmões do rato para observar a vasculatura azul. </li><li> Os ratos no estudo foram injetados cada 3 º dia por 3 semanas sem mortes ou efeitos adversos. </li></ol> 4. Rato de perfusão pulmonar e coleta de tecido para estudos bioquímicos <ol start="0"><li> Conjunto de bomba peristáltica para executar a 1,5 ml / min. </li><li> Prepare o ambiente: ventilador, mesa de operações, instrumentos, cotonetes estéreis, Q-dicas, cordas, copos, água destilada salina balanceada de Hank, tracer. </li><li> Anestesiar o rato através de injecção intraperitoneal do anestésico mistura (100 mg / kg de peso corporal de cetamina e 10 mg / kg de peso corporal de xilazina). </li&gt; <li> Ao nível do pescoço, remova as glândulas salivares e expor a traquéia. </li><li> Comece com laparotomia, consumo do diafragma, e seguir com a toracotomia, expondo os pulmões eo coração. </li><li> Remover o timo. </li><li> Usando a microscopia de luz para uma melhor precisão, cateterização da artéria pulmonar. </li><li> Fazer traqueostomia e entubar o mouse usando o traqueostoma. Defina o ventilador a uma taxa de 150 golpes / min e volume de golpe de 150 mL. </li><li> Como saída, abra o átrio esquerdo. </li><li> Perfundir vasculatura do pulmão do rato livre de sangue durante 5 minutos, utilizando a bomba peristáltica e solução de Hank aquecida a 37 ° C. </li><li> Perfundir traçador (8 nm de ouro albumina-16) para 10 min adicionais à mesma taxa de fluxo. </li><li> Lave o traçador não ligado por 5 min de perfusão pulmonar com solução de Hank. </li><li> Siga com a fixação in situ dos pulmões por 10 min de perfusão de 4% (peso / vol) de formaldeído, glutaraldeído a 2,5%, e 1% de ácido tânico 0,1 TUBOStampão a pH 7,2. </li><li> Recolher os pulmões, remover o excesso de tecido, cortar blocos pequenos (3/3 mm), e colocá-los num frasco de cintilação contendo 2 ml rotulados de mistura fixador. </li></ol> Os ratos expirará totalmente anestesiado durante o procedimento. 5. Rato Lung processamento de tecidos para a EM <ol><li> Preparar soluções stock: 1% Palade OsO4, acetato de veronal, e tampão Kellenberger. <ol class="lalpha"><li> - De 1% de OsO-Palade tampão 4 contém: 1 ml de caldo de veronal de etilo, 1,25 ml de 4% de OsO 4, 1 ml de ácido clorídrico 0,1 N, e água destilada até 5 ml de volume final. </li><li> - Solução de acetato de veronal é obtido por dissolução de 1,15 g andydrous acetato de sódio e 2,94 g de derivado do ácido barbitúrico em 100 ml de água destilada. </li><li> Solução-Kellenberger contém 2 ml de acetato de estoque Veronal, 2,8 ml de 0,1 N de ácido clorídrico, 0,05 g de acetato de uranilo, e 5,1 mlde água destilada, pH = 6. </li></ol></li><li> Lave os blocos de pulmão em 0,1 M de cacodilato de sódio, pH = 7,4, resumidamente três vezes. </li><li> Fixar as amostras em 4% (p / v) de formaldeído, 2,5% de glutaraldeído em tampão de 0,1 PIPES, pH 7,2, durante 1 hora, à temperatura ambiente. </li><li> Pós-fix com 1% Palade-ósmio para 1 hora no capô, no gelo, no escuro. </li><li> Lavar uma vez com tampão Kellenberger. </li><li> Incubar as amostras em tampão de Kellenberger durante 2 horas durante a noite, à temperatura ambiente. </li><li> Lavar uma vez em etanol a 50%. </li><li> Desidratam com série gradual de etanol, 5 min / cada um: 70%, 95%, depois 2 x 15 min 100% de etanol. </li><li> Alternar a 100% de óxido de propileno, 2 x 15 min. </li><li> Remover o óxido de propileno e adicionar uma mistura de 50% de óxido de propileno e 50% de Epon 812, incubar durante a noite, em uma roda rotativa, à temperatura ambiente. </li><li> Na manhã seguinte, retire a mistura e adicione Epon fresco 812, pelo menos por 4-5 horas no volante. </li><li> Usando moldes cônicos dobrou, cheiasno meio do caminho com frescos 100% Epon 812, adicionar espécimes selecionados e colocá-los para as bordas. </li><li> Mover os moldes para a incubadora a 60 ° C e deixá-los curar durante 48-72 hr. </li><li> Quando polimerizado, enviar os blocos para ser magra (60-70 nm de espessura) seccionado. </li></ol>

