The authors have nothing to disclose.

NOTA: Este estudo foi autorizado pela comissão de Ética número CEEA34.PB.103.12. 1. Utilização de Leitões como um modelo animal <ol><li> Realize o em dois grupos (n = 6 em cada grupo), casadas em termos de sexo, idade (15 ± 3 meses) e peso (30 ± 10 kg) (grupo controle e hipóxia crônica (CH) do grupo). Casa do grupo CH por 3 semanas em uma câmara hipobárica (0,4 atm), ea casa do grupo controle em normobaric regulares (1 atm) condições. </li><li> Usar uma câmara hipobárica que consiste de uma caixa de plexiglass com uma pegada de 2 metro quadrado e uma altura de 1,6 metros, como se mostra na Figura 1. </li><li> Continuamente monitorizar e manter uma temperatura de 18 ° C e uma pressão de 0,4 atm. Proporcionar uma ventilação adequada por uma bomba de vácuo, permitindo uma taxa de renovação de ar de 8 m 3 por hora. </li><li> Coloque dois animais na câmara do lixo apropriado. Cada 48 horas, volte a pressão na caixa à condições normobáricas para metadeuma hora para limpar a caixa, na presença dos dois animais, com a caixa mantida closedto impedi-los de escapar. Este método de indução de hipertensão pulmonar tem sido amplamente validado 13. </li><li> A anestesia dos animais <ol><li> Anestesiar os leitões com uma injecção intravenosa inicial de tiopental sódico (10 mg / kg) e manter a anestesia por inalação de isoflurano contínua (1,5 a 3,5%). Aplique duas gotas de gel Carbopol nos olhos dos leitões para prevenir o ressecamento da córnea. </li><li> Colocar os animais em decúbito lateral esquerdo com suas patas dianteiras amarradas em uma posição flexionada para expor o peito. Limpe a pele com água e sabão e, em seguida, fazer a barba usando um barbeador elétrico para remover qualquer cabelo que poderiam impedir a penetração do ultra-som através do peito. </li></ol></li><li> Ecocardiograma </li><li> Acompanhar o desenvolvimento da HAP longitudinalmente e não-invasiva por ecocardiografia. Execute um eco cada semana usando um transdutor de 3 MHz. Record um eletrocardiograma, colocando três eletrodos nas patas direita e esquerda e no lado direito do peito. </li><li> Grave bidimensionais e M-mode dados de imagem em três incidências diferentes (longitudinal, eixo menor e apical) usando sonda a-Doppler. Segure a sonda na mão direita e lugar entre os quarto e quinto espaços intercostais esquerdos. Mover a sonda lentamente para cima e para baixo, girando-o à direita e à esquerda até uma boa resolução de imagem é obtida para as diferentes estruturas cardíacas (ou seja, o septo). A janela acústica difere ligeiramente de um animal para outro, dependendo da posição do coração no peito. </li><li> Grave o ECG ao mesmo tempo para cada um destes incidentes e por pelo menos 10 ciclos cardíacos para permitir análise off-line. Diástole final é definido como o ponto no ciclo cardíaco coincidindo com o início da onda Q no ECG. Sístole final coincide com o início da onda T. </li><li> Medir o fluxo sanguíneo da válvula mitral e tricúspide por umultra-som Doppler vista Pical. Coloque a-Doppler sonda na ponta do manúbrio; a zona de amostragem estava localizada imediatamente acima da válvula para registar o fluxo do sangue de atravessar a válvula. </li><li> Grave a velocidade do sangue durante o ciclo cardíaco por dopplerfluxometria para obter a velocidade-tempo integral do fluxo de sangue através das válvulas mitral e tricúspide e as valvas aórtica e pulmonar. Use a matriz gráfica de vídeo do ecógrafo para armazenar imagens em uma taxa de quadros de 25 por segundo, a fim de obter imagens fixas ou imagens seqüência fornecidos pelo ecógrafo. </li><li> Medir as dimensões e área de superfície das cavidades cardíacas utilizando instrumentos de medição e os contornos das áreas de superfície propostos pelo software integrado no ecógrafo de acordo com as recomendações internacionais 14. </li><li> Meça a espessura livre do ventrículo direito parede durante a diástole e sístole por TM (tempo-motion) de gravação em eixo menor incidência 14. </li><li> MeaCertifique-se o diâmetro da raiz da artéria pulmonar na ponta das válvulas pulmonares na visão eixo menor 14. </li><li> Medir o septo e a parede posterior do ventrículo esquerdo durante a diástole na TM movimento na vista longitudinal no início das ondas Q no ECG e em sístole na ponta da onda T do ECG 14. </li><li> Medir o diâmetro do ventrículo esquerdo diastólico final (DDVE) e diâmetros sistólico final do ventrículo esquerdo (DSFVE). Calcular encurtamento fraccional (FS), utilizando a fórmula FS (%) = (DDFVE-DSFVE) / DDFVE. Medir o diâmetro da aorta e a área de superfície da aurícula direita e à esquerda. </li><li> A partir da velocidade-tempo integral da mitral e os fluxos sanguíneos tricúspide, medir o seguinte: amplitude máxima da onda E e A, a desaceleração do intervalo da onda E, índice de duração, velocidade-tempo 14 fluir. </li><li> A partir de medições Doppler da artéria pulmonar, medir o seguinte: velocidade máxima, ascensão meio-tempo,fluir duração e sua integral 14. </li><li> Avaliar o volume do ventrículo esquerdo pelo método de Simpson 15. </li><li> Armazenar os dados para cada leitão em um banco de dados para posterior análise estatística em todo o grupo. </li></ol> 2. Coração Direito Cateterismo <ol><li> Preparação animal <ol><li> Antes da colocação do cateter pulsátil, porco é colocada numa câmara hipobárica durante 3 semanas, a fim de induzir a hipertensão arterial pulmonar. </li><li> Jejuar os animais durante 24 horas antes da cirurgia (24 horas para alimentos sólidos, de 8 a 12 horas, para a água). </li><li> 24 horas antes de RHC, ter um veterinário bem treinado realizar um exame clínico pré-anestesia para avaliar cor mucosas, tempo de enchimento capilar, pulmão global e funções do coração usando um estetoscópio e temperatura do corpo usando um termômetro retal. </li><li> Administrar as injecções de midazolam (intramuscular, 0,5 mg / kg) e cloridrato de morfina (intramuscular, 0,1 mg / kg) de 15 a 30 min antes da indução of anestesia. Repita injecção de cloridrato de morfina (0,05 a 0,5 mg / kg, por via intramuscular), durante a indução cada 4 a 6 horas. </li><li> Administrar tiopental sódico (10 mg / kg, intravenosa) através de uma injecção de bólus inicial de 5 mg / kg seguida por injecção parcial até que fosse eficaz. Siga este por bolsa e máscara de ventilação até a intubação traqueal. </li><li> Intubação Leitão <ol><li> Lubrifique o tubo com gel pramocaine. Insira uma caneta de metal para dentro do tubo para endurecer-lo e facilitar o processo de intubação. </li><li> Toque na pálpebra para assegurar a anestesia profunda. Realizar intubação por visualização direta da laringe, usando um laringoscópio para elevar a língua e evitar danos ao cabo vocal. Inflar o balão do tubo para evitar problemas relacionados com a regurgitação. </li></ol></li><li> Controle a taxa respiratória em 10-12 respirações