Medições de ultrassom de alta resolução têm sido amplamente utilizadas para medir dimensões aórticas em camundongos. Este protocolo fornece um guia prático para a aplicação desta modalidade. Este protocolo facilita a aquisição de medidas bidimensionais reprodutíveis e precisas do diâmetro das aortas torácicas e abdominais em camundongos.
Demonstrando o procedimento estarão o Dr. Hasashi Sawada, um estudioso de pós-doutorado, e Jessica Morrleghen, uma cientista de pesquisa, ambas na Universidade de Kentucky. Antes de iniciar o procedimento, use um cotonete para aplicar creme dilatório na área de imagem do camundongo anestesiado. Depois de um minuto, retire suavemente todo o creme e cabelo, e enxágue a pele exposta com água morna.
Depois de limpar a pele seca para remover completamente o creme, coloque um ponto de gel de ultrassom sobre cada uma das quatro pistas de cobre na plataforma. Cada pata em cada pista para obter leituras de eletrocardiograma. E verifique se a frequência cardíaca está entre 450 e 450 batimentos por minuto.
Aplique gel ultrassônico pré-aquecido no local de imagem e conecte a sonda ao suporte. Em seguida, gire a plataforma para uma varredura ideal e baixe a sonda até que esteja em contato com o gel ultrassônico. Para imaginar a aorta torácica, incline a plataforma para baixo em direção ao lado esquerdo do mouse e coloque a sonda na borda direita do esterno do mouse.
Orientando o marcador de referência na sonda caudally. Mude para a cor doppler na aorta torácica para confirmar o fluxo sanguíneo. E ajuste o ângulo do estágio e da sonda para visualizar a aorta claramente.
Utilizando os botões para profundidade e largura da imagem, corte a imagem do ultrassom para aumentar a taxa de quadros e altere a profundidade focal no lado dorsal da aorta ascendente, usando o botão para profundidade focal. Verifique os parâmetros de ultrassom conforme indicado na tabela e use o botão de estágio do eixo X e Y para mover suavemente a sonda, para capturar a imagem aórtica longitudinal com o maior diâmetro possível. Para imaginar a aorta abdominal, coloque a sonda transversalmente logo abaixo do processo de esterno e xifoide com o marcador de referência na sonda voltada para o lado direito do mouse.
A aorta abdominal deve estar localizada ao lado da veia cava inferior, e ou veia portal. Visualize a aorta abdominal com doper de cor para confirmar o fluxo pulsante e corte a imagem do ultrassom para aumentar a taxa de quadros. Altere a profundidade focal para a parede posterior da aorta abdominal e mova a sonda caudally para visualizar os pontos de ramificação das artérias celíaca e superior mesentóricas.
Em seguida, use a artéria renal direita como marco e capture um laço seno da região de interesse, mostrando a dilatação máxima na aorta abdominal. Depois de todas as imagens terem sido capturadas, remova o gel ultrassônico, enxague a área de imagem com água morna e limpe suavemente o mouse seco. Devolva o mouse para sua gaiola na almofada de aquecimento, e limpe a máquina de ultrassom, sonda e plataforma com um pano macio e lenços umedecidos desinfetantes.
Em seguida, baixe todos os arquivos coletados durante a varredura e desligue a máquina de ultrassom. Nesta imagem representativa do ultrassom de uma aorta torácica proximal não aneurismal, a aorta ascendente pode ser observada localizada ao lado da artéria pulmonar, e forma um tubo curvo com três ramos na região do arco. A artéria innominada, a artéria carótida comum esquerda e a artéria subclávia esquerda.
Nesta imagem representativa de ultrassom de aorta abdominal não aneurisma, a aorta abdominal é detectada dorsalmente na veia cava inferior. Aqui, imagens representativas de aneurismas de aoórtica torácica e abdominal são mostradas. Para a medição dos diâmetros aórticos e ascendentes, a linha verde é utilizada para padronizar o seio aórtico e o diâmetro aórtico ascendente, respectivamente.
As linhas podem então ser desenhadas perpendicularmente para a linha verde entre as duas bordas internas do lúmen no seio aórtico e o diâmetro aórtico ascendente máximo. Para a medição da aorta abdominal, desenhe uma linha através do maior diâmetro luminal, desde a borda interna até a borda interna do lúmen do vaso, e trace a borda interna do lúmen aórtico para a área luminal. Os diâmetros luminosos das aortas torácicas e abdominais são diferentes entre sístole e diastole.
O ciclo cardíaco também deve ser considerado para medidas precisas. Neste estudo piloto representativo, não houve grande diferença nos diâmetros medidos da aorta ascendente entre o ultrassom e as imagens ex vivo. Esta técnica de ultrassom permite a aquisição de resultados reprodutíveis e precisos, uma vez que não foram observadas variabilidades inter ou intra observadores neste experimento entre as medidas aórticas feitas por dois observadores independentes e sessões de medição.
O ajuste das configurações da sonda e do estágio são passos importantes para imagens aórticas confiáveis e reprodutíveis. As etapas de análise de dados também são importantes para uma medição aórtica precisa.