<ol>
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Chem. 282 (282), 17166-17178 (2007).</li><li>Uddin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cationic+lipids+used+in+non-viral+gene+delivery+systems.">Cationic lipids used in non-viral gene delivery systems.</a> Biotechnology and Molecular Biology Review. 2 (2), 58-67 (2007).</li><li>Barenholz, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+lipid+composition+on+the+thermotropic+behavior+and+size+distribution+of+mixed+cationic+liposomes.">Influence of lipid composition on the thermotropic behavior and size distribution of mixed cationic liposomes.</a> J. Colloid Interface Sci. (356), 46-53 (2011).</li><li>Predescu, D. N., Neamu, R., Bardita, C., Wang, M., Predescu, S. 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(432), 173-178 (2004).</li><li>Barenholz, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposomes+enhance+bioremediation+of+oil-contaminated+soil.">Liposomes enhance bioremediation of oil-contaminated soil.</a> J. Liposome Res. (13), 1-8 (2003).</li><li>Zamboni, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposomal,+nanoparticle,+and+conjugated+formulations+of+anticancer+agents.">Liposomal, nanoparticle, and conjugated formulations of anticancer agents.</a> Clin. Cancer Res. (11), 8230-8234 (2005).</li><li>Newman, M. S., Colbern, G. T., Working, P. K., Engbers, C., Amantea, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+pharmacokinetics,+tissue+distribution,+and+therapeutic+effectiveness+of+cisplatin+encapsulated+in+long-circulating,+pegylated+liposomes+(SPI-077)+in+tumor-bearing+mice.">Comparative pharmacokinetics, tissue distribution, and therapeutic effectiveness of cisplatin encapsulated in long-circulating, pegylated liposomes (SPI-077) in tumor-bearing mice.</a> Cancer Chemother Pharmacol. (43), 1-7 (1999).</li><li>Martino, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+siRNA+delivery+by+the+cationic+liposome+DOTAP+in+human+hematopoietic+stem+cells+differentiating+into+dendritic+cells.">Efficient siRNA delivery by the cationic liposome DOTAP in human hematopoietic stem cells differentiating into dendritic cells.</a> J. Biomed. Biotechnol. (2009), 410260 (2009).</li><li>Zhang, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+delivery+system+targeting+bone+formation+surfaces+to+facilitate+RNAi-based+anabolic+therapy.">A delivery system targeting bone formation surfaces to facilitate RNAi-based anabolic therapy.</a> Nat. Med. 18 (18), 307-314 (2012).</li><li>Predescu, D., Palade, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasmalemmal+vesicles+represent+the+large+pore+system+of+continuous+microvascular+endothelium.">Plasmalemmal vesicles represent the large pore system of continuous microvascular endothelium.</a> Am. J. Physiol. (265), H725-H733 (1993).</li><li>Koh, T. W., Verstreken, P., Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dap160/intersectin+acts+as+a+stabilizing+scaffold+required+for+synaptic+development+and+vesicle+endocytosis.">Dap160/intersectin acts as a stabilizing scaffold required for synaptic development and vesicle endocytosis.</a> Neuron. (43), 193-205 (2004).</li><li>Miyawaki-Shimizu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Lung Cell Mol. Physiol. (290), L405-L413 (2006).</li></ol>

Os autores não têm nada a revelar.

Com base em estudos anteriores publicadas por outros 9 e nos 1, 18 que desenvolvemos esta metodologia para o longo prazo derrubar de ITSN-1s in vivo pela administração intravenosa repetida (cada 72 horas, durante 24 dias consecutivos) de siRNA específico / complexos de lipossomas. Esta abordagem experimental é eficiente, pode ser utilizado de forma segura e repetida e pode ser facilmente estendido para estudar o envolvimento de um gene que codifica toda a proteína de interesse no endo...