por minuto; volume de corrente de 7-10 ml / kg, a pressão de insuflação de 25 a 30 cm de H 2 O e uma fase inspiratória de 2 segundos com um e positivand pressão expiratória de 5 cm H 2 O. </li><li> Anestesiar os animais com isoflurano em 100% de oxigénio (3-5% de indução com o fluxo de oxigénio de 2 a 3 L / min, a manutenção do fluxo de oxigénio de 1,5-2,5% em 1 L / min). Aplicar gel de carbopol à córnea como no passo 1.5.1. </li><li> Inserir um cateter heparinizado na artéria auricular caudal (5 ml de 0,9% de solução salina enriquecida com 5000 UI / ml de heparina) através de infusão subcutânea com cânula verde fixada no lugar com um ponto de sutura. </li><li> Infundir solução de Ringer com lactato (10-20 ml / kg / h). </li><li> Colocar o animal em uma mesa de exame ligeiramente inclinada. Mantenha a cabeça ligeiramente inclinada para baixo para promover o fluxo salivar. </li></ol></li><li> Monitoração <ol><li> Cada 5 min, verificar e registrar os seguintes valores no indivíduo relato de caso anestesia: cor mucosas e tempo de enchimento capilar, tônus ​​muscular mandibular e posição do globo ocular, miosis / midríase, reflexo palpebral. </li><li> Monitorar continuamente o coração e respirataxa tory, oximetria de pulso, temperatura corporal e eletrocardiogramas. Insira um introdutor arterial na artéria femoral. Insira um grande calibre 10 cm de comprimento do cateter, na artéria femoral e monitorar a pressão arterial sistêmica. </li></ol></li><li> Criação do cateter pulsátil NOTA: Este dispositivo médico consiste de dois cateteres colocados lado-a-lado e soldadas entre si. A parte distal do primeiro está ligado a um balão standard com um diâmetro de 20 mm e uma capacidade máxima de volume de 5 ml. O segundo cateter permite a inserção de um fio para facilitar o posicionamento na artéria pulmonar. O dispositivo é de 750 mm de comprimento com um medidor interno de 0,035 e um diâmetro externo de 12 Fr. <ol><li> Para as experiências, realizar pulsação com um pequeno ventilador de animais Harvard 683, que se aplica um vácuo activo para o balão durante a deflação e pressão positiva durante o enchimento, com um volume de 2,5 ml por cada impulso. Use hélio como gás propulsor para a bolaoon bomba, a fim de evitar a embolia gasosa. </li><li> Registam-se os traçados eletrocardiográficos de superfície continuamente para documentar quaisquer alterações do ritmo cardíaco durante o protocolo. Na artéria femural esquerda, ligar-se um dispositivo sensor para um cateter de calibre 20, ligada a um sistema de monitorização hemodinâmica. </li></ol></li><li> O cateterismo cardíaco direito <ol><li> Lavar e raspar o pescoço do animal. Limpar a pele com uma solução anti-séptica cutânea (esfoliação Betadine) utilizando uma compressa de gaze. Para demarcar o local cirúrgico, coloque campos estéreis ao redor do jugular direita entre o ombro direito eo manúbrio. </li><li> Faça uma incisão longitudinal de 4 cm, com tesoura estéril a meio caminho entre o ombro direito eo manúbrio. </li><li> Remova cuidadosamente as camadas da pele e do músculo com uma pinça. Em seguida suavemente remover o tecido conjuntivo em torno da veia ao longo de um comprimento de cerca de 5 cm. Prenda o lado distal para prevenir hemorragias. Coloque um fio ligante em torno do proximal lado para poder controlar a abertura da veia pós-hemi secção. </li><li> Usando um pequeno cinzel muito afiada específico, cortar a veia ao meio transversalmente. Certifique-se de que as bordas da incisão são arrumados. Usando espuma fina, levantar um bordo da incisão e empurre o cateter no lado proximal da veia. Controle do sangramento com fio ligante. </li><li> Introduzir o cateter na veia jugular e empurrar sucessivamente através da veia cava superior, aurícula direita, do ventrículo direito e, finalmente, a artéria pulmonar. </li><li> Grave as pressões ao longo de 10 ciclos cardíacos estáveis, em cada cavidade cardíaca ea artéria pulmonar (T0). Medida de sangue cardíaco fluxo três vezes em intervalos de 1 minuto. </li><li> Posicione o cateter balão na artéria pulmonar sob controle radioscópico. Inflar e desinflar o balão (pulsação) com 1 cm3 de hélio. Continuar pulsação durante 10 min. Pressões gravar mais de 10 ciclos cardíacos estáveis, em cada cavidade cardíaca e da arte pulmonarry e medir o fluxo sanguíneo cardíaco após 10 min (T1). </li><li> Medir o fluxo de sangue cardíaco novamente 30 min depois do protocolo de pulsatilidade (T2). </li></ol></li></ol> 3. NO Medição <ol><li> Conecte-se um saco de Douglas para o tubo de saída de gás respiratório exalado até que esteja completamente preenchido. Coloque-o sobre a in-pipe de um analisador de NO respiração. </li><li> Lentamente e constantemente forçar o ar exalado no analisador comprimindo o saco de Douglas elástica. Medir o saco de escoamento pelo medidor de fluxo do analisador, para manter um fluxo constante. </li></ol> 4. Medições Histologia <ol><li> Sob anestesia, injectar 30 ml de Dolethal (solução injectável para eutanásia) no cateter pulsátil colocado no coração. </li><li> Imediatamente após a eutanásia, abra o baú serrando o manubrium longitudinalmente, ligeiramente mover o coração e manter o pulmão direito. Em seguida, utilizando tesouras de dissecação, cortados dois 2 ou 3 cm3 amostras a partir da middle lóbulo do pulmão. </li><li> Pressão congelar uma amostra em azoto líquido e armazenado a -80 ° C. Fixar a segunda amostra em 3,7% de paraformaldeído durante 24 h e, em seguida, incorporar em parafina para análise histológica subsequente. </li><li> Realizar medições de histologia, como descrito anteriormente 16. Medir a espessura da parede PA como se segue: 2 medições / artéria 10 em artérias / leitão e em leitões 6 / grupo. </li><li> Realizar a análise estatística. Os valores foram expressos como a mudança vezes ± SEM. <ol><li> Para comparar dois meios, utilize o teste t de Student não pareado um. Para comparar mais de duas médias, use uma ANOVA one-way, seguido pelo teste de Dunn. Um p &lt;0,05 foi considerado estatisticamente significativo (*). </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Malenfant, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signal+transduction+in+the+development+of+pulmonary+arterial+hypertension.">Signal transduction in the development of pulmonary arterial hypertension.</a> Pulm Circ. 3 (2), 278-293 (2013).</li><li>Paulin, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signal+transducers+and+activators+of+transcription-3/pim1+axis+plays+a+critical+role+in+the+pathogenesis+of+human+pulmonary+arterial+hypertension.">Signal transducers and activators of transcription-3/pim1 axis plays a critical role in the pathogenesis of human pulmonary arterial hypertension.</a> Circulation. 123 (11), 1205-1215 (2011).</li><li>Courboulin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+for+miR-204+in+human+pulmonary+arterial+hypertension.">Role for miR-204 in human pulmonary arterial hypertension.