Os autores agradecer Dr. F. Cordeiro do CCI as discussões úteis sobre tratamento estatístico dos dados. Laboratórios especializados na análise do iAs em matrizes biológicas que forneceu resultados para ser usado como atribuído valor no PTs e laboratórios que participaram os PTs estudados são reconhecidos.

Nota: todo o material utilizado deve ser descontaminado com 10% (m/v) HNO 3 e lavado pelo menos duas vezes com água desionizada.
 1. hidrólise <ol><li>pesar rigorosamente ca. 0,5 a 1 g de amostra liofilizada (ou a quantidade equivalente de amostra homogeneizada recentemente , por exemplo, 1 a 4 g) em um tubo de centrífuga de polipropileno de 50 mL com parafuso cap</li>
	<li>4,1 ml de água desionizada.</li>
	<li>Agitar com um agitador mecânico por cerca de 5 min, até que a amostra estiver completamente molhada.</li>
	<li>Adicionar 18,4 mL de ácido clorídrico concentrado (HCl), não menos do que 37% m / v.</li>
	<li>Agitar com um agitador mecânico durante 15 min.</li>
	<li>Deixe descansar por 12-15 h (por exemplo durante a noite).</li>
</ol> 2. Extração de <ol><li>Adicionar 2 mL de brometo de hidrogênio (HBr) não menos do que 48% m/v e 1 mL de sulfato de hidrazina (N 2 H 6 SO 4) (15 mg/mL) de solução de amostra hidrolisada.</li>
	<li>Agitar durante 30 s, com um agitador mecânico.</li>
	<li>Adicionar 10 mL de clorofórmio (CHCl 3).</li>
	<li>Agitar durante 5 min com um agitador mecânico.</li>
	<li>Centrifugue por 5 min em 800 g de x.</li>
	<li>Pipetar a fase de clorofórmio (fase inferior) para outro tubo de centrífuga de polipropileno de 50 mL.</li>
	<li>Adicionar 10 mL de clorofórmio de novo à fase ácida restante e repetir a extracção. No final cerca de 20 mL de clorofórmio deve foram recolhido. Tome cuidado para evitar contaminação cruzada da fase ácida.</li>
</ol> 3. Limpa-se a fase de clorofórmio <ol><li>centrífuga as fases de clorofórmio em pool por 5 min em x 800 g. O tempo de centrifugação ou a velocidade pode ser aumentada se necessário para atingir uma clara separação das duas fases.</li>
	<li>Remover todos os resíduos de ácido fase restante sobre o clorofórmio com uma pipeta de 1 mL. Esta etapa é crucial. Quaisquer resíduos de ácido fase permanecendo na fase de clorofórmio levará a superestimada iAs resultados porque todas as outras espécies de arsênico na amostra estão presentes na fase ácida.</li>
	<li>Filtro através de uma membrana hidrofóbica de PTFE (25 mm de diâmetro) para remover os resíduos de fase sólida ou ácido presentes na fase de clorofórmio e recolher a fase de clorofórmio em um tubo de centrífuga de polipropileno de 50 mL.</li>
</ol> 4. Extração de volta- <ol><li>Adicionar 10 mL de 1 M de HCl para extrair volta iAs desde a fase de clorofórmio coletado após a etapa de filtração.</li>
	<li>Agitar durante 5 min com um agitador mecânico.</li>
	<li>Centrifugue por 5 min em 800 g de x.</li>
	<li>Pipetar a fase ácida (fase superior) e despeje em um copo de vidro de 250 mL (por exemplo, Pyrex) para mineralização.</li>
	<li>Repetir a extracção de costas e combinar as fases coletadas de HCl.</li>
</ol> 5. Mineralização da amostra Nota: este passo permite a eliminação de interferências e pré-concentração nas amostras em que a fração de massa do iAs é perto ou abaixo do limite de quantificação, e ele é frequentemente omitido pelos laboratórios que utilizam este protocolo com ICP-MS para determinação final em vez de HG-AAS.
<ol><li>Suspender 20 g de hexaidrato de nitrato de magnésio [Mg (NO 3) 2 6 H 2 O] e 2 g de óxido de magnésio (MgO) em 100 mL de água desionizada. Adicione 2,5 mL da suspensão para o copo de vidro. Homogeneizar a suspensão ao adicioná-lo para evitar precipitação.</li>
	<li>Adicionar 10 mL de concentrado HNO 3 pelo menos 65% m/v e evaporar a seco em um banho de areia (ou uma placa térmica), evitando qualquer projeções. Para verificar que as amostras são totalmente secas, coloque um vidro de relógio em cima do copo de vidro e verificar que não há condensação é formada.</li>
	<li>Cobrir o béquer com vidros de relógio e coloque-os em um forno de mufla a temperatura inicial não superior a 150 ° c e aumentar progressivamente a temperatura para 425 ± 25 ° C, a uma taxa de 50 ° C/h. Maintain a 425 ° C, durante 12 h. Este passo é fundamental. Para evitar qualquer projeções para a taxa de aumento de temperatura deve ser estritamente implementada.</li>
	<li>Permitem que as cinzas arrefecer à temperatura ambiente.</li>
	<li>Adicionar 0,5 mL de água desionizada para molhar as cinzas e então adicionar 5 mL de HCL de 6 M. Tome cuidado para recuperar todos os cinzas das paredes do copo de vidro. Dissolver as cinzas completamente, tremendo, se necessário.</li>
	<li>Adicionar 5 mL de pre-redução agente, preparada dissolvendo-se 5 g de iodeto de potássio (KI) e 5 g de ácido ascórbico em 100 mL de água desionizada, e esperar 30 min para conseguir uma redução quantitativa do iAs para magnitude.</li>
	<li>Filtrar a solução através de um papel de Whatman número 1 ou equivalente e recolhê-la em um tubo de centrífuga de polipropileno de 50 mL. Enxágue o copo de vidro dobro com 6 M HCl. coletar os líquidos de lavagem em um 25 mL do tubo e torná-lo até um volume final com 6 M de HCl Nota: quando a concentração de NIC em uma amostra é esperada para ser perto ou abaixo do limite de quantificação do método (0,010 mg/kg) , ou pelo contrário, alta, as etapas de mineralização 5.5-5.7 devem ser modificadas usando os volumes descritos na tabela 1, que iria fornecer um limite de quantificação inferior. Re-dissolvidas e pre-redução de amostras são estáveis por 24 h a 4 ° C. Pelo menos dois espaços em branco do reagente devem ser usados para o processo analítico todo.</li>
</ol> 6. Calibração de Nota: para fins de quantificação usam uma curva de calibração externa de magnitude na faixa de 0,5 - 10 µ g/L. usar um 1000 mg/L As(V) solução-padrão certificada comercialmente disponível para construir a calibração curva de aplicar diluições subsequentes.
<ol><li>Preparar um 10 mg/L solução padrão As(V) Pipetar 1 mL da solução padrão de 1.000 mg/L em um balão volumétrico de 100 mL e preenchendo-se o volume com 6 M de HCl.</li>
	<li>Preparar um 0,1 mg/L de solução-padrão de As(V) Pipetar 1 mL da solução-padrão de As(V) em um balão volumétrico de 100 mL 10 mg/L e preenchendo-se o volume com 6 M de HCl.</li>
	<li>Preparar um 25 µ g/L As(V) solução padrão Pipetar 25 mL da solução-padrão de As(V) em um balão volumétrico de 100 mL 0,1 mg/L e encher até a marca com 6 M de HCl.</li>
	<li>Preparar a curva de calibração da magnitude da seguinte forma: Pipetar da 25 µ g/L solução-padrão de As(V) os volumes dados na tabela 2 para balão volumétrico de 50 mL, adicionar 10 mL da solução de pre-reduzindo cada balão volumétrico, esperar 30 min, em seguida, preencha o volume com 6 M de HCl. Outros volumes são adequados, desde que estes mantenham as proporções descritas acima.</li>
	<li>Preparar uma calibração em branco da seguinte forma: pipetar 10 mL 6 M de HCl e 10 mL pre-reduzindo a solução num balão volumétrico de 50 mL. Espere 30 min e encha-o em seguida para a marca com 6 M.</li>
	<li>Usar os padrões marcados como QC1 e QC2 na tabela 2, como controle de qualidade: QC1 garante que a quantificação a nível de baixa concentração é correta e QC2, garante que a resposta é estável em altas concentrações, com nenhum desvio significativo tempo.</li>
</ol> 7. Determinação espectrómetro de absorção <ol><li>uso uma atômica equipado com um auto-sampler, um sistema de geração de injeção-hidreto de fluxo e uma célula de quartzo electro-termicamente aquecida para fins de deteção e quantificação, seguindo o instrumental condições para quantificação de iAs FI-HG-AAS, conforme listado na tabela 3.</li>
</ol> 8. Quantificação <ol><li>calcular o iAfração em massa s nas amostras analisadas (expressa em mg/kg), usando a seguinte equação: <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/55953/55953eq1.jpg" /> onde: C x: concentração no extrato (µ g/L), calculado a partir da curva de calibração C BI: concentração da amostra em branco do reagente (µ g/L), extrapolada a partir da curva de calibração v: volume Final da etapa mineralização amostra (5.7), geralmente V = 25 mL w: peso de amostra ( em gramas)</li></ol>

