Este modelo murino de infração do miocárdio permite o monitoramento de processos patológicos que ocorrem desde a oclusão coronariana até a insuficiência cardíaca em estágio final nos níveis cardíacos e sistêmicos locais. Este método é compatível com qualquer leitura atualmente usada em biologia cardíaca e fisiologia. Além disso, beneficia-se da imensa diversidade de modelos genéticos murinos.
A aquisição de habilidades cirúrgicas adequadas pode levar tempo para dominar. Esse procedimento é melhor aprendido passo a passo com um pesquisador experiente. A demonstração visual desse modelo murino permite o compartilhamento de dicas que podem ajudar no procedimento cirúrgico e acelerar o processo de aprendizagem.
Use uma navalha elétrica para raspar rapidamente um anesterizado, 25 a 30 gramas, macho, C57-Black/6 na garganta e no lado esquerdo da caixa torácica. Confirme a falta de resposta ao aperto do dedo do dedo do dedo. Aplique pomada aos olhos do animal.
Coloque o mouse na posição supina em uma almofada de aquecimento e coloque uma pequena compressa de gaze sob a cabeça para evitar superaquecimento dos olhos. Fixar os membros com fita adesiva. Passe um laço de sutura de seda 5-0 sob os incisivos superiores, e fixe a extremidade do laço na almofada de aquecimento para manter a boca aberta durante a cannulação.
Aplique creme depilatório nas áreas pré-raspadas e massageie delicadamente com um cotonete por um minuto. Retire o excesso de pele e creme com gaze, e limpe a pele exposta com gotas de solução salina de 0,9% e gaze. Aplique pedaços de gaze estéril na garganta raspada e no tórax, e mergulhe a gaze com iodopovidona.
Coloque o ventilador em um volume de maré de sete mililitros por quilograma e uma taxa de ventilação de 140 traçados por minuto. Mova o rato sob um microscópio estéreo de microcirurgia. Segurando a pele no centro da garganta, faça uma incisão de 0,5 centímetros ao longo da linha caudal/cefálica, e separe os lóbulos da glândula salivar.
Use fórceps curvos para separar suavemente a fáscia do músculo esternoide até que a laringe e a traqueia sejam visíveis. Em seguida, fixe as bordas da abertura com retráteis ligados a bandas elásticas. Em seguida, puxe suavemente a língua para os lados, e use fórceps para inserir a agulha interna sem corte de uma cânula de 16 bitola na traqueia.
Visualize uma inserção correta na traqueia através da incisão da garganta e conecte a cânula ao ventilador. Coloque a solução salina estéril de 0,9% suplementada com gaze encharcada de iodopovidona na incisão para manter os tecidos molhados durante a operação. Em seguida, coloque o tubo de escape em água.
A presença de bolhas indica uma intubação bem sucedida. Para a ligadura da artéria coronária descendente anterior esquerda, ou LAD, mova cuidadosamente o mouse para a posição do decúbito do lado direito, e recure o membro anterior esquerdo na nova posição. Identifique a linha entre os músculos peitoral esquerdo menor e principal, e faça uma incisão oblíqua de um centímetro de pele ao longo da linha.
Usando micro tesouras dissecando sem cortes, separe a fáscia dos músculos peitoral sem incisar os tecidos e use retráteis ligados a bandas elásticas para manter a separação. Coloque o ventilador com uma pressão final positiva de três centímetros de água. Use fórceps contundentes para abrir a cavidade torácica no terceiro espaço intercostal entre a terceira e a quarta costelas.
Coloque dois retráteis na caixa torácica, um em cada costela, e use um fórceps fino curvo para remover cuidadosamente o pericárdio sem prejudicar o coração e os pulmões. Localize o LAD como uma linha vermelha superficial e brilhante que corre da borda da aurícula esquerda em direção ao ápice. Use um suporte de agulha para passar uma sutura de seda 7-0 sob o LAD dois a três milímetros abaixo da ária esquerda.
Puxando a seda lentamente para evitar rasgar tecido cardíaco, amarre a ligadura com três nós. A parte inferior esquerda do ventrículo esquerdo ficará imediatamente pálida após a ligadura. Agora solte os retráteis da costela, e segurando a terceira costela com fórceps, faça dois passes com uma sutura de seda 6-0 sob a terceira e quarta costelas.
Coloque três gotas de solução salina de 37 graus Celsius 0,9% na abertura e feche o tubo de escape de expiração por dois ou três ciclos respiratórios para inflar adequadamente os pulmões. Aperte e segure a sutura com dois lances, e solte os retráteis segurando os músculos, ajudando os músculos a retornar ao seu local anatômico correto. Em seguida, feche a pele torácica com dois pontos e dois arremessos de seda de sutura 5-0.
Feche a pele da garganta com um ponto de seda de sutura 5-0 e dois arremessos. No final do procedimento, remova as faixas de fita dos membros, gire cuidadosamente o animal para decúbito ventral na almofada de compressa e coloque uma compressa na almofada de aquecimento do lado direito do animal. Injetar intraperitoneally 0,3 mililitros de solução de glicose aquecida de 37 graus Celsius.
Pare o ventilador. Se o rato respirar espontaneamente, remova cautelosamente a cânula. Injete subcutâneamente 0,1 miligramas por quilograma de buprenorfina.
Coloque o mouse em uma gaiola Celsius de 30 graus ventilada com 100% de oxigênio por pelo menos uma hora com monitoramento. Durante os dois primeiros dias após a cirurgia, forneça ao rato uma dieta macia e ad libitum de água, aquecendo o animal conforme necessário. Sete dias após a cirurgia, as áreas isquêmicas permanecem inaluentas pelo cloreto de tripheniltetrazolium, enquanto o tecido vivo mancha vermelho devido à presença de desidrogenases.
As áreas isquêmicas podem então ser calculadas como a porcentagem da área branca do ventrículo esquerdo em um programa de software de imagem. A análise de manchas ocidentais para a actina muscular alfa-lisa e fosforilação SMAD2, que são respectivamente grandes leituras de miofibroblasts e de transformação do fator de crescimento beta sinalização ativação, podem ser usados para determinar a extensão da fibrose dentro do tecido miocárdio dos corações infartados. A análise de reação em cadeia de polimerase em tempo real da transformação do fator de crescimento beta e sua expressão mRNA alvo a jusante também podem ser realizadas para avaliar a presença de fibrose miocárdio.
Vias de sinalização pró-inflamatória e a expressão de genes pró-inflamatórios são tipicamente ativadas na primeira semana após o infarto do miocárdio. A expressão mRNA de genes pró-inflamatórios e marcadores monocitos/macrófagos também é observada. A altura de ligadura influenciará criticamente a sobrevivência e deve ser adaptada a cada cepa ou genótipo, pois a ramificação LAD pode variar.
As constantes na ligadura são fundamentais para obter resultados reprodutíveis. Este procedimento pode ser acoplado a qualquer método analítico e pode ser seguido por análise funcional, fixação tecidual, cultura celular ou qualquer técnica de interesse.
