Gli autori vorrei ringraziare Curetis GmbH per sostenere questo studio.

Questo studio è stato approvato dal comitato etico locale (046/09, Rev. 3). Consenso informato e informativa sulla privacy sono stati ottenuti da tutti i pazienti inclusi.
1. comune aspirazione
Nota: La procedura deve essere eseguita in un teatro chirurgico o un intervento con condizioni asettiche comparabili. Assistenza da un infermiere o assistenza di medico è utile ma non obbligatorio.
<ol><li>Posizionare il paziente in posizione supina su un letto di esame. Assicurarsi che il giunto di interesse sia privo di abbigliamento. Accorciare il corpo denso o lunghi capelli usando tagliatori elettrici. Non rimuovere i peli con un rasoio. Se l'articolazione dell'anca è quello di essere perforato, posizionare un fluoroscopio in direzione antero-posteriore. Se il ginocchio deve essere perforato, posizionare una bobina di ginocchio sotto al ginocchio del paziente, tale che il ginocchio si riposa in una posizione leggermente flessa13.</li>
	<li>Preparare un tavolo per strumenti con la seguente attrezzatura sterile: tamponi sterili, un telino fenestrato telo sterile, un bisturi sterile monouso, lama chirurgica appuntita (tipo #11) e siringa sterile da 10 mL con cannula sterile (20 gauge, 80 mm). Stabiliti separatamente disinfettante alcolico pelle, prelievo di sangue e un matraccio di cultura del sangue pediatrici.</li>
	<li>Vestito in un abito chirurgico, il cappuccio e la maschera e indossare guanti sterili.</li>
	<li>Lavare accuratamente la pelle del paziente presso il sito di puntura (p.e. superior recessus14 per l'area del portale anterolateral e del ginocchio per l'anca) con un disinfettante della pelle. Nota: Mente il tempo di esposizione necessario per il disinfettante usato (solitamente 90 s al ginocchio, 120 s all'anca per disinfettanti alcolici).</li>
	<li>
Coprire il sito di puntura con un telo di copertura sterile fenestrato. Identificare il sito di puntura. Nota: Per il ginocchio, il sito corretto è 2 cm sopra il polo superiore della rotula e laterale di 2 cm al faccetta laterale. Per l'anca, trovare la spina dorsale iliaca superiore anteriore e spostare caudalmente fino a quando non è in linea con la sinfisi superiore. Assicurarsi che il sito sia laterale all'arteria femorale (circa 4 cm), che può sempre essere palpato15.<ol>
<li>Fare una piccola incisione attraverso la pelle (3-4 mm largo e profondo) con la lama del bisturi aguzzo presso il sito di puntura. Non applicare anestetici locali in quanto possono causare falsi negativi nella coltura microbiologica, dovuto il loro effetto batteriostatico.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Collegare la cannula allo slip Luer della siringa. Inserire la cannula attraverso l'incisione lo stab. Al vano superiore dell'articolazione del ginocchio, mirare a un angolo di 45° dorsale e mediale, verso l'incavo sotto il polo superiore della rotula e inserire l'ago ad una profondità di circa 5 cm. aspirato il liquido articolare disegnando su pistone della siringa.
	<ol>
<li>Utilizzare informazioni aggiuntive fluoroscopio quando perforando un giunto di anca. Inserire l'ago nel sito di puntura, mirando medialmente ad un angolo di 60°. Nel fluoroscopio, assicurarsi che la punta dell'ago è puntata al collo di protesi. Fare avanzare la cannula ad una profondità di circa 8 cm (più profondo in pazienti adiposi) mentre ad aspirazione, fino a quando il liquido sinoviale è raggiunto. Tenere l'ago in posizione durante l'aspirazione, per evitare di raschiare la superficie della protesi. Nota: Contatto della punta dell'ago con la protesi garantisce un posizionamento intra-articolare. Di solito, non più di 5 mL di liquido può essere aspirato forma un giunto di anca, un giunto di ginocchio produrrà più di 10 mL.</li>
		<li>Dopo la rimozione della cannula, applicare una medicazione sterile per l'incisione. Per evitare la formazione di ematoma, applicare una benda alla gamba con leggera compressione.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Trasferire l'aspirato congiunto raccolto nei contenitori del campione. Garantire sterili tecniche di lavorazione in tutto.
	<ol>
<li>Per inoculazione del matraccio di cultura del sangue pediatrici con il liquido aspirato congiunto, disinfettare la membrana del matraccio di cultura del sangue pediatrici con disinfettante alcolico. Mettere una cannula fresca sulla siringa e iniettare 1 a 3 mL di liquido aspirato congiunta il matraccio di cultura del sangue. Mescolare di agitazione o rotazione dolce16.</li>
		<li>Per la preparazione di un esemplare aspirato comune nativo, è necessario rimuovere la cannula dalla siringa. Aprire una provetta senza additivi e iniettare 1 mL di aspirato in questo tubo di raccolta. Riposizionare e fissare il coperchio per l'analisi di PCR. Nota: Spedire il campione al laboratorio di microbiologia senza indugio per l'analisi di PCR. Dallo stesso campione, colture microbiologiche convenzionali di aerobiche ed anaerobiche possono anche istituire17.</li>
		<li>Trasferimento da 1 a 4 mL di aspirato congiunto in una provetta contenente EDTA per conteggio e la differenziazione di cellula2. Spedire il campione ad un laboratorio di biochimica senza alcun ritardo.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. PCR diagnostica
<ol><li>Assicurarsi che tutti e tre i dispositivi (il lysator, l'analizzatore e il cockpit; Vedi la tabella materiali) sono installato e funzionante correttamente. Indicate tutte le forniture necessarie per l'esecuzione del test (la cartuccia PCR, un tubo di mix master, la provetta con il campione e cappuccio del tubo di campione, uno 0 - 200 micropipetta µ l e Puntali sterili) sul banco di lavoro.</li>
	<li>Scongelare il tubo mix master prima di iniziare la procedura, fissando a temperatura ambiente. Tutti i consumabili (provetta master mix, cartuccia e provetta) sono già prelabeled con un codice a barre.</li>
	<li>Rimuovere il tappo della provetta del campione. Prendere 180 µ l di campione raccolto (congiunta aspirato, vedere la sezione 1; o fluido di sonicazione, vedere la sezione 4) con una pipetta e trasferimento nel campione di tubo. Chiudere la provetta con il tappo del tubo di campione contenente proteine chinasi K e un gene di controllo interno per il controllo di qualità di tutto il workflow.</li>
	<li>Presso il cockpit, aprire il software operativo toccando il "nuovo test" pulsante in basso a sinistra. Immettere i dati del paziente o un ID campione tramite il touchscreen. Per selezionare il campione, prima scegli "ITI-cartuccia" dal menu a discesa, quindi "ortopedia" come modalità di applicazione e infine selezionare "liquido sinoviale" o "sonicazione fluido" come tipo di campione. Premere il pulsante start.</li>
	<li>Eseguire la scansione del codice a barre sul fondo della provetta del campione. Inserire la provetta con il campione del lysator. Nota: Il processo di lisi verrà avviato automaticamente e vorranno circa 30 minuti alla fine. Conto alla rovescia del timer sullo schermo lysator indicherà quando è terminata la lisi.</li>
	<li>Selezionare il campione sullo schermo di pozzetto per sbloccare la provetta con il campione dalla lysator. Rimuovere il tubo di campionamento dalla lysator e chiudere il coperchio superiore di lysator. Trasferimento nella provetta nello slot campione tubo della cartuccia PCR. Inserire il tubo di mastermix scongelati nello slot mastermix della cartuccia PCR.</li>
	<li>Seguire le istruzioni sul monitor del pozzetto, la cartuccia PCR con tubo mastermix e campione di scansione.</li>
	<li>Inserire la cartuccia PCR cartuccia indicata nello slot dell'analizzatore. Al termine dell'operazione, l'analizzatore rilascia la cartuccia. Nota: Le condizioni PCR sono preimpostate dal costruttore e non possono essere modificate dall'utente. Per ulteriori informazioni vedere Guida all'applicazione del produttore. Il processo PCR inizierà automaticamente e prendere circa 4 h e 10 min.</li>