<ol>
	<li>European Commission. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Commission Regulation (EC) 1881/2006 setting maximum levels for certain contaminants in foodstuffs. , (2006).</li><li>EFSA Panel on Contaminants in the Food Chain (CONTAM). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scientific+Opinion+on+Arsenic+in+Food.">Scientific Opinion on Arsenic in Food.</a> EFSA J. 7 (10), 1351 (2009).</li><li>European Food Safety Authority. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+exposure+to+inorganic+arsenic+in+the+European+population.">Dietary exposure to inorganic arsenic in the European population.</a> EFSA J. 12 (3), 3597 (2014).</li><li>de la Calle, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Does+the+determination+of+inorganic+arsenic+in+rice+depend+on+the+method?.">Does the determination of inorganic arsenic in rice depend on the method?.</a> TrAC. 30 (4), 641-651 (2011).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GB/T5009.11-2003.">GB/T5009.11-2003.</a> Determination of total arsenic and abio-arsenic in foods. , (2003).</li><li>European Committee for Standardisation. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> EN 15517:2008 "Determination of trace elements-Determination of inorganic As in seaweed by hydride generation atomic absorption spectrometry (HG-AAS) after digestion". , (2008).</li><li>de la Calle, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+it+possible+to+agree+on+a+value+for+inorganic+arsenic+in+food?+The+outcome+of+IMEP-112.">Is it possible to agree on a value for inorganic arsenic in food? The outcome of IMEP-112.</a> Anal Bioanal Chem. 404 (8), 2475-2488 (2012).</li><li>Schmeisser, E., Goessler, W., Kienzl, N., Francesconi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Volatile+analytes+formed+from+arsenosugars:+determination+by+HPLC-HG-ICPMS+and+implications+for+arsenic+speciation+analyses.">Volatile analytes formed from arsenosugars: determination by HPLC-HG-ICPMS and implications for arsenic speciation analyses.</a> Anal. Chem. 76 (2), 418-423 (2004).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> EN 16802:2016. Foodstuffs. Determination elements and their chemical species. Determination of inorganic arsenic in foodstuffs of marine and plant origin by anion-exchange HPLC-ICP-MS. , (2016).</li><li>European Committee for Standardisation. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Animal feeding stuffs &#8211; Determination of inorganic arsenic by hydride generation atomic absorption spectrometry (HG-AAS) after microwave extraction and separation by solid phase extraction (SPE). , (2012).</li><li>Rasmussen, R. R., Qian, Y., Sloth, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SPE+HG-AAS+method+for+the+determination+of+inorganic+arsenic+in+rice.+Results+from+method+validation+studies+an+a+survey+on+rice+products.">SPE HG-AAS method for the determination of inorganic arsenic in rice. Results from method validation studies an a survey on rice products.</a> Anal Bioanal Chem. 405 (24), 7851-7857 (2013).</li><li>Rasmussen, R. R., Hedegaard, R. V., Larsen, E. H., Sloth, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+validation+of+a+method+for+the+determination+of+inorganic+arsenic+in+rice.+Results+from+method+validation+studies+and+a+survey+on+rice+products.">Development and validation of a method for the determination of inorganic arsenic in rice. Results from method validation studies and a survey on rice products.</a> Anal Bioanal Chem. 403, 2825-2834 (2012).</li><li>Fiamegkos, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accuracy+of+a+method+based+on+atomic+absorption+spectrometry+to+determine+inorganic+arsenic+in+food:+Outcome+of+the+collaborative+trial+IMEP-41.">Accuracy of a method based on atomic absorption spectrometry to determine inorganic arsenic in food: Outcome of the collaborative trial IMEP-41.</a> Food Chem. 213, 169-179 (2016).</li><li>Llorente-Mirandes, T., Barbero, M., Rubio, R., L&#243;pez-S&#225;nchez, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Occurrence+of+inorganic+arsenic+in+edible+Shiitake+(Lentinula+edodes)+Products.">Occurrence of inorganic arsenic in edible Shiitake (Lentinula edodes) Products.</a> Food Chem. 158, 207-215 (2014).</li><li>de la Calle, M. B., Linsinger, T., Emteborg, H., Charoud-Got, J., Verbist, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Report+of+the+seventh+interlaboratory+comparison+organised+by+the+European+Union-Reference+Laboratory+for+Heavy+Metals+in+Feed+and+Food.">Report of the seventh interlaboratory comparison organised by the European Union-Reference Laboratory for Heavy Metals in Feed and Food.</a> IMEP-107: Total and inorganic As in rice. , (2010).</li><li>Cordeiro, F., Cizek-Stroh, A., de la Calle, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+total+and+inorganic+arsenic+in+rice.">Determination of total and inorganic arsenic in rice.</a> IRMM-PT-43 Proficiency Test Report. , (2016).</li><li>de la Calle, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> IMEP-112: Total and inorganic arsenic in wheat, vegetable food and algae. , (2011).</li><li>Fiamegkos, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+total+As,+Cd,+Pb,+Hg+and+inorganic+arsenic+in+chocolate.">Determination of total As, Cd, Pb, Hg and inorganic arsenic in chocolate.</a> EURL-HM-20 Proficiency test Report. , (2015).</li><li>ISO-Geneva (CH), International Organization for Standardization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> ISO 17043: Conformity assessment - General requirements for proficiency testing. , (2010).</li></ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