</a> J Exp Med. 208 (3), 535-548 (2011).</li><li>Bonnet, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+nuclear+factor+of+activated+T+cells+in+pulmonary+arterial+hypertension+can+be+therapeutically+targeted.">The nuclear factor of activated T cells in pulmonary arterial hypertension can be therapeutically targeted.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104 (27), 11418-11423 (2007).</li><li>Meloche, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+for+DNA+damage+signaling+in+pulmonary+arterial+hypertension.">Role for DNA damage signaling in pulmonary arterial hypertension.</a> Circulation. 129 (7), 786-797 (2014).</li><li>Humbert, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+molecular+pathobiology+of+pulmonary+arterial+hypertension.">Cellular and molecular pathobiology of pulmonary arterial hypertension.</a> J Am Coll Cardiol. 43 (12 Suppl S), 13S-24S (2014).</li><li>Archer, S. L., Michelakis, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+evidence-based+approach+to+the+management+of+pulmonary+arterial+hypertension.">An evidence-based approach to the management of pulmonary arterial hypertension.</a> Curr Opin Cardiol. 21 (4), 385-392 (2006).</li><li>Li, M., Scott, D. E., Shandas, R., Stenmark, K. R., Tan, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+pulsatility+flow+induces+adhesion+molecule+and+cytokine+mRNA+expression+in+distal+pulmonary+artery+endothelial+cells.">High pulsatility flow induces adhesion molecule and cytokine mRNA expression in distal pulmonary artery endothelial cells.</a> Ann Biomed Eng. 37 (6), 1082-1092 (2009).</li><li>Li, M., Stenmark, K. R., Shandas, R., Tan, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+pathological+flow+on+pulmonary+artery+endothelial+production+of+vasoactive+mediators+and+growth+factors.">Effects of pathological flow on pulmonary artery endothelial production of vasoactive mediators and growth factors.</a> J Vasc Res. 46 (6), 561-571 (2009).</li><li>Nour, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrapulmonary+shear+stress+enhancement:+a+new+therapeutic+approach+in+pulmonary+arterial+hypertension.">Intrapulmonary shear stress enhancement: a new therapeutic approach in pulmonary arterial hypertension.</a> Pediatr Cardiol. 33 (8), 1332-1342 (2012).</li><li>Barst, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+differential+assessment+of+pulmonary+arterial+hypertension.">Diagnosis and differential assessment of pulmonary arterial hypertension.</a> J Am Coll Cardiol. 43 (12 Suppl S), 40S-47S (2004).</li><li>Galie, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+on+diagnosis+and+treatment+of+pulmonary+arterial+hypertension.+The+Task+Force+on+Diagnosis+and+Treatment+of+Pulmonary+Arterial+Hypertension+of+the+European+Society+of+Cardiology.">Guidelines on diagnosis and treatment of pulmonary arterial hypertension. The Task Force on Diagnosis and Treatment of Pulmonary Arterial Hypertension of the European Society of Cardiology.</a> Eur Heart J. 25 (24), 2243-2278 (2004).</li><li>Naeije, R., Dewachter, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+pulmonary+arterial+hypertension.">Animal models of pulmonary arterial hypertension.</a> Rev Mal Respir. 24 (4 pt 1), 481-496 (2007).</li><li>Via, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+evidence-based+recommendations+for+focused+cardiac+ultrasound.">International evidence-based recommendations for focused cardiac ultrasound.</a> J Am Soc Echocardiogr. 27 (7), e681-e683 (2014).</li><li>Folland, E. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+left+ventricular+ejection+fraction+and+volumes+by+real-time,+two-dimensional+echocardiography.+A+comparison+of+cineangiographic+and+radionuclide+techniques.">Assessment of left ventricular ejection fraction and volumes by real-time, two-dimensional echocardiography. A comparison of cineangiographic and radionuclide techniques.</a> Circulation. 60 (4), 760-766 (1979).</li><li>Meloche, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+role+for+the+advanced+glycation+end-products+receptor+in+pulmonary+arterial+hypertension+etiology.">Critical role for the advanced glycation end-products receptor in pulmonary arterial hypertension etiology.</a> J Am Heart Assoc. 2 (1), e005157 (2013).</li><li>Nour, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrapulmonary+shear+stress+enhancement:+a+new+therapeutic+approach+in+acute+myocardial+ischemia.">Intrapulmonary shear stress enhancement: a new therapeutic approach in acute myocardial ischemia.</a> Int J Cardiol. 168, 4199-4208 (2013).</li><li>Barrier, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Today's+and+tomorrow's+imaging+and+circulating+biomarkers+for+pulmonary+arterial+hypertension.">Today's and tomorrow's imaging and circulating biomarkers for pulmonary arterial hypertension.</a> Cell Mol Life Sci. 69 (17), 2805-2831 (2012).</li><li>Budev, M. M., Arroliga, A. C., Jennings, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+evaluation+of+pulmonary+hypertension.">Diagnosis and evaluation of pulmonary hypertension.</a> Cleve Clin J Med. 70, S9-S17 (2003).</li><li>Barst, R. J., Channick, R., Ivy, D., Goldstein, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+perspectives+with+long-term+pulsed+inhaled+nitric+oxide+for+the+treatment+of+pulmonary+arterial+hypertension.">Clinical perspectives with long-term pulsed inhaled nitric oxide for the treatment of pulmonary arterial hypertension.</a> Pulm Circ. 2 (2), 139-147 (2012).</li><li>Pepke-Zaba, J., Higenbottam, T. W., Dinh-Xuan, A. T., Stone, D., Wallwork, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhaled+nitric+oxide+as+a+cause+of+selective+pulmonary+vasodilatation+in+pulmonary+hypertension.">Inhaled nitric oxide as a cause of selective pulmonary vasodilatation in pulmonary hypertension.</a> Lancet. 338 (8776), 1173-1174 (1991).</li><li>Zapol, W. M., Rimar, S., Gillis, N., Marletta, M., Bosken, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide+and+the+lung.">Nitric oxide and the lung.</a> Am J Respir Crit Care Med. 149 (5), 1375-1380 (1994).</li><li>Stenmark, K. R., Meyrick, B., Galie, N., Mooi, W. J., McMurtry, I. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+pulmonary+arterial+hypertension:+the+hope+for+etiological+discovery+and+pharmacological+cure.">Animal models of pulmonary arterial hypertension: the hope for etiological discovery and pharmacological cure.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 297 (6), L1013-L1032 (2009).</li><li>Torre-Amione, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversal+of+secondary+pulmonary+hypertension+by+axial+and+pulsatile+mechanical+circulatory+support.">Reversal of secondary pulmonary hypertension by axial and pulsatile mechanical circulatory support.</a> J Heart Lung Transplant. 29 (2), 195-200 (2010).</li></ol>

