Estudos focados em modelos de doenças cardiovasculares, metas terapêuticas cardiovasculares ou agentes farmacêuticos exigem a avaliação da pressão arterial sistêmica e mudanças no ritmo cardíaco. A cannulação da artéria femoral é um método econômico para o registro de formas de onda de pressão intraarterial que podem ser realizadas com equipamentos padrão em uma instalação animal. Demonstrando o procedimento será Hsin-Ting Lin, um técnico do meu laboratório.
Antes de começar o experimento, coloque o rato anestesiado em uma posição supina em uma placa cirúrgica e confirme a falta de resposta ao aperto do dedo do pé. Fixar as pernas com elásticos para imobilizar o corpo, e configurar os instrumentos de pressão arterial e eletrocardiograma para gravação, incluindo uma unidade de entrada analógica para adquirir os sinais, um transdutor de pressão com um hub compatível, três condutores de eletrocardiograma com ponta de agulha bipolar e um computador com software adequado. Antes do início do registro da pressão arterial, remova o manguito de pressão de um esfigmomanômetro padrão e conecte a torneira de três vias no tubo de inflação ao transdutor de pressão do sistema de aquisição de dados.
Aparafusar a válvula de liberação de ar no sentido horário, mantendo um olho no medidor enquanto bombeia a lâmpada de inflação. Quando o medidor mostrar 100 milímetros de mercúrio, abra a torneira de três vias para se conectar ao transdutor de pressão. O fator de conversão para o cálculo da pressão arterial será determinado automaticamente.
Para liberar a pressão, aparafuse a válvula de liberação de ar no sentido anti-horário até que a pressão do esfigmomanômetro volte a zero. Repita a calibração com 200 milímetros de pressão de mercúrio e desvincule o transdutor de pressão do esfigmomanômetro de mercúrio. Conecte o transdutor de pressão à torneira de três vias do cateter PE e verifique as junções de conexão da torneira de três vias.
Para identificação de marcos de superfície, localize o vinco inguinal na junção entre o abdômen e a coxa e levante toda a camada de pele no centro da linha. Use uma tesoura para cortar a pele levantada em uma orientação aproximadamente paralela à coxa ipsilateral. O nervo femoral e os vasos estão localizados sob o tecido subcutâneo exposto.
Usando fórceps finos, disseque a camada tecidual por camada, interrompendo a dissecção ao nível dos vasos femorais. Limpe cuidadosamente o tecido mole ao longo do nervo femoral e vasos para obter uma boa visão do nervo semelhante a fibras. A veia é roxa escura e a artéria é pulsante.
Quando a dissecção tecidual chegar aos vasos femorais, troque e troque as fórceps para evitar vasos danificados. Em seguida, use fórceps com pontas angulares para estender o comprimento exposto da artéria femoral e da veia. Para anular a artéria femoral, use os fórceps para separar a veia femoral da artéria e aplicar um grampo buldogue na artéria femoral o mais cranialmente possível.
Faça uma gravata solta das duas cordas de seda, uma logo abaixo do grampo bulldog e outra no terminal caudal da artéria femoral exposta. Use microscisores para fazer um pequeno orifício sobre o lado ventral da artéria femoral e inserir a ponta de um cateter de polietileno ou PE através do pequeno orifício. Avance o cateter cranialmente.
Uma descarga de sangue no cateter depois de remover o grampo indica que a ponta do cateter atingiu o lúmen da artéria femoral. Aperte a seda superior para fixar a posição do cateter e aperte a seda inferior para evitar sangramento do lado caudal da artéria femoral. Para confirmar o sucesso da caninaculação, use uma seringa de um mililitro para injetar 0,1 a 0,2 mililitros de soro fisiológico heparinizado na artéria femoral.
Em seguida, verifique se escorre ao redor do local de canulação e cubra o local com uma bola de algodão molhado. Para realizar uma gravação de pressão arterial, conecte o cateter pe e a torneira de três vias à torneira transdutor de pressão e certifique-se de que não há bolhas de ar no sistema de cannulação. Em seguida, verifique as junções de conexão da torneira de três vias.
Quando o equipamento estiver pronto, inicie o sistema de aquisição de dados com uma frequência amostral de 1000 hertz. Ondas de pressão arterial serão exibidas. Permita que toda a configuração se estabilize por pelo menos três a cinco minutos, verificando o local de cannulação periodicamente para confirmar que não há sangramento.
Para realizar um eletrocardiograma superficial, primeiro verifique as três pistas do ECG bipolar para ter certeza de que os eletrodos positivos, negativos e de platina de referência estão intactos, e insira os fios subcutâneamente na pata dianteira esquerda, na pata dianteira direita e na perna traseira direita. Em seguida, conecte os hubs de eletrodos a um amplificador ECG personalizado com uma frequência amostral de 1000 hertz e uma frequência de filtro de três a 500 hertz. Registros simultâneos de pressão arterial e ECG em seis ratos normotensos e hipertensos de 47 semanas de idade revelaram uma pressão arterial significativamente maior e média em animais espontaneamente hipertensos em comparação com ratos normais.
As ondas P, os intervalos de RP, a largura do QRS e os parâmetros de intervalo QT medidos a partir das gravações de ECG não demonstraram diferenças entre os dois grupos. Você pode executar a calibração do sistema de pressão e configurar o transdutor de pressão e o sistema de aquisição de dados antes de anestesiar os animais. Os dados de onda de pressão arterial bruta adquirida e os dados de eletrocardiograma podem ser analisados no software.
Radiotelemetry é considerada uma técnica padrão-ouro para monitorar a BP e a frequência cardíaca, mas a técnica é cara. A canulação intraarterial com ECG simultâneo é uma alternativa econômica. Anestesia por inalação de isoflurane é fácil de realizar, mas pode ser perigosa se ocorrer um vazamento substancial.
Portanto, verifique sempre o equipamento e a tubulação antes de usar.
