Os autores gostaria de agradecer Curetis GmbH para apoiar este estudo.

Este estudo foi aprovado pelo Comitê de ética local (046/09, Rev. 3). Consentimento informado e declaração de privacidade de dados foram obtidos de todos os pacientes incluídos.
1. comum aspiração
Nota: O procedimento deve ser realizado em um teatro cirúrgico ou uma sala de intervenção com condições assépticas comparáveis. Assistência por uma enfermeira ou assistência do médico é útil, mas não obrigatórios.
<ol><li>Posicione o paciente em posição supina sobre uma cama de exame. Certifique-se de que a articulação de interesse é livre de roupa. Encurte os pelos do corpo denso ou longa usando tosquiadeiras elétricas. Não remova pelos do corpo com uma navalha. Posicione um fluoroscópio no sentido ântero-posterior, se a articulação do quadril deve ser perfurado. Se o joelho está a ser perfurado, coloque um rolo de joelho sob o joelho do paciente, de forma a que o joelho baseia-se em uma posição ligeiramente flexionado13.</li>
	<li>Preparar uma tabela de instrumento com o seguinte equipamento esterilizado: cotonetes estéreis, um pano de cobertura estéril fenestrado, um bisturi estéril descartável, lâmina pontiaguda (tipo #11) e seringa estéril de 10 mL com cânula estéril (calibre 20, 80 mm). Estabelecidos desinfectante da pele alcoólicas, tubos de colheita de sangue e um frasco de cultura de sangue pediátrica separadamente.</li>
	<li>Vestir um avental cirúrgico, capuz e máscara e colocar as luvas estéreis.</li>
	<li>Lave a pele do paciente no local da punção (por exemplo, recessus superior14 para a área de portal do joelho e ântero-lateral para o quadril) com um desinfetante de pele. Nota: Importa o tempo de exposição necessário para o desinfetante usado (geralmente 90 s no joelho, 120 s no quadril para desinfetantes alcoólicas).</li>
	<li>
Cobrir o local da punção com um pano de cobertura estéril fenestrado. Identifica o local de punção. Nota: Para o joelho, o site correto é 2 cm acima do polo superior da patela e a lateral de 2 cm para a faceta lateral. Para o quadril, encontrar a espinha ilíaca ântero-superior e move-se caudalmente até que, em consonância com a sínfise superior. Certifique-se de que o site é lateral à artéria femoral (aproximadamente 4 cm), que pode sempre ser palpada15.<ol>
<li>Fazer uma incisão pequena facada através da pele (3 a 4 mm largura e profundidade) com a lâmina de bisturi apontado no local da punção. Não são aplicáveis os anestésicos locais podem causar falsos negativos na cultura microbiológica, devido a seu efeito bacteriostático.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Fixe a cânula o Luer slip da seringa. Inserir a cânula através da incisão de facada. No intervalo superior da articulação do joelho, visam a um ângulo de 45°, dorsal e medial, em direção ao recesso abaixo do polo superior da patela e insira a agulha a uma profundidade de aproximadamente 5 cm. Aspire a sinovial desenhando-se para fora do pistão da seringa.
	<ol>
<li>Use o fluoroscópio orientação quando perfurar uma articulação do quadril. Introduza a agulha no local da punção, visando medialmente um ângulo de 60°. No fluoroscópio, certifique-se de que a ponta da agulha está apontada para o pescoço de prótese. Avança a cânula a uma profundidade de aproximadamente 8 cm (mais profundo em pacientes adiposos) enquanto aspira, até se atingir a sinovial. Segure a agulha em posição enquanto aspiração, para evitar a raspagem da superfície da prótese. Nota: O contacto da ponta da agulha com a prótese garante posição intra-articular. Geralmente, não mais que 5 mL de fluido pode ser aspirada forma uma articulação do quadril, uma articulação de joelho vai render mais de 10 mL.</li>
		<li>Após a remoção da cânula, aplica um curativo estéril para a incisão de facada. Para evitar a formação de hematoma, aplica um curativo na perna com leve compressão.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Transferi o aspirado conjunto coletado em recipientes de amostra. Certifique-se de técnicas de trabalho estéril em todo.
	<ol>
<li>Para inoculação do frasco com o líquido aspirado conjunto cultura sangue pediátrica, Desinfecte a membrana do balão cultura sangue pediátrica com desinfectante alcoólico. Colocar uma cânula fresca para a seringa e injetar 1 a 3 mL de aspirado sinovial o frasco de cultura de sangue. Misture por suave agitação ou rotação16.</li>
		<li>Para a preparação de um espécime aspirado conjunta nativo, retire a cânula da seringa. Abra um tubo de coleta de sangue sem aditivos e injectar 1 mL de aspirado por este tubo de coleta. Substitua e aperte a tampa para análise PCR. Nota: Envie a amostra para o laboratório de microbiologia sem demora para análise PCR. Da mesma amostra, as culturas aeróbias e anaeróbicas microbiológicas convencionais também podem ser definidas até17.</li>
		<li>Transferência de 1 a 4 mL de aspirado o conjunto em um tubo de coleta de sangue contendo EDTA para2, de contagem e diferenciação celular. Envie a amostra para um laboratório de bioquímica sem qualquer atraso.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. PCR diagnóstico
<ol><li>Certifique-se de todos os três dispositivos (o lysator, o analisador e o cockpit; consulte a tabela de materiais) estão funcionando corretamente. Estabelecidos todos os suprimentos necessários para a realização do teste (o cartucho PCR, um tubo de mistura de mestre, o tubo de amostra e tampa tubo de amostra, um 0 - 200 micropipeta µ l e pontas de pipeta estéril) sobre a bancada de trabalho.</li>
	<li>Degele o tubo de mistura de mestre antes de iniciar o procedimento, definindo-o em temperatura ambiente. Todos os consumíveis (tubo de mistura de mestre, cartucho e tubo de amostra) já são prelabeled com um código de barras.</li>
	<li>Retire a tampa do tubo de amostra. Tomar 180 µ l da amostra coletada (aspirado conjunto, consulte a seção 1; ou fluido sonication, consulte a secção 4) com uma pipeta e transferência na amostra do tubo. Feche o tubo de amostra com a tampa do tubo de amostra contendo proteína quinase K e um gene de controle interno para o controle de qualidade de fluxo de trabalho inteiro.</li>
	<li>No cockpit, abra o software operacional tocando o "novo teste" botão no canto inferior esquerdo. Inserir dados do paciente ou um ID de amostra através da tela sensível ao toque. Para selecionar a amostra, primeiro escolha "ITI-cartucho" na lista suspensa, em seguida, "ortopedia" ao modo de aplicação e finalmente selecione "líquido sinovial" ou "fluido sonication" como tipo de amostra. Pressione o botão Iniciar.</li>
	<li>Digitalize o código de barras na parte inferior do tubo de amostra. Insira o tubo de amostra a lysator. Nota: O processo de Lise iniciará automaticamente e leva cerca de 30 min para terminar. Contagem regressiva do timer na tela lysator indicará quando a Lise é terminado.</li>
	<li>Selecione a amostra na tela para destravar o tubo de amostra de lysator a cabine. Retire o tubo de amostra do lysator e feche a tampa superior do lysator. Transferi o tubo de amostra na ranhura do tubo de amostra do cartucho do PCR. Insira o tubo de mastermix descongelada no slot do cartucho PCR mastermix.</li>
	<li>Siga as instruções no monitor da cabine, o cartucho PCR com tubo mastermix e amostra de digitalização.</li>
	<li>Insira o cartucho de PCR no slot de cartucho indicado do analisador. Quando terminar, o analisador libera o cartucho. Nota: As condições PCR são predefinidas pelo construtor e não podem ser alteradas pelo usuário. Para mais informações, consulte Guia de aplicação do fabricante. O processo PCR iniciará automaticamente e leva aproximadamente 4 h 10 min.</li>
	<li>Remova e descarte o cartucho. Na tela sensível ao toque de cabine, escolha "testes atuais" no canto inferior esquerdo e, em seguida, escolha o ID de amostra correta para exibir os resultados de teste. Salvar os resultados na memória da máquina e imprimir ou exportar (via unidade USB) para uma referência mais adicional. Nota: Informar o resultado da PCR, incluindo a identificação do patógeno e detecção de marcadores de resistência, o cirurgião sem demora. Um painel com 114 alvos de Ácido desoxirribonucleico (DNA) de patógenos bacterianos e fúngicos normalmente encontrados em infecções de implante e infecções de tecidos moles, juntamente com os marcadores de resistência aos antibióticos mais comuns são analisados.</li>
</ol>3. cirúrgico: Coleta intraoperatória
Nota: A cirurgia de artroplastia de revisão requer um especialista em nível de habilidade e experiência; para uma visão abrangente dos procedimentos cirúrgicos, por favor consulte livros didáticos18 do cirurgião. Uma descrição completa e detalhada do procedimento cirúrgico seria bem além do escopo deste artigo. Aqui o foco é sobre os detalhes da coleta de amostra e análise prévia. Na cirurgia de artroplastia de revisão, abster-se da administração de uma profilaxia antibiótica tiro única, para não comprometer os resultados das amostras microbiológicas obtidas durante a cirurgia. Aderindo a essa regra é recomendado, embora esta prática é controversa19,20. Use a abordagem cirúrgica existente na articulação, sempre que possível. As abordagens cirúrgicas adicionais irão comprometer os tecidos moles e aumentar a formação de cicatriz.
<ol><li>Disse o tecido até a cápsula articular é bem exposta. Executar a artrotomia com uma seringa em riste, tão mais sinovial pode ser coletado para a seringa estéril para posterior análise, como dito acima (passos 1.7.1-1.7.3). Nota: Sem fluidos anti-séptico de lavagem devem ser utilizados até o implante é removido e tenham sido colhidas amostras de tecido.</li>
	<li>Remova os implantes comuns. Imediatamente após a remoção, transferi as peças de implante em um recipiente plástico estéril com uma tampa estanque e água. Nota: Instruções detalhadas para a remoção do implante podem ser encontradas na literatura livros didático (joelho, por exemplo: Wirtz et al, 16.4 do capítulo21; Quadril, por exemplo: Claes et al, capítulo 14.5.122). Instrumentos específicos podem ser necessários, como afirmado pelas instruções dos fabricantes. A técnica de remoção do implante varia consideravelmente entre implante de diferentes tipos e métodos de fixação. Um conjunto de formões e brocas, um martelo deslizante e um conjunto de remoção de prego intramedular universal são úteis na remoção de implantes ósseos de integrada23,24.</li>
	<li>Use uma cureta afiada estéril, fórceps e rongeur para remover o tecido da membrana através da interface osso-implante. Transferi uma amostra representativa do tecido em um recipiente plástico estéril com uma tampa de rosca, como amostras para Microbiologia e histologia. Nota: Um alargador pode ser usado para limpar o canal medular de todos os tecidos moles. Além disso, leve tecido sinovial e articulares cápsula amostras para exame e armazená-los em recipientes esterilizados. Pelo menos quatro espécimes no total devem ser reunidos.</li>
	<li>Envie todas as amostras e explantadas peças para o laboratório de microbiologia instantaneamente. Nota: Os antibióticos então podem ser dada. A escolha dos antibióticos corretos é essencial e deve ser uma decisão individualizada25,26. Conceitos terapêuticos devem ser decididos por um painel interdisciplinar dos cirurgiões e microbiologistas antecipadamente.</li>
	<li>Completar o desbridamento de local do implante anterior, removendo qualquer tecido que mostra sinais de detritos (tais como o desgaste do polietileno, metal ou as partículas de cimento) ou infecção e necrose (tecidos purulentos, avasculares, fibrina-revestido, membranosas ou "lamacento"). Remova qualquer osso morto ou osteitic. Remova todos os materiais estranhos tais como parafusos, fios, cerclages, os restos de cimento ósseo ou suturas não-absorvíveis (ver Claes et al, capítulo 14.5.322).</li>
	<li>Irriga o local cirúrgico utilizando um desinfectante de ferida de escolha, utilizando uma seringa de 50 mL. Irriga com quantidades amplas (pelo menos 3 L) de solução de ringer com um sistema de lavagem pulsada. Um espaçador pode ser necessário para estabilizar a articulação27.</li>
	<li>Feche a ferida usando revestimento antimicrobiano Suturas absorvíveis profundas para a cápsula ou fáscia (Poliglactina trançada suturas, revestidos com triclosan USP 2) e o tecido subcutâneo (Poliglactina trançada suturas, revestidos com triclosan USP 0). Feche a pele usando suturas interrompidas não-resorbing (monofilic polipropileno, USP 0 ou USP 2-0).</li>
</ol>4. sonication
Nota: Tenha cuidado ao trabalho estritamente assepticamente. Use um banco de segurança biológica classe II com fluxo de ar laminar para processamento do material explantado.
<ol><li>Abra o recipiente plástico segurando a prótese explantada da sala de operação (ver passo 3.2) em um banco de trabalho do fluxo laminar de ar e adicionar a solução de cloreto de sódio 0,9% estéril até que o corpo estranho explantado coberto pelo menos 80% (cerca de 500-800 mL).</li>
	<li>Feche o recipiente de plástico. Agitar cuidadosamente ou agite o recipiente plástico usando um misturador do vortex em alta intensidade por 30 s. o recipiente plástico em transferência do banho sonication. Verificar o nível do líquido no banho sonication. Nota: O nível de líquido de banho sonication deve ser o mesmo que dentro do recipiente de plástico. Certifique-se que o recipiente plástico não pode ser inundado e se necessário adiciona ou retirar líquido do banho sonication.</li>
	<li>Proceda à sonicação a amostra por 5 min com uma frequência de 40 ± 2 kHz e poder densidade 0,22 ± 0,04 W/cm2. Shake ou vórtice o espécime completamente por 30 s. Nota: Vezes Sonication entre 1-5 min são os melhores para a dissolução de biofilmes, sem qualquer influência na viabilidade bacteriana28.</li>