The authors would like to thank the INRA institute, which housed the piglets, and Cardio Innovating systems for the funding.

Pela primeira vez, mostrou-se que as alterações do fluxo pulsátil pulmonar está causalmente relacionada com o desenvolvimento de hipertensão arterial pulmonar hipóxica secundária à exposição crónica. Esta abordagem translacional fornece evidências de que induzir um aumento artificial fluxo pulsátil pulmonar utilizando um cateter projetado especificamente melhora a hipertensão pulmonar, provavelmente pelo aumento NO geração. Estes resultados não são apenas original, eles sã...

A hipertensão arterial pulmonar é uma doença fatal que afeta a vasculatura pulmonar. Existe um consenso no campo que um desequilíbrio entre o aumento na vasoconstritores (endotelina, a serotonina) e uma diminuição no vasodilatadores (NO, prostaciclina) contribui para o desenvolvimento de HAP. Ao longo do tempo, este fenótipo pró-constritiva evolui para um fenótipo pró-proliferativo e anti-apoptótica complexo, contribuindo para o desenvolvimento de lesões vasculares 1. A exposição prolongada a vasoconstritores leva a um aumento significativo e sustentado na [Ca2 +] i em artéria pulmonar de células do músculo liso, o que permite a activação de vários factores de transcrição regulados em cálcio, tais como NFAT 2-4, promovendo a proliferação e PASMC resistência a um apoptose fenótipo 5. Este fenótipo leva a lesões vasculares pulmonares, contribuindo para um aumento na pressão PA e res pulmonaresistance, o que acaba por conduzir a insuficiência cardíaca direita fatal 6. Actualmente, não existe nenhum tratamento disponível que inverte HAP embora existam vários que melhoram a qualidade de vida dos pacientes 7. Entre estes tratamentos, a eficácia do NO inalado tratamento foi demonstrada, mas devido à sua curta semi-vida é de difícil utilização na prática clínica. Por esta razão, os tratamentos mais estáveis ​​e duráveis ​​têm sido preferidos, tais como análogos da prostaciclina, ou bloqueadores do receptor de endotelina 7. Para desenvolver melhores tratamentos, é essencial para melhorar e ampliar o conhecimento da fisiopatologia da HAP. Pulsatilidade é um estímulo bem conhecido activação vasodilatação induzida por tensão de corte, de proteger a artéria distai não elástico de lesões de fluxo de alta pressão 8,9. Em um modelo de HAP secundária a shunt aortopulmonar cirúrgico, Nour et al. Demonstraram str cisalhamento intrapulmonarmediada por ess realce a função endotelial 10. Vários estudos têm demonstrado que o NO, prostaciclina e ET-1 expressão estão estreitamente regulada por alterações no fluxo pulsátil. De fato, um aumento moderado do fluxo pulsátil aumenta a atividade da eNOS e os níveis de prostaciclina, sendo que ambos são reduzidos em HAP. Modulação de fluxo pulsátil provavelmente está implicada na etiologia da hipertensão arterial pulmonar e aumento artificial é uma forma atractiva e de novo a aumentar a produção de NO e prostaciclina na circulação pulmonar. O presente estudo tem como objetivo avaliar os efeitos de um 10 min fluxo pulsátil através de um cateter pulsátil desenvolvido recentemente em medidas hemodinâmicas em um modelo de hipertensão pulmonar (HP) em leitões em quem foi induzida hipóxia. Postula-se que o aumento da pulsatilidade da artéria pulmonar induz relaxamento vascular das artérias pulmonares, diminuindo assim a pressão da artéria pulmonar. Gato cardíaca direitaheterization (RHC) é uma intervenção clínica fundamental para o diagnóstico e acompanhamento de pacientes com HAP. Na verdade, é a maneira mais confiável de diagnosticar HAP e permite aos médicos para avaliar a reatividade vascular 11,12, bem como a progressão da doença. Na verdade, cada paciente HAP sofre RHC várias vezes. O presente estudo em animais de grande porte tem como objetivo demonstrar a eficácia e segurança de cateteres pulsátil na avaliação e tratamento da hipertensão arterial pulmonar durante um procedimento normal RHC. Porque cateteres pulsátil já estão disponíveis e RHC é realizada rotineiramente em pacientes com HAP, este estudo fornece todas as informações necessárias para ser capaz de realizar ensaios clínicos rapidamente.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1421">
	<tbody>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:311px;">Drugs for anesthesia</td>
			<td style="width:336px;"></td>
			<td style="width:141px;"></td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">sodium thiopental, THIOPENTAL SODIUM</td>
			<td>Abbott, France</td>
			<td>0000071-73-8</td>
			<td>powder 
			3 place Gustave Eiffe 94518 RUNGIS CEDEX.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;isoflurane, FORANE</td>
			<td>Abbott, France</td>
			<td style="width:141px;">05260-05</td>
			<td>glass bottle 250 ml 
			3 place Gustave Eiffe 94518 RUNGIS CEDEX.</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">midazolam, Hypnovel</td>
			<td>Accord Healthcare&#160;</td>
			<td>Vidal</td>
			<td>injectable ampoules 1mg/ml 
			45 Rue du Faubourg de Roubaix 59000 Lille France</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">pramocaine,TRONOTHANE 1 %&#160;</td>
			<td>Laboratoires LISAPHARM</td>
			<td>Vidal</td>
			<td>Gel appl locale T/30g 
			3, rue Scheffer. 75016 Paris.</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">morphine chlohydrate Lavoisier</td>
			<td>CMD Lavoisier Laboratoires CHAIX et DU MARAIS</td>
			<td>Vidal</td>
			<td>injectable ampoules&#160; 
			7, rue Labie -75017 Paris - France</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:311px;">Acrylates Copolymer-Carbopol&#174; Aqua SF-1 Polymer</td>
			<td>Lubrizol</td>
			<td></td>
			<td>gel appl local 
			Elys&#233;es La D&#233;fense 19 le Parvis 92073 Paris la d&#233;fense</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Material&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ventilateur Harvard 683</td>
			<td>Harvard apparatus</td>
			<td>Harvard apparatus</td>
			<td>DRIM 75 rue des Anglais - 78700 Conflans Ste Honorine &#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Echographe Voluson E8 with a 3,5 MHz probe</td>
			<td>General Electric</td>
			<td>GEHealthcare</td>
			<td>DRIM 75 rue des Anglais - 78700 Conflans Ste Honorine &#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Pulsatil Catheter</td>
			<td>Cardio inovating system</td>
			<td></td>
			<td>Cardio innovative systems, 33 rue Vivienne, Paris, France 75002</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">NO breath Analyseur</td>
			<td>Respur</td>
			<td>Respur</td>
			<td>26 rue Felix Rouget 95490 Vaureal France</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