Um passo crítico no protocolo descrito é a limpar da fase de clorofórmio (passo 3.2) porque qualquer fase ácido resíduos restantes na fase de clorofórmio conduzirá aos resultados superestimada do iAs desde que todas as outras espécies de arsênico na amostra estão presentes no ácido fase. Isto é de particular relevância ao analisar amostras marinhas devido à presença de uma infinidade de espécies orgânicas, que poderiam ser responsáveis pela maior parte a fração em massa de arsênico presente na amostra. O uso de uma membrana hidrofóbica de PTFE (3.3) é de suma importância. Se uma emulsão é formada durante a extração do iAs em clorofórmio, pode aumentar a velocidade de centrifugação (3.1). Outras abordagens tradicionais para eliminar as emulsões também podem ser aplicadas. Outro passo crítico é a mineralização (etapa 5.3). A taxa de aumento de temperatura deve ser estritamente implementada para evitar saliências que reduziriam a recuperação de iAs, levando a um viés negativo não controlado e podem ser perigoso para o analista.
Como mencionado acima de alguns laboratórios têm usado o método avaliado usando ICP-MS em vez de FI-HG-AAS. Nesse caso, a etapa de incineração seco (etapa 5 no protocolo) não é necessária e a fase de HCl 1 M pode ser introduzida o ICP-MS. No caso de HG-AAS, devido ao seu maior limite de deteção, um passo de pré-concentração que também elimina possíveis interferências, é necessário.
O percentual dos resultados satisfatórios obtidos com o método descrito neste trabalho, ambos com e sem os resultados relataram para as algas, é comparável de HPLC-ICP-MS e maior que o do HG-AAS. A última técnica (HG-AAS) é amplamente disponível, mas propenso a interferências de espécie de arsênico orgânico, especialmente em bens alimentares com um padrão de distribuição de espécies do complexo arsênico. O menor percentual de resultados satisfatórios caracteriza os obtidos com "Outros métodos", mas deve ser mantido em mente que abrange várias abordagens analíticas, cada um deles representado por uma pequena quantidade de resultados, Figura 1. O método apresentado neste trabalho é uma alternativa ao mais sofisticado/caro HPLC-ICP-MS, ainda caracterizado por um desempenho semelhante mesmo em matrizes complexas. Frequentemente, o uso de técnicas hifenizadas, tais como HPLC-ICP-MS, requer operadores altamente qualificados e caros infraestruturas. O método apresentado neste artigo pode ser implementado por qualquer analista formada em química analítica básica.
Existem alguns inconvenientes principais associados ao método. Já que várias etapas devem ser seguidas para separar iAs de outras espécies de arsênico e de pre-concentrado de iAs para baixo aos níveis mesmo sub-ppm é demorada. Isso implica o uso de clorofórmio. Há uma tendência para evitar o uso de compostos clorados em laboratórios, devido aos efeitos de saúde negativos que poderiam ter. No entanto, se as boas práticas laboratoriais são mantidas e as amostras são tratadas em exaustores de fumos, esses efeitos negativos poderiam ser evitados. MMA vai interferir na determinação do iAs. Isto deve ser mantido em mente ao analisar as amostras em que MMA poderia estar presente, tais como algas, peixes e outros frutos do mar. No entanto, o MMA é normalmente presente em pequenas quantidades que seriam abrangidas pela incerteza associada aos resultados obtidos para o iAs.

