وأيد هذا العمل من قبل المعهد الوطني للصحة منح R01HL089462 ليرة سورية.

1. الليبوزومات الموجبة التحضير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الأوتوكلاف قارورة جولة القاع نظيفة لاستخدامها في إعداد lipososmes. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد حلول الأوراق المالية: <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> - ذوب 200 ملغ من ثنائي ميثيل بروميد الأمونيوم dioctadecyl (DOAB) في 10 مل كلوروفورم باستخدام زجاجة صغيرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> - ذوب 200 ملغ من الكولسترول في 10 مل كلوروفورم باستخدام زجاجة صغيرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> - إعداد والأوتوكلاف لتعقيم 5٪ جلوكوز في 100 مل من الحمض النووي الريبي / الحمض النووي بورصة عمان الماء المقطر مجانا. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف قارورة جولة القاع مع الكلوروفورم. أضف 5-10 مل إلى قارورة، دوامة، والسماح لها الجلوس لبضع دقائق. الحفاظ على قارورة مغطاة بورق الألمنيوم في جميع الأوقات. إفراغ الكلوروفورم من القارورة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الليبوزومات: <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> - إضافة 315 ميكرولتر من محلول المخزون DOAB إلى قارورة جولة القاع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> - إضافة 200 ميكرولتر من محلول المخزون الكولسترول إلى القارورة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> - إضافة 9.5 مل من الكلوروفورم إلى قارورة منالثانية خلط من قبل دوامة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعيين rotavapor عند 37 ° C، 100 التناوب في الدقيقة الواحدة (دورة في الدقيقة) أو أكثر (100-120 دورة في الدقيقة). يجب أن تكون متصلا rotavapor إلى عنصر تحكم فراغ مضخة المياه مع أنبوب الشفط تعلق بشكل صحيح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ربط خزان غاز الارجون وrotavapor. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نعلق القارورة إلى rotavapor وضبط الإعدادات المثلى قبل خفضه في حمام مائي. فتح صمام الأولى لالأرجون تماما بتحويلها عكس اتجاه عقارب الساعة. فتح دائما وإغلاق هذا الصمام الأول. صمام الثانية تسيطر على الأرجون تهب في لقارورة الضغط. يجب أن يكون الضغط دائما لطيف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خفض rotavapor في حمام الماء، وهو ما يكفي لقارورة للمس الماء دون أن مغمورة تماما وبدوره على السرعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انتظر حتى يتبخر كل كلوروفورم، حوالي 10 دقيقة. ثم وقف آلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إيقاف سرعة rotavapor وصمامات خزان الأرجون. الآن يجب إزالة القارورة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 2 مل من 5٪ غلوكوز إلى اله قارورة بحل الدهون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خدش الجزء السفلي من القارورة جيدا باستخدام 1 مل طرف ماصة بحل جميع الدهون. بعد الخدش، وإزالة أي الدهون المتبقية من طرف 1 مل في القارورة، إذا لزم الأمر، مع طرف الثاني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان الحل التي تم الحصول عليها في 42 ° C حمام الماء بينما vortexing لببطء (15 دورة في الدقيقة) القارورة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملء ضريبة القيمة المضافة sonicator بالماء البارد. يصوتن الحل لمدة 20-30 دقيقة على الأقل مع القارورة التي عقدت حتى والجزء السفلي مجرد لمس بالكاد الماء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسخين القارورة في حمام مائي وrotavapor لمدة 20 دقيقة عند 42 درجة مئوية، عند مستوى الصفر السرعة، مع الجزء السفلي جولة مغمورة في الماء، وهذه المرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد الجسيمات الشحمية من خلال ميكرون 0.47 وبعد ذلك، 0.22 ميكرون مرشحات حقنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام الطارد صغيرة، تصفية الجسيمات الشحمية من خلال غشاء نانومتر 50 لتوليد السكان متجانسة من الحويصلات الحويصلية unilamellar. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الجسيمات الشحمية إلى أنبوب إيبندورف ووضعه على الجليد. </li></ol><html> 2. إعداد الليبوزومات: سيرنا-ITSN-1 مولات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend وعلى المستهدفة الماوس ITSN سيرنا في المخزن سيرنا تحتوي على 20 ملي HEPES و150MM كلوريد الصوديوم، ودرجة الحموضة 7.4، إلى تركيز النهائي من 2 ميكروغرام / ميكرولتر. يبقيه على الجليد قبل الاختلاط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الليبوزومات: المجمعات ITSN سيرنا في نسبة الجسيمات الشحمية 8 نانومول: 2 RNA ميكروغرام (أو الجسيمات الشحمية 400 نانومول: 100 ميكروغرام ITSN سيرنا). في الدراسة الحالية، واضاف نحن 50 ميكرولتر من ITSN سيرنا من محلول المخزون (50 ميكرومتر) إلى 100 ​​ميكرولتر من الجسيمات الشحمية الطازجة باستخدام الحمض النووي الريبي / الحمض النووي بورصة عمان الحرة إيبندورف أنبوب. لاحظ أن تركيز ITSN سيرنا مهم جدا لمدة أقصاها 150 ميكرولتر من خليط يمكن أن يكون ثنائيا والرجعية المدارية حقن في الماوس في وقت واحد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على الخليط على الجليد في انتظار لحقن الفئران. </li></ol> 3. الماوس الرجعية المدارية حقن الوريد (زاوية الداخلية للمحجر العين) jove_content &quot;&gt; وقد وافق جميع التجارب التي أجريت في الماوس وفقا للمبادئ التوجيهية من جامعة راش المؤسسي رعاية الحيوان واللجنة الاستخدام. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الماوس عن طريق الحقن داخل الصفاق من 50 ملغم / كغم من وزن الجسم الكيتامين و 5 ملغم / كغم من وزن الجسم زيلازين (خليط متوفر تجاريا). اعتمادا على وزن الحيوان والسن، وضبط حجم التخدير والتركيز. الفئران المستخدمة في الدراسة هي CD1 الفئران الفئران الذكور، 6-8 أسابيع من العمر وتزن حوالي 25 غراما. المحاقن هي السلين 1 نوع مل مع إبرة المرفقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عقد آذان الفأر مع يد واحدة وتحويل الماوس لأسفل على الجانب لفضح زاوية الداخلية للعين. تهدف الإنسي إلى الثنية الهلالية، وتجنب لمس مقلة العين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقترب من لحيمة الدمعية للعين عقد حقنة تحتوي على خليط في درجة زاوية 45 في جميع المحاور الثلاثة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن ببطء الخليط، والسماح للماوس على التعافي مع الجانب حقن ما يصل. إذا كان السائل كبيرةأشكال الحبرية في المكان الإدراج إبرة، سحب الإبرة، وشفط الظهر الحبرية في حقنة وحاول مرة أخرى. تكرار الحقن والأفضل القيام بالتناوب عيون، للسماح الانتعاش الكمال. إذا لم تكن متأكدا، هذه التقنية يمكن التحقق عن طريق حقن صبغة زرقاء (50 ميكرولتر، 0.5٪ البنفسجي الكريستال في الميثانول) وتعريض الرئتين الماوس لمراقبة الأوعية الدموية الأزرق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تم حقن الفئران في هذه الدراسة كل يوم 3 طريق لمدة 3 أسابيع دون وفيات أو آثار ضارة. </li></ol> 4. الماوس الإرواء الرئة ومجموعة الأنسجة للدراسات بيوكيميائية <ol start="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعيين مضخة تحوي لتشغيلها في 1.5 مل / دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الإعداد: التنفس الصناعي، جدول التشغيل، والأدوات، ومسحات القطن المعقم، Q-نصائح، سلاسل، الأكواب، الماء المقطر، والملح متوازن هانك، التتبع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الماوس عن طريق الحقن داخل الصفاق من خليط مخدر (100 ملغ / كغ من وزن الجسم الكيتامين و 10 ملغم / كغم من وزن الجسم زيلازين). </lI&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> على مستوى العنق، وإزالة الغدد اللعابية وفضح القصبة الهوائية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تبدأ مع فتح البطن والمكوس الحجاب الحاجز، واتبع مع بضع الصدر، وتعريض الرئتين والقلب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الغدة الصعترية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام المجهر الضوئي للحصول على أفضل دقة، يقثطر الشريان الرئوي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هل القصبة الهوائية وينبب الماوس باستخدام tracheostoma. تعيين جهاز التنفس الصناعي إلى معدل 150 السكتات الدماغية / دقيقة، وحجم المخ من 150 ميكرولتر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كما منفذ، فتح الأذين الأيسر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يروي الماوس الأوعية الدموية الرئوية خالية من الدم لمدة 5 دقائق، وذلك باستخدام مضخة تحوي والحل هانك في درجة حرارة عند 37 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يروي التتبع (8 نانومتر الذهب الزلال 16) لمدة 10 دقيقة إضافية في معدل تدفق نفسه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مسح التتبع غير منضم من قبل 5 دقائق نضح الرئة مع حل هانك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اتبع مع ​​تثبيت الموقع من الرئتين من قبل 10 دقيقة نضح من 4٪ (وزن / المجلد) الفورمالديهايد، 2.5٪ غلوتارالدهيد، وحمض التانيك 1٪ في 0.1 أنابيبالعازلة، ودرجة الحموضة 7.2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع الرئتين، وإزالة الأنسجة المفرطة، وقطع كتل صغيرة (3/3 مم)، ووضعها في قارورة التلألؤ إلى المسمى تحتوي على 2 مل من خليط تثبيتي. </li></ol> سوف تنتهي الفئران تخدير كامل أثناء العملية. 5. الماوس الرئة معالجة الأنسجة لEM <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد حلول المخزون: 1٪ Palade أوسو 4، خلات veronal، وكيلينبرغر العازلة. <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> - 1٪ Palade-أوسو 4 العازلة تحتوي على: 1 مل خلات الأسهم veronal، 1.25 مل 4٪ أوسو 4، 1 مل من حمض الهيدروكلوريك 0.1 N، والماء المقطر تصل إلى 5 مل من الحجم النهائي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> - يتم الحصول على خلات veronal حل الأسهم عن طريق إذابة 1.15 غرام الصوديوم خلات andydrous و2.94 ز الباربيتال في 100 مل من الماء المقطر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حل كيلينبرغر يحتوي على 2 مل من خلات veronal الأسهم، و 2.8 مل من حمض الهيدروكلوريك 0.1 N، 0.05 غ خلات اليورانيل، و 5.1 ملمن الماء المقطر، ودرجة الحموضة = 6. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل كتل الرئة في 0.1 M الصوديوم كاكوديلات العازلة، ودرجة الحموضة = 7.4، لفترة وجيزة 3 مرات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إصلاح العينات في 4٪ (وزن / المجلد) والفورمالديهايد، غلوتارالدهيد 2.5٪ في 0.1 أنابيب العازلة، ودرجة الحموضة 7.2، لمدة 1 ساعة، في درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد إصلاح مع 1٪ Palade-الأزميوم لمدة 1 ساعة في غطاء محرك السيارة، على الجليد، في الظلام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف مرة واحدة مع كلينبرغر العازلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان العينات في كيلينبرغر العازلة لمدة 2 ساعة ليلة وضحاها، في درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف مرة واحدة في 50٪ من الإيثانول. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يذوى مع سلسلة متدرجة من الايثانول، 5 دقيقة / كل: 70٪، 95٪، ثم 2 × 15 دقيقة الإيثانول بنسبة 100٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التبديل إلى 100٪ أكسيد البروبيلين، 2 × 15 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة أكسيد البروبيلين وإضافة خليط من 50٪ أكسيد البروبيلين و 50٪ EPON 812، واحتضان بين عشية وضحاها، وتناوب على عجلة، في درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> صباح اليوم التالي، وإزالة الخليط وإضافة EPON الطازجة 812، على الأقل لمدة 4-5 ساعة على عجلة القيادة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام قوالب مدبب الضعف، وشغلنصف الطريق مع الطازجة 100٪ EPON 812، إضافة العينات المختارة ووضعها على حواف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل القوالب إلى مجموعة حاضنة عند 60 درجة مئوية والسماح لهم علاج لمدة 48-72 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عندما بلمرة، وإرسال كتل لتكون رقيقة (60-70 نانومتر سميكة) مقطوع. </li></ol>