	<li>Rimuovere e scartare la cartuccia. Il touchscreen di pozzetto, a scegliere "attuale test" in basso a sinistra, quindi scegliere l'ID corretto campione per visualizzare i risultati del test. Salvare i risultati sulla memoria della macchina e stampare o esportare (tramite drive USB) per ulteriore riferimento. Nota: Riportare il risultato della PCR, compreso l'identificazione dell'agente patogeno e individuazione di marcatori di resistenza, al chirurgo senza indugio. Un pannello con 114 acido deossiribonucleico (DNA) target di patogeni batterici e fungini trovato tipicamente in infezioni di protesi e infezioni dei tessuti molli, insieme con i marcatori di resistenza agli antibiotici più comuni sono analizzati.</li>
</ol>3. intervento chirurgico: Intraoperative campionario
Nota: Intervento di artroplastica di revisione richiede un livello di esperti di abilità e competenze; per una panoramica completa delle procedure chirurgiche, fare riferimento al libri di testo18 di chirurgo. Una descrizione completa e dettagliata della procedura chirurgica sarebbe ben oltre la portata di questo articolo. Qui il focus è sui dettagli della raccolta del campione e pre-analisi. Nell'intervento di artroplastica di revisione, astenersi dalla somministrazione di una profilassi antibiotica colpo singola, come non a compromettere i risultati dei campioni microbiologici ottenuti durante la chirurgia. Aderendo a questa regola è consigliato, anche se questa pratica è discutibile19,20. Utilizzare il metodo chirurgico esistente per il giunto quando possibile. Gli approcci chirurgici supplementari saranno danneggiare tessuti molli e aumentare la formazione della cicatrice.
<ol><li>Sezionare il tessuto fino a quando la capsula articolare è ben esposta. Eseguire l'artrotomia con una siringa a portata di mano, così ulteriormente sinoviale possa essere raccolti nella siringa sterile per ulteriori analisi come indicato in precedenza (punti 1.7.1-1.7.3). Nota: Nessun fluidi di lavaggio antisettico devono essere utilizzati fino a quando l'impianto viene rimosso e sono stati prelevati campioni di tessuto.</li>
	<li>Rimuovere la protesi articolari. Immediatamente dopo la rimozione, è possibile trasferire le parti di impianto in un contenitore sterile di plastica con un coperchio a tenuta d'aria e acqua. Nota: Istruzioni dettagliate per la rimozione dell'impianto possono essere trovate nella letteratura libro libro di testo (ginocchio, per esempio: Wirtz et al., capitolo 16.421; Anca, per esempio: Claes et al., capitolo 14.5.122). Strumenti specifici possono essere necessari, come indicato dalle istruzioni dei costruttori. La tecnica di rimozione dell'impianto varia considerevolmente tra impianto diversi tipi e metodi di fissazione. Un set di scalpelli e punte, un martello scorrevole e un set di rimozione del chiodo intramidollare universale sono utile nella rimozione di impianti integrati ossuta23,24.</li>
	<li>Utilizzare un curette tagliente sterili, pinze e Pinza ossivora per rimuovere i tessuti a membrana dall'interfaccia osso-impianto. Trasferire un campione rappresentativo del tessuto in un contenitore sterile di plastica con coperchio a vite, come campioni per microbiologia e l'istologia. Nota: Un alesatore può essere utilizzato per cancellare il canale midollare di tutti i tessuti molli. Inoltre, prendere il tessuto sinoviale e capsula articolari campioni per esami e conservarli in contenitori sterili. Almeno quattro esemplari in totale devono essere raccolti.</li>
	<li>Inviare istantaneamente tutte le parti espiantati e i campioni al laboratorio di microbiologia. Nota: Gli antibiotici quindi possono essere dato. La scelta degli antibiotici corretti è essenziale e deve essere una decisione individuale25,26. Concetti terapeutici devono essere decisa da un gruppo interdisciplinare di chirurghi e microbiologi in anticipo.</li>
	<li>Completare lo sbrigliamento del sito implantare ex rimuovendo qualsiasi tessuto che mostra segni di detriti (ad esempio usura del polietilene, metallo o particelle di cemento) o infezione e necrosi (tessuti purulenti, avascolare, rivestite con fibrina, membranosi o "sludge metal"). Rimuovere qualsiasi osso morto o osteitic. Rimuovere tutti i materiali estranei come viti, fili, cerchiaggi, detriti di cemento osseo o suture non riassorbibili (vedi Claes et al., capitolo 14.5.322).</li>
	<li>Irrigare il sito chirurgico utilizzando un disinfettante di ferita di scelta utilizzando una siringa da 50 mL. Irrigare con abbondanti quantità (almeno 3 L) di soluzione di ringer con un sistema di lavaggio pulsato. Un distanziatore può essere necessario per stabilizzare il comune27.</li>
	<li>Chiudere la ferita usando rivestite con antimicrobico suture riassorbibili profonde per la capsula o la gronda (polyglactin intrecciato suture, rivestite con triclosan, USP 2) e il tessuto sottocutaneo (suture polyglactin intrecciato, rivestite con triclosan, USP 0). Chiudere la pelle usando i suturare interrotti non-resorbing (monofilic polipropilene, USP 0 o USP 2-0).</li>
</ol>4. sonicazione
Nota: Fare attenzione a lavorare strettamente asetticamente. Utilizzare una panchina di sicurezza biologica di classe II con flusso d'aria laminare per l'ulteriore elaborazione del materiale espiantato.
<ol><li>Aprire il contenitore di plastica che tiene la protesi explanted dalla sala operatoria (Vedi punto 3.2) sotto un banco di lavoro di flusso d'aria laminare e aggiungere soluzione sterile di cloruro di sodio 0,9% fino a quando il corpo estraneo explanted è coperto almeno 80% (circa 500-800 mL).</li>
	<li>Chiudere il contenitore di plastica. Agitare accuratamente o agitare il contenitore di plastica usando un miscelatore vortex su ad alta intensità per 30 s. trasferimento del contenitore in plastica nel bagno di sonicazione. Controllare il livello del liquido nel bagno di sonicazione. Nota: Il livello del liquido bagno sonicazione deve essere lo stesso all'interno del contenitore di plastica. Assicurarsi che il contenitore di plastica non può essere allagato e se necessario, aggiunta o rimuovere il liquido dal bagno di sonicazione.</li>
	<li>Sonicare il campione per 5 minuti con una frequenza di 40 ± 2 kHz e potenza densità 0.22 ± 0,04 W/cm2. Frullato o vortice il campione accuratamente per 30 s. Nota: Tempi di sonicazione tra 1-5 min sono migliori per la dissoluzione del biofilm, senza alcuna influenza su vitalità batterica28.</li>
	<li>All'interno del banco di flusso laminare, raccogliere 50 mL del fluido sonicazione e trasferirlo in una provetta sterile, ermeticamente chiusi.</li>
	<li>Per creare un fluido concentrato sonicazione, centrifugare la provetta per 10 min a 4.200 g. x lasciando un volume residuo di 10 mL, scartare il surnatante con una pipetta rimanente. Risospendere il pellet di pipettaggio e Vortex.</li>
	<li>Inoculare idonei terreni di coltura (per esempio agar sangue, agar cioccolato, Sabouraud agar, agar di Schaedler, agar kanamicina-vancomicina o brodo tioglicolato) con 0,5 mL di sonicazione concentrato fluido ogni. Inoculare il matraccio di cultura del sangue pediatrici con 2 mL come descritto in precedenza (Vedi punto 1.7.1). Trasferire 1 mL di fluido concentrato sonicazione in una provetta senza additivi per l'analisi di PCR.</li>
	<li>Trasferire i terreni di coltura inoculato nell'incubatore (35 ° C, 5% CO2). Incubare le colture per 14 giorni e controllare la crescita ogni giorno.</li>
	<li>Dopo 14 giorni, scartare le culture senza crescita e relazione come negativo. Se viene rilevata la crescita, eseguire l'identificazione dell'agente patogeno utilizzando tecniche standard d'identificazione ed antibiogramma. Segnalare il risultato al chirurgo senza indugio. Nota: Qui, identificazione di patogeni è stato effettuato utilizzando Matrix-assisted LASER detezione/ionizzazione - time della spettroscopia di volo (MALDI-TOF). Test di suscettibilità antimicrobica è stata eseguita con un analizzatore semiautomatica29,30,31.</li>
</ol>