Desde de janeiro de 2016 os níveis máximos de arsênio inorgânico (iAs) em várias commodities arroz foram incluídos no Regulamento (CE) 1881/2006 da Comissão configuração teores máximos de certos contaminantes presentes nos géneros alimentícios1 com 0,10 µ g/L de arroz destinado a produção de alimentos para lactentes e crianças jovens, 0,20 µ g/L para os não-estufado arroz branqueado (arroz polido ou branco), 0,25 µ g/L para o arroz parboilizado e arroz descascado e 0,30 µ g/L para waffles de arroz, arroz bolachas, bolachas de arroz e bolos de arroz. Esta actualização da legislação europeia para contaminantes em alimentos seguiram o parecer científico sobre arsênico em alimentar da Autoridade Europeia para a segurança dos alimentos (AESA)2 em que é estima-se que a exposição através da dieta ao iAs, para os consumidores de médias e altas em Europa é tal que pode representar um risco para alguns consumidores, mantendo em mente que a exposição crônica a iAs provoca cancro do pulmão, pele e bexiga e lesões de pele. O relatório científico da AESA na exposição alimentar ao arsênio inorgânico na população europeia3, publicado em 2014, conclui-se que os principais contribuintes para iAs na dieta para consumidores de todas as idades são produtos transformados, feitos de cereais, além de arroz e que também arroz, leite, produtos lácteos e água potável contribuem significativamente para a ingestão de iAs, com leite e produtos lácteos sendo os principais contribuintes para crianças e bebés.
Em 2010, o laboratório de referência da União Europeia para os metais pesados na alimentação animal e humana, EURL-HM, correu uma proficiência testar, IMEP-107, para a determinação do iAs no arroz, demonstrando que era possível determinar iAs no arroz com suficiente precisão, independentemente do método analítico usado4.
Vários métodos analíticos validados para a determinação da iAs nos géneros alimentícios. A China foi o primeiro país a introduzir na sua legislação um nível máximo para iAs no arroz. Para viabilizar a implementação da legislação, um método padrão foi publicado em 2003 para a determinação do que no padrão é chamado de "abio-arsênico"5. Comité Europeu de normalização (CEN), publicado em 2008 um método padronizado, EN 15517:2008, para a determinação do iAs em algas6. Os dois métodos baseiam-se na utilização de condições otimizadas para gerar arsina apenas do iAs. Em que não é necessária a separação da forma do iAs de outras espécies de arsênico que também podem gerar hidreto de arsênio. A decisão final é feita por fluorescência atômica5 ou por espectrometria de absorção atómica de geração hidreto, HG-AAS6. No entanto, é difícil definir as condições exatas para gerar hidreto de arsênio sem sofrer interferências de outros compostos de arsénio e todas as frações de massa iAs em algas relatadas no IMEP-112 (PT organizado pela EURL-HM) obtidos com esses dois métodos. , foram marcados como insatisfatório7. Orgânico de arsénio espécies, tais como o ácido monomethylarsonic (MMA), ácido dimethylarsinic (DMA) e arsenosugars presentes em amostras de algas, podem gerar hidretos voláteis também e podem interferir na determinação do iAs, levando a uma polarização positiva nos resultados da8 .
CEN publicou, recentemente, um novo método padrão, EN 16802:2016, para a determinação do iAs em alimentos de origem marinha e vegetal usando HPLC-ICP-MS9. Nem todos os laboratórios estão equipados com esse tipo de instrumentação e métodos não-caros, direta são necessários, em particular nos países com menos infra-estruturas laboratoriais desenvolvidos.
Em 2012 CEN padronizado um método para a determinação do iAs em alimentos animais para HG-AAS após a extração de microondas e off-line separação de iAs por extração de fase sólida (SPE), EN 16278:201210. Esse método que provou estar apto para analisar iAs na alimentação poderia falta a sensibilidade necessária para determinar o iAs em alimentos de origem não-marinhas, que, de acordo com a AESA, parece ser os principais contribuintes dietéticos na Europa3. No entanto, o mesmo grupo que desenvolvido e validado EN 16278:2012 testado e com sucesso aplicado e validado o método para determinar o iAs em marisco e arroz em um julgamento colaborativo11,12.
Um método alternativo para a determinação do iAs em matrizes de alimentos após a extração seletiva de iAs em clorofórmio e quantificação mais HG-AAS, recentemente foi validado pelo centro comum de investigação (CCI), em um julgamento colaborativo13. A seletividade do método melhor do que o de HG-AAS diretos e é fácil de implementar que não exijam a utilização de instrumentos sofisticados, tais como HPLC-ICP-MS. Neste manuscrito, a viabilidade de usar esse método para determinar o iAs em uma ampla gama de matrizes de alimento: legumes, grãos, cogumelos e alimentos de origem marinha, tem sido avaliada. Além disso, o desempenho de laboratórios que usou o método nos testes de proficiência organizados pela EURL-HM e o CCI cobrindo várias matrizes é descrito.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Deionised water</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">18.2 M&#937; cm</td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:216px;">Concentrated hydrochloric acid (HCl).&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Not less than 37 % m/v, 
			c(HCl) = 12 mol/L, with a 
			density of 
			approx. &#961; (HCl) 1.15 g/L</td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:216px;">Concentrated nitric acid (HNO3)</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Not less that 65 % m/v, 
			c(HNO3) = 14 mol/L, with a 
			densitiy of approx. 
			&#961; 1.38 g/L</td>
		</tr>
		<tr height="147">
			<td height="147" style="height:147px;width:216px;">Chloroform&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Harmful by inhalation and if swallowed. Irritating to skin. 
			Wear suitable protective clothing and gloves.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Hydrogen bromide (HBr)</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Not less than 48 % m/v</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Hydrazine sulphate (N2H6SO4)</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Harmful if swallowed. 
			Causes burns. 
			May cause cancer.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Magnesium nitrate hexahydrate [Mg(NO3)6H2O]</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Magnesium oxide (MgO)</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Potassium iodide (KI)</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Ascorbic acid (C6H8O6)</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Sodium hydroxide (NaOH)</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Sodium borohydride (NaBH4)</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">Arsenic (V) standard solution</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">1000 mg/L 
			Use certified standard 
			solutions commercially available</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Mechanical shaker</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Sand bath</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Muffle furnace</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Polypropylene centrifuge (PC) tubes</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>50 mL with screw cap</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Syringe filters with hydrophobic PTFE membrane</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>25 mm diameter</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Pyrex glass beaker&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Tall form 250 mL, 
			capable of withstanding 500 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Watch glasses</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Volumetric flasks</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">10, 25, 100 or 200, 
			Class A.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Plastic funnels</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Whatman n&#176; 1 paper or equivalent</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Atomic absorption spectrometer equipped with a flow injection system (FI-AAS)</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

determination of inorganic arsenic in a wide range of food matrices using hydride generation - atomic absorption spectrometry.

O Europeu autoridade segurança alimentar (AESA) sublinhada no seu parecer científico sobre arsênico nos alimentos que, a fim de apoiar uma avaliação da exposição sonora de arsênio inorgânico através da dieta, informações sobre distribuição de espécies de arsênico em vários tipos de alimentos devem ser gerados. Um método, previamente validado em uma experimentação colaborativa, foi aplicado para determinar arsênio inorgânico em uma grande variedade de matrizes de alimentos, abrangendo grãos, cogumelos e alimentos de origem marinha (31 amostras no total). O método é baseado na deteção por espectrometria de absorção atômica-geração de injeção-hidreto de fluxo do iAs seletivamente extraído em clorofórmio após a digestão das proteínas com HCl concentrado. O método é caracterizado por um limite de quantificação de 10 µ g/kg peso seco, que permitiu a quantificação de arsênio inorgânico em uma grande quantidade de matrizes de comida. Informação é fornecida sobre pontuações de desempenho dadas aos resultados obtidos com este método e que foram relatados por diferentes laboratórios em vários testes de proficiência. O percentual dos resultados satisfatórios obtidos com o método discutido é maior do que dos resultados obtidos com outras abordagens analíticas.