	<li>Dentro do banco do fluxo laminar, coletar 50 mL do líquido de sonication e transferi-lo para um tubo estéril, hermeticamente fechado.</li>
	<li>Para criar um fluido concentrado sonication, centrifugar o tubo durante 10 minutos a 4.200 g. x, deixando um volume residual de 10 mL, descartar o sobrenadante restante com uma pipeta. Resuspenda o pellet por pipetagem e num Vortex.</li>
	<li>Semear em meios de cultura adequados (por exemplo, ágar sangue, ágar chocolate, ágar Sabouraud, agar do Schaedler, agar kanamicina-vancomicina ou caldo de tioglicolato) com 0,5 mL de fluido concentrado sonication cada. Inocular o frasco de cultura de sangue pediátrica com 2 mL, conforme descrito acima (consulte a etapa 1.7.1). Transferi 1 mL de fluido sonication concentrado em um tubo de coleta de sangue sem aditivos para análise PCR.</li>
	<li>Transfira o meio de cultura inoculado para a incubadora (35 ° C, 5% CO2). Incubar as culturas por 14 dias e verificar se há crescimento diariamente.</li>
	<li>Após 14 dias, descarte as culturas sem crescimento e relatório como negativo. Se o crescimento for detectado, proceder a identificação do patógeno usando técnicas padrão de identificação e testes de susceptibilidade. Relatar o resultado para o cirurgião sem demora. Nota: Aqui, identificação de patógenos foi realizada usando Matrix-assisted LASER desorbtion/ionização - time da espectroscopia de voo (MALDI-TOF). Testes de susceptibilidade antimicrobiana foi realizada com um analisador semiautomated29,30,31.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Wimmer, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+an+interdisciplinary+therapy+algorithm+in+patients+with+prosthetic+joint+infections.">Evaluation of an interdisciplinary therapy algorithm in patients with prosthetic joint infections.</a> Int Orthop. 37 (11), 2271-2278 (2013).</li><li>Trampuz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synovial+fluid+leukocyte+count+and+differential+for+the+diagnosis+of+prosthetic+knee+infection.">Synovial fluid leukocyte count and differential for the diagnosis of prosthetic knee infection.</a> Am J Med. 117 (8), 556-562 (2004).</li><li>Randau, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-6+in+serum+and+in+synovial+fluid+enhances+the+differentiation+between+periprosthetic+joint+infection+and+aseptic+loosening.">Interleukin-6 in serum and in synovial fluid enhances the differentiation between periprosthetic joint infection and aseptic loosening.</a> PLoS One. 9 (2), e89045 (2014).</li><li>Deirmengian, C. A., Wongworawat, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Editor's+spotlight/take+5:+diagnosing+periprosthetic+joint+infection:+has+the+era+of+the+biomarker+arrived.">Editor's spotlight/take 5: diagnosing periprosthetic joint infection: has the era of the biomarker arrived.</a> Clin Orthop Relat Res. 472 (111), 3250-3253 (2014).</li><li>Gollwitzer, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antimicrobial+peptides+and+proinflammatory+cytokines+in+periprosthetic+joint+infection.">Antimicrobial peptides and proinflammatory cytokines in periprosthetic joint infection.</a> J Bone Joint Surg Am. 95 (7), 644-651 (2013).</li><li>Trampuz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sonication+of+removed+hip+and+knee+prostheses+for+diagnosis+of+infection.">Sonication of removed hip and knee prostheses for diagnosis of infection.</a> N Engl J Med. 357 (7), 654-663 (2007).</li><li>Achermann, Y., Vogt, M., Leunig, M., Wust, J., Trampuz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+diagnosis+of+periprosthetic+joint+infection+by+multiplex+PCR+of+sonication+fluid+from+removed+implants.">Improved diagnosis of periprosthetic joint infection by multiplex PCR of sonication fluid from removed implants.</a> J Clin Microbiol. 48 (40), 1208-1214 (2010).</li><li>Portillo, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplex+PCR+of+sonication+fluid+accurately+differentiates+between+prosthetic+joint+infection+and+aseptic+failure.">Multiplex PCR of sonication fluid accurately differentiates between prosthetic joint infection and aseptic failure.</a> J Infect. 65 (6), 541-548 (2012).</li><li>Qu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PCR-based+diagnosis+of+prosthetic+joint+infection.">PCR-based diagnosis of prosthetic joint infection.</a> J Clin Microbiol. 51 (8), 2742-2746 (2013).</li><li>Borde, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+of+prosthetic+joint+infections+using+UMD-Universal+Kit+and+the+automated+multiplex-PCR+Unyvero+i60+ITI((R))+cartridge+system:+a+pilot+study.">Diagnosis of prosthetic joint infections using UMD-Universal Kit and the automated multiplex-PCR Unyvero i60 ITI((R)) cartridge system: a pilot study.</a> Infection. 43 (5), 551-560 (2015).</li><li>Hischebeth, G. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unyvero+i60+implant+and+tissue+infection+(ITI)+multiplex+PCR+system+in+diagnosing+periprosthetic+joint+infection.">Unyvero i60 implant and tissue infection (ITI) multiplex PCR system in diagnosing periprosthetic joint infection.</a> J Microbiol Methods. 121, 27-32 (2016).</li><li>Prieto-Borja, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+commercial+multiplex+PCR+(Unyvero+i60(R))+designed+for+the+diagnosis+of+bone+and+joint+infections+using+prosthetic-joint+sonication.">Evaluation of a commercial multiplex PCR (Unyvero i60(R)) designed for the diagnosis of bone and joint infections using prosthetic-joint sonication.</a> Enferm Infecc Microbiol Clin. , (2016).</li><li>Bernau, A., Heeg, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraarticular+punctures+and+injections:+indications--prevention+of+infection--technique--complications.">Intraarticular punctures and injections: indications--prevention of infection--technique--complications.</a> Orthopade. 32 (6), 548-569 (2003).</li><li>Courtney, P., Doherty, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Joint+aspiration+and+injection+and+synovial+fluid+analysis.">Joint aspiration and injection and synovial fluid analysis.</a> Best Pract Res Clin Rheumatol. 27 (2), 137-169 (2013).</li><li>Arnold, S., Meurer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intra-articular+punctures+and+injections.">Intra-articular punctures and injections.</a> Orthopade. 42 (12), 1075-1086 (2013).</li><li>Geller, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+Comparison+of+Blood+Culture+Bottles+and+Conventional+Swabs+for+Microbial+Identification+of+Suspected+Periprosthetic+Joint+Infection.">Prospective Comparison of Blood Culture Bottles and Conventional Swabs for Microbial Identification of Suspected Periprosthetic Joint Infection.</a> J Arthroplasty. 31 (8), 1779-1783 (2016).</li><li>Cross, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utility+of+percutaneous+joint+aspiration+and+synovial+biopsy+in+identifying+culture-positive+infected+hip+arthroplasty.">Utility of percutaneous joint aspiration and synovial biopsy in identifying culture-positive infected hip arthroplasty.</a> Skeletal Radiol. 43 (2), 165-168 (2014).</li><li>Berry, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Revision total hip and knee arthroplasty. , (2012).</li><li>Parvizi, J., Gehrke, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+Consensus+Group+on+Periprosthetic+Joint,+I.+Definition+of+periprosthetic+joint+infection.">International Consensus Group on Periprosthetic Joint, I. Definition of periprosthetic joint infection.</a> J Arthroplasty. 29 (7), 1331 (2014).</li><li>Ghanem, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perioperative+antibiotics+should+not+be+withheld+in+proven+cases+of+periprosthetic+infection.">Perioperative antibiotics should not be withheld in proven cases of periprosthetic infection.</a> Clin Orthop Relat Res. 461, 44-47 (2007).</li><li>Wirtz, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> AE-Manual der Endoprothetik - Knie. , (2011).</li><li>Claes, L. K., Peter, , Perka, , Carsten, , Rudert, , Maximilian, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> AE-Manual der Endoprothetik - H&#252;fte und H&#252;ftrevision. , (2012).</li><li>Herrmann, P., Thoele, P., Heppert, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infected+knee+prostheses.+Part+2:+chronic+late+infections.">Infected knee prostheses. Part 2: chronic late infections.</a> Oper Orthop Traumatol. 25 (3), 242-250 (2013).</li><li>Zweymuller, K. A., Steindl, M., Melmer, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anterior+windowing+of+the+femur+diaphysis+for+cement+removal+in+revision+surgery.">Anterior windowing of the femur diaphysis for cement removal in revision surgery.</a> Clin Orthop Relat Res. 441, 227-236 (2005).</li><li>Osmon, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiology+and+Antimicrobial+Challenges+of+Prosthetic+Joint+Infection.">Microbiology and Antimicrobial Challenges of Prosthetic Joint Infection.</a> J Am Acad Orthop Surg. 25, 17-19 (2017).</li><li>Renner, L., Perka, C., Trampuz, A., Renz, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+periprosthetic+infections.">Treatment of periprosthetic infections.</a> Chirurg. 87 (10), 831-838 (2016).</li><li>Kuzyk, P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-stage+revision+arthroplasty+for+management+of+chronic+periprosthetic+hip+and+knee+infection:+techniques,+controversies,+and+outcomes.">Two-stage revision arthroplasty for management of chronic periprosthetic hip and knee infection: techniques, controversies, and outcomes.</a> J Am Acad Orthop Surg. 22 (3), 153-164 (2014).</li><li>Kobayashi, N., Bauer, T. W., Tuohy, M. J., Fujishiro, T., Procop, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brief+ultrasonication+improves+detection+of+biofilm-formative+bacteria+around+a+metal+implant.">Brief ultrasonication improves detection of biofilm-formative bacteria around a metal implant.</a> Clin Orthop Relat Res. 457, 210-213 (2007).</li><li>Dubois, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performances+of+the+Vitek+MS+matrix-assisted+laser+desorption+ionization-time+of+flight+mass+spectrometry+system+for+rapid+identification+of+bacteria+in+routine+clinical+microbiology.">Performances of the Vitek MS matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry system for rapid identification of bacteria in routine clinical microbiology.</a> J Clin Microbiol. 50 (8), 2568-2576 (2012).</li><li>Cherkaoui, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+two+matrix-assisted+laser+desorption+ionization-time+of+flight+mass+spectrometry+methods+with+conventional+phenotypic+identification+for+routine+identification+of+bacteria+to+the+species+level.">Comparison of two matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry methods with conventional phenotypic identification for routine identification of bacteria to the species level.</a> J Clin Microbiol. 48 (4), 1169-1175 (2010).</li><li>Barenfanger, J., Drake, C., Kacich, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+and+financial+benefits+of+rapid+bacterial+identification+and+antimicrobial+susceptibility+testing.">Clinical and financial benefits of rapid bacterial identification and antimicrobial susceptibility testing.</a> J Clin Microbiol. 37 (5), 1415-1418 (1999).</li><li>Tande, A. J., Patel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prosthetic+joint+infection.">Prosthetic joint infection.</a> Clin Microbiol Rev. 27 (2), 302-345 (2014).</li><li>Portillo, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advantages+of+sonication+fluid+culture+for+the+diagnosis+of+prosthetic+joint+infection.">Advantages of sonication fluid culture for the diagnosis of prosthetic joint infection.</a> J Infect. 69 (1), 35-41 (2014).</li><li>Scorzolini, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sonication+technique+improves+microbiological+diagnosis+in+patients+treated+with+antibiotics+before+surgery+for+prosthetic+joint+infections.">Sonication technique improves microbiological diagnosis in patients treated with antibiotics before surgery for prosthetic joint infections.</a> New Microbiol. 37, 321-328 (2014).</li><li>Zhai, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meta-analysis+of+sonication+fluid+samples+from+prosthetic+components+for+diagnosis+of+infection+after+total+joint+arthroplasty.">Meta-analysis of sonication fluid samples from prosthetic components for diagnosis of infection after total joint arthroplasty.</a> J Clin Microbiol. 52 (5), 1730-1736 (2014).</li><li>Panousis, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Poor+predictive+value+of+broad-range+PCR+for+the+detection+of+arthroplasty+infection+in+92+cases.">Poor predictive value of broad-range PCR for the detection of arthroplasty infection in 92 cases.</a> Acta Orthop. 76 (3), 341-346 (2005).</li><li>Rak, M., KavcIc, M., Trebse, R., Co, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+bacteria+with+molecular+methods+in+prosthetic+joint+infection:+sonication+fluid+better+than+periprosthetic+tissue.">Detection of bacteria with molecular methods in prosthetic joint infection: sonication fluid better than periprosthetic tissue.</a> Acta Orthop. 87 (4), 339-345 (2016).</li><li>Li, Z., Yu, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+value+of+a+PCR-based+technique+for+prosthetic+joint+infection.">Diagnostic value of a PCR-based technique for prosthetic joint infection.</a> J Clin Microbiol. 52 (6), 2281-2282 (2014).</li></ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

