Expressamos a nossa gratidão para as crianças e famílias do estudo coorte COPSAC2010 por todo seu apoio e compromisso. Reconhecemos e apreciamos os esforços exclusivos da equipa de investigação de COPSAC e a ajuda técnica do técnico Lisbeth Buus Rosholm, da Universidade Técnica da Dinamarca, para a medição de citocinas e quimiocinas.

Os estudos foram conduzidos em conformidade com os princípios orientadores da declaração de Helsinque. Aprovação do Comitê de ética para Copenhaga (KF 01-289/96 para COPSAC2000 ) e H-B-2008-093 para COPSAC2010e Agência Dinamarquesa de proteção de dados foram obtidas, e foi obtido consentimento escrito de ambos os pais de cada assunto antes de inscrição.
1. experimental Setup
<ol>
	<li>Use folhas de papel de filtro (folhas de poliéster-hidroxilados fibrosas, consulte a Tabela de materiais)6,7.<ol>
		<li>Corte em tiras de 3 x 15 mm em tamanho para uma criança de 1 mês de idade e em forma de L para crianças mais velhas e adultos (5 x 20 x 10 mm (braço curto da L)).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Inserir um pedaço de papel de filtro em cada narina da criança usando fórceps. Coloque o papel de filtro na parte anterior do corneto inferior (aproximadamente 1 cm dentro da narina para neonatos e 1,5 cm para todas as outras idades).<ol>
		<li>Coloque recém-nascidos em uma cama e dar-lhes água com açúcar para o conforto. Nota: Para crianças de todas as outras idades, a amostragem é realizada mais facilmente com o sujeito sentado em uma cadeira.</li>
		<li>Para crianças mais velhas, inserir o longo braço do papel de filtro em forma de L em cada narina.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Aplica um grampo do nariz ao redor das narinas para minimizar o desconforto e evitar a perda acidental do papel filtro.</li>
	<li>Remova os papéis de filtro depois de 2 min de absorção.</li>
	<li>Coloque os papéis de filtro em tubos etiquetados e congelá-los imediatamente a-80 ° C.</li>
	<li>Tome nota de quaisquer sintomas de infecção das vias respiratórias, mostrado pela criança no dia de amostragem.</li>
	<li>Grave qualquer espirro, choro persistente ou epistaxe que ocorre durante a 2 min da amostragem.</li>
</ol>
2. quantificação das vias aéreas imune-mediadores
<ol>
	<li>Tome até 10 amostras aleatórias do freezer. Os números de identificação de registro. Mantenha as amostras no gelo durante todo o processo de trabalho.</li>
	<li>Após o descongelamento no gelo, mergulhe os papéis de filtro (por assunto) de ambas as narinas em 300 µ l de preparada na hora do buffer (veja a Tabela de materiais) contendo um tablet completo protease inibidor (consulte a Tabela de materiais) por 25 mL de tampão.<ol>
		<li>Ajuste o volume da reserva conforme o tamanho do papel filtro.<ol>
			<li>Use 300 µ l de tampão para papéis de filtro 3 x 15 mm de tamanho.</li>
			<li>Se apenas um papel de filtro está disponível, use metade do volume de reserva (150 µ l).</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Transferi as amostras para um agitador de placa (400 rpm) 5 min. Use um timer.</li>
	<li>Transferir os papéis de filtro húmidos e buffer de ensaio para a Copa de um filtro de tubo de acetato de celulose (tamanho de poros de 0,22 µm) colocado dentro microcentrifuga tubo (ver a Tabela de materiais).</li>
	<li>Centrifugar a 16.000 x g por 5 min em uma centrífuga de refrigeração (a 4 ° C) para obter o extrato nasal filtrado dentro do tubo.</li>
	<li>Retire a taça e manter os tubos em gelo enquanto alíquotas do extrato nasal nos poços das placas de armazenamento de baixa proteína de ligação (consulte a Tabela de materiais).</li>
	<li>Loja a-80 ° C até análise.</li>
	<li>Determinar as concentrações de citocinas e quimiocinas nos extratos nasais usando um sistema de alta sensibilidade, com base em electrochemiluminesce matriz multiplexado (consulte a Tabela de materiais). Nota: Um ensaio de 2 citocina humana 10-plex TH1/TH, 9-plex chemokine ensaio e single-plex IL-17A, TGF-β1 e TSLP foram realizados aqui.<ol>
