A sensibilidade barorreflexa descreve a relação entre alterações na pressão arterial e alterações reflexas na frequência cardíaca. Quando a pressão arterial aumenta, a frequência cardíaca diminui e vice-versa. As medidas combinadas de eletrocardiograma telemétrico e pressão arterial em camundongos conscientes permitem a determinação da sensibilidade barorreflexa.
A principal vantagem dessa técnica em relação aos métodos mais antigos para determinação da sensibilidade barorreflexa é que ela mede o reflexo espontâneo. Os ratos estão acordados e não precisam ser contidos. Não são necessários procedimentos invasivos, como a injeção de drogas vasoativas para induzir alterações da pressão arterial.
O barorreflexo pode ser usado para estratificação de risco de pacientes com doença cardíaca, como hipertensão arterial, infarto do miocárdio e insuficiência cardíaca. Alterações patológicas da sensibilidade barorreflexa estão associadas ao aumento do risco de mortalidade cardíaca. É, portanto, um importante marcador prognóstico para doença cardiovascular.
Os detalhes microcirúrgicos como punção e canulação da artéria carótida são as etapas mais desafiadoras do protocolo. Deve-se tomar cuidado para garantir que haja tensão suficiente nas suturas para interromper temporariamente o fluxo sanguíneo e levantar levemente a artéria para canulação. Comece usando um aparador para raspar a área cirúrgica de um camundongo anestesiado abaixo do queixo em direção aos músculos peitorais transversais.
Após posicionar o camundongo em decúbito dorsal, aplique pomada ocular para proteger os olhos do animal durante a anestesia. Aplicar creme depilatório na área cirúrgica previamente raspada. Após três a quatro minutos, remova o cabelo e o creme depilatório usando um algodão e água morna, certificando-se de que a pele esteja limpa e livre de qualquer resíduo de cabelo ou creme para que a ferida não seja contaminada durante a operação.
Faça uma incisão reta de um a 1,5 centímetro na linha média através da pele do pescoço, começando imediatamente abaixo do queixo. Crie um espaço subcutâneo em ambos os lados da incisão, separando a pele do tecido conjuntivo subjacente com tesoura de dissecção romba, tomando cuidado para não beliscar a pele muito fortemente com a pinça, o que pode causar necrose e levar à cicatrização prejudicada após a cirurgia. Separe as glândulas parótida e submandibular com aplicadores de ponta de algodão para expor a musculatura que recobre a traqueia.
Retrair a glândula salivar esquerda com pinça de dissecção curva para identificar a artéria carótida esquerda localizada lateralmente à traqueia. Dissecar cuidadosamente a artéria carótida do tecido adjacente com pinça curva, tomando muito cuidado para não lesar o nervo vago que corre ao longo do vaso. Continue a dissecção romba para expor a artéria carótida esquerda a cerca de 10 milímetros de comprimento e separá-la completamente da fáscia vascular e do nervo vago.
Passar uma sutura de seda cinco por zero inabsorvível sob a porção isolada da artéria carótida enquanto levanta levemente o vaso sanguíneo com pinça curva para reduzir o atrito entre as suturas e a artéria carótida. Coloque a sutura cranialmente apenas proximalmente à bifurcação da artéria carótida. Em seguida, forme um nó e amarre-o para ligar permanentemente o vaso.
Fixar ambas as extremidades da sutura da oclusão craniana na mesa cirúrgica com fita cirúrgica. Passar uma segunda sutura de oclusão por baixo da artéria carótida e colocá-la caudalmente a aproximadamente cinco milímetros de distância da sutura craniana, amarrando um nó solto. Fixar ambas as extremidades da sutura com fita adesiva cirúrgica.
Posicionar uma terceira sutura entre a sutura de oclusão cranial e caudal para manter o cateter no lugar enquanto se canula a artéria e fazer um nó frouxo. Puxe suavemente a sutura de oclusão caudal e fixe-a com tensão para interromper temporariamente o fluxo sanguíneo e levantar levemente a artéria. Penetrar cuidadosamente a artéria proximal à sutura da oclusão craniana com a agulha dobrada.
Ao elevar levemente a artéria carótida com a agulha dobrada, segure o cateter com pinça de canulação do vaso, introduza-o na pequena punção e deixe-o deslizar lentamente para dentro do vaso. Simultaneamente, puxe suavemente para trás a agulha dobrada. Quando o cateter atingir a sutura de oclusão caudal, aperte levemente a sutura segura para manter o cateter no lugar.