increasing pulmonary artery pulsatile flow improves hypoxic pulmonary hypertension in piglets

A hipertensão arterial pulmonar (HAP) é uma doença que afeta as artérias pulmonares distais (PA). Estas artérias são deformados, levando à insuficiência ventricular direita. Os tratamentos atuais são limitadas. Fisiologicamente, o fluxo de sangue pulsátil é prejudicial para a vasculatura. Em resposta ao estresse pulsátil sustentado, vasos liberar óxido nítrico (NO) para induzir vasodilatação para auto-proteção. Com base nesta observação, este estudo desenvolveu um protocolo para avaliar se um fluxo de sangue pulsátil pulmonar artificial poderia induzir uma diminuição dependente de NO na pressão da artéria pulmonar. Um grupo de leitões foi exposta a hipoxia crónica, durante 3 semanas, e em comparação com um grupo de leitões de controlo. Uma vez por semana, os leitões foram submetidos ao ecocardiograma para avaliar a gravidade HAP. No final da exposição a hipoxia, os leitões foram submetidos a um protocolo pulsátil utilizando um cateter pulsátil. Depois de ter sido anestesiados e preparados para cirurgia, a veia jugular do leitão foi isolado e a cAtheter foi introduzido através do átrio direito, o ventrículo direito ea artéria pulmonar, sob controle radioscópico. A pressão arterial pulmonar (PAP) foi medida antes (T0), imediatamente depois (T1) e 30 min depois (T2), o protocolo pulsátil. Demonstrou-se que este protocolo pulsátil é um método seguro e eficaz de indução de uma redução significativa na PAP média através de um mecanismo dependente de NO. Esses dados abrem novas perspectivas para o manejo clínico da HAP.

O aumento de artéria pulmonar fluxo pulsátil Melhora Crónica Induzida Hypoxic Hipertensão Pulmonar em Leitões Antes da exposição dos animais a um aumento do fluxo pulsátil, ultra-sons foi utilizado de forma não invasiva para verificar que os leitões tinham desenvolvido hipertensão pulmonar. Como mostrado na Figura 2, com três semanas de hipóxia crónica induzida o desenvolvimento de hipertensão pulmonar em leitões, caracterizada por uma redução significativa...

Watch this Scientific Journal Video about Increasing Pulmonary Artery Pulsatile Flow Improves Hypoxic Pulmonary Hypertension in Piglets at JoVE.com

Increasing Pulmonary Artery Pulsatile Flow Improves Hypoxic Pulmonary Hypertension in Piglets | Medicine | Video

Increasing Pulmonary Artery Pulsatile Flow Improves Hypoxic Pulmonary Hypertension in Piglets

Pulmonary hypertension is associated with a significant reduction in pulmonary artery pulsatility, contractility and elasticity, contributing to an increase in pulmonary artery pressure and pulmonary resistance. Using a hypoxic piglet model, this study demonstrated that improving pulmonary artery plasticity using a newly developed pulsatile catheter improves hypoxic pulmonary hypertension.

O aumento de artéria pulmonar fluxo pulsátil melhora Hypoxic Hipertensão Pulmonar em Leitões

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a disease affecting distal pulmonary arteries (PA). These arteries are deformed, leading to right ventricular ...

increasing-pulmonary-artery-pulsatile-flow-improves-hypoxic-pulmonary

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Biology

Medicine

Human Biology

Circulatory and Pulmonary Systems

SCIENTISTS IN ACTION

14.0K visualizações.  Laval University. Pulmonary hypertension is associated with a significant reduction in pulmonary artery pulsatility, contractility and elasticity, contributing to an increase in pulmonary artery pressure and pulmonary resistance. Using a hypoxic piglet model, this study demonstrated that improving pulmonary artery plasticity using a newly developed pulsatile catheter improves hypoxic pulmonary hypertension.