<ol>
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E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advantages+of+sonication+fluid+culture+for+the+diagnosis+of+prosthetic+joint+infection.">Advantages of sonication fluid culture for the diagnosis of prosthetic joint infection.</a> J Infect. 69 (1), 35-41 (2014).</li><li>Scorzolini, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sonication+technique+improves+microbiological+diagnosis+in+patients+treated+with+antibiotics+before+surgery+for+prosthetic+joint+infections.">Sonication technique improves microbiological diagnosis in patients treated with antibiotics before surgery for prosthetic joint infections.</a> New Microbiol. 37, 321-328 (2014).</li><li>Zhai, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meta-analysis+of+sonication+fluid+samples+from+prosthetic+components+for+diagnosis+of+infection+after+total+joint+arthroplasty.">Meta-analysis of sonication fluid samples from prosthetic components for diagnosis of infection after total joint arthroplasty.</a> J Clin Microbiol. 52 (5), 1730-1736 (2014).</li><li>Panousis, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Poor+predictive+value+of+broad-range+PCR+for+the+detection+of+arthroplasty+infection+in+92+cases.">Poor predictive value of broad-range PCR for the detection of arthroplasty infection in 92 cases.</a> Acta Orthop. 76 (3), 341-346 (2005).</li><li>Rak, M., KavcIc, M., Trebse, R., Co, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+bacteria+with+molecular+methods+in+prosthetic+joint+infection:+sonication+fluid+better+than+periprosthetic+tissue.">Detection of bacteria with molecular methods in prosthetic joint infection: sonication fluid better than periprosthetic tissue.</a> Acta Orthop. 87 (4), 339-345 (2016).</li><li>Li, Z., Yu, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+value+of+a+PCR-based+technique+for+prosthetic+joint+infection.">Diagnostic value of a PCR-based technique for prosthetic joint infection.</a> J Clin Microbiol. 52 (6), 2281-2282 (2014).</li></ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Corpo estraneo l'infezione è un problema emergente in Ortopedia e traumatologia con trattamento costoso, lungo ricovero in ospedale e deficit funzionale delle articolazioni colpite. La diagnostica differenziale è impegnativa. Molti ricercatori e clinici stanno dando attenzione a questo argomento, cercando di trovare più precisi e metodi affidabili per la diagnosi di corpo estraneo infezioni nosocomiali. Fin qui, molti strumenti diagnostici diversi vengono attuate nella diagnostica percorso32.
La procedura di sonicazione è un metodo prezioso, che mostrano una sensibilità migliore rispetto le colture convenzionali da campioni di tessuto6. Nel nostro studio, abbiamo dimostrato che le colture del liquido sonicazione hanno una sensibilità di 88,9% con una specificità pari al 61,5%. Le colture convenzionali da campioni di tessuto e misto aspira entrambi ha avuto una sensibilità di 66,7% con una specificità di 82,3% e 84,6%, rispettivamente. Altri ricercatori mostrano risultati simili per queste procedure microbiologiche convenzionali6,33,34,35. Si è spesso criticato che procedura di sonicazione è incline alla contaminazione, quindi dovrà prestare particolare attenzione nella manipolazione dei campioni.
La possibilità di rilevare il DNA di un agente patogeno causativo in campioni di tessuto o liquidi è intrigante. NAT è una procedura rapida che può fornire risultati entro un paio d'ore, rispetto ad i metodi di coltura microbiologica che richiede tempo. Senza dubbio, NAT ha una buona sensibilità nel rilevare gli agenti patogeni, ma tenere il rischio di rilevare contaminanti, così carente di specificità36. Il grande vantaggio di questa tecnica PCR nella diagnosi di PJI è stato documentato soprattutto in pazienti che hanno ricevuto terapia antibiotica vicino alla chirurgia o per un più lungo periodo7,8. Gli studi suggeriscono che NAT del fluido di sonicazione può aumentare ulteriormente la sensibilità e specificità37. Purtroppo, questa tecnica non è normalmente disponibile nei laboratori, a causa del suo flusso di lavoro che richiede tempo.
Ci sono alcune limitazioni per la tecnica PCR in generale: NAT rileva DNA senza differenziazione tra batteri vitali e non vitali, rendendo difficile l'interpretazione dei risultati. Vasto-gamma PCR rileverà solo acido ribonucleico ribosomiale 16S (16S rRNA), non distinguendo tra agenti patogeni37. Più specifici sistemi ordinariamente non rilevare marcatori di resistenza antibiotica codificata dal gene. Una terapia antibiotica mirata può quindi essere limitata senza ulteriore test di suscettibilità.
Il sistema applicato in questo studio supera alcune di queste limitazioni, differenziando tra batteri specifici e identificazione di marcatori di resistenza gene-codificati. Nel complesso, saggi di NAT possono essere considerati come una complementazione veloce e utile per confermare PJI7,8,9,38.
È necessario pianificare in anticipo in aspirazione comune ed in chirurgia: contenitori per campioni devono essere sterile e pronto, e trasporto richiesta campione devono essere disponibile. I chirurghi dovrebbero breve loro microbiologi su previste procedure e cosa materiale aspettarsi campione. Quando eseguire l'aspirazione comune, condizioni rigorosamente sterile deve essere assicurata, per prevenire l'infezione iatrogenica del giunto. In pazienti adiposi, puntura congiunta può essere impegnativa e guida fluoroscopica può essere utile. Intervento di artroplastica di revisione richiede un altissimo livello di competenza e deve essere eseguita solo da un chirurgo esperto. Explanted materiale non dovrebbe essere tenuto nella sala operatoria più del necessario, ma essere inviato per il microbiologo appena possibile. Una parte molto critica all'interno di questo protocollo è il potenziale rischio di contaminazione. Non solo durante la raccolta dei campioni, ma anche durante la manipolazione dei campioni al laboratorio di microbiologia, tutto il personale coinvolto (chirurgo ortopedico, infermieri, tecnici, microbiologi) devono lavorare rapidamente e con precisione e avere una formazione adeguata nelle procedure.
Sonicazione e NAT sono strumenti importanti nella diagnosi di infezioni associate all'impianto. Tuttavia, i risultati dovrebbero essere interrogati sempre con attenzione. Si consiglia di discutere i risultati in una tavola rotonda di chirurghi ortopedici, microbiologi e specialisti in malattie infettive e patologi per concordare la strategia terapeutica individualizzata.
Per implementare questa tecnica della diagnostica percorso di PJI può avere diversi vantaggi. È una diagnosi rapida con un risultato entro ore. A causa l'analisi di diversi marcatori di resistenza gene codificato, una terapia antibiotica mirata può avvenire in una fase molto precoce nel decorso clinico. Come effetto collaterale, gli antibiotici di vasto-gamma possono essere salvati per le indicazioni di cui sono veramente necessari. Altri tipi di campioni (ad es. gli esemplari del tessuto, tamponi, ematoma, ecc.) possono anche essere studiati secondo il nostro protocollo. Poiché la cartuccia PCR è un sistema chiuso, non risoluzione dei problemi è necessario o possibile sul lato utente. Qualsiasi adattamento del protocollo deve essere implementata dal produttore. Cambiamenti nel software e hardware (cartuccia) sono continuamente fatti dal produttore per migliorare il sistema, tuttavia nessuna informazione sono resi pubblica nelle modifiche esatte nelle versioni più recenti.

