Name: application of two-spotted spider mite tetranychus urticae for plant-pest interaction studies
Uploaded: 2014-07-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
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This project was funded by the Government of Canada through Genome Canada and the Ontario Genomics Institute (OGI-046), and Ontario Research Fund&#8211;Global Leadership in Genomics and Life Sciences GL2-01-035 (to M.G. and V.G.). T.V.L. is a postdoctoral fellow of the Fund for Scientific Research Flanders (FWO).

1. Manutenção da Mite População Aranha NOTA: Ácaros são criados na Califórnia feijão vermelho (Phaseolus vulgaris). <ol><li> Cultivar plantas a partir de sementes de feijão por 2-3 semanas antes da infestação. </li><li> Intermix essas plantas com plantas infestadas; ácaros adultos vão colonizar rapidamente o material vegetal fresco. </li><li> Remover velhas plantas de feijão infestados cada 7-10 dias, substituindo-os com plantas frescas. </li></ol> 2. Coleta Adulto Feminino Ácaros <ol><li> Mite coleção usando o método de lavagem <ol><li> Para a coleta de ácaros, coloque uma planta de feijão fresco em contato com plantas infestadas de 1 a 2 dias antes do experimento. </li><li> Utilize de 20 a 30 plantas de feijão frescos para coletar 1.000 a 2.000 ácaros adulto do sexo feminino. </li><li> Prepare uma solução de Tween 20 a 0,001%, utilizando a água da torneira à temperatura ambiente. </li><li> Lavar feijoeiro infestadas na solução de Tween 20, utilizando 2-3 plantas de cada vez. </li><li&gt; Cada planta é lavado 2-3x para coletar todos os ácaros das folhas. </li><li> Complete a etapa 2.1.4 dentro de 10 min para evitar a mortalidade dos ácaros. </li></ol></li><li> O isolamento da fêmea adulta ácaros por filtração da suspensão Mite através de peneiras de malha Tamanho Definido <ol><li> Preparar os seguintes peneiras de tamanhos de malha: 500 um (para remover os detritos) e 300 um (para recolher os ácaros adultos fêmeas) (Figura 1A). </li><li> Filtrar a suspensão através do crivo de 500 mM. </li><li> ReFilter a suspensão através da peneira de 300 mM. Ácaros fêmeas adultas serão retidos. </li><li> Mergulhe uma peneira 300 mm com ácaros fêmeas adultas em água corrente limpa para remover o Tween 20. </li><li> Espalhe ácaros em uma única camada na parte inferior da peneira. </li><li> Use papel toalha para remover o excesso de água da rede e dos lados da peneira. NOTA: Isso é feito porque os ácaros precisam secar rapidamente, a fim de se recuperar. </li><li> Preparar um conjunto tal como mostrado na Figura 1B; isso permitirá que os ácaros se mover livremente, mas vai impedi-los de escapar. </li><li> Coloque a peneira com ácaros no topo do crivo que é usado como um suporte. </li><li> Cerque-peneira de fundo com água para evitar os ácaros da dispersão. NOTA: Os ácaros vai começar a recuperar depois de cerca de 5 min. Após aproximadamente 30 minutos, o número de ácaros que se deslocam é suficiente para iniciar a recolha (Figura 1D). Ácaros devem ser recolhidos no prazo de 1 hora, como eles produzem seda que irá interferir com a coleção. </li></ol></li></ol> 3. Fábrica infestação com ácaros NOTA: Uma vez que os ácaros fêmeas adultas se recuperaram, eles podem ser usados ​​para a infestação de plantas. Há dois métodos utilizados para infestar as plantas experimentais com ácaros fêmeas adultas: a) usando um pincel fino (seção de protocolo 3.1) e b), utilizando uma bomba ou linha de vácuo (seção de protocolo 3.2). <ol><li> Mite Infestação usando uma escova NOTA: infestação do ácaro aranhacom uma escova é utilizado para a aplicação de até 30 ácaros para cada planta. <ol><li> Use uma escova de cabelo redonda arte suave de tamanho 00 ou mais fino. </li><li> Molhe a escova com água da torneira RT. </li><li> Gentilmente pegar ácaros da peneira usando a ponta do pincel e transferi-los para a planta. </li></ol></li><li> Infestação do ácaro usando uma bomba NOTA: infestação de plantas com ácaros coletados por uma linha de bomba / vácuo é utilizada quando mais de 30 ácaros são aplicadas. Para este método, uma bomba de vácuo para componentes microelectrónicos captador ou uma linha de vácuo pode ser usado. É importante manter o constante do fluxo de ar e uma resistência suficiente (2-4 psi). <ol><li> Anexar uma ponta de pipeta de 1 ml para o tubo que liga a linha da bomba de vácuo ou usando um