Vídeo: Increasing Pulmonary Artery Pulsatile Flow Improves Hypoxic Pulmonary Hypertension in Piglets

Human Internal Mammary Artery (IMA) Transplantation and Stenting: A Human Model to Study the Development of In-Stent Restenosis

Preclinical in vivo research models to investigate pathobiological and pathophysiological processes in the development of intimal hyperplasia after vessel stenting are crucial for translational approaches1,2.
The commonly used animal models include mice, rats, rabbits, and pigs3-5. However, the translation of these models into clinical settings remains difficult, since those biological processes are already studied in animal vessels but never performed before in human research models6,7. In this video we demonstrate a new humanized model to overcome this translational gap. The shown procedure is reproducible, easy, and fast to perform and is suitable to study the development of intimal hyperplasia and the applicability of diverse stents.
This video shows how to perform the stent technique in human vessels followed by transplantation into immunodeficient rats, and identifies the origin of proliferating cells as human.

Human Internal Mammary Artery IMA Transplantation and Stenting: A Human Model to Study the Development of In-Stent Restenosis

This video shows a model to study the development of intimal hyperplasia after stent deployment using a human vessel (IMA) in an immunodeficient rat model.

Humanos da artéria mamária interna (IMA) Transplante e implante de stent: um modelo humano para estudar o desenvolvimento de reestenose intra-stent

Preclinical in vivo research models to investigate pathobiological and pathophysiological processes in the development of intimal hyperplasia after vessel ...

Medicina

Videomorphometric Analysis of Hypoxic Pulmonary Vasoconstriction of Intra-pulmonary Arteries Using Murine Precision Cut Lung Slices

Acute alveolar hypoxia causes pulmonary vasoconstriction (HPV) - also known as von Euler-Liljestrand mechanism - which serves to match lung perfusion to ventilation. Up to now, the underlying mechanisms are not fully understood. The major vascular segment contributing to HPV is the intra-acinar artery. This vessel section is responsible for the blood supply of an individual acinus, which is defined as the portion of lung distal to a terminal bronchiole. Intra-acinar arteries are mostly located in that part of the lung that cannot be selectively reached by a number of commonly used techniques such as measurement of the pulmonary artery pressure in isolated perfused lungs or force recordings from dissected proximal pulmonary artery segments1,2. The analysis of subpleural vessels by real-time confocal laser scanning luminescence microscopy is limited to vessels with up to 50 &#181;m in diameter3.
We provide a technique to study HPV of murine intra-pulmonary arteries in the range of 20-100 &#181;m inner diameters. It is based on the videomorphometric analysis of cross-sectioned arteries in precision cut lung slices (PCLS). This method allows the quantitative measurement of vasoreactivity of small intra-acinar arteries with inner diameter between 20-40 &#181;m which are located at gussets of alveolar septa next to alveolar ducts and of larger pre-acinar arteries with inner diameters between 40-100 &#181;m which run adjacent to bronchi and bronchioles. In contrast to real-time imaging of subpleural vessels in anesthetized and ventilated mice, videomorphometric analysis of PCLS occurs under conditions free of shear stress. In our experimental model both arterial segments exhibit a monophasic HPV when exposed to medium gassed with 1% O2 and the response fades after 30-40 min at hypoxia.

Hypoxic pulmonary vasoconstriction (HPV) is an important physiological phenomenon by which at alveolar hypoxia lung perfusion is matched to ventilation. The major vascular segment contributing to HPV is the intra-acinar artery. Here, we describe our protocol for the analysis of HPV of murine pulmonary vessels with diameters of 20-100 &mu;m.

Análise videomorfométrica da vasoconstrição pulmonar hipoxica de artérias intra-pulmonares usando fatias pulmonares cortadas por precisão de murina

Acute alveolar hypoxia causes pulmonary vasoconstriction (HPV) - also known as von Euler-Liljestrand mechanism - which serves to match lung perfusion to ...

Automated Measurement of Microcirculatory Blood Flow Velocity in Pulmonary Metastases of Rats

Because the lung is a major target organ of metastatic disease, animal models to study the physiology of pulmonary metastases are of great importance. However, very few methods exist to date to investigate lung metastases in a dynamic fashion at the microcirculatory level, due to the difficulty to access the lung with a microscope. Here, an intravital microscopy method is presented to functionally image and quantify the microcirculation of superficial pulmonary metastases in rats, using a closed-chest pulmonary window and automated analysis of blood flow velocity and direction. The utility of this method is demonstrated to measure increases in blood flow velocity in response to pharmacological intervention, and to image the well-known tortuous vasculature of solid tumors. This is the first demonstration of intravital microscopy on pulmonary metastases in a closed-chest model. Because of its minimized invasiveness, as well as due to its relative ease and practicality, this technology has the potential to experience widespread use in laboratories that specialize on pulmonary tumor research.

A method is presented to measure microcirculatory blood flow velocity in pulmonary cancer metastases of the pleural surface in rats in an automated fashion, using closed-chest pulmonary intravital microscopy. This model has potential to be used as a widespread tool to perform physiologic research on pulmonary metastases in rodents.

Automated Medição da microcirculação sanguínea velocidade na Pulmonar Metástases of Rats

Because the lung is a major target organ of metastatic disease, animal models to study the physiology of pulmonary metastases are of great importance. ...

