Para modelar doenças pulmonares em camundongos, os agentes experimentais são frequentemente administrados através de injeção intratraqueal. Essa abordagem, no entanto, não pode atingir seletivamente um pulmão, e a distribuição pode ser assimétrica entre os pulmões. Ao cânular um pulmão individual em um rato anestesiado, podemos administrar unilateralmente agentes experimentais.
Com a modificação, essa abordagem pode ser usada bilateralmente, melhorando a simetria da deposição em ambos os pulmões. A preparação do cateter, incluindo polimento, leve angulação e rotulagem é elemento-chave para o sucesso. Claro, praticar essa técnica também é necessária.
Demonstrando o procedimento estará Sumei Liao, um assistente profissional de pesquisa do meu laboratório. Depois de confirmar a falta de resposta ao dedo do pé, suspenda um rato anestesiado, de oito a 10 semanas, C57-Black/6 dos incisivos em uma linha de sutura drapeada em uma orientação supina. Segure livremente o mouse com dois a três pedaços de gancho, e enrole a fita, evitando a restrição de ventilação, e ligue um iluminador de fibra óptica emissor de luz.
Posicione o operador atrás da plataforma, dorsal ao mouse. Oriente o pescoço de ganso do iluminador de dois a três centímetros de distância do mouse para que ele acenda a área de laringe através da pele. Usando fórceps estéreis na mão dominante, tire a língua da cavidade oral.
Use a mão nondominante e o depressor estéril para achatar a raiz da língua para expor amplamente a orofaringe. Após a liberação dos fórceps, use a mão dominante para entubar o cateter estendido na traqueia através da cavidade oral. Confirme a colocação observando se a bolha na seringa se move para cima e para baixo a cada respiração.
Para a canulação de lobar seletiva do pulmão direito distal, após intubação intratraqueal, gire a placa de plástico 30 graus e guie o cubo do cateter em paralelo à linha média do rato até a profundidade adequada à base de peso, conforme indicado na tabela. Usando uma ponta de carregamento de gel, entregue 20 microliters de corante azul evans de 0,3% no cateter, seguido por um a dois alíquotas de 100 microliteres de ar por conta-gotas de vidro. Em seguida, retire o cateter e mantenha o rato em posição por 30 segundos antes de colocar o animal em um cobertor de aquecimento, com monitoramento até a recuperação completa.
Para a canulação lobar seletiva do pulmão esquerdo distal, após intubação intratraqueal, gire a placa de plástico menos 74 graus, e levemente avance o cateter para o bronchus da rede esquerda enquanto coloca uma pressão modesta de 90 graus para baixo e em direção ao marcador. Depois de cansar os segmentos inferiores inferiores esquerdos, gire a placa de plástico menos 30 graus, e entregue 40 microliters de corante azul evans de 0,3%com uma ponta de carregamento de gel. Em seguida, entregue de um a dois alíquotas de 100 a 300 microliter de ar via conta-gotas de vidro, e retire o cateter para permitir que o rato se recupere, como demonstrado.
Para toda a administração pulmonar, após a intubação intratraqueal, gire a placa de plástico 30 graus e guie o cateter em paralelo à linha média do rato, atingindo as profundidades necessárias para a cannulação distal do lado direito. Confirme o aparecimento do sinal de taquipnéia e gire o mouse menos 74 graus para permitir a assistência de gravidade para a entrega do agente. Retire o cateter para uma posição que corresponda à decolagem do brônquio da rede direita, e certifique-se de que o bisel do cateter fique voltado para baixo.
Entregar 30 microliters de corante azul evans de 0,3% para o pulmão direito, seguido por um a dois alíquotas de ar de 100 a 300 microliteres. Em seguida, retire o cateter e deixe o mouse se recuperar. Para toda a administração pulmonar esquerda, após a canulação intratraqueal, gire a placa de plástico menos 74 graus, e levemente avance o cateter para o brônquio da rede esquerda enquanto coloca uma pressão modesta de 90 graus para baixo e em direção ao bookend.
Confirme o sinal de não taquipnéia e gire o mouse 86 graus para permitir a assistência de gravidade com a administração do agente. Retire o cateter para o brônquio da rede esquerda e gire o bisel do cateter para ficar virado para baixo. Entregue 30 microliters de corante azul evans de 0,3%com uma ponta de carregamento de gel para o pulmão esquerdo, seguido por um a dois alíquotas de ar de 100 a 300 microliteres.
Em seguida, retire o cateter, para permitir que o mouse se recupere, como demonstrado. A entrega bilateral de FITC-dextran pela administração intratraqueal e simétrica intrabronquial leva à fluorescência fitc assimétrica com maiores concentrações relativas observadas no pulmão esquerdo. Isso sugere que a entrega assimétrica de pulmão de agentes experimentais após a administração intratraqueal não é uma consequência da apresentação assimétrica desses agentes a cada brônquio de mainstem, mas que a entrega igual de mainstem é diluída por diferenças no peso pulmonar e na massa.
A administração intrabronquial ajustada por dose melhora a simetria da entrega de agentes parenchymal pulmonares. Apesar dessa correção, no entanto, a heterogeneidade persistente ainda é observada dentro dos diferentes lóbulos do pulmão direito. 21 dias após a lesão pulmonar fibrosa induzida pela bleomicina intratraqueal, a inflamação é observada predominantemente no pulmão esquerdo, com menor lesão notável no pulmão direito.
Por outro lado, a administração de bleomicina intrabronquial ajustada por dose resulta em uma lesão ligeiramente diminuída no pulmão esquerdo e uma lesão aumentada no pulmão direito, com a maior lesão evidente nos lobos médio e superior. Durante toda a administração pulmonar, não se esqueça de retirar o cateter e cuidar do bisbigo do cateter de frente para baixo.