corte de 1,5 ml tubo de centrífuga, na parte inferior, como um adaptador entre o tubo de bomba / vácuo e a ponta. </li><li> Coloque um pedaço de toalha de papel entre a ponta da pipeta e o adaptador (1,5 ml tubo de centrifugação). Nota: O objetivo deste é a ácaros armadilha dentro tele ponteira durante o processo de aspiração e também para reduzir o fluxo de ar (Figura 1C). </li><li> Colete ácaros diretamente da peneira usando a ponta da pipeta. </li><li> Alternativamente, recolher os ácaros, um por um a partir de folhas infestadas, usando um estereoscópio. </li><li> Quando foi recolhido o número necessário de ácaros, remover a ponta da pipeta a partir do tubo, fazendo com que o pedaço de toalha de papel na parte de trás da ponta da pipeta não é perturbada. </li><li> Colete ácaros tocando a ponta da pipeta e aglomeração dos ácaros juntos. Em seguida, coloque-os na folha; dentro de segundos, os ácaros vai começar a dispersar-se na folha. </li></ol></li></ol> 4. Gravação e avaliação dos danos Planta <ol><li> Danos às plantas de gravação NOTA: Para A. thaliana, planta dano é avaliada após 4 dias de alimentação do ácaro. O dano é registrada como a superfície total das manchas cloróticas. Para a medição de danos, toda a roseta é cortado e digitalizada.Parâmetros de verificação descritos são para um scanner Epson V30, mas vai agir como um bom ponto de partida para qualquer scanner de mesa similar. Mantenha parâmetros de digitalização constantes para todos os experimentos, permitindo a comparação entre experimentos corridas individuais. <ol><li> Cubra scanner com a folha de transparência para evitar a contaminação da superfície do scanner com material vegetal. </li><li> Corte uma roseta inteira e lugar na mesa do scanner para que lado adaxial (superior) de folhas estão enfrentando a fonte de luz do scanner e elemento de captura. Alternativamente, se rosetas são muito densos para capturar folhas individuais, sem sobreposição, dissecar a roseta em folhas individuais ou grupos de folhas que não se sobrepõem com uma tesoura fina antes de colocar na mesa do scanner. Vários rosetas podem ser digitalizados simultaneamente. </li><li> Cubra rosetas ou folhas com um pedaço de papel branco para evitar a adesão e contaminação da tampa do scanner. </li><li> Feche a tampa do scanner e executar uma varredura com os seguintes parâmetros: Resolução: 1,200 dpi; Modo de cor: Adobe RGB; Brilho: 25; Tipo de Arquivo: JPEG máxima qualidade. </li><li> Salve arquivos de imagem para análise de danos subseqüentes. </li></ol></li><li> Danos Planta Quantificação NOTA: A área de dano é calculado manualmente usando o Photoshop. Devido às grandes diferenças em forma de folha e a intensidade da cor dos sintomas, como resultado da alimentação de ácaro, métodos automáticos eram fiáveis. Assim, um método que serve para avaliar os danos planta: <ol><li> Abra a imagem da planta com Photoshop. </li><li> Crie uma nova camada, em seguida, sobrepor imagem digitalizada com uma grade de 0,25 mm x 0,25 mm divisões (Ver ou Display - Show - Grade, atalho de teclado Ctrl + &#39;). </li><li> Em uma camada sobreposta, marque área foliar danificada usando um ponto (use a ferramenta &quot;Pencil&quot;, atalho de teclado B). Usar um único ponto para cada quadrado da grelha abaixo dos quais não é o dano que cobre mais do que uma metade da unidade de grelha. O tamanho do ponto é definido em pixels (isto é, </em&gt; 52 pixels por ponto). </li><li> Quando todos os quadrados da grade que mostram danos às plantas que cubram pelo menos metade da unidade grade são marcados com um ponto, use a ferramenta histograma (Janela - Histograma) para determinar o número total de pixels na camada. A ferramenta permite que um histograma para medir o número de pixels. Uma vez que cada ponto é representado por um número constante e conhecida de pixels, a ferramenta histograma vai medir o número total de pixels, que representa o número total de pontos, e, por extensão, o número total de quadrados marcados. </li><li> Calcular o número de &quot;pontos&quot; marcadas por meio da seguinte fórmula: Número de pontos = número total de pixels / número de pixels por ponto. </li><li> Calcula-se a área total de lesões através da multiplicação do número de pontos marcados sobre a imagem da área de um quadrado da grelha, tal como um ponto corresponde a um quadrado da grelha. </li></ol></li></ol>