Arthroplasties doloroso sono una sfida diagnostica in chirurgia ortopedica. Dopo mobilizzazione asettica, PJI è il secondo maggior motivo per fallimento dell'impianto e presenta una complicazione devastante dopo l'intervento di artroplastica. PJI è difficile da diagnosticare e difficile da trattare. Mancata diagnosi di un risultato probabile di volontà PJI nell'infezione ricorrente, con morbilità maggiore, perdita della funzione e la perdita della qualità di vita. Pertanto, infezione dovrebbe essere esclusa in tutti i pazienti che presentano con arthroplasty doloroso, prima vengono avviate misure terapeutiche.
Storia del paziente, esame clinico, l'esame del sangue per CRP e numero di globuli bianchi, così come radiografia o szintigraphy dell'articolazione colpita costituiscono la diagnostica di base1. La routine preoperatoria dovrebbe includere anche un'aspirazione comune in condizioni sterili, ove possibile. L'aspirato ha acquisito è un materiale molto prezioso nella ulteriore diagnostica.
Oltre al conteggio delle cellule e differenziazione cellulare in comune aspirato come analisi consolidata2, l'individuazione di biomarcatori di proteina può aiutare nella diagnostica differenziale3,4,5. Coltura microbiologica convenzionale resta il gold standard nel rilevamento del patogeno. Biofilm, causate da batteri Gram-positivi e Gram-negativi sia aderente alle superfici dell'impianto, sono un importante fattore patogeno in PJI. Pertanto, nel 2007, la procedura di sonicazione è stata implementata nel sistema diagnostico di stranieri associata al corpo infezioni in chirurgia ortopedica, interrompendo il biofilm su impianti rimossi per consentire il rilevamento del patogeno. I batteri sono quindi ripresi dalla loro forma che riposa alla forma attiva, rendendo l'individuazione nella cultura possibili. Sonicazione di impianti rimossi ha mostrato una sensibilità maggiore rispetto culture da tessuto esemplari (78,5% vs 60,8%)6.
Test di amplificazione degli acidi nucleici (NAT), come la PCR, si è recentemente trasferita nella portata dei clinici ed i microbiologi per diagnosticare PJI. Particolarmente in pazienti che hanno ricevuto terapia antibiotica prima dell'intervento, è stato indicato che la PCR diagnostica è utile nell'identificare gli organismi causativi7,8,9. Ultimamente, è stato introdotto un nuovo sistema multiplex PCR, appositamente progettato per infezioni dell'impianto e dei tessuti (ITI). Questo sistema basato su cartuccia offre una varietà di marcatori genomici per l'identificazione di agenti patogeni e marcatori di resistenza agli antibiotici. Tra la sua gamma di applicazione sono numerose indicazioni (infezioni protesiche articolari, infezioni del sito chirurgico, infezioni correlate a cardiology, infezioni catetere-associate, infezioni del piede diabetico, profonda della pelle e infezioni dei tessuti molli, impiantare infezioni, e ferita da ustione infezioni), e un ampio panel di materiale campione può essere utilizzato per questa tecnica (sonicazione liquido, liquido sinoviale, tamponi, tessuto, pus, aspirato/essudato e biofilm)10,11,12.
È il più grande vantaggio della procedura, rispetto ai convenzionale microbiologia, velocità: l'agente patogeno causativo possa essere identificato entro ore. Inoltre, questo sistema PCR rileva un ampio panel di marcatori di resistenza gene-codificati, permettendo l'inizio della terapia antibiotica mirata all'inizio. Con l'assistenza di PCR, i chirurghi possono essere in grado di distinguere tra pazienti infetti e non infetti in una fase molto precoce nella procedura diagnostica11. Qui, presentiamo il protocollo per eseguire questo multiplex PCR, diagnosticare rapidamente PJI da aspirato congiunta e fluido di sonicazione.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="900">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">sterile plastic container&#160;</td>
			<td style="width:333px;">Lock &#38; Lock, Distributor ISI GmbH, Solingen, Germany</td>
			<td style="width:119px;">EAN 8803733184403</td>
			<td style="width:232px;">Transport container for implants</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bactosonic 14.2&#160;</td>
			<td>Bactosonic, Bandelin, Berlin, Germany</td>
			<td align="right" style="width:119px;">3290</td>
			<td>&#34;Sonication machine&#34;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">50ml Falcon tubes</td>
			<td>Becton &#38; Dickinson, Heidelberg, Germany</td>
			<td align="right" style="width:119px;">352070</td>
			<td>Centrifugation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PEDS medium blood culture flasks&#160;</td>
			<td>Becton &#38; Dickinson, Heidelberg, Germany</td>
			<td align="right" style="width:119px;">442194</td>
			<td>culture medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Columbia agar with 5% sheep blood</td>
			<td>Becton &#38; Dickinson, Heidelberg, Germany</td>
			<td align="right" style="width:119px;">254071</td>
			<td>culture medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mac Conkey agar</td>
			<td>Becton &#38; Dickinson, Heidelberg, Germany</td>
			<td align="right" style="width:119px;">254078</td>
			<td>culture medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">chocolate agar&#160;</td>
			<td>Becton &#38; Dickinson, Heidelberg, Germany</td>
			<td align="right" style="width:119px;">254089</td>
			<td>culture medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">sabouraud agar&#160;</td>
			<td>Becton &#38; Dickinson, Heidelberg, Germany</td>
			<td align="right" style="width:119px;">254096</td>
			<td>culture medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">thioglycolate bouillon&#160;</td>
			<td>Becton &#38; Dickinson, Heidelberg, Germany</td>
			<td align="right" style="width:119px;">221788</td>
			<td>culture medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Schaedler agar</td>
			<td>Becton &#38; Dickinson, Heidelberg, Germany</td>
			<td align="right" style="width:119px;">254084</td>
			<td>culture medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">kanamycin/vancomycin agar</td>
			<td>Becton &#38; Dickinson, Heidelberg, Germany</td>
			<td align="right" style="width:119px;">254077</td>
			<td>culture medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bactec FX blood culture system&#160;</td>
			<td>Becton &#38; Dickinson, Heidelberg, Germany</td>
			<td style="width:119px;">441386/441385</td>
			<td>culture medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Unyvero A50 Analyzer</td>
			<td style="width:333px;">Curetis, Holzgerlingen, Germany</td>
			<td align="right" style="width:119px;">60001</td>
			<td>PCR machine</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Unyvero L4 Lysator</td>
			<td style="width:333px;">Curetis, Holzgerlingen, Germany</td>
			<td align="right" style="width:119px;">60002</td>
			<td>PCR machine</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Unyvero C8 Cockpit</td>
			<td style="width:333px;">Curetis, Holzgerlingen, Germany</td>
			<td align="right" style="width:119px;">60003</td>
			<td>PCR machine</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Unyvero M1 Masterix Tube</td>
			<td style="width:333px;">Curetis, Holzgerlingen, Germany</td>
			<td align="right" style="width:119px;">10002</td>
			<td>consumables PCR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Unyvero i60 ITI Cartridge</td>
			<td style="width:333px;">Curetis, Holzgerlingen, Germany</td>
			<td align="right" style="width:119px;">10040</td>
			<td>consumables PCR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Unyvero Sample Tube Cap</td>
			<td style="width:333px;">Curetis, Holzgerlingen, Germany</td>
			<td align="right" style="width:119px;">10004</td>
			<td>consumables PCR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Unyvero Sample Tube</td>
			<td style="width:333px;">Curetis, Holzgerlingen, Germany</td>
			<td align="right" style="width:119px;">10003</td>
			<td>consumables PCR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">S-Monovette 2.7ml</td>
			<td style="width:333px;">Sarstedt AG, N&#252;mbrecht, Germany</td>
			<td style="width:119px;">05.1729.001&#160;</td>
			<td>Transport container (aspirate)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">scalpel typ 11</td>
			<td style="width:333px;">pfm medical, Cologne, Germany</td>
			<td align="right">200130011</td>
			<td>scalpel for stab incision</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">PP Container 70mL 55x45mm</td>
			<td style="width:333px;">Sarstedt AG, N&#252;mbrecht, Germany</td>
			<td align="right">759,922,721</td>
			<td>Transport container (tissue specimen)</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Vicryl Plus</td>
			<td style="width:333px;">Johnson&#38;Johnson Medical GmbH, Ethicon Germany, Norderstedt, Germany</td>
			<td>VCP247H</td>
			<td>surgical suture material</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Prolene 0</td>
			<td style="width:333px;">Johnson&#38;Johnson Medical GmbH, Ethicon Germany, Norderstedt, Germany</td>
			<td>EH7920H</td>
			<td>surgical suture material</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Prolene 2/0</td>
			<td style="width:333px;">Johnson&#38;Johnson Medical GmbH, Ethicon Germany, Norderstedt, Germany</td>
			<td>EH7697H</td>
			<td>surgical suture material</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Kodan&#160; Tinktur forte farblos</td>
			<td style="width:333px;">Sch&#252;lke &#38; Mayr GmbH, Norderstedt, Germany</td>
			<td align="right" style="width:119px;">104005</td>
			<td>alcoholic skin disinfectant</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

novel diagnostics in revision arthroplasty: implant sonication and multiplex polymerase chain reaction