O método foi aplicado para determinar a fração de massa do iAs em vários produtos alimentares, comprados em vários mercados espanhóis. Os resultados obtidos com este método para uma série de diferentes matrizes classificam-se na tabela 4 , seguindo as categorias usadas pela AESA3 em um relatório no qual exposição alimentar ao arsênio inorgânico na população europeia é avaliada o base de dados relatados pelos laboratórios oficiais de controle (OCL). Os resultados na tabela 4 representam a média de três repetições ± o desvio padrão da reprodutibilidade (S.R) para as categorias de alimentos diferentes, calculadas durante o ensaio colectivo em que o presente método foi validado13. Os resultados mostrados na tabela 4 estão em boa concordância com outros anteriormente publicados em semelhante matrizes11,12,14.
De particular relevância são os resultados obtidos para iAs em diferentes tipos de arroz, porque os limites máximos são incluídos para eles na legislação europeia de contaminantes em alimentos1. Os valores mais altos, sendo obtidos por arroz integral e a mais baixa para o arroz branco, de acordo com as conclusões do OCLs3. Os mais altos níveis foram encontrados para as algas marinhas Hizikia fusiforme, cujo consumo tem sido desencorajado por várias autoridades, como indicado no relatório pela AESA.
O desempenho dos laboratórios que participaram em PTs organizado pela EURL-HM e o CCI e que usou este método para a determinação da iAs, tem sido comparado com o desempenho dos laboratórios usando outros métodos. A maioria dos outros métodos é baseada em HPLC-ICP-MS (cerca de 50% dos resultados avaliados) e na HG-AAS sem separação anterior do iAs de outras espécies de arsênio (25% do total), Figura 1. Outras abordagens usadas (cerca de 15% dos resultados avaliados), basearam-se na atomização Eletrotérmica (ETAAS), detecção de fluorescência e ICP acoplada a espectroscopia de emissão atômica (ICP-AES), com e sem geração de hidreto e são avaliadas juntos sob o nome "Outros métodos" porque os números individuais seria muito pouco para ser de qualquer significado estatístico.
Alguns dos laboratórios que têm usado o método avaliado apresentou algumas variações do protocolo original e usado ICP-MS em vez de FI-HG-AAS. Frequentemente, esses laboratórios não se aplicava a etapa de incineração seco (etapa 5 no protocolo) e introduziram apenas a fase de HCl 1 M a ICP-MS. Os PTs avaliados coberto várias matrizes: arroz15,16, trigo, espinafre, algas17 e18de chocolate.
O desempenho dos laboratórios foi expressa como z-score: 
<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/55953/55953eq2.jpg"> Onde: xlaboratório é o resultado da medição relatado por um participante em um PT X-ref é o valor atribuído (usado para laboratórios de referência). Em todos os PTs tratados dentro deste papel, estabeleceu-se o valor atribuído por um grupo de laboratórios especializados no campo da análise de iAs usando diferentes métodos analíticos. Σ é o desvio-padrão para avaliação de proficiência, corrigido pelo provedor do PT, levando em consideração o estado da arte em uma determinada área de análise. Nos PTs consideradas-se neste trabalho σ foi de 15% do valor atribuído para arroz e trigo, 22% em algas e 25% de chocolate e espinafre.
A interpretação do escore z é feita de acordo com ISO 17043:201019: | partitura | ≤ 2 satisfatório (S) desempenho 2 &#60; | placar | &#60; 3 desempenho questionável do (Q) | partitura | ≥ 3 Desempenho insatisfatório (U)
Setenta e cinco por cento dos resultados obtidos com o método descrito acima, tem um z-score satisfatória. A determinação da fração de massa iAs nas algas acabou por ser um desafio como o esperado, tendo em consideração a distribuição complexa de espécies de arsênico em matrizes de origem marinha. Dois dos três valores relatados no IMEP-112 para iAs em algas, usando este método, tem um z-escore insatisfatório. A mesma dificuldade foi observada entre os resultados obtidos com outros métodos. Excluindo os resultados relatados por iAs em algas, 85% dos resultados obtidos com o método avaliado foram satisfatórios.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55953/55953fig1.jpg"> 
Figura 1: Comparação de desempenhos (expresso como z-scores) de laboratórios tomando parte em PTs (IMEP-107, IMEP-112, EURL-HM-20 e IRMM-PT-43) com o método descrito neste artigo e outros comumente aplicados métodos. S: satisfatória, p: questionável e u: insatisfatório. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55953/55953fig1large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Fração de massa esperado iAs inferiores 0,010 mg/kg</td>
			<td>Fração de massa esperado iAs maior do que o que está coberto pela curva de calibração</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>volume HCL 6 mol L-1 usados para re-dissolver as cinzas (mL)</td>
			<td>2</td>
			<td>10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pre-reduzindo o agente volume (mL)</td>
			<td>2</td>
			<td>10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Volume final (mL)</td>
			<td>10</td>
			<td>50</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabela 1: modificações do protocolo quando analisando amostras em que muito baixa ou muito alta iAs concentrações são esperadas.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Concentração na curva de calibração (µ g/L)</td>
			<td>Alíquota (mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0,5</td>
			<td>1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1</td>
			<td>2 (QC1)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.5</td>
			<td>5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5</td>
			<td>10 (QC2)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7.5</td>
			<td>15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10</td>
			<td>20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="2">Todas as soluções padrão de calibração de magnitude deverão ser preparadas na hora, antes de cada calibração.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabela 2: Alíquotas retirado a 25 µ g/L solução-padrão de As(V) para construir a curva de calibração de magnitude em um volume final de 50 mL.
<table border="1" border="1"></table border="1" >Fo:Keep-together.within-página = "1" fo:keep-com-next.within-página = "sempre" ><tbody>
		<tr>
			<td rowspan="4">Fluxo de injeção Geração de hidreto</td>
			<td>·         Amostra de loop: 0,5 mL (para ser adaptado quando o volume de reconstituição da solução final pre-redução é diferente de 25 mL).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>·         Agente redutor: 0,2% (p/v) NaBH4 em 0,05% (p/v) de NaOH; taxa de fluxo de 5 mL/min.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>·         Solução de HCl 10% (v/v), taxa de fluxo de 10 mL/min.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>·         Gás portador: argônio, taxa de fluxo de 100 mL/min.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="5">Absorção atómica espectrômetro</td>
			<td>·         Comprimento de onda: 193.7 nm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>·         Passa-faixa espectral: 0.7 nm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>·         Sistema de electrodeless lâmpada de descarga 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>·         A configuração atual da lâmpada: 400 mA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>·         Temperatura da pilha: 900 ° C</td>
		</tr>
	</tbody>

Tabela 3: Condições instrumentais utilizados para iAs quantificação HG-AAS.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td colspan="2">Comida</td>
			<td>Eu-como (µ g/kg de peso fresco)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grãos e produtos à base de grãos</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Arroz</td>
			<td>Branco</td>
			<td>113 ± 18</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>73 ± 12</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>56 ± 9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Brown</td>
			<td>197 ± 32</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>125 ± 20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>275 ± 44</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Parboilizado</td>
			<td>134 ± 21</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>159 ± 25</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Discos (wafers)</td>
			<td>162 ± 26</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>127 ± 20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Produtos vegetais e legumes</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cogumelo desidratado</td>
			<td>Boletus edulis</td>
			<td>174 ± 10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Galocybe gambosa</td>
			<td>74 ± 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Marasmius oreades</td>
			<td>104 ± 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Cantharellus lutescens</td>
			<td>16 ± 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Lentinula edodes</td>
			<td>96 ± 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Algas marinhas</td>
			<td>Hizikia fusiforme</td>
			<td>97000 ± 14550</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>44943 ± 6742</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Fucus vesiculosus</td>
			<td>288 ± 43</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>433 ± 65</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peixes e outros frutos do mar</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carne de peixe</td>
			<td>Tainha Flathead cinza</td>
			<td>53 ± 12</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>21 ± 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Enguia europeia</td>
			<td>72 ± 16</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>42 ± 9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Lagostim</td>
			<td>33 ± 7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>20 ± 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Atum</td>
			<td>11 ± 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>5 ± 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moluscos</td>
			<td>Molusco</td>
			<td>243 ± 54</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>133 ± 29</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Mexilhão</td>
			<td>± 32 32</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>139 ± 31</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabela 4: Resultados obtidos para uma gama de diferentes matrizes aplicando o método descrito.

