O protocolo combina um modelo de camundongo de aneurisma de aoórtico abdominal semelhante a doença humana estabelecida e tratamento repetitivo via cateter intravenoso. Para atender à necessidade clínica de bloquear a progressão do aneurisma. O protocolo fornece um fluxo de trabalho completo para testar drogas para reduzir a progressão do aneurisma em camundongos, incluindo informações abrangentes sobre a expansão do volume de diâmetro aórtico e morfologia.
Mais ultrassom 3D. O ultrassom 3D pode ser adaptado para medir a aorta infrarenal onde os aneurismas se desenvolvem em modelos de camundongos menos baseados em sabor. O cateterismo venoso jugular pode ser utilizado para qualquer conjunto de injeções intravenosas.
Depois de anestesiar de 12 a 14 semanas de idade, o rato de correio deficiente APOE raspa a pequena área no lado superior esquerdo das costas, sobre a omoplata, aplique solução de iodo povidone de 10% para desinfetar a área raspada. Faça uma incisão transversal de um centímetro na pele da parte superior das costas com um bisturi entre a linha média espinhal e a linha escapular esquerda. Segurando a pele com fórceps e usando tesouras curvas sem cortes.
Faça um bolso subcutâneo empurrando em direção ao membro traseiro esquerdo. Abra a tesoura e puxe a tesoura aberta para fora do corte para ampliar o bolso. Insira suavemente a bomba no bolso com o moderador de fluxo em direção à cauda para minimizar a possível interferência de angiotensina dois liberados pelo local da incisão.
Em seguida, feche a ferida com suturas absorvíveis de 4.0. Usando o sistema de acesso vascular. Prepare o cateter cortando o três lados franceses ao comprimento desejado e empurrando o cateter sobre o conector metálico 22 do sistema de acesso vascular ou VAS com pelo menos três milímetros de sobreposição.
Coloque a tampa de alumínio no botão para proteger a porta. Raspe a pele do lado direito do pescoço no lado ventral e o lado direito da parte superior traseira de um rato anestesiado. Em seguida, aplique a solução de iodo povidone para desinfetar a área raspada.
Para a preparação da veia jugular, faça uma incisão transversal de pele super clavicular de 0,5 centímetros no lado direito do pescoço sobre a clavícula direita. Use pinças microcirúrgicas cegas para separar o tecido conjuntivo e a gordura expondo a veia jugular externa. Evite rasgar pequenos vasos sanguíneos na gordura.
Isole cinco milímetros do vaso perto dos músculos peitorais. Em seguida, o tecido dissecou sem cortes sob a veia usando pinças micro dobradas e passar por duas a três das ligaduras de seda 6.0. Coloque as ligaduras e adicione uma gota de soro fisiológico ao local.
Para a implantação do botão, vire o mouse e coloque-o na posição propensa. Aplique a solução de iodo povidone para desinfetar a área raspada. Faça uma incisão sagital de um centímetro na parte superior das costas com um bisturi entre as linhas escárula média e direita.
Em seguida, use uma tesoura curvada sem cortes para fazer um bolso circular ligeiramente maior do que o tamanho do VAS ao redor do local da incisão por dissecção contundente. Use a tesoura curvada para cavar cranialmente sobre o ombro direito em direção à incisão ventral no pescoço, abrindo ligeiramente a tesoura. Em seguida, puxando a tesoura aberta para fora e repetindo a ação como ela é empurrada ainda mais para dentro.
Uma vez que o túnel tenha atingido a incisão ventral passe por grampos cirúrgicos do ventral para a incisão dorsal. Conecte três extremidades francesas do cateter ao grampo e puxe o cateter através do túnel para que ele esteja fora da incisão do pescoço ventral e o VAS esteja no lugar na incisão dorsal. Em seguida, insira o disco de feltro cirúrgico VAS subcutâneamente na incisão na parte de trás.
Desescalar o cateter verifique se há patency usando a extremidade do garfo da ferramenta de manuseio para remover a tampa de alumínio protetora e use a extremidade magnética para segurar o botão e injete soro fisiológico ou PBS com uma seringa de um mililitro presa ao injetor correspondente até que o líquido vaze da extremidade francesa. Aperte o botão caudally no bolso e feche a pele sobre o disco de feltro dos VAs sob a flange do VAS com duas quatro suturas interrompidas cranialmente. Para o cateterismo venoso, gire o mouse de volta para a posição supina e adicione uma gota de soro fisiológico ao lado do corte.
