Este método fornece um substituto comportamental pré-clínico para a fotofobia, que é uma queixa principal de pacientes com enxaqueca. A principal vantagem dessa técnica é que a detecção é automática, portanto, muito conveniente. Além disso, a aversão leve e a ansiedade podem ser distinguidas com a realização desses testes.
No primeiro dia, ligue o aparelho de ensaio claro/escuro. Afina a intensidade da luz para 27.000 lux. Coloque a inserção escura em câmara clara/escura.
Abra o software de rastreamento e configure um novo protocolo. Na nova configuração do protocolo, defina a duração para 30 minutos. Na nova configuração de análise, defina as caixas de dados por duração até 300 segundos.
Na nova configuração da zona, escolha zonas predefinidas. Escolha dois, e depois horizontal. Verifique se a câmara está dividida em duas zonas de tamanho igual para gravação.
Antes dos testes, habituar os ratos à sala de testes por uma hora, mantendo a luz da sala acesa para não perturbar o ritmo circadiano dos ratos. Certifique-se de que todos os equipamentos para o ensaio claro/escuro sejam ligados permitindo que os ratos se aclimauram totalmente ao ambiente da sala de testes. Selecione adquirir dados, digite os IDs do mouse e inicie o protocolo.
Puxe a gaveta para fora do cubículo atenuante do som para acessar a câmara clara/escura e a pastilha escura. Coloque suavemente um rato na zona de luz da câmara e empurre a gaveta dentro do cubículo. Certifique-se de que o software detecta o mouse imediatamente e comece a registrar a atividade.
Aguarde que a gravação pare automaticamente após 30 minutos. Devolva o rato para sua gaiola. Limpe a câmara e a pastilha escura usando lenços descartáveis germicidal de odor de álcool para erradicar quaisquer pistas olfativas deixadas pelo rato anterior.
No quarto dia, repita todos os passos que foram realizados no primeiro dia. No sétimo dia, repita os passos realizados no primeiro dia, mas apenas até a habituação dos ratos. Após a habituação, administre os camundongos com CGRP intraperitoneal.
Então devolva ratos para suas gaiolas. Após 30 minutos, retome o protocolo e execute o mouse na câmara clara/escura, como mencionado anteriormente. Limpe a câmara e a pastilha escura como descrito anteriormente.
No dia 10, repita todos os passos realizados no primeiro dia. Ligue o aparelho e afina a intensidade da luz para 27.000 lux. Abra o software de rastreamento e configure um novo protocolo como demonstrado anteriormente.
Nas novas configurações de zona, escolha uma seguida pelo centro. Coloque a periferia em 3,97 centímetros e o centro como 19,05 por 19,05 centímetros. Habituar os ratos à sala de testes como demonstrado anteriormente.
Administre os camundongos com CGRP intraperitoneal. Devolva os ratos para suas gaiolas. Depois de 30 minutos, inicie o protocolo.
Puxe a gaveta de retirada fora do cubículo atenuante do som e coloque suavemente um mouse no meio da câmara de campo aberto. Empurre a gaveta para dentro do cubículo. Rastreie o comportamento do rato por 30 minutos e depois devolva os ratos para suas gaiolas.
Limpe o aparelho como demonstrado anteriormente. Os resultados revelaram que a injeção intraperitoneal de CGRP diminuiu significativamente a duração do tempo gasto na zona de luz no ensaio claro/escuro em camundongos CD1 e C57 preto 6J, mas não afetou o tempo que os ratos passaram no centro no ensaio de campo aberto em camundongos CD1 e C57 preto 6J. O tratamento com CGRP também aumentou a quantidade de tempo que os ratos descansavam na zona escura, mas não na zona de luz em camundongos CD1 e C57 pretos 6J.
A estimulação óptica dos neurônios nos núcleos tálamômicos posteriores, levou a uma diminuição correspondente na duração que os camundongos passaram na zona de luz no ensaio claro/escuro em camundongos injetados channelrhodopsin-2 em comparação com o vírus de controle injetado em camundongos. Um aumento no tempo de descanso na zona escura, mas não na zona de luz também foi observado no caso dos camundongos injetados channelrhodopsin-2, em comparação com o vírus de controle injetado camundongos. É importante lembrar que ao colocar o mouse na câmara clara/escura, o mouse deve ser manuseado suavemente para evitar o máximo de estresse possível.
Esta técnica abrirá o caminho para explorar mecanismos subjacentes à enxaqueca e outros distúrbios relacionados à fotofobia, e testar a eficácia pré-clínica para potenciais terapêuticas.