Chronic Thromboembolic Pulmonary Hypertension and Assessment of Right Ventricular Function in the Piglet

An original piglet model of Chronic Thromboembolic Pulmonary Hypertension (CTEPH) associated with chronic Right Ventricular (RV) dysfunction is described. Pulmonary Hypertension (PH) was induced in 3-week-old piglets by a progressive obstruction of the pulmonary vascular bed. A ligation of the left Pulmonary Artery (PA) was performed first through a mini-thoracotomy. Second, weekly embolizations of the right lower pulmonary lobe were done under fluoroscopic guidance with n-butyl-2-cyanoacrylate during 5 weeks. Mean Pulmonary Arterial Pressure (mPAP) measured by ritght heart catheterism, increased progressively, as well as Right Atrial pressure and Pulmonary Vascular Resistances (PVR) after 5 weeks compared to sham animals. Right Ventricular (RV) structural and functional remodeling were assessed by transthoracic echocardiography (RV diameters, RV wall thickness, RV systolic function). RV elastance and RV-pulmonary coupling were assessed by Pressure-Volume Loops (PVL) analysis with conductance method. Histologic study of the lung and the right ventricle were also performed. Molecular analyses on RV fresh tissues could be performed through repeated transcutaneous endomyocardial biopsies. Pulmonary microvascular disease in obstructed and unobstructed territories was studied from lung biopsies using molecular analyses and pathology. Furthermore, the reliability and the reproducibility was associated with a range of PH severity in animals. Most aspects of the human CTEPH disease were reproduced in this model, which allows new perspectives for the understanding of the underlying mechanisms (mitochondria, inflammation) and new therapeutic approaches (targeted, cellular or gene therapies) of the overloaded right ventricle but also pulmonary microvascular disease.

Chronic Thromboembolic Pulmonary Hypertension (CTEPH) and Right Ventricular (RV) dysfunction were induced in piglets by progressive obstruction of the pulmonary arteries. Consequences were remarkably similar to those observed in CTEPH patients. This animal model would be a very useful tool for pathophysiology and therapeutic experiments on CTEPH and RV failure.

Tromboembólica crônica Hipertensão Pulmonar e Avaliação da Função Ventricular Direita no Piglet

An original piglet model of Chronic Thromboembolic Pulmonary Hypertension (CTEPH) associated with chronic Right Ventricular (RV) dysfunction is described. ...

Hemodynamic Characterization of Rodent Models of Pulmonary Arterial Hypertension

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a rare disease of the pulmonary vasculature characterized by endothelial cell apoptosis, smooth muscle proliferation and obliteration of pulmonary arterioles. This in turn results in right ventricular (RV) failure, with significant morbidity and mortality. Rodent models of PAH, in the mouse and the rat, are important for understanding the pathophysiology underlying this rare disease. Notably, different models of PAH may be associated with different degrees of pulmonary hypertension, RV hypertrophy and RV failure. Therefore, a complete hemodynamic characterization of mice and rats with PAH is critical in determining the effects of drugs or genetic modifications on the disease. 
Here we demonstrate standard procedures for assessment of right ventricular function and hemodynamics in both rat and mouse PAH models. Echocardiography is useful in determining RV function in rats, although obtaining standard views of the right ventricle is challenging in the awake mouse. Access for right heart catheterization is obtained by the internal jugular vein in closed-chest mice and rats. Pressures can be measured using polyethylene tubing with a fluid pressure transducer or a miniature micromanometer pressure catheter. Pressure-volume loop analysis can be performed in the open chest. After obtaining hemodynamics, the rodent is euthanized. The heart can be dissected to separate the RV free wall from the left ventricle (LV) and septum, allowing an assessment of RV hypertrophy using the Fulton index (RV/(LV+S)). Then samples can be harvested from the heart, lungs and other tissues as needed.

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a disease of pulmonary arterioles that leads to their obliteration and the development of right ventricular failure. Rodent models of PAH are critical in understanding the pathophysiology of PAH. Here we demonstrate hemodynamic characterization, with right heart catheterization and echocardiography, in the mouse and rat.

Hemodinâmica Caracterização de roedores modelos de Hipertensão Arterial Pulmonar

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a rare disease of the pulmonary vasculature characterized by endothelial cell apoptosis, smooth muscle ...

Shunt Surgery, Right Heart Catheterization, and Vascular Morphometry in a Rat Model for Flow-induced Pulmonary Arterial Hypertension

In this protocol, PAH is induced by combining a 60 mg/kg monocrotalin (MCT) injection with increased pulmonary blood flow through an aorto-caval shunt (MCT+Flow). The shunt is created by inserting an 18-G needle from the abdominal aorta into the adjacent caval vein. Increased pulmonary flow has been demonstrated as an essential trigger for a severe form of PAH with distinct phases of disease progression, characterized by early medial hypertrophy followed by neointimal lesions and the progressive occlusion of the small pulmonary vessels. To measure the right heart and pulmonary hemodynamics in this model, right heart catheterization is performed by inserting a rigid cannula containing a flexible ball-tip catheter via the right jugular vein into the right ventricle. The catheter is then advanced into the main and the more distal pulmonary arteries. The histopathology of the pulmonary vasculature is assessed qualitatively, by scoring the pre- and intra-acinar vessels on the degree of muscularization and the presence of a neointima, and quantitatively, by measuring the wall thickness, the wall-lumen ratios, and the occlusion score.

This protocol describes a surgical procedure to create a model for flow-induced pulmonary arterial hypertension (PAH) in rats and the procedures to analyze the principle hemodynamic and histological end-points in this model.

A cirurgia de derivação, coração direito Cateterismo e Vascular morfometria em um modelo de rato para induzida Fluxo de Hipertensão Arterial Pulmonar

In this protocol, PAH is induced by combining a 60 mg/kg monocrotalin (MCT) injection with increased pulmonary blood flow through an aorto-caval shunt ...

Murine Echocardiography of Left Atrium, Aorta, and Pulmonary Artery

The present methodology teaches the investigator how to measure and use the LAV as a surrogate of chronic elevations in Left Ventricular diastolic pressure through echocardiography, as well as to obtain measurements of the Aorta and PA diameter in mice.
Mice older than 10 d of age can be analyzed using the present technique. The technique is composed of 3 main steps: set-up, image acquisition, and image analysis. The set-up step consists of getting the mouse anesthetized with 1% isoflurane, shaving it, and taping it in a supine position to a heated EKG board where the image acquisition will take place. The image acquisition step consists of learning to identify the cardiac structures and obtaining all the required images with its correspondent probe and axis in order to be able to calculate volumes and diameters. The image analysis step consists of measuring the previously acquired images with the aid of computer software.
Advantages of the proposed technique include a fast (15 min) procedure that would allow the researcher to evaluate interventions in a non-invasive, non-terminal approach and therefore follow the same mouse over time; each mouse can be used as its own control. This fact plus having the same operator perform all the acquisition and analysis for the entire experiment minimizes the limitation of operator-dependency. The present methodology is useful for mouse researchers in cardiovascular and pulmonary medicine.