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	<li>Jeppson, L. R., Keifer, H. H., Baker, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Mites injurious to economic plants. , (1975).</li><li>Migeon, A., Dorkeld, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spider+Mites+Web:+a+comprehensive+database+for+the+Tetranychidae.">Spider Mites Web: a comprehensive database for the Tetranychidae.</a> http://www.montpellier.inra.fr/CBGP/spmweb. , (2013).</li><li>Croft, B. A., Vandebaan, H. 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The authors have nothing to disclose.

Este vídeo demonstra protocolos utilizados para isolar e infestam plantas com grandes números de ácaros fêmeas adultas. Embora nós apresentamos esse protocolo usando A. thaliana, ele pode ser usado para qualquer sistema de interação planta-ácaro aranha e atualmente está sendo aplicado com sucesso também em plantas de tomateiro e videira (Vitis vinifera). Os rendimentos de protocolo de resultados reprodutíveis, indicando que os ácaros coletados são do estado fisiológico comparável <strong...

Interação planta-praga é um tema de grande importância científica e econômica. Foi estudado historicamente usando as duas plantas de cultivo (como o tomate) e da planta modelo, A. thaliana. Em ambos os casos, a suscetibilidade da planta de herbívoros pode ser medido diretamente por meio de avaliação de fenótipo da planta após o ataque herbívoro ou indiretamente, por meio da avaliação do desempenho de pragas. Medidas diretas de suscetibilidade da planta foram utilizados anteriormente para um número de espécies de insetos-praga usando uma variedade de métodos. Por exemplo, pragas de larvas de lepidópteros é medido como uma estimativa da porção de tecido da planta consumida por qualquer Plutella xylostella (traça de Diamondback) ou Trichoplusia ni (lagarta da couve), a olho nu, com a ajuda de uma grelha 12. Além disso, existem métodos que utilizam a imagem digital de dano foliar com posterior análise de imagem quantitativa. Tais métodos foram utilizados emestudos de A. interação thaliana com Frankliniella occidentalis (tripes flor ocidentais) 13, Scaptomyza flava (drosófila folha de mineração) 14, e T. ni 15. As medidas indiretas de suscetibilidade da planta são amplamente utilizados em estudos de interação planta-praga. Por exemplo, a susceptibilidade de A. thaliana de pêssego pulgão Myzus persicae herbivoria normalmente é avaliada através da análise de fecundidade pragas e descrição da morfologia de uma planta após interação 16,17. Outro indicador indirecto típico de A. thaliana suscetibilidade à praga é uma avaliação de peso seco ou molhado do herbívoro. Este parâmetro é utilizado para caracterizar a herbivoria de lepidoterans, como Pieris rapae (pequeno branco), P. xylostella, ou T. ni em seu larval ou de pupa encena 15,17. Ácaros são-conteúdo da célula feEders. Induzida por danos Mite é reconhecida como uma coleção de manchas cloróticas que variam em cor do branco ao verde pálido. A susceptibilidade de uma planta hospedeira para ácaro herbivoria foi previamente avaliada quer indirectamente através da análise de desempenho ácaro dias pós-infestação 18,19, ou diretamente usando morfologia de plantas semanas pós-infestação de 18 ou usando uma imagem digital de folhas expostas aos ácaros por dias com posterior análise de imagem automatizado 19. Estes métodos foram sendo desenvolvidos e utilizados para estudos de interações entre plantas de tomate e T. urticae, e normalmente usado um pequeno número de ácaros (5-15 por tratamento) que foram coletados a partir da população de ácaros mista e foram colocados na superfície da folha, utilizando uma escova de cerdas macias. No entanto, estes métodos não são adequados para estudos em que um maior número de ácaros precisam de ser aplicados. Além disso, durante o processamento direto de imagens de folhas de software de análise de imagemcomo o Adobe Photoshop (San Jose, CA) ou ImageJ 20 pode ser utilizado para a análise de danos tomate, estes protocolos de modificação precisa, a fim de ser aplicado a folhas, que têm uma maior reflectividade da superfície ou são levemente coloridas e possuem tricomas altamente visíveis ( por exemplo, A. thaliana) que interferem com a seleção automática de manchas cloróticas que marcam danos às plantas. Além disso, a fase de desenvolvimento de ácaros que podem ser facilmente utilizados com os métodos anteriores, é limitada às fêmeas adultas mais prevalentes e facilmente identificáveis ​​e opõe-se a utilização de outras fases de desenvolvimento. O primeiro passo crítico para análise de alto rendimento de interação planta-ácaro aranha é estabelecer, protocolos simples e robustas reprodutíveis para desafiar plantas com ácaros e confiável avaliar os resultados de interação. Neste vídeo, um método eficiente para a coleta rápida e fácil de um grande númemero de ácaros fêmeas adultas, a sua aplicação em uma planta hospedeira experimental ea avaliação dos danos planta devido à alimentação ácaro são descritos. O protocolo apresentado permite a recolha rápida e eficiente de centenas de pessoas, em qualquer estádio de desenvolvimento (ovos, larvas, ninfas, machos adultos e fêmeas) que pode ser utilizado para aplicação experimental subsequente. Além disso, estes protocolos podem ser aplicados a qualquer planta hospedeira ácaro, mas são especificamente demonstrado no caso de A. thaliana.

