A compreensão da fisiopatologia do acidente vascular cerebral isquêmico é limitada devido à ausência de dados teciduais de alta qualidade em humanos. Uma vez que tais amostras são impossíveis de adquirir, estudos de modelo animal bem controlados podem servir como substituto. O modelo de coelho utilizado neste protocolo fornece dados consistentes de alta qualidade para a interrogação do acidente vascular cerebral isquêmico.
A técnica aqui descrita permite o controle e a modulação precisos dos fatores hemodinâmicos para avaliar seu impacto na fisiopatologia do AVC isquêmico. Um procedimento bem planejado pode levar a resultados de alta qualidade, particularmente empregando estratégias para atenuar o vasoespasmo nas artérias, através de uma combinação de profilaxia farmacológica e técnicas angiográficas eficazes. Para começar, coloque o coelho em decúbito dorsal sobre uma mesa operatória compatível com fluoroscopia.
Estenda a cabeça à medida que otimiza o posicionamento para visualizações angiográficas subsequentes. Para atenuar o vasoespasmo, coloque 0,5 centímetros de nitroglicerina transdérmica no interior da orelha após a indução da anestesia. Depois de remover o pelo de ambas as regiões inguinais usando cortadores elétricos, prepare a pele com esfoliantes de clorexidina e álcool.
Escorre a pele da forma estéril habitual e palpa os pulsos arteriais femorais bilaterais. Realizar incisão cirúrgica de cinco centímetros com lâmina número 10 no local onde a lidocaína foi injetada. Use dissecção romba para expor o feixe vasculonervoso e, se necessário, estenda a incisão para expor um segmento arterial grande o suficiente para acesso.
Após o isolamento do feixe vasculoso, soltar várias gotas de lidocaína a 1% na artéria para evitar vasoespasmo. Separe suavemente a artéria da veia e do nervo adjacente usando pinças. Identificar a artéria pela aparência característica de sua parede muscular em comparação com as paredes finas da veia.
Após isolar a artéria, passar a pinça de ângulo reto sob o vaso. Em seguida, segure duas alças de vaso com o instrumento e passe-as suavemente sob a artéria. Situar um cada um nas extremidades a montante e a jusante da embarcação exposta.
Submeter a artéria a uma tração suave, puxando as alças do vaso, e inspecionar o vaso para que qualquer tecido residual seja removido com dissecção suave, aumentando as chances de sucesso do acesso. Após dissecar o vaso e preparar o cateter angio, gotejar lidocaína no vaso novamente. A artéria dilata-se visivelmente, aumentando as chances de sucesso do acesso e colocação de um introdutor pela técnica de Seldinger.
Aplicar tração suave na alça do vaso a jusante para ingurgitar a artéria, reduzindo o fluxo de saída e estabilizando o vaso para a tentativa de acesso. Em seguida, avançar lentamente a agulha do cateter angiodinâmico para o meio do segmento arterial exposto. Ao ver um flash de sangue no angiocateter e na câmara central, avance o cateter para a luz arterial.
Ao colocar o angiocateter com sucesso, avance um microfio através da luz do angiocateter e para dentro da aorta. Em seguida, remova o cateter angio sobre o fio e substitua-o por uma bainha hidrofílica fina de cinco franceses. Confirme o retorno do sangue arterial através da tubulação do braço lateral abrindo a válvula de três vias.
Feche a válvula e lave a bainha com soro fisiológico a 0,9%. Fixar o cubo da bainha na pele adjacente com uma sutura adicional de seda 3.0 e repetir esse processo para a artéria femoral contralateral. Sob visualização fluoroscópica, avançar um cateter deslizante de quatro French sobre um fio deslizante de 0,035 polegada inserido através da bainha femoral esquerda.
Posicionada a ponta do cateter deslizante na artéria vertebral esquerda proximal. Após a retirada do fio, lavar o cateter com soro fisiológico heparinizado a 0,9%. Realizar angiografia injetando a artéria vertebral esquerda com contraste iodado sob magnificação do lóbulo para visualizar toda a cabeça e pescoço.