Infecção do corpo estranho é um problema emergente em Ortopedia e cirurgia de trauma com tratamento dispendioso, longa hospitalização e deficiência funcional das articulações afetadas. O diagnóstico diferencial é um desafio. Muitos pesquisadores e clínicos estão dando atenção a este tópico, se esforçando para encontrar mais precisos e confiáveis métodos para diagnosticar o corpo estranho infecções. Até à data, muitos diferentes ferramentas de diagnóstico estão sendo avaliadas e implementadas no caminho diagnóstico32.
O procedimento de sonication é um método de valor inestimável, mostrando uma melhor sensibilidade do que culturas convencionais de tecido espécimes6. Em nosso estudo, nós mostramos que o fluido culturas sonication têm uma sensibilidade de 88.9%, com uma especificidade de 61,5%. Culturas convencionais de amostras de tecido e aspirados conjuntos, ambos tinham uma sensibilidade de 66,7%, com uma especificidade de 82,3% e 84,6%, respectivamente. Outros pesquisadores mostram resultados semelhantes para esses procedimentos microbiológicos convencionais6,33,34,35. Critica-se muitas vezes que o procedimento de sonication é propenso à contaminação, portanto deve ter especial cuidado no manuseio das amostras.
A possibilidade de detecção de DNA de um patógeno causador em amostras de tecidos ou fluidos é intrigante. NAT é um processo rápido que pode entregar os resultados dentro de algumas horas, em comparação com os métodos de cultura microbiológica demorada. Sem dúvida, NAT tem uma boa sensibilidade na detecção de agentes patogénicos, mas segurar o risco de detecção de contaminantes, assim, falta especificidade36. O grande benefício dessa técnica de PCR no diagnóstico de PJI foi documentado principalmente em pacientes que receberam terapia antibiótica perto de cirurgia ou por um longo período7,8. Estudos sugerem que a NAT do fluido sonication pode aumentar ainda mais a sensibilidade e especificidade37. Infelizmente, esta técnica não é rotineiramente disponível em laboratórios, devido ao seu fluxo de trabalho demorado.
Há certas limitações para a técnica PCR em geral: NAT detecta DNA com nenhuma diferenciação entre bactérias viáveis e não viáveis, dificultando a interpretação dos resultados. Vasta gama PCR só detectará ribosomal 16S o ácido ribonucleico (16S rRNA), não diferenciar entre patógenos37. Sistemas mais específicos não rotineiramente detectar marcadores de resistência aos antibióticos gene codificado. Uma antibiótica terapia-alvo, portanto, pode ser limitada sem testes de susceptibilidade suplementares.
O sistema aplicado neste estudo supera algumas destas limitações, a diferenciação entre bactérias específicas e identificar marcadores de resistência gene codificado. Em geral, os ensaios NAT podem ser considerados como uma complementação rápida e útil para confirmar PJI7,8,9,38.
É necessário planejar com antecedência na aspiração comum e na cirurgia: recipientes de amostra devem ser esterilizado e pronto, e transporte de amostra prompt deve estar disponível. Cirurgiões devem informar as microbiologistas em procedimentos planejados e que material a esperar de amostra. Quando realizar a aspiração comum, condições estritamente estéril deve ser assegurada, para prevenir a infecção iatrogênica da articulação. Em pacientes com tecido adiposos, punção conjunta pode ser desafiador e orientação fluoroscópica pode ser útil. Cirurgia de artroplastia de revisão requer um alto nível de especialização e só deve ser realizada por um cirurgião experiente. Explantados material não deve ser mantido na sala de cirurgia por mais tempo do que o necessário, mas ser enviado para a microbiologista logo que possível. Uma parte muito crítica no âmbito do presente protocolo é o risco potencial de contaminação. Não só durante a coleta de amostras, mas também quando manusear as amostras no laboratório de microbiologia, todo o pessoal envolvido (ortopedista, enfermeiras, técnicos, microbiólogos) deve trabalhar rapidamente e com precisão e ter formação adequada nos procedimentos.
Sonication e NAT são ferramentas valiosas no diagnóstico de infecções associadas a implantes. No entanto, os resultados devem sempre ser questionados cuidadosamente. Recomenda-se a discutir os resultados em uma discussão de mesa redonda de cirurgiões ortopédicos, microbiologistas e especialistas em doenças infecciosas e patologistas para chegar a acordo sobre a estratégia terapêutica individualizada.
Para implementar essa técnica no diagnóstico caminho de PJI pode ter várias vantagens. É um diagnóstico rápido com resultado dentro de horas. Devido a análise de vários marcadores de resistência de gene codificado, uma antibiótica terapia-alvo pode ocorrer em uma fase muito precoce no curso clínico. Como um efeito colateral, antibióticos de largo-escala podem ser salvos para as indicações de onde realmente são necessários. Outros tipos de amostra (por exemplo, amostras de tecido, cotonetes, hematoma, etc.) também podem ser investigados de acordo com o nosso protocolo. Desde que o cartucho PCR é um sistema fechado, nenhuma solução de problemas é necessário ou possível do lado do usuário. Qualquer adaptação do protocolo deve ser implementada pelo fabricante. Alterações no software e hardware (cartucho) continuamente são feitas pelo fabricante para melhorar o sistema, porém sem detalhes são tornadas públicas sobre as mudanças exatas em versões mais recentes.