Nei pazienti ortopedici, straniere associata al corpo infezioni, infezioni articolari soprattutto periprosthetic (PJIs), sono una complicazione devastante di arthroplasty. L'infezione richiede un trattamento complesso, può comportare costi notevoli lungo ricovero in ospedale e le cause. Revisioni chirurgiche multiple possono essere necessarie in questi pazienti, con una perdita in funzione così come nella qualità della vita.
La routine diagnostica preoperative include l'esame del sangue per proteina C - reattiva (CRP) e altri biomarcatori, nonché analisi congiunta aspirato per conteggio delle cellule, la differenziazione e la cultura. Intraoperative esemplari per istologia e microbiologia sono anche procedura standard. L'esame microbiologico di impianti rimossi con sonicazione, in combinazione con l'implementazione di tecniche di biologia molecolare in microbiologia, rappresentano due nuove tecniche attualmente impiegate per migliorare la diagnostica differenziale di PJI.
Presentiamo qui la procedura graduale di analisi congiunta aspirato e fluido di sonicazione, utilizzando un sistema di reazione a catena (PCR) basati su cartuccia multipla della polimerasi. Risultati sono stati confrontati con le colture convenzionali e criteri di consenso per PJI. Le colture microbiologiche convenzionali da biopsie dei tessuti, comune aspirato e fluido di sonicazione ha mostrato una sensibilità di 66,7%, 66,7% e 88,9%, rispettivamente e una specificità di 82,3%, 54,6% e 61,5%, rispettivamente. La PCR diagnostica del liquido sonicazione e il liquido sinoviale ha mostrato una sensibilità del 50,0% e 55,6%, rispettivamente e sia una specificità di 100.0%. Sia la diagnostica PCR combinata ha avuto una sensibilità di 66,7% e una specificità di 100.0%. La PCR multiplex rappresenta pertanto uno strumento diagnostico rapido con sensibilità moderata ma alta specificità nella diagnosi di PJI.

Presenza di un PJI, come definito dalla riunione di consenso di società l'infezione osteomuscolare (MSIS), è stata considerata provata quando un criteri maggiori o almeno tre su cinque criteri minori erano presenti. Criteri maggiori includono la presenza di una fistola o l'individuazione di un agente patogeno in due campioni microbiologici separati. Criteri minori comprendono il conteggio delle cellule positive (> 3.000 leucociti / µ l) o differenziazione delle cellule positive (> 85% granulociti neutrofili) in comune aspirato, tasso positivo di CRP e sedimentazione nel sangue campioni, l'istologia positiva in campioni di tessuto o rilevamento di un agente patogeno in un solo campione microbiologico19. Sensibilità e specificità sono state calcolate per test di amplificazione degli acidi nucleici (NAT), rispetto ai MSIS gold standard. Dati del paziente, compresi i patogeni rilevati, sono riportati nella tabella 1.
Nostri risultati hanno mostrato una moderata sensibilità per la PCR diagnostica di sonicazione fluido e congiunta aspirato (50,0% e 55,6%) ma una specificità molto forte di 100%11. Ogni volta che PCR diagnostica (Totale n = 62 test) ha mostrato un risultato positivo in aspirato congiunto (n = 31) o il fluido di sonicazione (n = 31), l'agente patogeno stesso è stato rilevato più successivamente in una delle colture microbiologiche convenzionali. La PCR dei campioni differenti di casi di infezione non ha mostrati nessun falso positivo risultato (Vedi Figura 1).
La PCR diagnostica non è riuscito a rilevare alcuni agenti patogeni che sono state dimostrate con metodi di coltura microbiologica convenzionale. agenti patogeni vero 6 su 16 (37,0%) in campioni di liquido di sonicazione e 5 su 13 (38,0%) patogeni dalla comune cultura fluido sono stati mancati tramite rilevazione di PCR. Principalmente, la diagnostica PCR mancato rilevamento di stafilococchi coagulasi-negativi (8 su 11). La diagnostica PCR combinata di entrambi i materiali (liquido articolare aspirato e sonicazione, "pool PCR") identificato correttamente 12 su 18 casi di infezione (sensibilità 66,7%, 95% CI: 41,0% a 86,7%, Vedi tabella 2).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55147/55147fig1.jpg"> Figura 1: Risultati di riepilogo di NAT. Il grafico mostra i risultati riassunti dei campioni collettivi. Sul lato destro è il gruppo di pazienti PJI coincidenti, sul lato sinistro è il gruppo che non ha fatto. Le barre rappresentano i metodi di amplificazione dell'acido nucleico. Falsi positivi e falsi negativi sono mostrati in rosso come percentuale del totale. <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55147/55147fig1large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<table fo:keep-together.within-page="1"><tbody><tr><td>Giunto</td>
			<td>Causa di Revisione</td>
			<td>Partite MSIS criteri?</td>
			<td>Precedente trattamento antibiotico?</td>
			<td>Coltura fluida sonicazione</td>
			<td>Cultura comune aspirato</td>
			<td>Cultura di sonicazione NAT</td>
			<td>Aspirato congiunta NAT</td>
		</tr><tr><td>Anca</td>
			<td>mobilizzazione asettica</td>
			<td>No</td>
			<td>No</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Al ginocchio</td>
			<td>mobilizzazione asettica</td>
			<td>No</td>
			<td>No</td>
			<td>Linfonodi epidermidis</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Al ginocchio</td>
			<td>mobilizzazione asettica</td>
			<td>No</td>
			<td>No</td>
			<td>Dermabacter hominis</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Al ginocchio</td>
			<td>mobilizzazione asettica</td>
			<td>No</td>
			<td>No</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Al ginocchio</td>
			<td>mobilizzazione asettica</td>
			<td>No</td>
			<td>No</td>
			<td>Xyli Aquatica</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Anca</td>
			<td>mobilizzazione asettica</td>
			<td>No</td>
			<td>No</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Al ginocchio</td>
			<td>mobilizzazione asettica</td>
			<td>No</td>
			<td>No</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Al ginocchio</td>
			<td>instabilità</td>
			<td>No</td>
			<td>No</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Anca</td>
			<td>lussazione cronica</td>
			<td>No</td>
			<td>No</td>
			<td>Stafilococco haemolyticus</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Al ginocchio</td>
			<td>mobilizzazione asettica</td>
			<td>No</td>
			<td>No</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Anca</td>
			<td>mobilizzazione asettica</td>
			<td>No</td>
			<td>No</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Anca</td>
			<td>mobilizzazione asettica</td>
			<td>No</td>
			<td>No</td>
			<td>Linfonodi epidermidis</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Al ginocchio</td>
			<td>instabilità</td>
			<td>No</td>
			<td>No</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Al ginocchio</td>
			<td>infezione acuta</td>
			<td>Sì</td>
			<td>Sì</td>
			<td>Pseudomonas aeruginosa</td>
			<td>Pseudomonas aeruginosa</td>
			<td></td>
			<td>Pseudomonas aeruginosa</td>
		</tr><tr><td>Al ginocchio</td>
			<td>infezione acuta</td>
			<td>Sì</td>
			<td>No</td>
			<td>Escherichia coli</td>
			<td>Escherichia coli</td>
			<td>Escherichia coli</td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Anca</td>
			<td>infezione cronica</td>
			<td>Sì</td>
			<td>No</td>
			<td>Corynebakterium spp.</td>
			<td>Linfonodi epidermidis</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Al ginocchio</td>
			<td>infezione acuta</td>
			<td>Sì</td>
			<td>No</td>
			<td>Stafilococco aureo</td>
			<td>Stafilococco aureo</td>
			<td>Stafilococco aureo</td>
			<td>Stafilococco aureus</td>
		</tr><tr><td>Al ginocchio</td>
			<td>infezione cronica</td>
			<td>Sì</td>
			<td>No</td>
			<td>Streptococco agalacticae</td>
			<td>Streptococco agalacticae</td>
			<td>Streptococco agalacticae</td>
			<td>Streptococco agalacticae</td>
		</tr><tr><td>Anca</td>
			<td>infezione cronica</td>
			<td>Sì</td>
			<td>Sì</td>
			<td></td>
			<td>Stafilococco aureo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Al ginocchio</td>
			<td>infezione cronica</td>
			<td>Sì</td>
			<td>No</td>
			<td>Linfonodi epidermidis</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Al ginocchio</td>
			<td>infezione cronica</td>
			<td>Sì</td>
			<td>Sì</td>
			<td>Staphlococcu epidermidis</td>
			<td>Linfonodi epidermidis</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Anca</td>
			<td>infezione cronica</td>
			<td>Sì</td>
			<td>No</td>
			<td>Linfonodi epidermidis</td>
			<td>Linfonodi epidermidis</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Al ginocchio</td>
			<td>infezione cronica</td>
			<td>Sì</td>
			<td>No</td>
			<td>Linfonodi epidermidis</td>
			<td></td>
			<td>Stafilococchi coagulasi-negativi Stafilococchi</td>
			<td>Stafilococchi coagulasi-negativi Stafilococchi</td>
		</tr><tr><td>Anca</td>
			<td>infezione cronica</td>
			<td>Sì</td>
			<td>No</td>
			<td>Stafilococco aureo</td>
			<td></td>
			<td>Stafilococco aureo</td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Al ginocchio</td>
			<td>infezione acuta</td>
			<td>Sì</td>
			<td>No</td>
			<td>Linfonodi epidermidis</td>
			<td>Linfonodi epidermidis</td>
			<td>Stafilococchi coagulasi-negativi Stafilococchi</td>
			<td>Stafilococchi coagulasi-negativi Stafilococchi</td>
		</tr><tr><td>Anca</td>
			<td>infezione acuta</td>
			<td>Sì</td>
			<td>No</td>
			<td></td>
			<td>Linfonodi epidermidis</td>
			<td></td>
			<td>Stafilococchi coagulasi-negativi Stafilococchi</td>
		</tr><tr><td>Anca</td>
			<td>infezione cronica</td>
			<td>Sì</td>
			<td>No</td>
			<td>Linfonodi epidermidis</td>
			<td>Linfonodi epidermidis</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Anca</td>
			<td>infezione acuta</td>
			<td>Sì</td>
			<td>No</td>
			<td></td>
			<td>Linfonodi epidermidis</td>
			<td>Stafilococchi coagulasi-negativi Stafilococchi</td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Al ginocchio</td>
			<td>infezione cronica</td>
			<td>Sì</td>
			<td>No</td>
			<td>Stafilococco aureo</td>
			<td>Stafilococco aureo</td>
			<td></td>
			<td>Stafilococco aureus</td>
		</tr><tr><td>Anca</td>
			<td>infezione cronica</td>
			<td>Sì</td>
			<td>No</td>
			<td>Enterococcus faecialis</td>
			<td>Enterococcus faecialis</td>
			<td>Enterococcus spp.</td>
			<td>Enterococcus spp.</td>
		</tr><tr><td>Al ginocchio</td>
			<td>infezione cronica</td>
			<td>Sì</td>
			<td>Sì</td>
			<td>Enterocuccus faecalis</td>
			<td>Enterocuccus faecalis</td>
			<td>Enterococcus spp.</td>
			<td>Enterococcus spp.</td>
		</tr></tbody></table>Tabella 1: dati del paziente e agenti patogeni rilevati. Risultati tabulari dei dettagli pazienti, compresa la causa dell'intervento di revisione, i criteri MSIS corrispondenti e gli agenti patogeni rilevati in microbiologia convenzionale e analisi NAAT.
<table fo:keep-together.within-page="1"><tbody>
<tr>
<td>Criteri</td>
			<td>PCR Sonicare</td>
			<td>Aspirato PCR</td>
			<td>PCR in pool</td>
		</tr>
<tr>
<td>Valore di P</td>
			<td>0.0036</td>
			<td>0,0013</td>
			<td>0,0001</td>
		</tr>
<tr>
<td>Sensibilità</td>
			<td>50.0%</td>
			<td>55,6%</td>
			<td>66,7%</td>
		</tr>
<tr>
<td>Specificità</td>
			<td>100.0%</td>
			<td>100.0%</td>
			<td>100.0%</td>
		</tr>
<tr>
<td>Valore predittivo positivo</td>
			<td>100.0%</td>
			<td>100.0%</td>
			<td>100.0%</td>
		</tr>
<tr>
<td>Valore predittivo negativo</td>
			<td>59,1%</td>
			<td>61,9%</td>
			<td>68,4%</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabella 2: risultati di metodi microbiologici. Tabulare risultati della valutazione della PCR diagnostica del fluido di sonicazione, congiunta aspirato e PCR in pool. N = 31 esemplare per aspirare e sonicazione, rispettivamente, n = 62 per i dati aggregati di PCR.