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Determination of Inorganic Arsenic in a Wide Range of Food Matrices using Hydride Generation - Atomic Absorption Spectrometry.

A utilidade de um método analítico para determinar arsênio inorgânico em uma ampla gama de matrizes alimentares é demonstrada. O método consiste em extração seletiva de arsênio inorgânico em clorofórmio com uma determinação final por espectrometria de absorção atómica-geração de hidreto.

Determinação de arsênio inorgânico em uma ampla gama de alimentos matrizes usando a geração de hidreto - espectrometria de absorção atômica.

The European Food Safety Authority (EFSA) underlined in its Scientific Opinion on Arsenic in Food that in order to support a sound exposure assessment to ...

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14.5K visualizações.  Joint Research Centre. A utilidade de um método analítico para determinar arsênio inorgânico em uma ampla gama de matrizes alimentares é demonstrada. O método consiste em extração seletiva de arsênio inorgânico em clorofórmio com uma determinação final por espectrometria de absorção atómica-geração de hidreto.

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A Noninvasive Method For In situ Determination of Mating Success in Female American Lobsters (Homarus americanus)

Despite being one of the most productive fisheries in the Northwest Atlantic, much remains unknown about the natural reproductive dynamics of American lobsters. Recent work in exploited crustacean populations (crabs and lobsters) suggests that there are circumstances where mature females are unable to achieve their full reproductive potential due to sperm limitation. To examine this possibility in different regions of the American lobster fishery, a reliable and noninvasive method was developed for sampling large numbers of female lobsters at sea. This method involves inserting a blunt-tipped needle into the female&#39;s seminal receptacle to determine the presence or absence of a sperm plug and to withdraw a sample that can be examined for the presence of sperm. A series of control studies were conducted at the dock and in the laboratory to test the reliability of this technique. These efforts entailed sampling 294 female lobsters to confirm that the presence of a sperm plug was a reliable indicator of sperm within the receptacle and thus, mating. This paper details the methodology and the results obtained from a subset of the total females sampled. Of the 230 female lobsters sampled from George&#39;s Bank and Cape Ann, MA (size range = 71-145 mm in carapace length), 90.3% were positive for sperm. Potential explanations for the absence of sperm in some females include: immaturity (lack of physiological maturity), breakdown of the sperm plug after being used to fertilize a clutch of eggs, and lack of mating activity. The surveys indicate that this technique for examining the mating success of female lobsters is a reliable proxy that can be used in the field to document reproductive activity in natural populations.

A Noninvasive Method For In situ Determination of Mating Success in Female American Lobsters Homarus americanus

Fishery-induced changes to exploited crustacean fisheries, such as the American lobster fishery, could potentially influence their reproductive dynamics, leading to a reduction in mating success. This study&#39;s goal was to develop a noninvasive method for ascertaining the mating success of female lobsters that may be physiologically or functionally mature.

Um método não invasivo para<em&gt; Em situ</em&gt; Determinação do sucesso de acasalamento em fêmeas lagostas americanas (<em&gt; Homarus americanus</em&gt;)

Despite being one of the most productive fisheries in the Northwest Atlantic, much remains unknown about the natural reproductive dynamics of American ...

Ambiente

Tracking Microbial Contamination in Retail Environments Using Fluorescent Powder - A Retail Delicatessen Environment Example

Cross contamination of foodborne pathogens in the retail environment is a significant public health issue contributing to an increased risk for foodborne illness. Ready-to-eat (RTE) processed foods such as deli meats, cheese, and in some cases fresh produce, have been involved in foodborne disease outbreaks due to contamination with pathogens such as Listeria monocytogenes. With respect to L. monocytogenes, deli slicers are often the main source of cross contamination. The goal of this study was to use a fluorescent compound to simulate bacterial contamination and track this contamination in a retail setting. A mock deli kitchen was designed to simulate the retail environment. Deli meat was inoculated with the fluorescent compound and volunteers were recruited to complete a set of tasks similar to those expected of a food retail employee. The volunteers were instructed to slice, package, and store the meat in a deli refrigerator. The potential cross contamination was tracked in the mock retail environment by swabbing specific areas and measuring the optical density of the swabbed area with a spectrophotometer. The results indicated that the refrigerator (i.e. deli case) grip and various areas on the slicer had the highest risk for cross contamination. The results of this study may be used to develop more focused training material for retail employees. In addition, similar methodologies could also be used to track microbial contamination in food production environments (e.g.&#160;small farms), hospitals, nursing homes, cruise ships, and hotels.

The overall goal of this study was to demonstrate the potential cross contamination mechanism of foodborne pathogen Listeria monocytogenes in a retail deli setting. This methodology may be applied to a variety of different environments to track pathogen contamination. &#160;

Rastreamento contaminação microbiana em ambientes de varejo com fontes fluorescentes Powder - Um ambiente de exemplo Retail Delicatessen

Cross contamination of foodborne pathogens in the retail environment is a significant public health issue contributing to an increased risk for foodborne ...

Quantification of Heavy Metals and Other Inorganic Contaminants on the Productivity of Microalgae

Increasing demand for renewable fuels has researchers investigating the feasibility of alternative feedstocks, such as microalgae. Inherent advantages include high potential yield, use of non-arable land and integration with waste streams. The nutrient requirements of a large-scale microalgae production system will require the coupling of cultivation systems with industrial waste resources, such as carbon dioxide from flue gas and nutrients from wastewater. Inorganic contaminants present in these wastes can potentially lead to bioaccumulation in microalgal biomass negatively impact productivity and limiting end use. This study focuses on the experimental evaluation of the impact and the fate of 14 inorganic contaminants (As, Cd, Co, Cr, Cu, Hg, Mn, Ni, Pb, Sb, Se, Sn, V and Zn) on Nannochloropsis salina growth. Microalgae were cultivated in photobioreactors illuminated at 984 &#181;mol m-2 sec-1 and maintained at pH 7 in a growth media polluted with inorganic contaminants at levels expected based on the composition found in commercial coal flue gas systems. Contaminants present in the biomass and the medium at the end of a 7 day growth period were analytically quantified through cold vapor atomic absorption spectrometry for Hg and through inductively coupled plasma mass spectrometry for As, Cd, Co, Cr, Cu, Mn, Ni, Pb, Sb, Se, Sn, V and Zn. Results show N. salina is a sensitive strain to the multi-metal environment with a statistical decrease in biomass yieldwith the introduction of these contaminants. The techniques presented here are adequate for quantifying algal growth and determining the fate of inorganic contaminants.

Integration of microalgal cultivation with industrial flue gas will ultimately introduce heavy metals and other inorganic compounds into the growth media. This study presents a procedure used to determine the end fate and impact of heavy metals and inorganic contaminants on the growth of Nannochloropsis salina grown in photobioreactors.

Quantificação de Metais Pesados ​​e outros contaminantes inorgânicos sobre a produtividade de Microalgas

Increasing demand for renewable fuels has researchers investigating the feasibility of alternative feedstocks, such as microalgae. Inherent advantages ...