<table><tbody><tr><td>Plant material:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>California red kidney bean</td><td>Stokes, Thorold, ON, Canada</td><td></td><td>2 week old, well infested with spider mites 2 or 3 days before use. Other cultivars of &lt;em&gt;Phaseolus vulgaris&lt;/em&gt; can be used.</td></tr><tr><td>Chemicals:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9416</td><td>1% stock solution is prepared to simplify aliquoting</td></tr><tr><td>Tap water</td><td></td><td></td><td>At room temperature, heat- and cold-shock affect mite survival rate and performance</td></tr><tr><td>Other materials and equipment:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Plastic tray</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Set of scissors</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>2 L beakers</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paper towels</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sets of sieves</td><td>Manufactured in house</td><td></td><td>Detailed instructions are available</td></tr><tr><td>Thin brush</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipettes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipette tips</td><td></td><td></td><td>0.2 and 1 ml</td></tr><tr><td>1.5 ml centrifuge tubes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Air pump</td><td></td><td></td><td>Aquarium type pump with inverted air flow. Vacuum line can be used. Required pressure drop is approx. 2-4 psi</td></tr><tr><td>Stereoscope</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Scanner</td><td>Epson</td><td>V30</td><td>Any flatbed scanner allowing necessary degree of control over scan quality. We use Epson V30 for our experiments.</td></tr><tr><td>Computer</td><td></td><td></td><td>Windows or OS X PC which is compatible with scanner hardware and Adobe Photoshop software.</td></tr><tr><td>Adobe Photoshop software</td><td>Adobe Systems Inc., San Jose, CA, USA</td><td>various</td><td>Any version with Histogram tool included.</td></tr></tbody></table>

application of two-spotted spider mite tetranychus urticae for plant-pest interaction studies

O ácaro-rajado, Tetranychus urticae, é um herbívoro de artrópodes polífagas onipresente que se alimenta de uma notavelmente ampla gama de espécies, com mais de 150 de valor econômico. É uma das principais pragas das culturas de estufa, especialmente em Solanaceae e Cucurbitaceae (por exemplo, tomates, beringelas, pimentos, pepinos, abobrinha) e plantas ornamentais de efeito estufa (por exemplo, rosas, crisântemos, cravos), culturas anuais (como o milho, o algodão, soja e açúcar de beterraba) e em culturas perenes (alfafa, morangos, uvas, frutas cítricas, e ameixas) 1,2. Além do polyphagy extremo que torna uma importante praga agrícola, T. urticae tem uma tendência para desenvolver a resistência a uma vasta gama de insecticidas e acaricidas que são usados ​​para o seu controlo 3-7. T. urticae é um excelente organismo experimental, uma vez que tem um ciclo de vida rápido (7 dias a 27 ° C)e podem ser facilmente mantidas a uma densidade elevada no laboratório. Métodos de Ensaio para a expressão do gene (incluindo a hibridização in situ e a coloração do anticorpo) e para inactivar a expressão dos genes endógenos de ácaros de aranha com RNA de interferência foram desenvolvidos 8-10. Recentemente, toda a seqüência do genoma de T. urticae foi relatado, criando uma oportunidade para desenvolver este herbívoro de pragas como um organismo modelo com recursos equivalentes genômicos que já existem em algumas de suas plantas hospedeiras (Arabidopsis thaliana eo Solanum lycopersicum tomate) 11. Juntos, esses organismos modelo pode fornecer insights sobre bases moleculares das interações planta-praga. Aqui, um método eficiente para a coleta rápida e fácil de um grande número de ácaros adultos do sexo feminino, a sua aplicação em uma planta hospedeira experimental ea avaliação dos danos planta devido à alimentação ácaro são descritos. O protocolo apresentado enables recolha rápida e eficiente de centenas de pessoas, em qualquer estádio de desenvolvimento (ovos, larvas, ninfas, machos adultos e fêmeas) que pode ser utilizado para aplicação experimental subsequente.