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Novel Diagnostics in Revision Arthroplasty: Implant Sonication and Multiplex Polymerase Chain Reaction

La diagnostica differenziale in arthroplasty doloroso è cruciale per il successo del trattamento. L'aspirazione unita è effettuata ordinariamente preoperatively. Reazione a catena multipla della polimerasi di aspirato congiunto e il fluido di sonicazione, uno strumento fattibile per il rilevamento rapido agente patogeno da questi campioni è descritto.

Diagnostica di romanzo in artroplastica di Revisione: sonicazione e reazione a catena multipla della polimerasi dell'impianto

In orthopedic patients, foreign body-associated infections, especially periprosthetic joint infections (PJIs), are a devastating complication of ...

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Medicine

11.0K Views.  University Hospital Bonn. La diagnostica differenziale in arthroplasty doloroso è cruciale per il successo del trattamento. L'aspirazione unita è effettuata ordinariamente preoperatively. Reazione a catena multipla della polimerasi di aspirato congiunto e il fluido di sonicazione, uno strumento fattibile per il rilevamento rapido agente patogeno da questi campioni è descritto.

Video: Novel Diagnostics in Revision Arthroplasty: Implant Sonication and Multiplex Polymerase Chain Reaction

Reverse Total Shoulder Arthroplasty

Reverse total shoulder arthroplasty was initially approved for use in rotator cuff arthropathy and well as chronic pseudoparalysis without arthritis in patients who were not appropriate for tendon transfer reconstructions. Traditional surgical options for these patients were limited and functional results were sub-optimal and at times catastrophic. The use of reverse shoulder arthroplasty has been found to effectively restore these patients function and relieve symptoms associated with their disease. The procedure can be done through two approaches, the deltopectoral or the superolateral. Complication rates associated with the use of the prosthesis have ranged from 8-60% with more recent reports trending lower as experienced is gained. Salvage options for a failed reverse shoulder prosthesis are limited and often have significant associated disability. Indications for the use of this prosthesis continue to be evaluated including its use for revision arthroplasty, proximal humeral fracture and tumor. Careful patient selection is essential because of the significant risks associated with the procedure.

Reverse total shoulder arthroplasty is indicated for the treatment of conditions that cannot be treated with conventional arthroplasty or other procedures. These primarily include degenerative and incapacitating conditions with irreparable rotator cuff and loss of the normal biomechanical coupling of the shoulder.

Protesi totale di spalla inversa

Reverse total shoulder arthroplasty was initially approved for use in rotator cuff arthropathy and well as chronic pseudoparalysis without arthritis in ...