As artroplastias dolorosas são um desafio de diagnóstico em cirurgia ortopédica. Depois de afrouxamento asséptico, PJI é a segunda mais razão para o fracasso do implante e apresenta uma complicação devastadora após a cirurgia de artroplastia. PJI é difícil de diagnosticar e difícil de tratar. Errou o diagnóstico de um PJI irá provavelmente resultar em infecções de repetição, com maior morbidade, perda da função e perda da qualidade de vida. Portanto, a infecção deve ser descartada em todos os pacientes que apresentam com artroplastia dolorosa, antes de medidas terapêuticas são iniciadas.
O histórico do paciente, exame clínico, exame de sangue para o CRP e contagem de células brancas do sangue, bem como radiografia ou szintigraphy da articulação afetada constituem o diagnóstico básico1. A rotina pré-operatória deve incluir também uma aspiração comum sob condições estéreis, sempre que possível. O aspirado adquirido é um material muito valioso no diagnóstico ainda mais.
Além da contagem de células e diferenciação celular no aspirado conjunta como ensaios bem-estabelecida2, a detecção de biomarcadores de proteína pode ajudar no diagnóstico diferencial de4,3,5. Cultura microbiológica convencional continua a ser o padrão-ouro na deteção do patógeno. Biofilmes, causadas por bactérias gram-positivas e Gram-negativas e aderente à superfície do implante, são um fator patogênico em PJI. Portanto, em 2007, o procedimento de sonication foi implementado nos diagnósticos de estrangeiros corpo infecções associadas em cirurgia ortopédica, rompendo os biofilmes sobre implantes removidos para permitir a detecção de agentes patogénicos. As bactérias são desse modo tiradas da sua forma de descanso para uma forma ativa, tornando a detecção em cultura possíveis novamente. Sonication dos implantes removidos mostrou uma sensibilidade maior do que as culturas de tecido espécimes (78,5% vs 60,8%)6.
Teste de amplificação de ácidos nucleicos (NAT), tais como a PCR, mudou-se recentemente para o escopo de clínicos e microbiologistas para diagnosticar PJI. Especialmente em pacientes que receberam terapia antibiótica antes da cirurgia, ficou demonstrado que o diagnóstico de PCR é benéfica em identificar os organismos causadores de7,8,9. Ultimamente, foi introduzido um novo sistema PCR multiplex, especialmente concebido para o implante e o tecido de infecções (ITI). Este sistema baseado em cartucho oferece uma variedade de genômicas marcadores para identificação de patógenos e marcadores de resistência aos antibióticos. Entre a sua gama de aplicação são inúmeras indicações (próteses comuns infecções, infecções do sítio cirúrgico, infecções relacionadas a cardiologia, infecções associadas a cateter, infecções do pé diabético, profunda da pele e infecções de tecidos, implante de infecções, e infecções de ferida de queimadura), e um amplo painel de material de amostra pode ser usado para essa técnica (fluido sonication, líquido sinovial, cotonetes, tecido, pus, exsudato/aspirado e biofilme)10,11,12.
A maior vantagem do procedimento, em comparação com microbiologia convencional, é a velocidade: O patógeno causador pode ser identificado dentro de horas. Além disso, este sistema PCR detecta um amplo painel de marcadores de resistência gene codificado, permitindo o início da terapia antibiótica alvo desde o início. Com o auxílio do PCR, cirurgiões podem ser capazes de distinguir entre pacientes infectados e não infectados numa fase muito precoce do procedimento diagnóstico11. Aqui, apresentamos o protocolo para executar este PCR multiplex, rapidamente diagnosticar PJI de aspirado conjunto e sonication fluido.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="900">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">sterile plastic container&#160;</td>
			<td style="width:333px;">Lock &#38; Lock, Distributor ISI GmbH, Solingen, Germany</td>
			<td style="width:119px;">EAN 8803733184403</td>
			<td style="width:232px;">Transport container for implants</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bactosonic 14.2&#160;</td>
			<td>Bactosonic, Bandelin, Berlin, Germany</td>
			<td align="right" style="width:119px;">3290</td>
			<td>&#34;Sonication machine&#34;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">50ml Falcon tubes</td>
			<td>Becton &#38; Dickinson, Heidelberg, Germany</td>
			<td align="right" style="width:119px;">352070</td>
			<td>Centrifugation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PEDS medium blood culture flasks&#160;</td>
			<td>Becton &#38; Dickinson, Heidelberg, Germany</td>
			<td align="right" style="width:119px;">442194</td>
			<td>culture medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Columbia agar with 5% sheep blood</td>
			<td>Becton &#38; Dickinson, Heidelberg, Germany</td>
			<td align="right" style="width:119px;">254071</td>
			<td>culture medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mac Conkey agar</td>
			<td>Becton &#38; Dickinson, Heidelberg, Germany</td>
			<td align="right" style="width:119px;">254078</td>
			<td>culture medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">chocolate agar&#160;</td>
			<td>Becton &#38; Dickinson, Heidelberg, Germany</td>
			<td align="right" style="width:119px;">254089</td>
			<td>culture medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">sabouraud agar&#160;</td>
			<td>Becton &#38; Dickinson, Heidelberg, Germany</td>
			<td align="right" style="width:119px;">254096</td>
			<td>culture medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">thioglycolate bouillon&#160;</td>
			<td>Becton &#38; Dickinson, Heidelberg, Germany</td>
			<td align="right" style="width:119px;">221788</td>
			<td>culture medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Schaedler agar</td>
			<td>Becton &#38; Dickinson, Heidelberg, Germany</td>
			<td align="right" style="width:119px;">254084</td>
			<td>culture medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">kanamycin/vancomycin agar</td>
			<td>Becton &#38; Dickinson, Heidelberg, Germany</td>
			<td align="right" style="width:119px;">254077</td>
			<td>culture medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bactec FX blood culture system&#160;</td>
			<td>Becton &#38; Dickinson, Heidelberg, Germany</td>
			<td style="width:119px;">441386/441385</td>
			<td>culture medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Unyvero A50 Analyzer</td>
			<td style="width:333px;">Curetis, Holzgerlingen, Germany</td>
			<td align="right" style="width:119px;">60001</td>
			<td>PCR machine</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Unyvero L4 Lysator</td>
			<td style="width:333px;">Curetis, Holzgerlingen, Germany</td>
			<td align="right" style="width:119px;">60002</td>
			<td>PCR machine</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Unyvero C8 Cockpit</td>
			<td style="width:333px;">Curetis, Holzgerlingen, Germany</td>
			<td align="right" style="width:119px;">60003</td>
			<td>PCR machine</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Unyvero M1 Masterix Tube</td>
			<td style="width:333px;">Curetis, Holzgerlingen, Germany</td>
			<td align="right" style="width:119px;">10002</td>
			<td>consumables PCR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Unyvero i60 ITI Cartridge</td>
			<td style="width:333px;">Curetis, Holzgerlingen, Germany</td>
			<td align="right" style="width:119px;">10040</td>
			<td>consumables PCR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Unyvero Sample Tube Cap</td>
			<td style="width:333px;">Curetis, Holzgerlingen, Germany</td>
			<td align="right" style="width:119px;">10004</td>
			<td>consumables PCR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Unyvero Sample Tube</td>
			<td style="width:333px;">Curetis, Holzgerlingen, Germany</td>
			<td align="right" style="width:119px;">10003</td>
			<td>consumables PCR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">S-Monovette 2.7ml</td>
			<td style="width:333px;">Sarstedt AG, N&#252;mbrecht, Germany</td>
			<td style="width:119px;">05.1729.001&#160;</td>
			<td>Transport container (aspirate)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">scalpel typ 11</td>
			<td style="width:333px;">pfm medical, Cologne, Germany</td>
			<td align="right">200130011</td>
			<td>scalpel for stab incision</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">PP Container 70mL 55x45mm</td>
			<td style="width:333px;">Sarstedt AG, N&#252;mbrecht, Germany</td>
			<td align="right">759,922,721</td>
			<td>Transport container (tissue specimen)</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Vicryl Plus</td>
			<td style="width:333px;">Johnson&#38;Johnson Medical GmbH, Ethicon Germany, Norderstedt, Germany</td>
			<td>VCP247H</td>
			<td>surgical suture material</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Prolene 0</td>
			<td style="width:333px;">Johnson&#38;Johnson Medical GmbH, Ethicon Germany, Norderstedt, Germany</td>
			<td>EH7920H</td>
			<td>surgical suture material</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Prolene 2/0</td>
			<td style="width:333px;">Johnson&#38;Johnson Medical GmbH, Ethicon Germany, Norderstedt, Germany</td>
			<td>EH7697H</td>
			<td>surgical suture material</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Kodan&#160; Tinktur forte farblos</td>
			<td style="width:333px;">Sch&#252;lke &#38; Mayr GmbH, Norderstedt, Germany</td>
			<td align="right" style="width:119px;">104005</td>
			<td>alcoholic skin disinfectant</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