<ol>
	<li>Predescu, S. A., Predescu, D. N., Knezevic, I., Klein, I. K., Malik, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intersectin-1s+regulates+the+mitochondrial+apoptotic+pathway+in+endothelial+cells.">Intersectin-1s regulates the mitochondrial apoptotic pathway in endothelial cells.</a> J. Biol. Chem. 282 (282), 17166-17178 (2007).</li><li>Uddin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cationic+lipids+used+in+non-viral+gene+delivery+systems.">Cationic lipids used in non-viral gene delivery systems.</a> Biotechnology and Molecular Biology Review. 2 (2), 58-67 (2007).</li><li>Barenholz, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+lipid+composition+on+the+thermotropic+behavior+and+size+distribution+of+mixed+cationic+liposomes.">Influence of lipid composition on the thermotropic behavior and size distribution of mixed cationic liposomes.</a> J. Colloid Interface Sci. (356), 46-53 (2011).</li><li>Predescu, D. N., Neamu, R., Bardita, C., Wang, M., Predescu, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+caveolae+function+and+upregulation+of+alternative+endocytic+pathways+induced+by+experimental+modulation+of+intersectin-1s+expression+in+mouse+lung+endothelium.">Impaired caveolae function and upregulation of alternative endocytic pathways induced by experimental modulation of intersectin-1s expression in mouse lung endothelium.</a> Biochem. Res. Int.. (2012), 672705 (2012).</li><li>Higuchi, Y., Kawakami, S., Hashida, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+for+in+vivo+delivery+of+siRNAs:+recent+progress.">Strategies for in vivo delivery of siRNAs: recent progress.</a> BioDrugs. 24 (24), 195-205 (2010).</li><li>Caracciolo, G., Amenitsch, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cationic+liposome/DNA+complexes:+from+structure+to+interactions+with+cellular+membranes.">Cationic liposome/DNA complexes: from structure to interactions with cellular membranes.</a> Eur. Biophys. J. , (2012).</li><li>Barnier Quer, C., Elsharkawy, A., Romeijn, S., Kros, A., Jiskoot, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cationic+liposomes+as+adjuvants+for+influenza+hemagglutinin:+more+than+charge+alone.">Cationic liposomes as adjuvants for influenza hemagglutinin: more than charge alone.</a> Eur. J. Pharm. Biopharm. 81 (81), 294-302 (2012).</li><li>Rai, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposomal+delivery+of+MicroRNA-7-expressing+plasmid+overcomes+epidermal+growth+factor+receptor+tyrosine+kinase+inhibitor-resistance+in+lung+cancer+cells.">Liposomal delivery of MicroRNA-7-expressing plasmid overcomes epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor-resistance in lung cancer cells.</a> Mol. Cancer Ther. (10), 1720-1727 (2011).</li><li>McLean, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ-specific+endothelial+cell+uptake+of+cationic+liposome-DNA+complexes+in+mice.">Organ-specific endothelial cell uptake of cationic liposome-DNA complexes in mice.</a> Am. J. Physiol. (273), H387-H404 (1997).</li><li>Soutschek, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+silencing+of+an+endogenous+gene+by+systemic+administration+of+modified+siRNAs.">Therapeutic silencing of an endogenous gene by systemic administration of modified siRNAs.</a> Nature. (432), 173-178 (2004).</li><li>Barenholz, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposomes+enhance+bioremediation+of+oil-contaminated+soil.">Liposomes enhance bioremediation of oil-contaminated soil.</a> J. Liposome Res. (13), 1-8 (2003).</li><li>Zamboni, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposomal,+nanoparticle,+and+conjugated+formulations+of+anticancer+agents.">Liposomal, nanoparticle, and conjugated formulations of anticancer agents.</a> Clin. Cancer Res. (11), 8230-8234 (2005).</li><li>Newman, M. S., Colbern, G. T., Working, P. K., Engbers, C., Amantea, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+pharmacokinetics,+tissue+distribution,+and+therapeutic+effectiveness+of+cisplatin+encapsulated+in+long-circulating,+pegylated+liposomes+(SPI-077)+in+tumor-bearing+mice.">Comparative pharmacokinetics, tissue distribution, and therapeutic effectiveness of cisplatin encapsulated in long-circulating, pegylated liposomes (SPI-077) in tumor-bearing mice.</a> Cancer Chemother Pharmacol. (43), 1-7 (1999).</li><li>Martino, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+siRNA+delivery+by+the+cationic+liposome+DOTAP+in+human+hematopoietic+stem+cells+differentiating+into+dendritic+cells.">Efficient siRNA delivery by the cationic liposome DOTAP in human hematopoietic stem cells differentiating into dendritic cells.</a> J. Biomed. Biotechnol. (2009), 410260 (2009).</li><li>Zhang, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+delivery+system+targeting+bone+formation+surfaces+to+facilitate+RNAi-based+anabolic+therapy.">A delivery system targeting bone formation surfaces to facilitate RNAi-based anabolic therapy.</a> Nat. Med. 18 (18), 307-314 (2012).</li><li>Predescu, D., Palade, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasmalemmal+vesicles+represent+the+large+pore+system+of+continuous+microvascular+endothelium.">Plasmalemmal vesicles represent the large pore system of continuous microvascular endothelium.</a> Am. J. Physiol. (265), H725-H733 (1993).</li><li>Koh, T. W., Verstreken, P., Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dap160/intersectin+acts+as+a+stabilizing+scaffold+required+for+synaptic+development+and+vesicle+endocytosis.">Dap160/intersectin acts as a stabilizing scaffold required for synaptic development and vesicle endocytosis.</a> Neuron. (43), 193-205 (2004).</li><li>Miyawaki-Shimizu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Lung Cell Mol. Physiol. (290), L405-L413 (2006).</li></ol>