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Medicina

RNAscope for In situ Detection of Transcriptionally Active Human Papillomavirus in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

The &#39;gold standard&#39; for oncogenic HPV detection is the demonstration of transcriptionally active high-risk HPV in tumor tissue. However, detection of E6/E7 mRNA by quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (qRT-PCR) requires RNA extraction which destroys the tumor tissue context critical for morphological correlation and has been difficult to be adopted in routine clinical practice. Our recently developed RNA in situ hybridization technology, RNAscope, permits direct visualization of RNA in formalin-fixed, paraffin-embedded (FFPE) tissue with single molecule sensitivity and single cell resolution, which enables highly sensitive and specific in situ analysis of any RNA biomarker in routine clinical specimens. The RNAscope HPV assay was designed to detect the E6/E7 mRNA of seven high-risk HPV genotypes (HPV16, 18, 31, 33, 35, 52, and 58) using a pool of genotype-specific probes. It has demonstrated excellent sensitivity and specificity against the current &#39;gold standard&#39; method of detecting E6/E7 mRNA by qRT-PCR. HPV status determined by RNAscope is strongly prognostic of clinical outcome in oropharyngeal cancer patients.

RNAscope for In situ Detection of Transcriptionally Active Human Papillomavirus in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

The presence of high-risk HPV in head and neck tumor tissue is associated with favorable outcomes. The recently developed RNA in situ hybridization technique called RNAscope allows direct visualization of HPV E6/E7 mRNA in FFPE tissue sections.

RNAscope per<em&gt; In situ</em&gt; Rilevamento di trascrizionale attivo Papillomavirus Umano in Cervico Carcinoma a cellule squamose

The &#39;gold standard&#39; for oncogenic HPV detection is the demonstration of transcriptionally active high-risk HPV in tumor tissue. However, detection ...

Combined In vivo Optical and &#181;CT Imaging to Monitor Infection, Inflammation, and Bone Anatomy in an Orthopaedic Implant Infection in Mice

Multimodality imaging has emerged as a common technological approach used in both preclinical and clinical research. Advanced techniques that combine in vivo optical and &#956;CT imaging allow the visualization of biological phenomena in an anatomical context. These imaging modalities may be especially useful to study conditions that impact bone. In particular, orthopaedic implant infections are an important problem in clinical orthopaedic surgery. These infections are difficult to treat because bacterial biofilms form on the foreign surgically implanted materials, leading to persistent inflammation, osteomyelitis and eventual osteolysis of the bone surrounding the implant, which ultimately results in implant loosening and failure. Here, a mouse model of an infected orthopaedic prosthetic implant was used that involved the surgical placement of a Kirschner-wire implant into an intramedullary canal in the femur in such a way that the end of the implant extended into the knee joint. In this model, LysEGFP mice, a mouse strain that has EGFP-fluorescent neutrophils, were employed in conjunction with a bioluminescent Staphylococcus aureus strain, which naturally emits light. The bacteria were inoculated into the knee joints of the mice prior to closing the surgical site. In vivo bioluminescent and fluorescent imaging was used to quantify the bacterial burden and neutrophil inflammatory response, respectively. In addition, &#956;CT imaging was performed on the same mice so that the 3D location of the bioluminescent and fluorescent optical signals could be co-registered with the anatomical &#956;CT images. To quantify the changes in the bone over time, the outer bone volume of the distal femurs were measured at specific time points using a semi-automated contour based segmentation process. Taken together, the combination of in vivo bioluminescent/fluorescent imaging with &#956;CT imaging may be especially useful for the noninvasive monitoring of the infection, inflammatory response and anatomical changes in bone over time.

Combined In vivo Optical and  &#181;CT Imaging to Monitor Infection, Inflammation, and Bone Anatomy in an Orthopaedic Implant Infection in Mice

Combined optical and &#956;CT imaging in a mouse model of orthopaedic implant infection, utilizing a bioluminescent engineered strain of Staphylococcus aureus, provided the capability to noninvasively and longitudinally monitor the dynamics of the bacterial infection, as well as the corresponding inflammatory response and anatomical changes in the bone.

Combinato<em&gt; In vivo</em&gt; Optical e μCT Imaging Monitor per infezione, infiammazione, e Bone Anatomy in una infezione ortopedica impianto in topi

Multimodality imaging has emerged as a common technological approach used in both preclinical and clinical research. Advanced techniques that combine in ...

Individualized Stem-positioning in Calcar-guided Short-stem Total Hip Arthroplasty

Bone- and soft-tissue sparing short stems are increasingly used in total hip arthroplasty (THA). However, there are a large variety of models of short stems, differing in design and function. Calcar-guided short stems provide an anatomical curvature in the medial calcar region, thus, positioning is done individually alongside the calcar in the "round-the-corner" technique. Depending on the level of the neck's osteotomy, stems can be aligned individually in a large bandwidth of varus- and valgus anatomies. This differs from conventional total hip arthroplasty and potentially includes a severe learning curve. Given that a great variety of caput-collum-diaphyseal (CCD)-angles can be retained, the reconstruction of femoro-acetabular offsets can be achieved precisely. However, particularly extensive varus- and valgus positioning has raised concerns in regard to stability and bone remodeling. The purpose of the present manuscript is to showcase the implantation technique in calcar-guided short-stem THA and to summarize short-term clinical and radiological results.

This protocol describes the round-the-corner technique and the individualized stem-positioning of calcar-guided short stems alongside the medial calcar, depending on the level of the osteotomy. This differs from conventional total hip arthroplasty and includes a learning curve.

Staminali-posizionamento individualizzato in Calcar-guida breve-staminali Arthroplasty totale dell'anca

Bone- and soft-tissue sparing short stems are increasingly used in total hip arthroplasty (THA). However, there are a large variety of models of short ...

A Blood-based Test for the Detection of ROS1 and RET Fusion Transcripts from Circulating Ribonucleic Acid Using Digital Polymerase Chain Reaction

We have developed novel methods for the isolation and characterization of tumor-derived circulating ribonucleic acid (cRNA) for blood-based liquid biopsy. Robust detection of cRNA recovered from blood represents a solution to a critical unmet need in clinical diagnostics. The test begins with the collection of whole blood into blood collection tubes containing preservatives that stabilize cRNA. Cell-free, exosomal, and platelet-associated RNA is isolated from plasma in this test system. The cRNA is reverse transcribed to complementary DNA (cDNA) and amplified using digital polymerase chain reaction (dPCR). Samples are evaluated for both the target biomarker as well as a control gene. Test validation included limit of detection, accuracy, and robustness studies with analytic samples. The method developed as a result of these studies reproducibly detect multiple fusion variants for ROS1 (C-Ros proto-oncogene 1; 8 variants) and RET (rearranged during transfection proto-oncogene; 8 variants). The sample processing workflow has been optimized so that test results can consistently be generated within 72 hours of sample receipt.

Detection of circulating ribonucleic acid (cRNA) from blood is an unmet need in clinical diagnostics. Here we describe methods that characterize cRNA from non-small cell lung cancer patients using sensitive and specific digital polymerase chain reaction. The tests meet design requirements to detect fusion variants within 72 hours.

Un emoderivato di Test per la rilevazione di ROS1 e RET trascrizioni di fusione da acido ribonucleico usando reazione a catena della polimerasi digitale di circolazione

We have developed novel methods for the isolation and characterization of tumor-derived circulating ribonucleic acid (cRNA) for blood-based liquid biopsy. ...

Remote Laboratory Management: Respiratory Virus Diagnostics

An uptick in recent pandemics (Ebola, Zika, MERS, influenza, etc.) underlines the need for a more 'nimble,' coordinated response that addresses a multitude of issues ranging from transportation, access, facilities, equipment, and communication to provider training. To address this need, we have developed an innovative, scalable, logistics-enhanced, mobile, laboratory facility for emergencies and epidemics in resource-constrained global settings. Utilizing a background in clinical operations as an academic medical center, we designed a rapidly-deployable, modular BSL-2 and BSL-3 facility with user-friendly software for tracking and management of drugs and supplies in remote regions during epidemics and outbreaks. Here, we present our intermodal, mobile, expandable shipping-container laboratory units. The design of the laboratory facilitates off-grid usage by minimizing power consumption and allowing alternate water sources. The unit's information communication technology (ICT) platform provides (i) user-friendly tablet-based documentation, (ii) enhanced tracking of patients and supplies, and (iii) integrated communication onsite with built-in telehealth capabilities. To ensure quality in remote environments, we have developed a checklist for a basic laboratory workflow and a protocol for respiratory viral diagnosis using reverse-transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). As described, this innovative and comprehensive approach allows for the provision of laboratory capability in resource-limited global environments.