SiRNA Nu não pode penetrar na membrana da célula, a ser carregada negativamente, e que é facilmente degradado por enzimas no sangue, tecidos e células. Até recentemente, com modificações estruturais para melhorar a estabilidade, a acumulação de siRNA no local alvo depois da administração é extremamente baixo e requer um veículo intracelular eficiente 5. Lipossomas catiónicos emergiu como seguros transportadoras ácidos nucleicos com o potencial de transferência de grandes pedaços de DNA / RNA em células, encapsulando e protegendo os ácidos nucleicos a partir da degradação enzimática 6. Além disso, lipossomas catiónicos interagem espontaneamente com o ADN / ARN, promovendo assim a transferência de genes para as células 2. Mais recentemente, os lipossomas têm sido aplicadas para proporcionar vacinas e os medicamentos de baixo peso molecular 7. Entrega lipossomal de microRNA-7-expressando plasmídeo supera receptor do factor de crescimento epidérmico tirosina-quinase inibidor de resistência em células de cancro do pulmão 8. Quando visando oendotélio vascular, a administração intravenosa é essencial porque os complexos que não são susceptíveis de atravessar a barreira endotelial e extravasamento para o interstício 9. Em comparação com outros órgãos, ECs da microvasculatura do pulmão têm a maior absorção e avidamente internalizar lipossoma catiónico e complexos de ADN / ARN, seguido dos gânglios linfáticos e placas de Peyer 9. Entrega intravenosa em modelos de roedores de siRNA através de injecções veia retro-orbital ou cauda foi provado inofensivos mesmo em concentrações elevadas, tais como 50 mg / kg 10. Na literatura publicada a composição de lipossomas catiónicos é diferente, com base na formulação de lípidos e a sua razão molar 11, 12. Existe uma grande variedade de aplicações potenciais utilizando lipossomas catiónicos para a distribuição de genes in vivo, quer visando down-regulation/over-expression das proteínas, a entrega de vacinas ou de terapias anti-tumorais 13-15. Importante lembraré que a eficiência da interacção de membrana de DNA / RNA celular é regulada pela forma de acoplamento entre os complexos gerados e lípidos de membrana. Isto sugere que a adaptação da composição para os perfis de lípidos da membrana celular alvo pode ser benéfico e resultam em elevadas taxas de transfecção num determinado tipo de célula 6.

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name of Reagent/Material</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalog Number</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Dimethyl Dioctadecyl Ammonium Bromide (DOAB)</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>D2779</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>LiposoFast stabilizer (mini-extruder)</td>
 <td>Avestin Inc.</td>
 <td>LF-STB</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Polycarbonate membrane, 19 mm diameter, 50 nm pore</td>
 <td>Avestin Inc.</td>
 <td>LFM-50</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Cholesterol</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>C-8667</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Chloroform</td>
 <td>Mallinckrodt Chemicals</td>
 <td>4432-04</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Hank's balanced salts</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>H1387</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Round-bottom flask</td>
 <td>Fisher Scientific</td>
 <td>FHB-275-030X</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Mouse siRNAITSN - on target </td>
 <td>Dharmacon/ThermoScientific</td>
 <td>J-046912-11</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Peristaltic pump</td>
 <td>Ismatec</td>
 <td>REGLO-CDF digital with RHOO pump head</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ventilator</td>
 <td>Hugo Sachs Electronik</td>
 <td>NA</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Barbital</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>B-0500</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Uranyl acetate</td>
 <td>EM Sciences</td>
 <td>22400</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Epon812</td>
 <td>EM Sciences</td>
 <td>Discontinued by the manufacturer</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Propylene oxide</td>
 <td>EM Sciences</td>
 <td>20400</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Embedding molds</td>
 <td>EM Sciences</td>
 <td>69923-05</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Tannic acid</td>
 <td>EM Sciences</td>
 <td>21710</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>8 nm gold-albumin tracer</td>
 <td></td>
 <td>Prepared in the laboratory as in16</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Equipped with 2 Avestin 1 ml gas-tight syringes (cat. # LF-1)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Pyrex, 100 ml</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Modified siRNA, in vivo</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Part of IDEX corp.</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>D-79232 March, Germany</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Replaced with Embed812, cat. # 14120</td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

long-term silencing of intersectin-1s in mouse lungs by repeated delivery of a specific sirna via cationic liposomes. evaluation of knockdown effects by electron microscopy