novel diagnostics in revision arthroplasty: implant sonication and multiplex polymerase chain reaction

Em pacientes ortopédicos, infecções associadas a corpo estrangeiras, especialmente periprotética infecções conjuntas (PJIs), são uma complicação devastadora da artroplastia. Infecção requer tratamento complexo, pode resultar em custos consideráveis longa hospitalização e causas. Múltiplas revisões cirúrgicas podem ser necessárias nesses pacientes, com uma perda de função, bem como na qualidade de vida.
O diagnóstico pré-operatório rotineiro incluem o exame de sangue para a proteína C - reativa (CRP) e outro biomarcadores, bem como análise conjunta aspirado para contagem de células, diferenciação e cultura. Intra-operatória espécimes para histologia e Microbiologia são, também, procedimento padrão. O exame microbiológico de implantes removidos com sonication, em combinação com a aplicação de técnicas de biologia molecular em microbiologia, representam duas novas técnicas atualmente empregadas para melhorar o diagnóstico diferencial de PJI.
Apresentamos aqui o procedimento passo a passo da análise conjunto aspirado e fluido sonication, usando um sistema de reação em cadeia (PCR) baseado em cartucho multiplex polimerase. Os resultados foram comparados com culturas convencionais e critérios de consenso para PJI. Culturas microbiológicas convencionais de biópsias de tecido, mista aspirado e fluido sonication mostrou uma sensibilidade de 66,7%, 66,7% e 88,9%, respectivamente e uma especificidade de 82,3% e 54,6% 61,5%, respectivamente. O PCR diagnóstico de fluido sonication e a sinovial mostrou uma sensibilidade de 50,0% e 55,6%, respectivamente e ambos uma especificidade de 100,0%. Ambos os diagnósticos PCR combinados tinham uma sensibilidade de 66,7% e uma especificidade de 100,0%. O PCR multiplex, portanto, apresenta uma rápida ferramenta de diagnóstico com sensibilidade moderada mas alta especificidade no diagnóstico de PJI.