		<li>Para os ensaios, incubar os extratos nasais durante a noite a 4 ° C. Realizar as medições pelo fabricante padrão protocolo (consulte a Tabela de materiais). Nota: Os imunoensaios (consulte a Tabela de materiais) geralmente têm uma alta gama dinâmica de medição que varia entre 1 &#38; 10.000 pg/mL, mas pode ser para alguns ensaios, 100.000 pg/mL. Isto significa que todas as amostras podem ser executadas na mesma diluição, limitando assim a influência de diferentes diluições em indivíduos saudáveis e doentes, como é o caso em outros imunoensaios semelhantes. O limite inferior de detecção para todas as citocinas foi 1 pg/mL ou menos e para quimiocinas, variou entre 1 &#38; 50 pg/mL. TSLP não era detectável em 98% das amostras em 1 mês de idade.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. estatísticas
<ol>
	<li>Log-transformar os dados antes da análise para obter resíduos normalmente distribuídos dos níveis de citocinas e chemokine.</li>
	<li>Se as amostras são analisadas em mais de um lote, corrigi os dados de citocinas e chemokine para centrar batch-wise sobre os dados de log-transformadas.<ol>
		<li>Incorpore a média global e o antitransformação log de para obter dados em unidades de medida do original. Nota: Para cada conjunto de análises feito, considere ajustar as variáveis que afetam o nível de citocinas e quimiocinas. Isto poderia ser influências maternas (por exemplo, o consumo de álcool e fumar durante a gravidez), aleitamento materno, eventos adversos durante a amostragem, irmãos, animais de estimação no lar, etc.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol>
	<li>Bousquet, J., van Cauwenberge, P., Khaltaev, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allergic+Rhinitis+and+Its+Impact+on+Asthma.">Allergic Rhinitis and Its Impact on Asthma.</a> J Allergy Clin Immunol. 108 (5), 147-334 (2001).</li><li>Howarth, P. H., Persson, C. G. A., Meltzer, E. O., Jacobson, M. R., Durham, S. R., Silkoff, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Objective+monitoring+of+nasal+airway+inflammation+in+rhinitis.">Objective monitoring of nasal airway inflammation in rhinitis.</a> J Allergy Clin Immunol. 115 (3), 414-441 (2005).</li><li>Bensch, G. W., Nelson, H. S., Borish, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+cytokines+in+nasal+secretions+after+nasal+antigen+challenge:+lack+of+influence+of+antihistamines.">Evaluation of cytokines in nasal secretions after nasal antigen challenge: lack of influence of antihistamines.</a> Ann Allergy Asthma Immunol. 88 (5), 457-462 (2002).</li><li>Sussman, G. L., Mason, J., Compton, D., Stewart, J., Ricard, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+efficacy+and+safety+of+fexofenadine+HCl+and+pseudoephedrine,+alone+and+in+combination,+in+seasonal+allergic+rhinitis.">The efficacy and safety of fexofenadine HCl and pseudoephedrine, alone and in combination, in seasonal allergic rhinitis.</a> J Allergy Clin Immunol. 104 (1), 100-106 (1999).</li><li>Bisgaard, H., Robinson, C., R&#248;meling, F., Mygind, N., Church, M., Holgate, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukotriene+C4+and+histamine+in+early+allergic+reaction+in+the+nose.">Leukotriene C4 and histamine in early allergic reaction in the nose.</a> Allergy. 43 (3), 219-227 (1988).</li><li>Chawes, B. L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+for+assessing+unchallenged+levels+of+mediators+in+nasal+epithelial+lining+fluid.">A novel method for assessing unchallenged levels of mediators in nasal epithelial lining fluid.</a> J Allergy Clin Immunol. 125 (6), 1387-1389 (2010).</li><li>F&#0248;lsgaard, N. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenic+bacteria+colonizing+the+airways+in+asymptomatic+neonates+stimulates+topical+inflammatory+mediator+release.">Pathogenic bacteria colonizing the airways in asymptomatic neonates stimulates topical inflammatory mediator release.</a> Am J Respir Crit Care Med. 187 (6), 589-595 (2013).</li><li>F&#0248;lsgaard, N. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+Cytokine+Profile+in+the+Airway+Mucosal+Lining+Fluid+Is+Skewed+by+Maternal+Atopy.">Neonatal Cytokine Profile in the Airway Mucosal Lining Fluid Is Skewed by Maternal Atopy.</a> Am J Respir Crit Care Med. 185 (3), 275-280 (2012).</li><li>Chawes, B. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Vitamin+D3+Supplementation+During+Pregnancy+on+Risk+of+Persistent+Wheeze+in+the+Offspring:+A+Randomized+Clinical+Trial.">Effect of Vitamin D3 Supplementation During Pregnancy on Risk of Persistent Wheeze in the Offspring: A Randomized Clinical Trial.</a> JAMA. 315 (4), 353-361 (2016).</li><li>Bischoff, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+Response+to+A(H1N1)pnd09+Vaccination+in+Pregnant+Women:+A+Single+Blinded+Randomized+Controlled+Trial.">Altered Response to A(H1N1)pnd09 Vaccination in Pregnant Women: A Single Blinded Randomized Controlled Trial.</a> PloS One. 8 (4), 56700 (2013).</li><li>Wolsk, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Picornavirus-Induced+Airway+Mucosa+Immune+Profile+in+Asymptomatic+Neonates.">Picornavirus-Induced Airway Mucosa Immune Profile in Asymptomatic Neonates.</a> J Infect Dis. 213 (8), 1262-1270 (2016).</li><li>Wolsk, H. M., Chawes, B. L., F&#248;lsgaard, N. V., Rasmussen, M. A., Brix, S., Bisgaard, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Siblings+Promote+a+Type+1/Type+17-oriented+immune+response+in+the+airways+of+asymptomatic+neonates.">Siblings Promote a Type 1/Type 17-oriented immune response in the airways of asymptomatic neonates.</a> Allergy. 71 (6), 820-828 (2016).</li><li>Alam, R., Sim, T. C., Hilsmeier, K., Grant, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+new+technique+for+recovery+of+cytokines+from+inflammatory+sites+in+situ.">Development of a new technique for recovery of cytokines from inflammatory sites in situ.</a> J Immunol Methods. 155 (1), 25-29 (1992).</li><li>Ishizaka, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+bronchoscopic+microsample+probe+to+measure+the+biochemical+constituents+in+epithelial+lining+fluid+of+patients+with+acute+respiratory+distress+syndrome.">New bronchoscopic microsample probe to measure the biochemical constituents in epithelial lining fluid of patients with acute respiratory distress syndrome.</a> Crit Care Med. 29 (4), 896-898 (2001).</li><li>Ishizaka, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elevation+of+KL-6,+a+lung+epithelial+cell+marker,+in+plasma+and+epithelial+lining+fluid+in+acute+respiratory+distress+syndrome.">Elevation of KL-6, a lung epithelial cell marker, in plasma and epithelial lining fluid in acute respiratory distress syndrome.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 286 (6), 1088-1094 (2004).</li><li>Nakano, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelin-1+level+in+epithelial+lining+fluid+of+patients+with+acute+respiratory+distress+syndrome.">Endothelin-1 level in epithelial lining fluid of patients with acute respiratory distress syndrome.</a> Respirology. 12 (5), 740-743 (2007).</li><li>Komaki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokine-mediated+xanthine+oxidase+upregulation+in+chronic+obstructive+pulmonary+disease's+airways.">Cytokine-mediated xanthine oxidase upregulation in chronic obstructive pulmonary disease's airways.</a> Pulm Pharmacol Ther. 18 (4), 297-302 (2005).</li><li>Moeller, A., Franklin, P., Hall, G. L., Horak, F., Wildhaber, J. H., Stick, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+exhaled+breath+condensates+in+infants.">Measuring exhaled breath condensates in infants.</a> Pediatr Pulmonol. 41 (2), 184-187 (2006).</li></ol>

