Técnicas reprodutivas para monitoramento e controle ovariano em anfíbios

Esta técnica de ovariectomia emprega um procedimento cirúrgico recuperável para a obtenção de oócitos anfíbios para nossa pesquisa médica ou outra aplicação para superar a condição patológica dos óvulos retidos. Não requer eutanásia para obter oócitos anfíbios para fins de pesquisa. De fato, após uma ovariectomia parcial, o sujeito anfíbio pode ser reprodutivamente ativo após a recuperação.

Depois de confirmar a falta de resposta ao beliscão do membro pélvico, coloque um anuran fêmea anestesiado em uma posição dorsal recumbent, e use gaze úmida e estéril para limpar o campo cirúrgico com solução de povidona-iodo por 10 a 15 segundos. Coloque uma cortina de plástico clara e estéril sobre a área cirúrgica e reduza a evaporação mantendo a pele circundante úmida, antes de usar uma lâmina de bisturi número 15 ou 11 para fazer uma incisão de pele perimédia de 3 milímetros no coelomo médio entre os ombros e a cloaca. Use aplicadores com ponta de algodão para aplicar pressão localizada a quaisquer pequenos vasos ao redor da incisão, conforme necessário, e elevar a membrana abdominal para uma incisão de membrana sucessiva.

Use retrálires para retrair as incisões e extir esse consumo de uma porção da massa de ovos sem ligar os vasos sanguíneos. Para uma ovaectomia completa, cauterize os vasos sanguíneos circundantes, e use uma sutura mono-filamento para fechar a incisão de ceoliotomia com um padrão de sutura de sempre interrompido. Diferentes espécies anfíbias, como estes Necturus e o sapo de vidro, apresentam diferentes graus de transparência da pele, afetando a capacidade de visualizar seu status reprodutivo transdermicamente.

Em algumas espécies, diferenças morfológicas podem ser detectadas entre fêmeas que são ralvidas, versus animais recentemente ovipositados. Neste exemplo, uma moscosa rana fêmea que recentemente ovipositada pode ser distinguida de uma fêmea gravid pela flacidez de sua pele e sua aparência mais fina. Os estágios comportamentais da oviposição em Rana moscosa incluem cortejar, em que um macho persegue ativamente uma fêmea e apiúpida, durante a qual o macho Rana muscosa monta e aperta firmemente nas costas da fêmea.

Durante o aplexo, o macho aperta a fêmea de forma suave. Rana muscosa fêmea se move e exibe comportamentos intermitentes de suporte de mão, eventualmente encostado em superfícies que os ovos podem ser presos, enquanto o macho bombeia seu abdômen vigorosamente. Imediatamente após a oviposição, os ovários femininos retornam à categoria estágio um.

Durante esse tempo, folículos são difíceis de visualizar ao realizar ultrassom. A segunda fase é representada pelo aparecimento de pontos ecogênicos dispersos por todo o ovário. O estágio três é determinado pela presença de pontos ecogênicos maiores e redondos com centros escuros, indicativos de folículos maduros e gemidos.

Nesta avaliação representativa de quatro anos do Necturus feminino cativo, o desenvolvimento de ovos foi elevado, mas a oviposição não foi garantida. Algumas fêmeas com óvulos retidos concomitantes com ganho de líquido na cavidade corporal, apresentaram cintura excessiva e inchaço, juntamente com alguns sinais de vasos sanguíneos estourados, como o mostrado nestes Rana e Necturus afetados. Embora a abordagem cirúrgica possa ser usada para o gerenciamento da patologia ovariana, essa técnica também pode estar envolvida em pesquisas gametas e umbilicais.

Após a cirurgia, o praticante pode retornar ao primeiro protocolo descrito neste manuscrito para monitorar a saúde geral contínua do sujeito anfíbio.