Presença de um PJI, conforme definido na reunião de consenso da sociedade a infecção músculo-esqueléticas (MSIS), considerou-se provado quando um critério principal, ou pelo menos três dos cinco critérios menores estavam presente. Principais critérios incluem a presença de uma fístula ou detecção de um patógeno em duas amostras separadas e microbiológicas. Critérios menores incluem a contagem de células positivas (> 3.000 leucócitos / µ l) ou diferenciação celular positivo (> 85% de granulócitos neutrófilos) em comum aspirado, amostras de taxa positiva de CRP e sedimentação em sangue, histologia positiva nas amostras de tecido ou deteção de um patógeno em apenas uma amostra microbiológicos19. Sensibilidade e especificidade foram calculados para teste de amplificação de ácidos nucleicos (NAT), em comparação com o padrão de ouro MSIS. Detalhes de paciente, incluindo patógenos detectados, são dadas na tabela 1.
Nossos resultados mostraram uma sensibilidade moderada para PCR diagnóstico de fluido sonication e aspirado conjunto (50,0% e 55,6%) mas uma forte especificidade de 100%11. Sempre que diagnóstico PCR (n total = 62 testes) mostrou a existência na aspiração comum (n = 31) ou o fluido sonication (n = 31), o mesmo patógeno foi detectado mais tarde em uma das culturas microbiológicas convencionais. O PCR das amostras diferentes de casos de infecção não mostrou nenhum falso positivo resultado (ver Figura 1).
O diagnóstico de PCR não conseguiu detectar alguns patógenos que foram comprovados com métodos convencionais de cultura microbiológica. 6 de 16 (37,0%) verdadeiros patógenos nas amostras de fluido de sonication e 5 de 13 (38,0%) patógenos da cultura comum fluido foram falta por detecção de PCR. Principalmente, o diagnóstico PCR perdeu a deteção de estafilococos coagulase-negativa (8 de 11). O diagnóstico PCR combinado de ambos os materiais (sinovial aspirado e sonication, "pool PCR") identificado 12 de 18 casos de infecção corretamente (sensibilidade 66,7%, 95% CI: 41.0% 86,7%, ver tabela 2).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55147/55147fig1.jpg"> Figura 1: Resultados de Resumo de NAT. O gráfico mostra os resultados resumidos a partir das amostras colectivas. Do lado direito é o grupo de pacientes que correspondem critérios de PJI, do lado esquerdo é o grupo que não o fez. As barras representam os métodos de amplificação de ácidos nucleicos. Falsos positivos e falsos negativos são mostrados em vermelho como percentagem do total. <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55147/55147fig1large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<table fo:keep-together.within-page="1"><tbody><tr><td>Articulação</td>
			<td>Causa da revisão</td>
			<td>Critérios MSIS de fósforos?</td>
			<td>Tratamento antibiótico anterior?</td>
			<td>Cultura de fluido sonication</td>
			<td>Cultura de aspirado conjunta</td>
			<td>Cultura de sonication NAT</td>
			<td>Aspirado conjunto de NAT</td>
		</tr><tr><td>Quadril</td>
			<td>afrouxamento asséptico</td>
			<td>Não</td>
			<td>Não</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Joelho</td>
			<td>afrouxamento asséptico</td>
			<td>Não</td>
			<td>Não</td>
			<td>Staphlococcus epidermidis</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Joelho</td>
			<td>afrouxamento asséptico</td>
			<td>Não</td>
			<td>Não</td>
			<td>Dermabacter hominis</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Joelho</td>
			<td>afrouxamento asséptico</td>
			<td>Não</td>
			<td>Não</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Joelho</td>
			<td>afrouxamento asséptico</td>
			<td>Não</td>
			<td>Não</td>
			<td>Leifsonia aquatica</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Quadril</td>
			<td>afrouxamento asséptico</td>
			<td>Não</td>
			<td>Não</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Joelho</td>
			<td>afrouxamento asséptico</td>
			<td>Não</td>
			<td>Não</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Joelho</td>
			<td>instabilidade</td>
			<td>Não</td>
			<td>Não</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Quadril</td>
			<td>luxação crônica</td>
			<td>Não</td>
			<td>Não</td>
			<td>Staphylococcus haemolyticus</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Joelho</td>
			<td>afrouxamento asséptico</td>
			<td>Não</td>
			<td>Não</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Quadril</td>
			<td>afrouxamento asséptico</td>
			<td>Não</td>
			<td>Não</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Quadril</td>
			<td>afrouxamento asséptico</td>
			<td>Não</td>
			<td>Não</td>
			<td>Staphlococcus epidermidis</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Joelho</td>
			<td>instabilidade</td>
			<td>Não</td>
			<td>Não</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Joelho</td>
			<td>infecção aguda</td>
			<td>Sim</td>
			<td>Sim</td>
			<td>Pseudomonas aeruginosa</td>
			<td>Pseudomonas aeruginosa</td>
			<td></td>
			<td>Pseudomonas aeruginosa</td>
		</tr><tr><td>Joelho</td>
			<td>infecção aguda</td>
			<td>Sim</td>
			<td>Não</td>
			<td>Escherichia Coli</td>
			<td>Escherichia Coli</td>
			<td>Escherichia Coli</td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Quadril</td>
			<td>infecção crônica</td>
			<td>Sim</td>
			<td>Não</td>
			<td>Corynebakterium spp.</td>
			<td>Staphlococcus epidermidis</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Joelho</td>
			<td>infecção aguda</td>
			<td>Sim</td>
			<td>Não</td>
			<td>Staphylococcus aureus</td>
			<td>Staphylococcus aureus</td>
			<td>Staphylococcus aureus</td>
			<td>Staphylococcus aureus</td>
		</tr><tr><td>Joelho</td>
			<td>infecção crônica</td>
			<td>Sim</td>
			<td>Não</td>
			<td>Streptococcus agalacticae</td>
			<td>Streptococcus agalacticae</td>
			<td>Streptococcus agalacticae</td>
			<td>Streptococcus agalacticae</td>
		</tr><tr><td>Quadril</td>
			<td>infecção crônica</td>
			<td>Sim</td>
			<td>Sim</td>
			<td></td>
			<td>Staphylococcus aureus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Joelho</td>
			<td>infecção crônica</td>
			<td>Sim</td>
			<td>Não</td>
			<td>Staphlococcus epidermidis</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Joelho</td>
			<td>infecção crônica</td>
			<td>Sim</td>
			<td>Sim</td>
			<td>Staphlococcu epidermidis</td>
			<td>Staphlococcus epidermidis</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Quadril</td>
			<td>infecção crônica</td>
			<td>Sim</td>
			<td>Não</td>
			<td>Staphlococcus epidermidis</td>
			<td>Staphlococcus epidermidis</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Joelho</td>
			<td>infecção crônica</td>
			<td>Sim</td>
			<td>Não</td>
			<td>Staphlococcus epidermidis</td>
			<td></td>
			<td>Estafilococos coagulase-negativa Estafilococos</td>
			<td>Estafilococos coagulase-negativa Estafilococos</td>
		</tr><tr><td>Quadril</td>
			<td>infecção crônica</td>
			<td>Sim</td>
			<td>Não</td>
			<td>Staphylococcus aureus</td>
			<td></td>
			<td>Staphylococcus aureus</td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Joelho</td>
			<td>infecção aguda</td>
			<td>Sim</td>
			<td>Não</td>
			<td>Staphlococcus epidermidis</td>
			<td>Staphlococcus epidermidis</td>
			<td>Estafilococos coagulase-negativa Estafilococos</td>
			<td>Estafilococos coagulase-negativa Estafilococos</td>
		</tr><tr><td>Quadril</td>
			<td>infecção aguda</td>
			<td>Sim</td>
			<td>Não</td>
			<td></td>
			<td>Staphlococcus epidermidis</td>
			<td></td>
			<td>Estafilococos coagulase-negativa Estafilococos</td>
		</tr><tr><td>Quadril</td>
			<td>infecção crônica</td>
			<td>Sim</td>
			<td>Não</td>
			<td>Staphlococcus epidermidis</td>
			<td>Staphlococcus epidermidis</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Quadril</td>
			<td>infecção aguda</td>
			<td>Sim</td>
			<td>Não</td>
			<td></td>
			<td>Staphlococcus epidermidis</td>
			<td>Estafilococos coagulase-negativa Estafilococos</td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Joelho</td>
			<td>infecção crônica</td>
			<td>Sim</td>
			<td>Não</td>
			<td>Staphylococcus aureus</td>
			<td>Staphylococcus aureus</td>
			<td></td>
			<td>Staphylococcus aureus</td>
		</tr><tr><td>Quadril</td>
			<td>infecção crônica</td>
			<td>Sim</td>
			<td>Não</td>
			<td>Enterococus faecialis</td>
			<td>Enterococus faecialis</td>
			<td>Enterococus spp.</td>
			<td>Enterococus spp.</td>
		</tr><tr><td>Joelho</td>
			<td>infecção crônica</td>
			<td>Sim</td>
			<td>Sim</td>
			<td>Enterocuccus faecalis</td>
			<td>Enterocuccus faecalis</td>
			<td>Enterococus spp.</td>
			<td>Enterococus spp.</td>
		</tr></tbody></table>Tabela 1: pacientes detalhes e patógenos detectados. Resultados tabulares dos detalhes do pacientes, incluindo a causa da cirurgia de revisão, os critérios MSIS correspondentes e os patógenos detectados em microbiologia convencional e análise NAAT.
<table fo:keep-together.within-page="1"><tbody>
<tr>
<td>Critérios</td>
			<td>Proceda à sonicação PCR</td>
			<td>Aspirado de PCR</td>
			<td>PCR em pool</td>
		</tr>
<tr>
<td>Valor de P</td>
			<td>0.0036</td>
			<td>0.0013</td>
			<td>0,0001</td>
		</tr>
<tr>
<td>Sensibilidade</td>
			<td>50,0%</td>
			<td>55,6%</td>
			<td>66,7%</td>
		</tr>
<tr>
<td>Especificidade</td>
			<td>100,0%</td>
			<td>100,0%</td>
			<td>100,0%</td>
		</tr>
<tr>
<td>Valor preditivo positivo</td>
			<td>100,0%</td>
			<td>100,0%</td>
			<td>100,0%</td>
		</tr>
<tr>
<td>Valor preditivo negativo</td>
			<td>59,1%</td>
			<td>61,9%</td>
			<td>68,4%</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabela 2: resultados de métodos microbiológicos. Tabulares resultados da avaliação do PCR diagnóstico de fluido sonication, aspirado conjunto e PCR em pool. N = 31 amostras de aspirado e sonication, respectivamente, n = 62 para os dados PCR em pool.

Watch this Scientific Journal Video about Novel Diagnostics in Revision Arthroplasty: Implant Sonication and Multiplex Polymerase Chain Reaction at JoVE.com

Novel Diagnostics in Revision Arthroplasty: Implant Sonication and Multiplex Polymerase Chain Reaction

Diagnóstico diferencial em artroplastia doloroso é crucial para o sucesso do tratamento. Aspiração comum é realizada de rotina no pré-operatório. Reação em cadeia polimerase multiplex de aspirado o comum e o fluido sonication, uma ferramenta viável para a deteção de patógeno rápida destas amostras é descrita.