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

استنادا إلى الدراسات السابقة التي نشرت من قبل الآخرين ولنا 9 1، 18 وضعنا هذه المنهجية على المدى الطويل نهدم من ITSN-1S في الجسم الحي بواسطة الوريد المتكررة (كل ساعة 72، لمدة 24 يوما متتالية) من سيرنا محددة / المجمعات الحويصلية. هذا النهج التجريبي هو كفاءة، ويمكن اس?...

سيرنا المجردة لا يمكن أن تخترق غشاء الخلية، ويجري سالبة الشحنة، وأنه هو المتدهورة بسهولة عن طريق الانزيمات في الدم والأنسجة، والخلايا. حتى مع مؤخرا تعديلات هيكلية لتحسين الاستقرار، وتراكم سيرنا في الموقع المستهدف بعد تناوله منخفضة للغاية ويتطلب وسيلة فعالة داخل الخلايا 5. ظهرت الجسيمات الشحمية الموجبة كما آمن الأحماض النووية ناقلات مع القدرة على نقل قطع كبيرة من الحمض النووي / الحمض النووي الريبي في الخلايا عن طريق التغليف وحماية الأحماض النووية من تدهور الأنزيمية 6. أيضا، الجسيمات الشحمية الموجبة تتفاعل تلقائيا مع DNA / RNA، وبالتالي تعزيز نقل الجينات إلى الخلايا 2. وفي الآونة الأخيرة تم تطبيق الجسيمات الشحمية لتقديم اللقاحات والأدوية الجزيئي المنخفض الوزن 7. تسليم الليبوسومال من الرنا الميكروي-7-معربا عن البلازميد يتغلب عامل نمو البشرة مستقبلات التيروزين كيناز المانع للمقاومة في خلايا سرطان الرئة 8. عند استهدافبطانة الأوعية الدموية، والتسليم في الوريد أمر ضروري لأن المجمعات من غير المرجح أن عبور حاجز البطانية ويتسرب في النسيج الخلالي إلى 9. وعلى سبيل المقارنة إلى أعضاء أخرى، ECS من الأوعية الدموية الدقيقة في الرئة يكون لها أكبر امتصاص واستيعاب بشوق الحويصلية الموجبة وDNA / RNA المجمعات، يليه الغدد الليمفاوية وبقع باير 9. وقد ثبت التسليم عن طريق الوريد في نماذج القوارض من سيرنا عبر حقن الوريد الرجعية المدارية أو الذيل غير مؤذية حتى في تركيزات عالية، مثل 50 مغ / كغ 10. في الكتابات المنشورة تكوين الجسيمات الشحمية الموجبة يختلف، استنادا إلى صياغة الدهون ونسبة متساوي المولية من 11 و 12. هناك طائفة واسعة من التطبيقات المحتملة باستخدام الجسيمات الشحمية الموجبة للتسليم الجينات في الجسم الحي، سواء استهداف down-regulation/over-expression من البروتينات، والتسليم لقاحات أو علاجات المضادة للورم 13-15. المهم أن نتذكرغير أن كفاءة DNA / RNA الخلوية التفاعل غشاء ينظم شكل اقتران بين المجمعات ولدت والدهون غشاء. هذا يشير إلى أن الخياطة تكوين الدهون إلى ملامح الغشاء الخلوي المستهدف قد يكون مفيدا ويؤدي إلى ارتفاع معدلات ترنسفكأيشن في نوع خلية معينة 6.