Separe as ligaduras e amarre a primeira ligadura ao redor do cateter e a veia jugular com dois a três nós o mais longe possível para ligar a veia e ancorar o cateter para fora. Mova a segunda ligadura o mais perto possível dos músculos peitorais. Usando micro tesouras corte um ângulo diagonal para criar uma extremidade afiada de modo que três a cinco milímetros do cateter estará na veia.
Em seguida, fure um buraco na veia usando uma agulha de calibre 27 presa a uma seringa de um mililitro cheia de soro fisiológico puxando a ligadura craniana presa e empurrando a agulha paralela à veia. Em seguida, insira o cateter na veia da mesma forma puxando a ligadura craniana fixa e deslizando o cateter na veia usando a pinça dobrada. Empurre o cateter até que esteja alinhado com a veia.
Amarre a segunda ligadura sobre a região inserida do cateter com dois a três nós e verifique se não há vazamento de sangue. Corte a extremidade excedente de ambas as ligaduras com micro tesouras e adicione uma gota de soro fisiológico. Em seguida, feche a pele com suturas absorvíveis de 4.0.
Injete no mouse o volume desejado de inibidor ou soro fisiológico PBS, como demonstrado anteriormente. Mantenha pressão positiva sobre o êmbolo enquanto desconecta a seringa do VAS. Monitore os ratos após a recuperação.
Usando o software de ultrassom, ajuste as configurações para obter profundidade de imagem de 30 DB para 9,0 milímetros e largura para 8,08 milímetros. Em seguida, adicione uma gota de eletro gel a cada um dos quatro eletrocardiogramas ou eletrodos ECG no palco e tape as extremidades do mouse a eles. Espalhe gel de ultrassom quente no abdômen do camundongo e baixe o transmissor para colocá-lo em contato com o abdômen.
Identifique a aorta como um vaso circular e pulsante rápido. Localize a artéria renal esquerda e inspecione manualmente a área até 12 milímetros cranialmente para garantir que não haja interferência na área de interesse. Volte para a artéria renal esquerda.
Em seguida, coloque a sonda a seis milímetros cranialmente da artéria. Para aquisição de ultrassom 3D, a gating respiratória é de 25% de atraso e uma janela de 50% e o gatilho do ECG para 50 milissegundos. Das opções 3D, ajuste a distância de varredura para 11,96 milímetros com um tamanho de passo de 0,076 milímetros.
Depois de adquirir 157 quadros, role para verificar a qualidade da imagem antes de salvar a imagem. Para aquisição de diâmetro 2D desligue o gatilho de gating respiratório e ECG e localize manualmente a área com maior diâmetro no trecho de 12 milímetros da aorta super renal. Pressione o modo B na tela e adquira uma imagem do modo B.
Além disso, para a imagem EKV sem mover o transdutor, adquira uma imagem EKV com as configurações padrão do sistema no mesmo local. O desenvolvimento e progressão dos aneurismas super renais foram monitorados por ultrassom no oitavo dia e dia 27. Uma mancha tricrômica do dia 27 aorta ilustra a morfologia do aneurisma formado com dissecção de parede e trombo intramural.
A taxa de incidência de aneurisma de aorta abdominal ou AAA no oitavo dia e rupturas aórticas nos primeiros nove dias mostraram que 9% dos camundongos não conseguiram formar um AAA. No entanto, 35% dos camundongos experimentaram rupturas aórticas antes da implantação do cateter, resultando em um total de 56% dos camundongos restantes com a doença AAA estabelecida sendo mínima para estratificação em grupos de tratamento. Observou-se relação inversa entre a expansão inicial e a progressão da doença de formação inicialmente rápida versus aneurismas de crescimento moderado em camundongos tratados com controle da PBS.
Os resultados exemplares do ultrassom revelaram que o tratamento GSK 4 84 inibiu a progressão do AAA enquanto os aneurismas continuaram a ampliar e controlar os camundongos. A patência do cateter é essencial, pois a desconexão do cateter da veia ou do botão de acesso vascular resulta na entrega de medicamentos no espaço subcutâneo com concentrações de drogas desconhecidas no local do aneurisma. Quando os camundongos são sacrificados no final do experimento, a água e outros tecidos podem ser histologicamente investigados e a análise sanguínea conduzida para caracterizar efeitos de drogas dentro e fora do alvo.