Usando 20 a 30 plantas de feijão infestados, pode-se coletar cerca de 2.000 ácaros adulto do sexo feminino usando peneiras. O tempo necessário para infestar 10 plantas com 20 ácaros por planta é de aproximadamente 15 minutos se estiver usando um pincel para transferir ácaros. Combinações de coleta e os métodos de aplicação são mostrados na Figura 2. Este protocolo gera resultados reprodutíveis de danos às plantas, demonstrando que os ácaros coletados são do e...

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Application of Two-spotted Spider Mite Tetranychus urticae for Plant-pest Interaction Studies

Protocolos para preparação eficiente de amostras homogêneas de ácaros, infestação de plantas experimentais e avaliação de danos às plantas, como requerido para estudos de interação planta-praga foram desenvolvidos.

Aplicação de duas avistou Ácaro<em&gt; Tetranychus urticae</em&gt; De Estudos Planta-praga de Interação

The two-spotted spider mite, Tetranychus urticae, is a ubiquitous polyphagous arthropod herbivore that feeds on a remarkably broad array of species, with ...

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Application of Two-spotted Spider Mite Tetranychus urticae for Plant-pest Interaction Studies

17.6K visualizações.  The University of Western Ontario.  Protocolos para preparação eficiente de amostras homogêneas de ácaros, infestação de plantas experimentais e avaliação de danos às plantas, como requerido para estudos de interação planta-praga foram desenvolvidos. 

Vídeo: Application of Two-spotted Spider Mite Tetranychus urticae for Plant-pest Interaction Studies

Remote Sensing Evaluation of Two-spotted Spider Mite Damage on Greenhouse Cotton

The objective of this study was to evaluate a ground-based multispectral optical sensor as a remote sensing tool to assess foliar damage caused by the two-spotted spider mite (TSSM), Tetranychus urticae Koch, on greenhouse grown cotton. TSSM is a polyphagous pest which occurs on a variety of field and horticultural crops. It often becomes an early season pest of cotton in damaging proportions as opposed to being a late season innocuous pest in the mid-southern United States. Evaluation of acaricides is important for maintaining the efficacy of and preventing resistance to the currently available arsenal of chemicals and newly developed control agents. Enumeration of spider mites for efficacy evaluations is laborious and time consuming. Therefore, subjective visual damage rating is commonly used to assess density of spider mites. The NDVI (Normalized Difference Vegetation Index) is the most widely used statistic to describe the spectral reflectance characteristics of vegetation canopy to assess plant stress and health consequent to spider mite infestations. Results demonstrated that a multispectral optical sensor is an effective tool in distinguishing varying levels of infestation caused by T. urticae on early season cotton. This remote sensing technique may be used in lieu of a visual rating to evaluate insecticide treatments.

This manuscript describes a multispectral optical sensor that effectively detected damage to early season cotton artificially infested with varying densities of the two-spotted spider mite populations.

Avaliação de Sensoriamento Remoto do Dois-manchada danos Aranha Mite em Cotton Greenhouse

The objective of this study was to evaluate a ground-based multispectral optical sensor as a remote sensing tool to assess foliar damage caused by the ...