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name of Reagent/Material</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalog Number</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Dimethyl Dioctadecyl Ammonium Bromide (DOAB)</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>D2779</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>LiposoFast stabilizer (mini-extruder)</td>
 <td>Avestin Inc.</td>
 <td>LF-STB</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Polycarbonate membrane, 19 mm diameter, 50 nm pore</td>
 <td>Avestin Inc.</td>
 <td>LFM-50</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Cholesterol</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>C-8667</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Chloroform</td>
 <td>Mallinckrodt Chemicals</td>
 <td>4432-04</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Hank's balanced salts</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>H1387</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Round-bottom flask</td>
 <td>Fisher Scientific</td>
 <td>FHB-275-030X</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Mouse siRNAITSN - on target </td>
 <td>Dharmacon/ThermoScientific</td>
 <td>J-046912-11</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Peristaltic pump</td>
 <td>Ismatec</td>
 <td>REGLO-CDF digital with RHOO pump head</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ventilator</td>
 <td>Hugo Sachs Electronik</td>
 <td>NA</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Barbital</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>B-0500</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Uranyl acetate</td>
 <td>EM Sciences</td>
 <td>22400</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Epon812</td>
 <td>EM Sciences</td>
 <td>Discontinued by the manufacturer</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Propylene oxide</td>
 <td>EM Sciences</td>
 <td>20400</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Embedding molds</td>
 <td>EM Sciences</td>
 <td>69923-05</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Tannic acid</td>
 <td>EM Sciences</td>
 <td>21710</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>8 nm gold-albumin tracer</td>
 <td></td>
 <td>Prepared in the laboratory as in16</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Equipped with 2 Avestin 1 ml gas-tight syringes (cat. # LF-1)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Pyrex, 100 ml</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Modified siRNA, in vivo</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Part of IDEX corp.</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>D-79232 March, Germany</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Replaced with Embed812, cat. # 14120</td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

long-term silencing of intersectin-1s in mouse lungs by repeated delivery of a specific sirna via cationic liposomes. evaluation of knockdown effects by electron microscopy

وأظهرت دراسات سابقة أن ضربة قاضية من ITSN-1S (KD ITSN)، وهو البروتين التقامي تشارك في تنظيم الرئة نفاذية الأوعية الدموية والخلايا البطانية (ECS) البقاء على قيد الحياة، يسببها موت الخلايا أفكارك، عقبة رئيسية في تطوير نظام زراعة الخلايا لفترات طويلة مع ITSN-1S تثبيط 1. باستخدام الجسيمات الشحمية الموجبة وناقلات، ونحن استكشاف إسكات الجينات ITSN-1S في الرئتين الماوس عن طريق الإدارة النظامية من سيرنا استهداف ITSN-1 الجين (ITSN سيرنا). الجسيمات الشحمية الموجبة توفر العديد من المزايا للتسليم سيرنا: آمن مع الجرعات المتكررة، nonimmunogenic، غير سام، وسهلة لإنتاج 2. أداء الجسيمات الشحمية والنشاط البيولوجي تعتمد على حجمها، تهمة، الدهون تكوين والاستقرار، جرعة وطريقة التعاطي 3 هنا وكفاءة وITSN دينار كويتي محددة في الرئتين الماوس قد تم الحصول عليها باستخدام مزيج بروميد الأمونيوم dioctadecyl الكولسترول وثنائي ميثيل. التسليم في الوريدمن ITSN سيرنا / المجمعات الحويصلية الموجبة طرقت عابر أسفل البروتين ITSN-1S ومرنا في الرئتين الماوس في يوم 3، والذي تعافى بعد 3 أيام إضافية. الاستفادة من الجسيمات الشحمية الموجبة باعتبارها الناقل آمنة للتكرار، وسعت الدراسة لمدة 24 يوما. وهكذا، كانت تدار العلاج الرجعية المدارية مع المجمعات ولدت حديثا كل يوم 3، الأمر الذي أدى ITSN دينار كويتي مستمرة طوال فترة الدراسة 4. وتعرض الأنسجة الماوس جمعها في عدة نقاط زمنية ITSN بعد سيرنا إلى المجهر (EM) تحليلات الإلكترون لتقييم آثار دينار كويتي ITSN المزمنة، في البطانة الرئة. سمح عالية الدقة EM التصوير لنا لتقييم التغيرات المورفولوجية التي تسببها KDITSN في السرير الوعائي الرئوي (أي تعطل حاجز البطانية، انخفض عدد caveolae وupregulation من مسارات نقل بديلة)، وخصائص غير القابلة للكشف بواسطة المجهر الضوئي. عموما أنشئت هذه النتائج والمجمدةدور تانت من ITSN-1S في وظيفة ECS والتوازن الرئة، في حين توضح فعالية تسليم سيرنا-الجسيمات الشحمية في الجسم الحي.