Para a injeção vertebral esquerda, injetar 50% de contraste, diluído em soro fisiológico, com um suave crescendo a partir de uma seringa de três CC. Determinar a quantidade de injeção verificando o refluxo pela artéria vertebral direita e para a artéria subclávia direita. Durante essa injeção, observe também a artéria cerebral posterior ou artéria cerebral superior, uma das quais será o alvo a ocluir com o microcateter.
Prepare um microcateter direcionado a fluxo de 2,4 French com um microfio de 0,010 polegadas e faça uma forma de C na ponta do microfio. Sob orientação de roteiro, avance o microcateter dentro de um cateter deslizante de quatro French usando a bainha femoral direita e sobre o fio para a artéria vertebral direita. Avançar o microcateter através do segmento cervical da artéria vertebral esquerda.
Para passar a curva afiada como é melhor do segmento V2 para V3, avance o microcateter sozinho enquanto o microfio está de volta proximal à sua ponta. Após passar o giro brusco de V2 para V3, o microcateter frequentemente passa facilmente para a artéria ou basal proximal. Nesse momento, avançar o microfio e selecionar as artérias cerebrais posteriores e cerebelares superiores desejadas, pois injeções de microcateter não são aconselháveis devido à natureza frágil das artérias intracranianas.
Avançar ainda mais o microcateter sobre o microfio para dentro da artéria alvo e escolher uma posição proximal, pois é tipicamente mais seguro na parte posterior para se comunicar devido à sua angulação em sua origem. Uma posição mais profunda é factível na artéria cerebelar superior. Repetir a angiografia injetando o cateter da artéria vertebral esquerda com grande magnificação sobre a cabeça para confirmar a oclusão da artéria alvo.
Para obter imagens ideais, injete contraste de força total, normalmente não mais do que um CC, que é adequado para a pacificação de todas as artérias intracranianas. Remova suavemente o microfio do microcateter sob visualização fluoroscópica para confirmar uma posição estável. Coloque uma torneira no cubo do microcateter e feche a torneira para evitar a perda de sangue por fluxo sanguíneo retrógrado.
Retirar o cateter vertebral esquerdo para disponibilizar a bainha de acesso femoral esquerdo. Durante o período de oclusão subsequente, adquirir imagens fluoroscópicas intermitentes para confirmar a posição estável do microcateter oclusivo. Retirar o microcateter oclusivo após três horas.
E, em seguida, continuar a medição e modulação da pressão arterial pelo período adicional desejado. Inflar e desinflar o cateter-balão na aorta para monitorar a variabilidade da pressão arterial. Em procedimentos agudos com colheita imediata de cérebro, remova o calvário de forma fragmentada com rongeurs, começando na crista occipital e trabalhando anteriormente até que o cérebro possa ser colhido intacto.
Coloque o cérebro em formalina ou flash freeze, dependendo do tipo de análise de tecido desejada. Em todos os animais, o encéfalo foi retirado com sucesso e a análise histopatológica foi realizada, demonstrando infarto no cerebelo direito. A pressão arterial foi traçada a partir de um cateter balão de Fogarty colocado na aorta infrarrenal, e os dados de aproximadamente uma hora de monitorização demonstram mudanças da pressão arterial em tempo real com mudanças na insuflação do balão.
O traçado de curto prazo da pressão arterial demonstra as mudanças pressóricas ao longo do ciclo cardíaco. Além disso, pequenas mudanças rápidas foram observadas a partir da variabilidade respiratória, que é fisiologicamente normal. Uma quase duplicação imediata da pressão arterial medida foi observada após a insuflação do balão.
Durante a tentativa desse procedimento, a dissecção romba meticulosa e o gotejamento de lidocaína para evitar vasoespasmo durante o acesso do cateter angiodinâmico são críticos. Além disso, a angiografia da artéria vertebral esquerda fornece um roteiro para o acesso endovascular eficiente à artéria intracraniana alvo. A hemodinâmica pode ser modulada de forma farmacológica ou pela insuflação de cateter-balão na aorta.
Os espécimes cerebrais colhidos podem ser analisados com uma variedade de técnicas, tais como histopatologia ou transcriptômica espacial.