Ambiente

Development of Metarhizium anisopliae as a Mycoinsecticide: From Isolation to Field Performance

A major concern when developing commercial mycoinsecticides is the kill speed compared to that of chemical insecticides. Therefore, isolation and screening for the selection of a fast-acting, highly virulent entomopathogenic fungus are important steps. Entomopathogenic fungi, such as Metarhizium, Beauveria, and Nomurea, which act by contact, are better suited than Bacillus thuringiensis or nucleopolyhedrosis virus (NPV), which must be ingested by the insect pest. In the present work, we isolated 68 Metarhizium strains from infected insects using a soil dilution and bait method. The isolates were identified by the amplification and sequencing of the ITS1-5.8S-ITS2 and 26S rDNA region. The most virulent strain of Metarhizium anisopliae was selected based on the median lethal concentration (LC50) and time (LT50) obtained in insect bioassays against III-instar larvae of Helicoverpa armigera. The mass production of spores by the selected strain was carried out with solid-state fermentation (SSF) using rice as a substrate for 14 days. Spores were extracted from the sporulated biomass using 0.1% tween-80, and different formulations of the spores were prepared. Field trials of the formulations for the control of an H. armigera infestation in pigeon peas were carried out by randomized block design. The infestation control levels obtained with oil and aqueous formulations (78.0% and 70.9%, respectively) were better than the 63.4% obtained with chemical pesticide.

Development of Metarhizium anisopliae as a Mycoinsecticide: From Isolation to Field Performance

Here, we report the different stages involved in the knowledge-based development of an effective mycoinsecticide, including the isolation, identification, screening, and selection of the "best-fit" entomopathogenic fungus, Metarhizium anisopliae, for the control of insect pests in agriculture.

Desenvolvimento de<em&gt; Metarhizium anisopliae</em&gt; Como um Mycoinsecticide: do isolamento ao desempenho do campo

A major concern when developing commercial mycoinsecticides is the kill speed compared to that of chemical insecticides. Therefore, isolation and ...

Detached Leaf Assays to Simplify Gene Expression Studies in Potato During Infestation by Chewing Insect Manduca sexta

The multitrophic nature of gene expression studies of insect herbivory demands large numbers of biological replicates, creating the need for simpler, more streamlined herbivory protocols. Perturbations of chewing insects are usually studied in whole plant systems. While this whole organism strategy is popular, it is not necessary if similar observations can be replicated in a single detached leaf. The assumption is that basic elements required for signal transduction are present within the leaf itself. In the case of early events in signal transduction, cells need only to receive the signal from the perturbation and transmit that signal to neighboring cells which are assayed for gene expression.
The proposed method simply changes the timing of the detachment. In whole plant experiments, larvae are confined to a single leaf which is eventually detached from the plant and assayed for gene expression. If the order of excision is reversed, from last in whole plant studies, to first in the detached study, the feeding experiment is simplified.
Solanum tuberosum var. Kennebec is propagated by nodal transfer in a simple tissue culture medium and transferred to soil for further growth if desired. Leaves are excised from the parent plant and relocated to Petri dishes where the feeding assay is conducted with the larval stages of M. sexta. Damaged leaf tissue is assayed for the expression of relatively early events in signal transduction. Gene expression analysis identified infestation-specific Cys2-His2 (C2H2) transcription factors, confirming the success of using detached leaves in early response studies. The method is easier to perform than whole plant infestations and uses less space.

The presented method creates natural herbivore damaged plant tissue through the application of Manduca sexta larvae to detached leaves of potato. The plant tissue is assayed for expression of six transcription factor homologs involved in early responses to insect herbivory.

Ensaios foliares destacados para simplificar estudos de expressão gênica em batata durante a infestação por mastigação de insetos Manduca sexta

The multitrophic nature of gene expression studies of insect herbivory demands large numbers of biological replicates, creating the need for simpler, more ...

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea (Camellia Sinensis L.) Leaves

A platform for studying insecticide metabolism using in vitro tissues of tea plant was developed. Leaves from sterile tea plantlets were induced to form loose callus on Murashige and Skoog (MS) basal media with the plant hormones 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D, 1.0 mg L-1) and kinetin (KT, 0.1 mg L-1). Callus formed after 3 or 4 rounds of subculturing, each lasting 28 days. Loose callus (about 3 g) was then inoculated into B5 liquid media containing the same plant hormones and was cultured in a shaking incubator (120 rpm) in the dark at 25 &#177; 1 &#176;C. After 3&#8722;4 subcultures, a cell suspension derived from tea leaf was established at a subculture ratio ranging between 1:1 and 1:2 (suspension mother liquid: fresh medium). Using this platform, six insecticides (5 &#181;g mL-1 each thiamethoxam, imidacloprid, acetamiprid, imidaclothiz, dimethoate, and omethoate) were added into the tea leaf-derived cell suspension culture. The metabolism of the insecticides was tracked using liquid chromatography and gas chromatography. To validate the usefulness of the tea cell suspension culture, the metabolites of thiamethoxan and dimethoate present in treated cell cultures and intact plants were compared using mass spectrometry. In treated tea cell cultures, seven metabolites of thiamethoxan and two metabolites of dimethoate were found, while in treated intact plants, only two metabolites of thiamethoxam and one of dimethoate were found. The use of a cell suspension simplified the metabolic analysis compared to the use of intact tea plants, especially for a difficult matrix such as tea.