وتم رصد مستويات البروتين ITSN-1S ومرنا في عدة نقاط وقت بعد سيرنا تسليم ITSN بواسطة لطخة غربية وPCR التقليدية والكمي كما هو الحال في 4. وكانت مستويات البروتين ITSN-1S ومرنا في سيرنا الرئتين الماوس المعالجة ITSN-أقل بحوالي 75٪ بالرجوع إلى الضوابط خلال ضربة قاضية ال...

Watch this Scientific Journal Video about Long-term Silencing of Intersectin-1s in Mouse Lungs by Repeated Delivery of a Specific siRNA via Cationic Liposomes. Evaluation of Knockdown Effects by Elect

Long-term Silencing of Intersectin-1s in Mouse Lungs by Repeated Delivery of a Specific siRNA via Cationic Liposomes. Evaluation of Knockdown Effects by Electron Microscopy

تكرار الحقن الرجعية المدارية من liposomes/siRNA/ITSN-1s الموجبة المجمعات في الفئران، كل 72 ساعة لمدة 24 يوما، وتقديم كفاءة دوبلكس سيرنا إلى الماوس الرئة الأوعية الدموية الدقيقة الحد مرنا ITSN-1S والتعبير البروتين بنسبة 75٪. هذا الأسلوب هو تكرار للغاية في نموذج حيواني، ليس له آثار سلبية والابتعاد عن حالة وفاة.

إسكات طويلة الأجل من Intersectin-1S في الرئتين الماوس عن طريق المتكررة تسليم سيرنا محددة عبر الليبوزومات الموجبة. تقييم تأثيرات ضربة قاضية بواسطة المجهر الإلكتروني

Previous  studies showed that knockdown of ITSN-1s (KDITSN), an endocytic  protein involved in regulating lung vascular permeability and endothelial cells ...

long-term-silencing-intersectin-1s-mouse-lungs-repeated-delivery

Research

JoVE Journal

Biology

10.6K Views.  Rush University. تكرار الحقن الرجعية المدارية من liposomes/siRNA/ITSN-1s الموجبة المجمعات في الفئران، كل 72 ساعة لمدة 24 يوما، وتقديم كفاءة دوبلكس سيرنا إلى الماوس الرئة الأوعية الدموية الدقيقة الحد مرنا ITSN-1S والتعبير البروتين بنسبة 75٪. هذا الأسلوب هو تكرار للغاية في نموذج حيواني، ليس له آث...

Video: Long-term Silencing of Intersectin-1s in Mouse Lungs by Repeated Delivery of a Specific siRNA via Cationic Liposomes. Evaluation of Knockdown Effects by Electron Microscopy

Long-term Imaging Mammalian Cells using Wide-Field Microscopy

التصوير خلايا الثدييات على المدى الطويل باستخدام الميكروسكوب واسعة الميدانية

Multilayer Mounting for Long-term Light Sheet Microscopy of Zebrafish

Light sheet microscopy is the ideal imaging technique to study zebrafish embryonic development. Due to minimal photo-toxicity and bleaching, it is particularly suited for long-term time-lapse imaging over many hours up to several days. However, an appropriate sample mounting strategy is needed that offers both confinement and normal development of the sample. Multilayer mounting, a new embedding technique using low-concentration agarose in optically clear tubes, now overcomes this limitation and unleashes the full potential of light sheet microscopy for real-time developmental biology.

The development of zebrafish can be followed over days with light sheet microscopy when embryos are embedded in optically clear polymer tubes with low-concentration agarose.

متعدد الطبقات لتركيب المدى الطويل المجهر الضوئي ورقة من الزرد

Light sheet microscopy is the ideal imaging technique to study zebrafish embryonic development. Due to minimal photo-toxicity and bleaching, it is ...

Visualization of ATP Synthase Dimers in Mitochondria by Electron Cryo-tomography

Electron cryo-tomography is a powerful tool in structural biology, capable of visualizing the three-dimensional structure of biological samples, such as cells, organelles, membrane vesicles, or viruses at molecular detail. To achieve this, the aqueous sample is rapidly vitrified in liquid ethane, which preserves it in a close-to-native, frozen-hydrated state. In the electron microscope, tilt series are recorded at liquid nitrogen temperature, from which 3D tomograms are reconstructed. The signal-to-noise ratio of the tomographic volume is inherently low. Recognizable, recurring features are enhanced by subtomogram averaging, by which individual subvolumes are cut out, aligned and averaged to reduce noise. In this way, 3D maps with a resolution of 2 nm or better can be obtained. A fit of available high-resolution structures to the 3D volume then produces atomic models of protein complexes in their native environment. Here we show how we use electron cryo-tomography to study the in situ organization of large membrane protein complexes in mitochondria. We find that ATP synthases are organized in rows of dimers along highly curved apices of the inner membrane cristae, whereas complex I is randomly distributed in the membrane regions on either side of the rows. By subtomogram averaging we obtained a structure of the mitochondrial ATP synthase dimer within the cristae membrane.

We present a protocol of how to collect and process electron cryo-tomograms of whole mitochondria. The technique provides detailed insights into the structure, function, and organization of large membrane protein complexes in native biological membranes.

التصور من ATP سينسيز Dimers في الميتوكوندريا بواسطة الكترون البرد المقطعي

Electron cryo-tomography is a powerful tool in structural biology, capable of visualizing the three-dimensional structure of biological samples, such as ...