Todos os autores não declaram nenhum conflito de interesses potencial, percebido ou real em relação ao conteúdo deste manuscrito. Agências de fomento não tinha qualquer papel na concepção e execução do estudo; a recolha, gestão e interpretação dos dados; ou a preparação, revisão e aprovação do manuscrito. Nenhuma empresa farmacêutica estava envolvida no estudo.

Com a técnica apresentada aqui, éramos capazes de determinar na vivo superior-via aérea da mucosa imune perfil em crianças desde o início como 1 mês de idade, que não foi feito anteriormente. Observamos que a presença de bactérias específicas das vias respiratórias e picornaviruses7,11, bem como outros pré e perinatais exposições, foram espelhadas no perfil imune dos recém-nascidos das vias respiratórias. Além disso, usamos esses dados d...

O fluido da mucosa do nariz torna-se a parte líquida do sistema superior-das vias respiratórias. Consiste de uma matriz complexa de mediadores derivado a interação entre o epitélio e as células imunitárias que compõem a primeira linha de defesa contra a invasão de microorganismos. A mucosa nasal é facilmente acessível, e há uma forte relação funcional e imunológica entre o nariz e os brônquios1. Este compartimento é de especial interesse em relação às doenças das vias respiratórias que são comuns na infância, como asma e rinite alérgica, mas também a uma gama de outras doenças respiratórias mais prevalentes mais tarde na vida.
Aqui, descrevemos a implementação de um método para amostra intacta da mucosa revestimento fluido da cavidade nasal usando uma técnica não-invasiva, baseada em papel de filtro, bem como um procedimento de extração subsequente, usada para eluir analitos baseados em proteína dos papéis de filtro antes da sua quantificação. Esta técnica por exemplo, pode ser usada para obter na vivo assinaturas imunes de indivíduos saudáveis e indivíduos com várias doenças respiratórias. Além disso, é possível examinar as exposições de importância para uma assinatura específica imune e avaliar se é um preditor ou mediador do desenvolvimento posterior da doença.
Fluido de mucosa anteriormente tiver sido obtido por lavagem nasal2, que muitas vezes é precedida por um teste de desafio nasal, onde um alérgeno é introduzido em níveis elevados para estimular uma resposta inflamatória3,4. No entanto, a técnica de lavagem nasal não é viável em crianças pequenas e introduz um factor de diluição desconhecido, que confunde os resultados, como o mediador diluído níveis podem cair abaixo do limite de detecção do ensaio5. Além disso, devido ao fator de diluição desconhecido, as analito medida respostas dos testes desafio nasal não são comparáveis entre indivíduos, limitando assim a utilidade da técnica de lavagem nasal em uma coorte de configuração. Finalmente, desafio de alérgeno só é aplicável em indivíduos sensibilizados e outros desafios, como o desafio de histamina, não são fisiologicamente relevantes, potencialmente causando um efeito de teto na liberação de mediador. Estes problemas são contornados na técnica apresentada em papel de filtro para recolha de fluidos de mucosa, onde a individual secreção de fluidos e níveis de analito são apenas fatores que influenciam a variação inter-individual.
Durante o procedimento de extração, analitos são eluídos dos papéis de filtro após a adição de volumes idênticos de buffer para todas as amostras. Isso favorece semelhante ex vivo diluição das amostras. Uma solução tampão de solução salina isotônica baseada em albumina é usado para a etapa de extração; permite a extração de mediadores à base de proteínas e estabiliza as proteínas para limitar a desnaturação durante o congelamento subsequente de proteínas eluted antes da quantificação. Para evitar a degradação proteica durante a fase de extração, um coquetel de inibidores de protease é adicionado para o buffer de extração.
A implementação de técnicas que permitem a quantificação do intacta, na vivo-mediadores imunes gerados em locais da mucosa é de extrema importância. Primeiro, o site da mucosa torna-se o maior órgão imunológico no corpo. Em segundo lugar, a localização nasal é o principal local de exposição no ar e está firmemente conectada ao compartimento imunológicas respiratórias dos pulmões1. Em terceiro lugar, a possibilidade de levantamento deste órgão importante com uma técnica não-invasiva abre a possibilidade de fornecer uma infinidade de informações sobre o eixo importante interação micróbio imune em relação à saúde e doença nas vias aéreas. Em quarto lugar, existem muitas outras possíveis aplicações desta técnica, tais como estudar alterações imunológicas locais em experimentações randomized, controladas de drogas e micronutrientes.
Inicialmente implementamos a técnica nos estudos prospectivos Copenhague sobre asma em coorte de2000 (COPSAC2000) de infância, onde determinamos o perfil imunológico do fluido em crianças de 7 anos de idade com rinite alérgica versus controles saudáveis13mucosa. Posteriormente, com êxito aplicamos esta técnica à coorte longitudinal de2010 COPSAC e imune perfis das vias respiratórias avaliados em 1 mês, 2 anos e 6 anos de idade e em instâncias de sintomas respiratórios agudos. Resultados de neonatos a 1 mês de idade demonstraram importantes associações entre a assinatura imune e a exposição ambiental do início da vida7,8,9,10,11,12.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1688">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:383px;">Fibrous hydroxylatedpolyester sheets</td>
			<td style="width:103px;">Accuwik Ultra&#160;</td>
			<td style="width:119px;">SPR0730</td>
			<td style="width:1084px;">Filter paper</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Milliplex Assay Buffer&#160;</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>L-AB</td>
			<td>Buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">low-protein binding storage plates&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>CLS8161</td>
			<td>Plates</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Protease Inhibitor</td>
			<td style="width:103px;">Roche</td>
			<td align="right" style="width:119px;">11873580001</td>
			<td>complete EDTA-free Protease Inhibitor Cocktail</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:383px;">Reader of multi-spot plates</td>
			<td style="width:103px;">Mesoscale</td>
			<td style="width:119px;">NA</td>
			<td>Sector imager 6000</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:383px;">Assays&#160;</td>
			<td style="width:103px;">Mesoscale</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Human 10-plex TH1/TH2 cytokine assay and 9-plex chemokine assay, and singleplex IL-17A, TGF-&#946;1and TSLP. A description can be found online on www.mesoscale.com</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