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea Camellia Sinensis L. Leaves

This work presents a protocol for establishing a cell suspension culture derived from tea (Camellia sinensis L.) leaves that can be used to study the metabolism of external compounds that can be taken up by the whole plant, such as insecticides.

Estudo sobre o metabolismo de seis inseticidas sistêmicas em uma cultura de suspensão celular recém-estabelecida derivada do chá (Camellia sinensis L.) Folhas

A platform for studying insecticide metabolism using in vitro tissues of tea plant was developed. Leaves from sterile tea plantlets were induced to form ...

Bioquímica

Sampling for Estimating Frankliniella Species Flower Thrips and Orius Species Predators in Field Experiments

The western flower thrips, Frankliniella occidentalis (Pergande), is a polyphagous pest that has been spread worldwide. The extensive use of insecticides in attempts to control its populations eliminates natural enemies and competitor flower thrips species, thereby increasing its populations. An unsustainable situation develops with concomitant resistant pest populations, secondary pest outbreaks, and environmental degradation. Integrated pest management utilizes knowledge of pest and natural enemy relationships to implement tactics that are environmentally friendly and sustainable. Minute pirate bugs are the most important worldwide predators of thrips. They can suppress and ultimately control Frankliniella species flower thrips. Flower samples taken at least weekly are needed to understand predator-prey dynamics. Shown here is the sampling of the flowers of fruiting vegetables and companion plants to estimate the densities of individual thrips and minute pirate bug species. Representative data illustrates how the protocol is used to determine the efficacy of management tactics over time and how to evaluate the benefits of predation by minute pirate bugs. The sampling protocol is similarly adaptable to sampling thrips and minute pirate bugs in other plant species hosts.

Sampling for Estimating Frankliniella Species Flower Thrips and Orius Species Predators in Field Experiments

Presented here is a protocol to determine the number of thrips and minute pirate bug predators in crops over multiple dates in field experiments. Also illustrated is how to determine the efficacy of management tactics against thrips and evaluate the benefits of predation by minute pirate bugs.

Amostragem para estimar espécies de Frankliniella flor tripes e Orius espécies predadores em experimentos de campo

The western flower thrips, Frankliniella occidentalis (Pergande), is a polyphagous pest that has been spread worldwide. The extensive use of insecticides ...

Leveraging Micro-CT Scanning to Analyze Parasitic Plant-Host Interactions

Micro-CT scanning has become an established tool in investigating plant structure and function. Its non-destructive nature, combined with the possibility of three-dimensional visualization and virtual sectioning, has allowed novel and increasingly detailed analysis of complex plant organs. Interactions among plants, including between parasitic plants and their hosts, can also be explored. However, sample preparation before scanning becomes crucial due to the interaction between these plants, which often differ in tissue organization and composition. Furthermore, the broad diversity of parasitic flowering plants, ranging from highly reduced vegetative bodies to trees, herbs, and shrubs, must be considered during the sampling, treatment, and preparation of parasite-host material. Here two different approaches are described for introducing contrast solutions into the parasite and/or host plants, focusing on analyzing the haustorium. This organ promotes connection and communication between the two plants. Following a simple approach, details of haustorium tissue organization can be explored three-dimensionally, as shown here for&#160;euphytoid, vine, and mistletoe parasitic species. Selecting specific contrasting agents and application approaches also allow detailed observation of endoparasite spread within the host body and detection of direct vessel-to-vessel connection between parasite and host, as shown here for an obligate root parasite. Thus, the protocol discussed here can be applied to the broad diversity of parasitic flowering plants to advance the understanding of their development, structure, and functioning.

Micro-CT is a non-destructive tool that can analyze plant structures in three dimensions. The present protocol describes the sample preparation to leverage micro-CT to analyze parasitic plant structure and function. Different species are used to highlight the advantages of this method when coupled with specific preparations.

Aproveitando a microtomografia computadorizada para analisar interações parasitas planta-hospedeiro

Micro-CT scanning has become an established tool in investigating plant structure and function. Its non-destructive nature, combined with the possibility ...