In Vivo SiRNA Transfection and Gene Knockdown in Spinal Cord via Rapid Noninvasive Lumbar Intrathecal Injections in Mice

This report describes a step-by-step guide to the technique of acute intrathecal needle injections in a noninvasive manner, i.e. independent of catheter implantation. The technical limitation of this surgical technique lies in the finesse of the hands. The injection is rapid, especially for a trained experimenter, and since tissue disruption with this technique is minimal, repeated injections are possible; moreover immune reaction to foreign tools (e.g. catheter) does not occur, thereby giving a better and more specific read out of spinal cord modulation. Since the application of the substance is largely limited to the target region of the spinal cord, drugs do not need to be applied in large dosages, and more importantly unwanted effects on other tissue, as observed with a systemic delivery, could be circumvented1,2. Moreover, we combine this technique with in vivo transfection of nucleic acid with the help of polyethylenimine (PEI) reagent3, which provides tremendous versatility for studying spinal functions via delivery of pharmacological agents as well as gene, RNA, and protein modulators.

In Vivo SiRNA Transfection and Gene Knockdown in Spinal Cord via Rapid Noninvasive Lumbar Intrathecal Injections in Mice

This report describes a simple and rapid technique of intrathecal needle puncture for a localized transfection of siRNA in the lumbar spinal cord in mouse under short lasting light anesthesia.

في فيفو سيرنا ترنسفكأيشن والجينات ضربة قاضية في الحبل الشوكي عن طريق السريع موسع قطني داخل القراب الحقن في الفئران

This report describes a step-by-step guide to the technique of acute intrathecal needle injections in a noninvasive manner, i.e. independent of catheter ...

Cryo-electron Microscopy Specimen Preparation By Means Of a Focused Ion Beam

Here we present a protocol used to prepare cryo-TEM samples of Aspergillus niger spores, but which can easily be adapted for any number of microorganisms or solutions. We make use of a custom built cryo-transfer station and a modified cryo-SEM preparation chamber2. The spores are taken from a culture, plunge-frozen in a liquid nitrogen slush and observed in the cryo-SEM to select a region of interest. A thin lamella is then extracted using the FIB, attached to a TEM grid and subsequently thinned to electron transparency. The grid is transferred to a cryo-TEM holder and into a TEM for high resolution studies. Thanks to the introduction of a cooled nanomanipulator tip and a cryo-transfer station, this protocol is a straightforward adaptation to cryogenic temperature of the routinely used FIB preparation of TEM samples. As such it has the advantages of requiring a small amount of modifications to existing instruments, setups and procedures; it is easy to implement; it has a broad range of applications, in principle the same as for cryo-TEM sample preparation. One limitation is that it requires skillful handling of the specimens at critical steps to avoid or minimize contaminations.

Cryo Electron Microscopes, either Scanning (SEM) or Transmission (TEM), are widely used for characterization of biological samples or other materials with a high water content1. A SEM/Focused Ion Beam (FIB) is used to identify features of interest in samples and extract a thin, electron-transparent lamella for transfer to a cryo-TEM.

البرد الإلكترون المجهري عينة التحضير عن طريق المركزة ايون شعاع

Here we present a protocol used to prepare cryo-TEM samples of Aspergillus niger spores, but which can easily be adapted for any number of microorganisms ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) maintain the turnover of all mature blood cell lineages. The coordination of the complex signals leading to specific HSC fates relies upon the interaction between HSCs and the intricate bone marrow microenvironment, which is still poorly understood[1-2].
We describe how by combining a newly developed specimen holder for stable animal positioning with multi-step confocal and two-photon in vivo imaging techniques, it is possible to obtain high-resolution 3D stacks containing HSPCs and their surrounding niches and to monitor them over time through multi-point time-lapse imaging. High definition imaging allows detecting ex vivo labeled hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) residing within the bone marrow. Moreover, multi-point time-lapse 3D imaging, obtained with faster acquisition settings, provides accurate information about HSPC movement and the reciprocal interactions between HSPCs and stroma cells.
Tracking of HSPCs in relation to GFP positive osteoblastic cells is shown as an exemplary application of this method. This technique can be utilized to track any appropriately labeled hematopoietic or stromal cell of interest within the mouse calvarium bone marrow space.

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

The nature of the interactions between hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) and bone marrow niches is poorly understood. Custom hardware modifications and a multi-step acquisition protocol allow the use of two-photon and confocal microscopy to image ex vivo labeled HSPCs homed within bone marrow areas, tracking interactions and movement.

في فيفو تتبع 4 الأبعاد للالجذعية المكونة للدم والسلف الكبار في خلايا الفأر قبي نخاع العظم

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Correlative Confocal and 3D Electron Microscopy of a Specific Sensory Cell

Delineation of a cell&#8217;s ultrastructure is important for understanding its function. This can be a daunting project for rare cell types diffused throughout tissues made of diverse cell types, such as enteroendocrine cells of the intestinal epithelium. These gastrointestinal sensors of food and bacteria have been difficult to study because they are dispersed among other epithelial cells at a ratio of 1:1,000. Recently, transgenic reporter mice have been generated to identify enteroendocrine cells by means of fluorescence. One of those is the peptide YY-GFP mouse. Using this mouse, we developed a method to correlate confocal and serial block-face scanning electron microscopy. We named the method cocem3D and applied it to identify a specific enteroendocrine cell in tissue and unveil the cell&#8217;s ultrastructure in 3D. The resolution of cocem3D is sufficient to identify organelles as small as secretory vesicles and to distinguish cell membranes for volume rendering. Cocem3D can be easily adapted to study the 3D ultrastructure of other specific cell types in their native tissue.