Estudos anteriores mostraram que o knockdown de ITSN-1s (KD ITSN), uma proteína envolvida na regulação de endocitose permeabilidade vascular pulmonar e células endoteliais (ECs) a sobrevivência, a morte celular induzida por apoptose, um obstáculo importante no desenvolvimento de um sistema de cultura celular, com períodos prolongados ITSN-1s inibição 1. Usando lipossomas catiônicos como carreadores, exploramos o silenciamento do gene ITSN-1s nos pulmões do rato pela administração sistêmica de siRNA visando ITSN-1 gene (ITSN siRNA). Lipossomas catiônicos oferecem várias vantagens para entrega siRNA: cofre com doses repetidas, não imunogénico, não tóxico, e fácil de produzir 2. Lipossomas desempenho e actividade biológica depende do seu tamanho, carga, a composição lipídica, a estabilidade, a dose e via de administração de 3 Aqui, eficiente e ITSN KD específica em pulmões do rato foi obtida utilizando uma combinação de colesterol dioctadecil brometo de amónio e dimetil. Entrega intravenosade ITSN siRNA / complexos de lipossomas catiônicos transitoriamente derrubado proteína ITSN-1s e mRNA em pulmões de ratos no dia 3, que se recuperou depois de mais 3 dias. Aproveitando os lipossomas catiónicos como um transportador segura repetível, o estudo alargado para 24 dias. Assim, o tratamento retro-orbital com complexos recém-gerados foi administrado a cada 3 dias, induzindo ITSN KD sustentado ao longo do estudo 4. Tecidos de camundongos coletadas em vários pontos tempo ITSN pós-siRNA foram submetidos a análises de microscopia eletrônica (ME) para avaliar os efeitos da crônica KD ITSN, no endotélio pulmonar. High-resolution EM imagens nos permitiu avaliar as alterações morfológicas causadas por KDITSN no leito vascular pulmonar (ou seja, o rompimento da barreira endotelial, diminuição do número de caveolae e regulação positiva de vias de transporte alternativos), características não-detectável por microscopia de luz. Em geral estes resultados estabeleceu um importantetante papel de ITSN-1s na função de ECs e homeostase do pulmão, enquanto que ilustra a eficácia da prestação de siRNA lipossomas in vivo.

Os níveis de proteína ITSN-1s e ARNm foram monitorizadas a vários pontos de tempo após a entrega siRNA ITSN por Western blot e por PCR convencional e quantitativas como no 4. Os níveis de proteína ITSN-1s e ARNm em siRNA ITSN pulmões de ratinho foram tratadas com cerca de 75% menor, por referência aos controlos durante o knockdown contínua de ITSN-1s durante 21 dias. Sem ITSN-1s, dinamina-2, um parceiro importante interagindo de jogador ITSN-1s e essencial no descolamento da cav...

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Long-term Silencing of Intersectin-1s in Mouse Lungs by Repeated Delivery of a Specific siRNA via Cationic Liposomes. Evaluation of Knockdown Effects by Electron Microscopy

Repetidas injeções de retro-orbital dos complexos liposomes/siRNA/ITSN-1s catiônicos em camundongos, a cada 72 horas por 24 dias, entregar eficientemente o duplex siRNA para a microcirculação do pulmão do rato reduzindo mRNA ITSN-1s e expressão da proteína em 75%. Esta técnica é altamente reprodutível num modelo animal, não tem efeitos adversos e evita mortes.

Silenciando a longo prazo de Intersectin-1s nos pulmões do rato por entrega repetida de um siRNA específico via lipossomos catiônicos. Avaliação dos efeitos Knockdown por microscopia eletrônica

Previous  studies showed that knockdown of ITSN-1s (KDITSN), an endocytic  protein involved in regulating lung vascular permeability and endothelial cells ...

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10.6K visualizações.  Rush University. Repetidas injeções de retro-orbital dos complexos liposomes/siRNA/ITSN-1s catiônicos em camundongos, a cada 72 horas por 24 dias, entregar eficientemente o duplex siRNA para a microcirculação do pulmão do rato reduzindo mRNA ITSN-1s e expressão da proteína em 75%. Esta técnica é altamente reprodutível num modelo animal, não tem efeitos adversos e evita mortes.

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