Diagnóstico de romance em artroplastia de revisão: implante Sonication e reação em cadeia da polimerase Multiplex

In orthopedic patients, foreign body-associated infections, especially periprosthetic joint infections (PJIs), are a devastating complication of ...

novel-diagnostics-revision-arthroplasty-implant-sonication-multiplex

Research

JoVE Journal

Medicine

11.0K visualizações.  University Hospital Bonn. Diagnóstico diferencial em artroplastia doloroso é crucial para o sucesso do tratamento. Aspiração comum é realizada de rotina no pré-operatório. Reação em cadeia polimerase multiplex de aspirado o comum e o fluido sonication, uma ferramenta viável para a deteção de patógeno rápida destas amostras é descrita.

Vídeo: Novel Diagnostics in Revision Arthroplasty: Implant Sonication and Multiplex Polymerase Chain Reaction

Reverse Total Shoulder Arthroplasty

Reverse total shoulder arthroplasty was initially approved for use in rotator cuff arthropathy and well as chronic pseudoparalysis without arthritis in patients who were not appropriate for tendon transfer reconstructions. Traditional surgical options for these patients were limited and functional results were sub-optimal and at times catastrophic. The use of reverse shoulder arthroplasty has been found to effectively restore these patients function and relieve symptoms associated with their disease. The procedure can be done through two approaches, the deltopectoral or the superolateral. Complication rates associated with the use of the prosthesis have ranged from 8-60% with more recent reports trending lower as experienced is gained. Salvage options for a failed reverse shoulder prosthesis are limited and often have significant associated disability. Indications for the use of this prosthesis continue to be evaluated including its use for revision arthroplasty, proximal humeral fracture and tumor. Careful patient selection is essential because of the significant risks associated with the procedure.

Reverse total shoulder arthroplasty is indicated for the treatment of conditions that cannot be treated with conventional arthroplasty or other procedures. These primarily include degenerative and incapacitating conditions with irreparable rotator cuff and loss of the normal biomechanical coupling of the shoulder.

Reversa Artroplastia Total do Ombro

Reverse total shoulder arthroplasty was initially approved for use in rotator cuff arthropathy and well as chronic pseudoparalysis without arthritis in ...

Medicina

RNAscope for In situ Detection of Transcriptionally Active Human Papillomavirus in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

The &#39;gold standard&#39; for oncogenic HPV detection is the demonstration of transcriptionally active high-risk HPV in tumor tissue. However, detection of E6/E7 mRNA by quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (qRT-PCR) requires RNA extraction which destroys the tumor tissue context critical for morphological correlation and has been difficult to be adopted in routine clinical practice. Our recently developed RNA in situ hybridization technology, RNAscope, permits direct visualization of RNA in formalin-fixed, paraffin-embedded (FFPE) tissue with single molecule sensitivity and single cell resolution, which enables highly sensitive and specific in situ analysis of any RNA biomarker in routine clinical specimens. The RNAscope HPV assay was designed to detect the E6/E7 mRNA of seven high-risk HPV genotypes (HPV16, 18, 31, 33, 35, 52, and 58) using a pool of genotype-specific probes. It has demonstrated excellent sensitivity and specificity against the current &#39;gold standard&#39; method of detecting E6/E7 mRNA by qRT-PCR. HPV status determined by RNAscope is strongly prognostic of clinical outcome in oropharyngeal cancer patients.

RNAscope for In situ Detection of Transcriptionally Active Human Papillomavirus in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

The presence of high-risk HPV in head and neck tumor tissue is associated with favorable outcomes. The recently developed RNA in situ hybridization technique called RNAscope allows direct visualization of HPV E6/E7 mRNA in FFPE tissue sections.

RNAscope para<em&gt; Em situ</em&gt; Detecção de Papilomavírus Humano transcricionalmente ativo em Cabeça e Pescoço Carcinoma de células escamosas

The &#39;gold standard&#39; for oncogenic HPV detection is the demonstration of transcriptionally active high-risk HPV in tumor tissue. However, detection ...

Combined In vivo Optical and &#181;CT Imaging to Monitor Infection, Inflammation, and Bone Anatomy in an Orthopaedic Implant Infection in Mice

Multimodality imaging has emerged as a common technological approach used in both preclinical and clinical research. Advanced techniques that combine in vivo optical and &#956;CT imaging allow the visualization of biological phenomena in an anatomical context. These imaging modalities may be especially useful to study conditions that impact bone. In particular, orthopaedic implant infections are an important problem in clinical orthopaedic surgery. These infections are difficult to treat because bacterial biofilms form on the foreign surgically implanted materials, leading to persistent inflammation, osteomyelitis and eventual osteolysis of the bone surrounding the implant, which ultimately results in implant loosening and failure. Here, a mouse model of an infected orthopaedic prosthetic implant was used that involved the surgical placement of a Kirschner-wire implant into an intramedullary canal in the femur in such a way that the end of the implant extended into the knee joint. In this model, LysEGFP mice, a mouse strain that has EGFP-fluorescent neutrophils, were employed in conjunction with a bioluminescent Staphylococcus aureus strain, which naturally emits light. The bacteria were inoculated into the knee joints of the mice prior to closing the surgical site. In vivo bioluminescent and fluorescent imaging was used to quantify the bacterial burden and neutrophil inflammatory response, respectively. In addition, &#956;CT imaging was performed on the same mice so that the 3D location of the bioluminescent and fluorescent optical signals could be co-registered with the anatomical &#956;CT images. To quantify the changes in the bone over time, the outer bone volume of the distal femurs were measured at specific time points using a semi-automated contour based segmentation process. Taken together, the combination of in vivo bioluminescent/fluorescent imaging with &#956;CT imaging may be especially useful for the noninvasive monitoring of the infection, inflammatory response and anatomical changes in bone over time.

Combined In vivo Optical and  &#181;CT Imaging to Monitor Infection, Inflammation, and Bone Anatomy in an Orthopaedic Implant Infection in Mice

Combined optical and &#956;CT imaging in a mouse model of orthopaedic implant infection, utilizing a bioluminescent engineered strain of Staphylococcus aureus, provided the capability to noninvasively and longitudinally monitor the dynamics of the bacterial infection, as well as the corresponding inflammatory response and anatomical changes in the bone.

Combinado<em&gt; In vivo</em&gt; Optical e μCT imagem para monitorar infecções, inflamações, and Bone Anatomy em uma infecção Orthopaedic Implant em Ratos

Multimodality imaging has emerged as a common technological approach used in both preclinical and clinical research. Advanced techniques that combine in ...

Individualized Stem-positioning in Calcar-guided Short-stem Total Hip Arthroplasty

Bone- and soft-tissue sparing short stems are increasingly used in total hip arthroplasty (THA). However, there are a large variety of models of short stems, differing in design and function. Calcar-guided short stems provide an anatomical curvature in the medial calcar region, thus, positioning is done individually alongside the calcar in the "round-the-corner" technique. Depending on the level of the neck's osteotomy, stems can be aligned individually in a large bandwidth of varus- and valgus anatomies. This differs from conventional total hip arthroplasty and potentially includes a severe learning curve. Given that a great variety of caput-collum-diaphyseal (CCD)-angles can be retained, the reconstruction of femoro-acetabular offsets can be achieved precisely. However, particularly extensive varus- and valgus positioning has raised concerns in regard to stability and bone remodeling. The purpose of the present manuscript is to showcase the implantation technique in calcar-guided short-stem THA and to summarize short-term clinical and radiological results.

This protocol describes the round-the-corner technique and the individualized stem-positioning of calcar-guided short stems alongside the medial calcar, depending on the level of the osteotomy. This differs from conventional total hip arthroplasty and includes a learning curve.

Haste-posicionamento individualizado em Calcar-guiados Short-tronco Artroplastia Total de quadril

Bone- and soft-tissue sparing short stems are increasingly used in total hip arthroplasty (THA). However, there are a large variety of models of short ...

A Blood-based Test for the Detection of ROS1 and RET Fusion Transcripts from Circulating Ribonucleic Acid Using Digital Polymerase Chain Reaction

We have developed novel methods for the isolation and characterization of tumor-derived circulating ribonucleic acid (cRNA) for blood-based liquid biopsy. Robust detection of cRNA recovered from blood represents a solution to a critical unmet need in clinical diagnostics. The test begins with the collection of whole blood into blood collection tubes containing preservatives that stabilize cRNA. Cell-free, exosomal, and platelet-associated RNA is isolated from plasma in this test system. The cRNA is reverse transcribed to complementary DNA (cDNA) and amplified using digital polymerase chain reaction (dPCR). Samples are evaluated for both the target biomarker as well as a control gene. Test validation included limit of detection, accuracy, and robustness studies with analytic samples. The method developed as a result of these studies reproducibly detect multiple fusion variants for ROS1 (C-Ros proto-oncogene 1; 8 variants) and RET (rearranged during transfection proto-oncogene; 8 variants). The sample processing workflow has been optimized so that test results can consistently be generated within 72 hours of sample receipt.

Detection of circulating ribonucleic acid (cRNA) from blood is an unmet need in clinical diagnostics. Here we describe methods that characterize cRNA from non-small cell lung cancer patients using sensitive and specific digital polymerase chain reaction. The tests meet design requirements to detect fusion variants within 72 hours.

Um sangue com base em teste para a detecção de ROS1 e RET transcrições de fusão do ácido ribonucleico, usando a reação em cadeia da polimerase Digital de circulação

We have developed novel methods for the isolation and characterization of tumor-derived circulating ribonucleic acid (cRNA) for blood-based liquid biopsy. ...