Measuring Stolons and Rhizomes of Turfgrasses Using a Digital Image Analysis System

Length and diameter of stolons or rhizomes are usually measured using simple rulers and calipers. This procedure is slow and laborious, so it is often used on a limited number of stolons or rhizomes. For this reason, these traits are limited in their use for morphological characterization of plants. The use of digital image analysis software technology may overcome measurement errors due to human mistakes, which tend to increase as the number and size of samples also increase. The protocol can be used for any kind of crop but is particularly suitable for forage or grasses, where plants are small and numerous. Turf samples consist of aboveground biomass and an upper soil layer to the depth of maximum rhizome development, depending on the species of interest. In studies, samples are washed from the soil, and stolons/rhizomes are cleaned by hand before analysis by digital image analysis software. The samples are further dried in a laboratory heating oven to measure dry weight; therefore, for each sample, the resultant data are total length, total dry weight, and average diameter. Scanned images can be corrected before analysis by excluding visible extraneous parts, such as remaining roots or leaves not removed with the cleaning process. Indeed, these fragments normally have much smaller diameters than stolons or rhizomes, so they can be easily excluded from analysis by fixing the minimum diameter below which objects are not considered. Stolon or rhizome density per unit area can then be calculated based on sample size. The advantage of this method is quick and efficient measurement of the length and average diameter of large sample numbers of stolons or rhizomes.

A software-based image analysis system provides an alternative method to study the morphology of stoloniferous and rhizomatous species. This protocol permits measurement of the length and diameter of stolons and rhizomes and can be applied to samples with a large amount of biomass and to a wide variety of species.

Medição de raízes adventícias e rizomas de Turfgrasses usando um sistema de análise de imagem Digital

Length and diameter of stolons or rhizomes are usually measured using simple rulers and calipers. This procedure is slow and laborious, so it is often ...

In Vitro Scratch Assay to Demonstrate Effects of Arsenic on Skin Cell Migration

Understanding the physiologic mechanisms of wound healing has been the focus of ongoing research for many years. This research directly translates into changes in clinical standards used for treating wounds and decreasing morbidity and mortality for patients. Wound healing is a complex process that requires strategic cell and tissue interaction and function. One of the many critically important functions of wound healing is individual and collective cellular migration. Upon injury, various cells from the blood, surrounding connective, and epithelial tissues rapidly migrate to the wound site by way of chemical and/or physical stimuli. This migration response can largely dictate the outcomes and success of a healing wound. Understanding this specific cellular function is important for translational medicine that can lead to improved wound healing outcomes. Here, we describe a protocol used to better understand cellular migration as it pertains to wound healing, and how changes to the cellular environment can significantly alter this process. In this example study, dermal fibroblasts were grown in media supplemented with fetal bovine serum (FBS) as monolayer cultures in tissue culture flasks. Cells were aseptically transferred into tissue culture treated 12-well plates and grown to 100% confluence. Upon reaching confluence, the cells in the monolayer were vertically scratched using a p200 pipet tip. Arsenic diluted in culture media supplemented with FBS was added to individual wells at environmentally relevant doses ranging 0.1-10 &#956;M. Images were captured every 4 hours (h) over a 24 h period using an inverted light microscope to observe cellular migration (wound closure). Images were individually analyzed using image analysis software, and percent wound closure was calculated. Results demonstrate that arsenic slows down wound healing. This technique provides a rapid and inexpensive first screen for evaluation of the effects of contaminants on wound healing.

In Vitro Scratch Assay to Demonstrate Effects of Arsenic on Skin Cell Migration

This study focuses on an in vitro model of wound healing (scratch assay) as a mechanism for determining how environmental contaminants such as arsenic influence cellular migration. The results demonstrate that this in vitro assay provides rapid and early indications of changes to cellular migration prior to in vivo experimentation.

In Vitro Arranhar o ensaio para demonstrar os efeitos de arsênico na migração de células de pele

Understanding the physiologic mechanisms of wound healing has been the focus of ongoing research for many years. This research directly translates into ...

Removal of Arsenic Using a Cationic Polymer Gel Impregnated with Iron Hydroxide

In this work, we prepared an adsorbent composed of a cationic polymer gel containing iron hydroxide in its structure designed to adsorb arsenic from groundwater. The gel we selected was the N,N-dimethylamino propylacrylamide methyl chloride quaternary (DMAPAAQ) gel. The objective of our preparation method was to ensure the maximum content of iron hydroxide in the structure of the gel. This design approach enabled simultaneous adsorption by both the polymer structure of the gel and the iron hydroxide component, thus, enhancing the adsorption capacity of the material. To examine the performance of the gel, we measured reaction kinetics, carried out pH sensitivity and selectivity analyses, monitored arsenic adsorption performance, and conducted regeneration experiments. We determined that the gel undergoes a chemisorption process and reaches equilibrium at 10 h. Moreover, the gel adsorbed arsenic effectively at neutral pH levels and selectively in complex ion environments, achieving a maximum adsorption volume of 1.63 mM/g. The gel could be regenerated with 87.6% efficiency and NaCl could be used for desorption instead of harmful NaOH. Taken together, the presented gel-based design method is an effective approach for constructing high-performance arsenic adsorbents.

In this work, we prepared an adsorbent composed of the cationic N,N-dimethylamino propylacrylamide methyl chloride quaternary (DMAPAAQ) polymer gel and iron hydroxide for adsorbing arsenic from groundwater. The gel was prepared via a novel method designed to ensure the maximum content of iron particles in its structure.

Remoção de arsênico usando um gel de polímero catiônico impregnado com hidróxido de ferro

In this work, we prepared an adsorbent composed of a cationic polymer gel containing iron hydroxide in its structure designed to adsorb arsenic from ...

Enrichment and Detection of Clostridium perfringens Toxinotypes in Retail Food Samples

Clostridium perfringens (C. perfringens) is a prolific toxin producer and causes a wide range of diseases in various hosts. C. perfringens is categorized into five different toxinotypes, A through E, based on the carriage of four major toxin genes. The prevalence and distribution of these various toxinotypes is understudied, especially their pervasiveness in American retail food. Of particular interest to us are the type B and D strains, which produce epsilon toxin, an extremely lethal toxin suggested to be the environmental trigger of multiple sclerosis in humans. To evaluate the presence of different C. perfringens toxinotypes in various food samples, we developed an easy method to selectively culture these bacteria without the use of an anaerobic container system only involving three culturing steps. Food is purchased from local grocery stores and transported to the laboratory under ambient conditions. Samples are minced and inoculated into modified rapid perfringens media (RPM) and incubated overnight at 37 &#176;C in a sealed, airtight conical tube. Overnight cultures are inoculated onto a bottom layer of solid Tryptose Sulfite Cycloserine (TSC) agar, and then overlaid with a top layer of molten TSC agar, creating a &#34;sandwiched&#34;, anaerobic environment. Agar plates are incubated overnight at 37 &#176;C and then evaluated for appearance of black, sulfite-reducing colonies. C. perfringens-suspected colonies are removed from the TSC agar using sterile eye droppers, and inoculated into RPM and sub-cultured overnight at 37 &#176;C in an airtight conical tube. DNA is extracted from the RPM subculture, and then analyzed for the presence of C. perfringens toxin genes via polymerase chain reaction (PCR). Depending on the type of food sampled, typically 15&#8211;20% of samples test positive for C. perfringens.