A rapidly-deployable, off-grid laboratory has been designed and built for remote, resource-constrained global settings. The features and critical aspects of the logistically-enhanced, expandable, multifunctional laboratory modules are explored. A checklist for a basic laboratory workflow and a protocol for a respiratory viral diagnostic test are developed and presented.

Laboratorio remoto gestione: Diagnostica Virus respiratorio

An uptick in recent pandemics (Ebola, Zika, MERS, influenza, etc.) underlines the need for a more 'nimble,' coordinated response that addresses a ...

In Vivo Mouse Model of Spinal Implant Infection

Spine implant infections portend poor outcomes as diagnosis is challenging and surgical eradication is at odds with mechanical spinal stability. The purpose of this method is to describe a novel mouse model of spinal implant infection (SII) that was created to provide an inexpensive, rapid, and accurate in vivo tool to test potential therapeutics and treatment strategies for spinal implant infections.
In this method, we present a model of posterior-approach spinal surgery in which a stainless-steel k-wire is transfixed into the L4 spinous process of 12-week old C57BL/6J wild-type mice and inoculated with 1 x 103 CFU of a bioluminescent strain of Staphylococcus aureus Xen36 bacteria. Mice are then longitudinally imaged for bioluminescence in vivo on post-operative days 0, 1, 3, 5, 7, 10, 14, 18, 21, 25, 28, and 35. Bioluminescence imaging (BLI) signals from a standardized field of view are quantified to measure in vivo bacterial burden.
To quantify bacteria adhering to implants and peri-implant tissue, mice are euthanized and the implant and surrounding soft tissue are harvested. Bacteria are detached from the implant by sonication, cultured overnight and then colony forming units (CFUs) are counted. The results acquired from this method include longitudinal bacterial counts as measured by in vivo S. aureus bioluminescence (mean maximum flux) and CFU counts following euthanasia.
While prior animal models of instrumented spine infection have involved invasive, ex vivo tissue analysis, the mouse model of SII presented in this paper leverages noninvasive, real time in vivo optical imaging of bioluminescent bacteria to replace static tissue study. Applications of the model are broad and may include utilizing alternative bioluminescent bacterial strains, incorporating other types of genetically engineered mice to contemporaneously study host immune response, and evaluating current or investigating new diagnostic and therapeutic modalities such as antibiotics or implant coatings.

The protocol describes a novel in vivo mouse model of spinal implant infection where a stainless-steel k-wire implant is infected with bioluminescent Staphylococcus aureus Xen36. Bacterial burden is monitored longitudinally with bioluminescent imaging and confirmed with colony forming unit counts after euthanasia.

Modello murino in vivo di infezione da impianto spinale

Spine implant infections portend poor outcomes as diagnosis is challenging and surgical eradication is at odds with mechanical spinal stability. The ...

Dynamic Navigation for Dental Implant Placement

In modern implantology, the application of surgical navigation systems is becoming increasingly important. In addition to static surgical navigation methods, a guide-independent dynamic navigation implant placement procedure is becoming more widespread. The procedure is based on computer-guided dental implant placement utilizing optical control. This work aims to demonstrate the technical steps of a new dynamic computer-aided implant surgery (DCAIS)&#160;system (design, calibration, surgery) and check the accuracy of the results. Based on cone-beam computed tomography (CBCT) scans, the exact positions of implants are determined with dedicated software. The first step of the operation is the calibration of the navigation system, which can be performed in two ways: 1) based on CBCT images taken with a marker or 2) based on CBCT images without markers. Implants are inserted with the aid of real-time navigation according to the preoperative plans. The accuracy of the interventions can be evaluated based on postoperative CBCT images. The preoperative images containing the planned positions of the implants and postoperative CBCT images were compared based on the angulation (degree), platform, and apical deviation (mm) of the implants. To evaluate the data, we calculated the standard deviation (SD), mean, and standard error of the mean (SEM) of deviations within planned and performed implant positions. Differences between the two calibration methods were compared based on this data. Based on the interventions performed so far, the use of DCAIS allows for high-precision implant placement. A calibration system that does not require labeled CBCT recording allows for surgical intervention with similar accuracy as a system that uses labeling. The accuracy of the intervention can be improved by training.

Dynamic computer-aided implant surgery (DCAIS) is a controlled implant surgical placement method performed without a surgical template using optical control. The real-time intraoperative control of movement and position of the surgical device simplifies the procedure and gives more freedom to the surgeon, providing similar precision as static navigation methods.

Navigazione dinamica per il posizionamento di impianti dentali

In modern implantology, the application of surgical navigation systems is becoming increasingly important. In addition to static surgical navigation ...

The Use of Mixed Reality in Custom-Made Revision Hip Arthroplasty: A First Case Report

The technology of 3D printing and visualization of anatomical structures is rapidly growing in various fields of medicine. A custom-made implant and mixed reality were used to perform complex revision hip arthroplasty in January 2019. The use of mixed reality allowed for a very good visualization of the structures and resulted in precise implant fixation. According to the authors' knowledge, this is the first described case report of the combined use of these two innovations. The diagnosis preceding the qualification for the procedure was the loosening of the left hip's acetabular component. Mixed reality headset and holograms prepared by engineers were used during the surgery. The operation was successful, and it was followed by early verticalization and patient rehabilitation. The team sees opportunities for technology development in joint arthroplasty, trauma, and orthopedic oncology.

A complex revision hip arthroplasty was performed using a custom-made implant and mixed reality technology. According to the authors&#39; knowledge, this is the first report of such procedure described in the literature.

L'uso della realtà mista nell'artroplastica dell'anca di revisione su misura: un primo caso clinico

The technology of 3D printing and visualization of anatomical structures is rapidly growing in various fields of medicine. A custom-made implant and mixed ...

Measuring Single-Cell Mitochondrial DNA Copy Number and Heteroplasmy Using Digital Droplet Polymerase Chain Reaction

The mammalian mitochondrial (mt)DNA is a small, circular, double-stranded, intra-mitochondrial DNA molecule, encoding 13 subunits of the electron transport chain. Unlike the diploid nuclear genome, most cells contain many more copies of mtDNA, ranging from less than 100 to over 200,000 copies depending on cell type. MtDNA copy number is increasingly used as a biomarker for a number of age-related degenerative conditions and diseases, and thus, accurate measurement of the mtDNA copy number is becoming a key tool in both research and diagnostic settings. Mutations in the mtDNA, often occurring as single nucleotide polymorphisms (SNPs) or deletions, can either exist in all copies of the mtDNA within the cell (termed homoplasmy) or as a mixture of mutated and WT mtDNA copies (termed heteroplasmy). Heteroplasmic mtDNA mutations are a major cause of clinical mitochondrial pathology, either in rare diseases or in a growing number of common late-onset diseases such as Parkinson's disease. Determining the level of heteroplasmy present in cells is a critical step in the diagnosis of rare mitochondrial diseases and in research aimed at understanding common late-onset disorders where mitochondria may play a role. MtDNA copy number and heteroplasmy have traditionally been measured by quantitative (q)PCR-based assays or deep sequencing. However, the recent introduction of ddPCR technology has provided an alternative method for measuring both parameters. It offers several advantages over existing methods, including the ability to measure absolute mtDNA copy number and sufficient sensitivity to make accurate measurements from single cells even at low copy numbers. Presented here is a detailed protocol describing the measurement of mtDNA copy number in single cells using ddPCR, referred to as droplet generation PCR henceforth, with the option for simultaneous measurement of heteroplasmy in cells with mtDNA deletions. The possibility of expanding this method to measure heteroplasmy in cells with mtDNA SNPs is also discussed.

Here we present a protocol for measuring absolute mitochondrial (mt)DNA copy number and mtDNA deletion heteroplasmy levels in single cells.

Misurazione del numero di copie del DNA mitocondriale a singola cellula e dell'eteroplasmia utilizzando la reazione a catena della polimerasi digitale a goccia