noninvasive sampling of mucosal lining fluid for the quantification of in vivo upper airway immune-mediator levels

Este protocolo descreve a amostragem não-invasiva de fluido de mucosa das vias aéreas superiores não perturbadas. Ele também detalha o procedimento de extracção utilizado antes da análise dos mediadores imunes em eluídos fluidos para o estudo da via aérea tópica imune assinatura, sem a necessidade de procedimentos de estimulação (frequentemente usados por outras técnicas). O fluido de mucosa é amostrado em uma tira de papel de filtro colocado na parte anterior do corneto e esquerdo por 2 min de absorção inferior. Analitos são eluídos dos papéis de filtro, e os eluídos extraídos à base de proteínas são analisados por um imunoensaio baseado em eletroquimioluminescência, permitindo a quantificação de alta sensibilidade de analitos de baixo e de alto nível na mesma amostra. Medimos os níveis na vivo de 20 mediadores imunes pré-selecionadas relacionados com imunológico específico sinalização de caminhos na mucosa das vias aéreas superiores, mas a técnica não está limitada a esse painel específico ou local de amostragem. A técnica foi primeiramente implementada em crianças de 7 anos desde os estudos prospectivos de Copenhaga sobre asma em coorte de2000 (COPSAC2000) de infância com rinite alérgica. Posteriormente foi usado no COPSAC2010 nascimento coorte longitudinal, amostrada em 1 mês, 2 anos e 6 anos de idade e em instâncias de sintomas respiratórios agudos. Estamos com sucesso obtidas e analisadas amostras de 620 (89%) de 700 crianças de 1 mês de idade; algumas amostras estavam abaixo do limite de detecção do ensaio (relatado como a mediana (intervalo inter-quartil (IQR)). O número de amostras abaixo do limite de detecção (ou seja, de 0 até o ponto de ajuste para o limite inferior de detecção) para cada mediador foi 29 (7.25-119,5). Esta técnica permite a quantificação do vivo em vias aéreas da mucosa imune perfil desde o nascimento, pode ser aplicada no sentido longitudinal e pode ser aplicada a estudos sobre o efeito da genética e exposições ambientais iniciais de vida, fisiopatologia, endotyping e monitoramento de doenças respiratórias e desenvolvimento e avaliação de novas terapêuticas.

Baseline Characteristics of the Airway Immune Profiles: 
Complete data on upper airway mucosal immune mediator levels at 1 month of age was obtained in 620 (89%) of the 700 children enrolled in the COPSAC2010 cohort. Ten neonates were enrolled before the technique was established, and 19 did not attend the 1-month visit. Additionally, 47 samples were excluded because they were extracted and measured in another laboratory used in a pilot study, and 4 sample...

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Noninvasive Sampling of Mucosal Lining Fluid for the Quantification of In Vivo Upper Airway Immune-mediator Levels

Este protocolo descreve uma técnica não-invasiva para a amostragem de líquido imperturbado mucosa das vias aéreas superiores. Ele pode ser usado para realizar a quantificação dos níveis na vivo de mediadores de proteína, tais como citocinas e quimiocinas, em indivíduos de todas as idades.

Amostragem não-invasiva de mucosa líquido para a quantificação dos níveis de imune-mediador na Vivo das vias aéreas superiores

This protocol describes noninvasive sampling of undisturbed upper airway mucosal lining fluid. It also details the extraction procedure used prior to the ...

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