Here, we introduce a method, cocem3D, to unveil the ultrastructure of a specific cell in its native tissue by bridging confocal and serial block-face scanning electron microscopy.

متلازم متحد البؤر و3D المجهر الإلكتروني لخلية حسية معينة

Delineation of a cell&#8217;s ultrastructure is important for understanding its function. This can be a daunting project for rare cell types diffused ...

Fecal Glucocorticoid Analysis: Non-invasive Adrenal Monitoring in Equids

Adrenal activity can be assessed in the equine species by analysis of feces for corticosterone metabolites. During a potentially aversive situation, corticotrophin releasing hormone (CRH) is released from the hypothalamus in the brain. This stimulates the release of adrenocorticotrophic hormone (ACTH) from the pituitary gland, which in turn stimulates release of glucocorticoids from the adrenal gland. In horses the glucocorticoid corticosterone is responsible for several adaptations needed to support equine flight behaviour and subsequent removal from the aversive situation. Corticosterone metabolites can be detected in the feces of horses and assessment offers a non-invasive option to evaluate long term patterns of adrenal activity. Fecal assessment offers advantages over other techniques that monitor adrenal activity including blood plasma and saliva analysis. The non-invasive nature of the method avoids sampling stress which can confound results. It also allows the opportunity for repeated sampling over time and is ideal for studies in free ranging horses. This protocol describes the enzyme linked immunoassay (EIA) used to assess feces for corticosterone, in addition to the associated biochemical validation.

Adrenal activity can be assessed in the equine species by analysis of feces for corticosterone metabolites. The method offers a non-invasive option to assess long term patterns in both domestic and free ranging horses. This protocol describes the enzyme linked immunoassay involved and the associated biochemical validation.

برازي تحليل جلايكورتيكود: رصد الغدة الكظرية غير الغازية في الخيليات

Adrenal activity can be assessed in the equine species by analysis of feces for corticosterone metabolites. During a potentially aversive situation, ...

Meiotic Spindle Assessment in Mouse Oocytes by siRNA-mediated Silencing

Errors in chromosome segregation during meiotic division in gametes can lead to aneuploidy that is subsequently transmitted to the embryo upon fertilization. The resulting aneuploidy in developing embryos is recognized as a major cause of pregnancy loss and congenital birth defects such as Down&#8217;s syndrome. Accurate chromosome segregation is critically dependent on the formation of the microtubule spindle apparatus, yet this process remains poorly understood in mammalian oocytes. Intriguingly, meiotic spindle assembly differs from mitosis and is regulated, at least in part, by unique microtubule organizing centers (MTOCs). Assessment of MTOC-associated proteins can provide valuable insight into the regulatory mechanisms that govern meiotic spindle formation and organization. Here, we describe methods to isolate mouse oocytes and deplete MTOC-associated proteins using a siRNA-mediated approach to test function. In addition, we describe oocyte fixation and immunofluorescence analysis conditions to evaluate meiotic spindle formation and organization.

Here, we present a protocol for specific siRNA-mediated mRNA depletion followed by immunofluorescence analysis to evaluate meiotic spindle assembly and organization in mouse oocytes. This protocol is suitable for in vitro depletion of transcripts and functional assessment of different spindle and/or MTOC-associated factors in oocytes.

تقييم المغزل الانتصافي في ماوس البويضات التي كتبها بوساطة سيرنا إسكات

Errors in chromosome segregation during meiotic division in gametes can lead to aneuploidy that is subsequently transmitted to the embryo upon ...

Sample Preparation and Imaging of Exosomes by Transmission Electron Microscopy

Exosomes are nano-sized extracellular vesicles secreted by body fluids and are known to represent the characteristics of cells that secrete them. The contents and morphology of the secreted vesicles reflect cell behavior or physiological status, for example cell growth, migration, cleavage, and death. The exosomes&#39; role may depend highly on size, and the size of exosomes varies from 30 to 300 nm. The most widely used method for exosome imaging is negative staining, while other results are based on Cryo-Transmission Electron Microscopy, Scanning Electron Microscopy, and Atomic Force Microscopy. The typical exosome&#39;s morphology assessed through negative staining is a cup-shape, but further details are not yet clear. An exosome well-characterized through structural study is necessary particular in medical and pharmaceutical fields. Therefore, function-dependent morphology should be verified by electron microscopy techniques such as labeling a specific protein in the detailed structure of exosome. To observe detailed structure, ultrathin sectioned images and negative stained images of exosomes were compared. In this protocol, we suggest transmission electron microscopy for the imaging of exosomes including negative staining, whole mount immuno-staining, block preparation, thin section, and immuno-gold labelling.

This protocol describes the various techniques necessary for transmission electron microscopy including negative staining, ultrathin sectioning for detailed structure, and immuno-gold labelling to determine the positions of specific proteins in exosomes.

نموذج إعداد وتصوير اكسوسوميس مجهر إلكتروني

Exosomes are nano-sized extracellular vesicles secreted by body fluids and are known to represent the characteristics of cells that secrete them. The ...