Soltar a sutura da oclusão caudal para que o cateter possa ser movimentado até que sua ponta seja posicionada no arco aórtico. Uma vez posicionado corretamente, prenda o cateter com as três suturas e corte as extremidades o mais curto possível sem puxar os nós com muita força. Formar um túnel subcutâneo a partir do pescoço direcionado para o flanco esquerdo do animal e formar uma pequena bolsa usando uma pequena tesoura dissecante romba.
Irrigar o túnel com uma seringa de um mililitro preenchida com solução quente estéril de cloreto de sódio a 0,9% e introduzir aproximadamente 300 microlitros da solução na bolsa. Levante cuidadosamente a pele com pinça romba e introduza o corpo do dispositivo transmissor na bolsa, tomando cuidado para não puxar o cateter de pressão arterial para fora da artéria carótida. Formar um túnel fino para o músculo peitoral direito com tesoura dissecante romba e colocar o eletrodo negativo no túnel usando pinça romba.
Fixar a extremidade terminal do cabo-eletrodo com um ponto no músculo peitoral usando material de sutura absorvível seis por zero. Formar uma alça no eletrodo positivo, posicionar sua ponta na região da costela caudal esquerda e fixar sua posição com um fio absorvível seis por zero. Fechar a pele com nós únicos com material de sutura inabsorvível cinco por zero.
Além disso, aplique uma pequena quantidade de adesivo tecidual em cada nó para evitar que o animal morda a sutura e evite deiscências. Aplique hidrogel de iodopovidona a 10% na ferida para prevenir a infecção da ferida durante a fase de recuperação. Para alívio preemptivo da dor, injetar carprofeno em cloreto de sódio a 0,9% por via subcutânea enquanto o camundongo ainda estiver sob anestesia.
Posicione metade da gaiola em uma plataforma de aquecimento regulada para 36 graus Celsius por 12 horas após a cirurgia e transfira o mouse para a área quente para que o animal tenha a opção de permanecer na área quente ou mover-se para a parte mais fria da gaiola quando acordado. Após a aquisição dos dados, inspecione os traços da pressão arterial e do ECG e rastreie uma sequência de três horas de baixa atividade. Para realizar a análise da sensibilidade barorreflexa ou da BRS, abra o painel de análise da BRS.
Inspecione manualmente cada sequência exibida no painel e exclua batimentos ectópicos, pausas sinusais, eventos arrítmicos ou dados ruidosos para excluí-los com êxito da análise. Esse protocolo pode ser usado para análise precisa da SBR e uma ampla gama de parâmetros derivados do ECG ou da PA, como intervalos de ECG, variabilidade da PA e detecção de arritmias. Um camundongo saudável que se recuperou suficientemente da cirurgia mostra um aumento fisiológico de atividade, frequência cardíaca e PA durante a fase escura.
O método de sequência foi utilizado para determinar a SBR, onde a pressão arterial sistólica e os intervalos RR foram examinados batimento a batimento durante sequências curtas de três ou mais batimentos com aumento ou queda espontânea da pressão arterial sistólica. Para avaliar a correlação entre FR e pressão arterial sistólica, ambos os parâmetros foram plotados um contra o outro e a inclinação da reta de regressão linear foi calculada para cada sequência. O número total de sequências por 1.000 batimentos e o ganho médio da SB espontânea refletido pelas inclinações das retas de regressão linear calculadas a partir da FR pela relação pressão arterial sistólica são parâmetros de interesse na análise.
Durante as fases de maior atividade, a qualidade do sinal pode diminuir e induzir ruído. A definição de dois valores baixos para o coeficiente de correlação mínimo também resulta em falsas detecções de sequências que não refletem a atividade barorreflexa, mas resultam de esferas arrítmicas. Para a interpretação dos dados de sensibilidade dos barorreceptores, é importante considerar os níveis funcionais envolvidos no reflexo barorreceptor.
No nível neuronal, os componentes aferentes, centrais ou eferentes do reflexo podem estar alterados. No nível cardiovascular, a responsividade reduzida ou aumentada do nó sinusal pode causar alterações na sensibilidade dos barorreceptores. Com esses dados, não se pode apenas determinar a sensibilidade barorreflexa e a função do nó sinoatrial cardíaco, mas também uma ampla gama de parâmetros derivados do ECG e da pressão arterial.
Estes incluem, por exemplo, pressão arterial sistólica e diastólica, intervalos de ECG, variabilidade da frequência cardíaca ou ritmos de cigarra.