The following protocol describes the methodology for the acquisition and analysis of echocardiographic images used to obtain the Left Atrial Volume (LAV), Aorta (Ao) diameter, and Pulmonary Artery (PA) diameter in mice. This technique is a non-invasive, non-terminal procedure that allows assessment of the cardiopulmonary function.

Murino Ecocardiografia de Esquerda Atrium, Aorta, ea artéria pulmonar

The present methodology teaches the investigator how to measure and use the LAV as a surrogate of chronic elevations in Left Ventricular diastolic ...

Left Atrial Stenosis Induced Pulmonary Venous Arterialization and Group 2 Pulmonary Hypertension in Rat

The mechanism of mitral stenosis-induced pulmonary venous arterialization and group 2 pulmonary hypertension (PH) is unclear. There is no rodent model of group 2 PH, due to mitral stenosis (MS), to facilitate the investigation of disease mechanisms and potential therapeutic strategies. We present a novel rat model of pulmonary venous congestion-induced pulmonary venous arterialization and group 2 PH caused by left atrial stenosis (LAS). LAS is achieved by constricting the left atrium using a half-closed titanium clip. After the LAS surgery, a rat model with a transmitral inflow velocity greater than or equal to 2.0 m/s on echocardiography gradually develops pulmonary venous arterialization and group 2 PH over an 8- to 10-week period. In this protocol, we provide the step-by-step procedure of how to perform the LAS surgery. The presented LAS rat model mimics MS in humans and is useful for studying the underlying molecular mechanism of pulmonary venous arterialization and for the preclinical evaluation of therapies for group 2 PH.

Left atrial stenosis (LAS) is a novel surgical technique used for studying group 2 pulmonary hypertension (PH) and mechanisms underlying pulmonary venous arterialization. Here, we present a protocol to constrict the left atrium using a titanium clip to cause pulmonary venous arterialization and moderate PH in a rat.

Estenose Atrial Esquerdo induzida Arterialization venoso pulmonar e hipertensão pulmonar do grupo 2 no rato

The mechanism of mitral stenosis-induced pulmonary venous arterialization and group 2 pulmonary hypertension (PH) is unclear. There is no rodent model of ...

The Left Pneumonectomy Combined with Monocrotaline or Sugen as a Model of Pulmonary Hypertension in Rats

In this protocol, we detail the correct procedural steps and necessary precautions to successfully perform a left pneumonectomy and induce PAH in rats with the additional administration of monocrotaline (MCT) or SU5416 (Sugen). We also compare these two models to other PAH models commonly used in research. In the last few years, the focus of animal PAH models has moved towards studying the mechanism of angioproliferation of plexiform lesions, in which the role of increased pulmonary blood flow is considered as an important trigger in the development of severe pulmonary vascular remodeling. One of the most promising rodent models of increased pulmonary flow is the unilateral left pneumonectomy combined with a "second hit" of MCT or Sugen. The removal of the left lung leads to increased and turbulent pulmonary blood flow and vascular remodeling. Currently, there is no detailed procedure of the pneumonectomy surgery in rats. This article details a step-by-step protocol of the pneumonectomy surgical procedure and post-operative care in male Sprague-Dawley rats. Briefly, the animal is anesthetized and the chest is opened. Once the left pulmonary artery, pulmonary vein, and bronchus are visualized, they are ligated and the left lung is removed. The chest then closed and the animal recovered. Blood is forced to circulate only on the right lung. This increased vascular pressure leads to a progressive remodeling and occlusion of small pulmonary arteries. The second hit of MCT or Sugen is used one week post-surgery to induce endothelial dysfunction. The combination of increased blood flow in the lung and endothelial dysfunction produces severe PAH. The primary limitation of this procedure is that it requires general surgical skills.

The rodent left pneumonectomy is a valuable technique in pulmonary hypertension research. Here, we present a protocol to describe the rat pneumonectomy procedure and postoperative care to ensure minimal morbidity and mortality.

A pneumonectomia esquerda combinado com Monocrotaline ou Sugen como modelo de hipertensão pulmonar em ratos

In this protocol, we detail the correct procedural steps and necessary precautions to successfully perform a left pneumonectomy and induce PAH in rats ...

Induction and Characterization of Pulmonary Hypertension in Mice using the Hypoxia/SU5416 Model

Pulmonary Hypertension (PH) is a pathophysiological condition, defined by a mean pulmonary arterial pressure exceeding 25 mm Hg at rest, as assessed by right heart&#160;catheterization. A broad spectrum of diseases can lead to PH, differing in their etiology, histopathology, clinical presentation, prognosis, and response to&#160;treatment. Despite significant progress in the last years, PH remains an uncured disease. Understanding the underlying mechanisms can pave the way for the development of new therapies. Animal models are important research tools to achieve this goal. Currently, there are several models available for recapitulating PH. This protocol describes a two-hit mouse PH model. The stimuli for PH development are hypoxia and the injection of SU5416, a vascular endothelial growth factor (VEGF) receptor antagonist. Three weeks after initiation of Hypoxia/SU5416, animals develop pulmonary vascular remodeling imitating the histopathological changes observed in human PH (predominantly Group 1). Vascular remodeling in the pulmonary circulation results in the remodeling of the right&#160;ventricle (RV). The procedures for measuring RV pressures (using the open chest method), the morphometrical analyses of the RV (by dissecting and weighing both cardiac ventricles) and the histological assessments of the remodeling (both pulmonary by assessing vascular remodeling and cardiac by assessing RV cardiomyocyte hypertrophy and fibrosis) are described in detail. The advantages of this protocol are the possibility of the application both in wild type and in genetically modified mice, the relatively easy and low-cost implementation, and the quick development of the disease of interest (3 weeks). Limitations of this method are that mice do not develop a severe phenotype and PH is reversible upon return to normoxia. Prevention, as well as therapy studies, can easily be implemented in this model, without the necessity of advanced skills (as opposed to surgical rodent models).

This protocol describes the induction of pulmonary hypertension (PH) in mice based on the exposure to hypoxia and the injection of a VEGF receptor antagonist. The animals develop PH and right ventricular (RV) hypertrophy 3 weeks after the initiation of the protocol. The functional and morphometrical characterization of the model is also presented.

Indução e Caracterização da Hipertensão Pulmonar em Camundongos usando o Modelo De Hypoxia/SU5416

Pulmonary Hypertension (PH) is a pathophysiological condition, defined by a mean pulmonary arterial pressure exceeding 25 mm Hg at rest, as assessed by ...