Remote Laboratory Management: Respiratory Virus Diagnostics

An uptick in recent pandemics (Ebola, Zika, MERS, influenza, etc.) underlines the need for a more 'nimble,' coordinated response that addresses a multitude of issues ranging from transportation, access, facilities, equipment, and communication to provider training. To address this need, we have developed an innovative, scalable, logistics-enhanced, mobile, laboratory facility for emergencies and epidemics in resource-constrained global settings. Utilizing a background in clinical operations as an academic medical center, we designed a rapidly-deployable, modular BSL-2 and BSL-3 facility with user-friendly software for tracking and management of drugs and supplies in remote regions during epidemics and outbreaks. Here, we present our intermodal, mobile, expandable shipping-container laboratory units. The design of the laboratory facilitates off-grid usage by minimizing power consumption and allowing alternate water sources. The unit's information communication technology (ICT) platform provides (i) user-friendly tablet-based documentation, (ii) enhanced tracking of patients and supplies, and (iii) integrated communication onsite with built-in telehealth capabilities. To ensure quality in remote environments, we have developed a checklist for a basic laboratory workflow and a protocol for respiratory viral diagnosis using reverse-transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). As described, this innovative and comprehensive approach allows for the provision of laboratory capability in resource-limited global environments.

A rapidly-deployable, off-grid laboratory has been designed and built for remote, resource-constrained global settings. The features and critical aspects of the logistically-enhanced, expandable, multifunctional laboratory modules are explored. A checklist for a basic laboratory workflow and a protocol for a respiratory viral diagnostic test are developed and presented.

Gerenciamento remoto do laboratório: Diagnósticos de vírus respiratório

An uptick in recent pandemics (Ebola, Zika, MERS, influenza, etc.) underlines the need for a more 'nimble,' coordinated response that addresses a ...

In Vivo Mouse Model of Spinal Implant Infection

Spine implant infections portend poor outcomes as diagnosis is challenging and surgical eradication is at odds with mechanical spinal stability. The purpose of this method is to describe a novel mouse model of spinal implant infection (SII) that was created to provide an inexpensive, rapid, and accurate in vivo tool to test potential therapeutics and treatment strategies for spinal implant infections.
In this method, we present a model of posterior-approach spinal surgery in which a stainless-steel k-wire is transfixed into the L4 spinous process of 12-week old C57BL/6J wild-type mice and inoculated with 1 x 103 CFU of a bioluminescent strain of Staphylococcus aureus Xen36 bacteria. Mice are then longitudinally imaged for bioluminescence in vivo on post-operative days 0, 1, 3, 5, 7, 10, 14, 18, 21, 25, 28, and 35. Bioluminescence imaging (BLI) signals from a standardized field of view are quantified to measure in vivo bacterial burden.
To quantify bacteria adhering to implants and peri-implant tissue, mice are euthanized and the implant and surrounding soft tissue are harvested. Bacteria are detached from the implant by sonication, cultured overnight and then colony forming units (CFUs) are counted. The results acquired from this method include longitudinal bacterial counts as measured by in vivo S. aureus bioluminescence (mean maximum flux) and CFU counts following euthanasia.
While prior animal models of instrumented spine infection have involved invasive, ex vivo tissue analysis, the mouse model of SII presented in this paper leverages noninvasive, real time in vivo optical imaging of bioluminescent bacteria to replace static tissue study. Applications of the model are broad and may include utilizing alternative bioluminescent bacterial strains, incorporating other types of genetically engineered mice to contemporaneously study host immune response, and evaluating current or investigating new diagnostic and therapeutic modalities such as antibiotics or implant coatings.

The protocol describes a novel in vivo mouse model of spinal implant infection where a stainless-steel k-wire implant is infected with bioluminescent Staphylococcus aureus Xen36. Bacterial burden is monitored longitudinally with bioluminescent imaging and confirmed with colony forming unit counts after euthanasia.

Modelo in vivo de infecção de implante espinhal em camundongos

Spine implant infections portend poor outcomes as diagnosis is challenging and surgical eradication is at odds with mechanical spinal stability. The ...

Dynamic Navigation for Dental Implant Placement

In modern implantology, the application of surgical navigation systems is becoming increasingly important. In addition to static surgical navigation methods, a guide-independent dynamic navigation implant placement procedure is becoming more widespread. The procedure is based on computer-guided dental implant placement utilizing optical control. This work aims to demonstrate the technical steps of a new dynamic computer-aided implant surgery (DCAIS)&#160;system (design, calibration, surgery) and check the accuracy of the results. Based on cone-beam computed tomography (CBCT) scans, the exact positions of implants are determined with dedicated software. The first step of the operation is the calibration of the navigation system, which can be performed in two ways: 1) based on CBCT images taken with a marker or 2) based on CBCT images without markers. Implants are inserted with the aid of real-time navigation according to the preoperative plans. The accuracy of the interventions can be evaluated based on postoperative CBCT images. The preoperative images containing the planned positions of the implants and postoperative CBCT images were compared based on the angulation (degree), platform, and apical deviation (mm) of the implants. To evaluate the data, we calculated the standard deviation (SD), mean, and standard error of the mean (SEM) of deviations within planned and performed implant positions. Differences between the two calibration methods were compared based on this data. Based on the interventions performed so far, the use of DCAIS allows for high-precision implant placement. A calibration system that does not require labeled CBCT recording allows for surgical intervention with similar accuracy as a system that uses labeling. The accuracy of the intervention can be improved by training.

Dynamic computer-aided implant surgery (DCAIS) is a controlled implant surgical placement method performed without a surgical template using optical control. The real-time intraoperative control of movement and position of the surgical device simplifies the procedure and gives more freedom to the surgeon, providing similar precision as static navigation methods.

Navegação dinâmica para colocação de implantes dentários

In modern implantology, the application of surgical navigation systems is becoming increasingly important. In addition to static surgical navigation ...

The Use of Mixed Reality in Custom-Made Revision Hip Arthroplasty: A First Case Report

The technology of 3D printing and visualization of anatomical structures is rapidly growing in various fields of medicine. A custom-made implant and mixed reality were used to perform complex revision hip arthroplasty in January 2019. The use of mixed reality allowed for a very good visualization of the structures and resulted in precise implant fixation. According to the authors' knowledge, this is the first described case report of the combined use of these two innovations. The diagnosis preceding the qualification for the procedure was the loosening of the left hip's acetabular component. Mixed reality headset and holograms prepared by engineers were used during the surgery. The operation was successful, and it was followed by early verticalization and patient rehabilitation. The team sees opportunities for technology development in joint arthroplasty, trauma, and orthopedic oncology.

A complex revision hip arthroplasty was performed using a custom-made implant and mixed reality technology. According to the authors&#39; knowledge, this is the first report of such procedure described in the literature.

O Uso da Realidade Mista na Artroplastia de Quadril de Revisão Personalizada: Um Primeiro Relato de Caso

The technology of 3D printing and visualization of anatomical structures is rapidly growing in various fields of medicine. A custom-made implant and mixed ...

Measuring Single-Cell Mitochondrial DNA Copy Number and Heteroplasmy Using Digital Droplet Polymerase Chain Reaction

The mammalian mitochondrial (mt)DNA is a small, circular, double-stranded, intra-mitochondrial DNA molecule, encoding 13 subunits of the electron transport chain. Unlike the diploid nuclear genome, most cells contain many more copies of mtDNA, ranging from less than 100 to over 200,000 copies depending on cell type. MtDNA copy number is increasingly used as a biomarker for a number of age-related degenerative conditions and diseases, and thus, accurate measurement of the mtDNA copy number is becoming a key tool in both research and diagnostic settings. Mutations in the mtDNA, often occurring as single nucleotide polymorphisms (SNPs) or deletions, can either exist in all copies of the mtDNA within the cell (termed homoplasmy) or as a mixture of mutated and WT mtDNA copies (termed heteroplasmy). Heteroplasmic mtDNA mutations are a major cause of clinical mitochondrial pathology, either in rare diseases or in a growing number of common late-onset diseases such as Parkinson's disease. Determining the level of heteroplasmy present in cells is a critical step in the diagnosis of rare mitochondrial diseases and in research aimed at understanding common late-onset disorders where mitochondria may play a role. MtDNA copy number and heteroplasmy have traditionally been measured by quantitative (q)PCR-based assays or deep sequencing. However, the recent introduction of ddPCR technology has provided an alternative method for measuring both parameters. It offers several advantages over existing methods, including the ability to measure absolute mtDNA copy number and sufficient sensitivity to make accurate measurements from single cells even at low copy numbers. Presented here is a detailed protocol describing the measurement of mtDNA copy number in single cells using ddPCR, referred to as droplet generation PCR henceforth, with the option for simultaneous measurement of heteroplasmy in cells with mtDNA deletions. The possibility of expanding this method to measure heteroplasmy in cells with mtDNA SNPs is also discussed.

Here we present a protocol for measuring absolute mitochondrial (mt)DNA copy number and mtDNA deletion heteroplasmy levels in single cells.