Enrichment and Detection of Clostridium perfringens Toxinotypes in Retail Food Samples

The objective of this protocol is to detect different Clostridium perfringens toxinotypes in locally purchased foods, particularly epsilon toxin producing strain types B and D, without the use of anaerobic chambers.

Enriquecimento e detecção de toxinotipos de Clostridium perfringens em amostras de alimentos para varejo

Clostridium perfringens (C. perfringens) is a prolific toxin producer and causes a wide range of diseases in various hosts. C. perfringens is categorized ...

Cortisol Extraction from Sturgeon Fin and Jawbone Matrices

The aims of this study were to develop a technique for the extraction of cortisol from sturgeon fins using two washing solvents (water and isopropanol) and quantify any differences in fin cortisol levels among three main sturgeon species. Fins were harvested from 19 sacrificed sturgeons including seven beluga (Huso huso), seven Siberian (Acipenser baerii), and five sevruga (A. stellatus). The sturgeons were raised in Iranian farms for 2 years (2017-2018), and cortisol extraction analysis was conducted in South Korea (January-February 2019). Jawbones from five H. huso were also used for cortisol extraction. Data were analyzed using the general linear model (GLM) procedure in the SAS environment. The intra- and inter-assay coefficients of variation were 14.15 and 7.70, respectively. Briefly, the cortisol extraction technique involved washing the samples (300 &#177; 10 mg) with 3 mL of solvent (ultrapure water and isopropanol) twice, rotation at 80&#160;rpm for 2.5 min, air-drying the washed samples at room temperature (22-28 &#176;C) for 7 days, further drying the samples using a bead beater at 50 Hz for 32 min and grinding them into powder, applying 1.5 mL methanol to the dried powder (75 &#177; 5 mg), and slow rotation (40 rpm) for 18 h at room temperature with continuous mixing. Following extraction, samples were centrifuged (9,500 x g for 10 min), and 1 mL supernatant was transferred into a new microcentrifuge tube (1.5 mL), incubated at 38 &#176;C to evaporate the methanol, and analyzed via enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). No differences were observed in fin cortisol levels among species or in fin and jawbone cortisol levels between washing solvents. The results of this study demonstrate that the sturgeon jawbone matrix is a promising alternative stress indicator to solid matrices.

In this study, we present a protocol for cortisol extraction from the fin and jawbone of sturgeon species. Fin and jawbone cortisol levels were further examined by comparing two washing solvents followed by ELISA assays. This study piloted the feasibility of jawbone cortisol as a novel stress indicator.

Extração de cortisol de matrizes de Sturgeon Fin e Jawbone

The aims of this study were to develop a technique for the extraction of cortisol from sturgeon fins using two washing solvents (water and isopropanol) ...

Investigation of Xenobiotics Metabolism In Salix alba Leaves via Mass Spectrometry Imaging

The method presented uses mass spectrometry imaging (MSI) to establish the metabolic profile of S. alba leaves when exposed to xenobiotics. Using a non-targeted approach, plant metabolites and xenobiotics of interest are identified and localized in plant tissues to uncover&#160;specific distribution patterns. Then, in silico prediction of potential metabolites (i.e., catabolites and conjugates) from the identified xenobiotics is performed. When a xenobiotic metabolite is located in the tissue, the type of enzyme involved in its alteration by the plant is recorded. These results were used to describe different types of biological reactions occurring in S. alba leaves in response to xenobiotic accumulation in the leaves. The metabolites were predicted in two generations, allowing the documentation of successive biological reactions to transform xenobiotics in the leaf tissues.

Investigation of Xenobiotics Metabolism In Salix alba Leaves via Mass Spectrometry Imaging

This method uses mass spectrometry imaging (MSI) to understand metabolic processes in S. alba leaves when exposed to xenobiotics. The method allows the spatial localization of compounds of interest and their predicted metabolites within specific, intact tissues.

Investigação do metabolismo xenobióticos em folhas de Salix alba via Imagem de Espectrometria de Massa

The method presented uses mass spectrometry imaging (MSI) to establish the metabolic profile of S. alba leaves when exposed to xenobiotics. Using a ...

A Telemetric, Gravimetric Platform for Real-Time Physiological Phenotyping of Plant&ndash;Environment Interactions

Food security for the growing global population is a major concern. The data provided by genomic tools far exceeds the supply of phenotypic data, creating a knowledge gap. To meet the challenge of improving crops to feed the growing global population, this gap must be bridged.
Physiological traits are considered key functional traits in the context of responsiveness or sensitivity to environmental conditions. Many recently introduced high-throughput (HTP) phenotyping techniques are based on remote sensing or imaging and are capable of directly measuring morphological traits, but measure physiological parameters mainly indirectly.
This paper describes a method for direct physiological phenotyping that has several advantages for the functional phenotyping of plant&#8211;environment interactions. It helps users overcome the many challenges encountered in the use of load-cell gravimetric systems and pot experiments. The suggested techniques will enable users to distinguish between soil weight, plant weight and soil water content, providing a method for the continuous and simultaneous measurement of dynamic soil, plant and atmosphere conditions, alongside the measurement of key physiological traits. This method allows researchers to closely mimic field stress scenarios while taking into consideration the environment&#8217;s effects on the plants&#8217; physiology. This method also minimizes pot effects, which are one of the major problems in pre-field phenotyping. It includes a feed-back fertigation system that enables a truly randomized experimental design at a field-like plant density. This system detects the soil-water-content limiting threshold (&#952;) and allows for the translation of data into knowledge through the use of a real-time analytic tool and an online statistical resource. This method for the rapid and direct measurement of the physiological responses of multiple plants to a dynamic environment has great potential for use in screening for beneficial traits associated with responses to abiotic stress, in the context of pre-field breeding and crop improvement.

A Telemetric, Gravimetric Platform for Real-Time Physiological Phenotyping of Plant&amp;#8211;Environment Interactions

This high-throughput, telemetric, whole-plant water relations gravimetric phenotyping method enables direct and simultaneous real-time measurements, as well as the analysis of multiple yield-related physiological traits involved in dynamic plant&#8211;environment interactions.

Uma plataforma telemétrica e gravimétrica para fenotipagem fisiológica em tempo real de interações vegetais-ambientais

Food security for the growing global population is a major concern. The data provided by genomic tools far exceeds the supply of phenotypic data, creating ...