Bioassays for Monitoring Insecticide Resistance

Pest resistance to pesticides is an increasing problem because pesticides are an integral part of high-yielding production agriculture. When few products are labeled for an individual pest within a particular crop system, chemical control options are limited. Therefore, the same product(s) are used repeatedly and continual selection pressure is placed on the target pest. There are both financial and environmental costs associated with the development of resistant populations. The cost of pesticide resistance has been estimated at approximately $ 1.5 billion annually in the United States. This paper will describe protocols, currently used to monitor arthropod (specifically insects) populations for the development of resistance. The adult vial test is used to measure the toxicity to contact insecticides and a modification of this test is used for plant-systemic insecticides. In these bioassays, insects are exposed to technical grade insecticide and responses (mortality) recorded at a specific post-exposure interval. The mortality data are subjected to Log Dose probit analysis to generate estimates of a lethal concentration that provides mortality to 50% (LC50) of the target populations and a series of confidence limits (CL's) as estimates of data variability. When these data are collected for a range of insecticide-susceptible populations, the LC50 can be used as baseline data for future monitoring purposes. After populations have been exposed to products, the results can be compared to a previously determined LC50 using the same methodology.

This manuscript demonstrates and discusses techniques used to survey pesticide susceptibility and detect resistance to contact and systemic pesticides in arthropod pests.

Bioensaios de Resistência a Inseticidas Monitoramento

Pest resistance to pesticides is an increasing problem because pesticides are an integral part of high-yielding production agriculture. When few products ...

Biologia

Parasitização artificial do hospedeiro por Trichogramma dendrolimi e extração de veneno

Extracting Venom from the Parasitoid Wasp Trichogramma dendrolimi Using an Artificial Host

Parasitoid wasps are a diverse group of hymenopteran insects that serve as invaluable resources for pest biocontrol. To ensure successful parasitism, parasitoid wasps inject venom into their hosts to suppress their hosts&#39; immunity, modulate hosts&#39; development, metabolism, and even behavior. With over 600,000 estimated species, the diversity of parasitoid wasps surpasses that of other venomous animals, such as snakes, cone snails, and spiders. Parasitoid wasp venom is an underexplored source of bioactive molecules with potential applications in pest control and medicine. However, collecting parasitoid venom is challenging due to the inability to use direct or electrical stimulation and the difficulty in dissection because of their small size. Trichogramma is a genus of tiny (~0.5 mm) egg parasitoid wasps that are widely used for the biological control of lepidopteran pests in both agriculture and forests. Here, we report a method for extracting venom from T. dendrolimi using artificial hosts. These artificial hosts are created with polyethylene film and amino acid solutions and then inoculated with Trichogramma wasps for parasitism. The venom was subsequently collected and concentrated. This method enables the extraction of large amounts of Trichogramma venom while avoiding contamination from other tissues caused by dissection, a common issue in venom reservoir dissection protocols. This innovative approach facilitates the study of Trichogramma venom, paving the way for new research and potential applications.

Autor em destaque: Método eficiente de extração de veneno de vespas parasitóides Trichogramma 

Here, we present a protocol for extracting venom from Trichogramma dendrolimi using an artificial host created with polyethylene film and amino acid solution.

Extração de veneno da vespa parasitoide Trichogramma dendrolimi usando um hospedeiro artificial

Parasitoid wasps are a diverse group of hymenopteran insects that serve as invaluable resources for pest biocontrol. To ensure successful parasitism, ...

Aplicação de duas avistou Ácaro

Resumo

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Avaliação de Sensoriamento Remoto do Dois-manchada danos Aranha Mite em Cotton Greenhouse

Desenvolvimento de

Ensaios foliares destacados para simplificar estudos de expressão gênica em batata durante a infestação por mastigação de insetos Manduca sexta

Estudo sobre o metabolismo de seis inseticidas sistêmicas em uma cultura de suspensão celular recém-estabelecida derivada do chá (Camellia sinensis L.) Folhas

Amostragem para estimar espécies de Frankliniella flor tripes e Orius espécies predadores em experimentos de campo

Aproveitando a microtomografia computadorizada para analisar interações parasitas planta-hospedeiro

Bioensaios de Resistência a Inseticidas Monitoramento

Extração de veneno da vespa parasitoide Trichogramma dendrolimi usando um hospedeiro artificial

Extração de veneno da vespa parasitoide Trichogramma dendrolimi usando um hospedeiro artificial

Extração de veneno da vespa parasitoide Trichogramma dendrolimi usando um hospedeiro artificial