O labirinto mais elevado é um método para documentar o efeito de vários tratamentos potencialmente ansiolíticos em modelos de roedores de laboratório de forma mais humana em comparação com outros métodos. A principal vantagem desse método é que se baseia na propensão instintiva do roedor tanto para espaços escuros quanto fechados, além do medo incondicionado de alturas e evitar espaços abertos. Collin Park, um colaborador do meu laboratório, ajudará a demonstrar o procedimento.
Vários dias antes do teste, manuseie os animais escolhendo-os pelo torso e segurando-os por um minuto para aclimatá-los ao experimentador. Em seguida, meça o peso corporal dos animais antes de iniciar qualquer tratamento para determinar o cálculo da dosagem para o tratamento. Em seguida, familiarize os animais ao método de gavage intragastric usando água por gavage por cinco dias antes da suplementação de cetona.
Para o ensaio de ansiedade, use o labirinto mais elevado ou aparelho EPM, um aparelho em forma de plus com quatro braços abertos e dois fechados. Ilumine o aparelho EPM usando iluminação indireta do teto em vez de iluminá-lo diretamente. Certifique-se de que todos os quatro braços estão igualmente iluminados.
Conecte a chave de instalação do software de rastreamento de movimento em uma porta USB 2.0 e instale o software. Em seguida, conserte a câmera acima da área experimental, e certifique-se de que ela permanecerá imóvel durante a duração do experimento. Finalmente, configure um novo experimento no sistema de software de rastreamento de movimento usando o manual de instruções.
Coloque o animal na área experimental. Em seguida, inicie o processo de aquisição de dados pressionando o botão iniciar no painel de controle de tempo. Na sala de testes colete os dados do EPM de duas maneiras, manualmente e usando o software.
Os observadores cegos são separados por uma cortina. Aguarde até que o ene da gravação do processo de rastreamento ou pressione o botão stop no painel de controle de tempo. Em seguida, remova o animal da área experimental.
Por fim, para acessar a ferramenta de análise pressione o botão de análise na barra do assistente de experimentação. Selecione ensaios e intervalos de tempo para analisar e gerar um relatório. Comece transferindo os ratos em sua gaiola para a sala experimental 30 minutos antes de começar o experimento.
Coloque um rato no cruzamento dos quatro braços do EPM de frente para o braço aberto em frente ao experimentador. Execute o software de rastreamento de vídeo, bem como regise manualmente o comportamento do animal por cinco minutos. Então, se o animal cair do EPM, pegue-o e coloque-o de volta no mesmo ponto do EPM onde ele caiu.
Exclua os dados comportamentais deste animal da análise. No final do teste de cinco minutos, pare o software de rastreamento de vídeo. Retire o animal do EPM, e coloque-o de volta em sua gaiola.
Por fim, limpe o EPM com um detergente desinfetante seguido de água da torneira. Seque o aparelho com toalhas de papel. Após a alimentação crônica, os ratos do grupo KSMCT passaram significativamente mais tempo em braços abertos em comparação com o grupo controle.
O grupo KS passou significativamente mais tempo no centro em comparação com o grupo controle. E menos tempo é gasto em braços fechados nos grupos LKE, KS, KSMCT em comparação com o controle. Ratos nos grupos KS e KSMCT percorreram distâncias significativamente mais longas em braços abertos.
Enquanto os ratos dos grupos LKE, KS e KSMCT mostraram significativamente menos distância percorrida nos braços fechados em comparação com o grupo controle. Além disso, após sete dias de gavage oral, o tempo gasto em braços abertos foi maior no grupo KE, mas diminuiu no centro para os grupos KE, KS e KSMCT. O número de entradas para os braços fechados também foi significativamente menor após sete dias de administração nos grupos KE e KS.
É muito importante colocar todos os ratos no equipamento em uma mansão consistente no cruzamento voltado para longe do experimentador. O ensaio do EPM sobre roedores é um método adequado e sensível para investigar o efeito de diferentes tratamentos que influenciam as áreas cerebrais envolvidas no efeito ansiolítico e mecanismos de ação.
