Neste vídeo, é fornecido um protocolo para amostragem contínua de sangue. A radioatividade sanguínea será medida em paralelo a um PET/CT usando um desvio arteriovenoso extracorpórea. Ao fazer isso, a função de entrada arterial para quantificação subsequente de dados PET/CT é gerada e permite mais tarde uma modelagem biocinética precisa.
As principais vantagens deste protocolo são que ele é reprodutível, gera perda mínima de sangue e facilita uma alta precisão na resolução temporal da função de entrada arterial. É essencial cruzar todos os dispositivos de medição a serem utilizados para a determinação da concentração de atividade do sangue. Demonstrando o procedimento estará Anne Moller, uma técnica do nosso laboratório.
Depois de confirmar a falta de resposta ao beliscão do dedo do pé em um rato em jejum de 12 horas, raspe a perna e a virilha no lado cirúrgico do animal e limpe a pele exposta com desinfetante adicional. Aplique pomada no olho do animal e coloque uma sonda retal para monitoramento contínuo e manutenção da temperatura corporal. Tape os membros do rato à superfície de trabalho, e desinfete o local de operação com um desinfetante mucosal.
Faça uma incisão de aproximadamente 20 milímetros na virilha, e disseque as finas camadas da pele para expor a veia femoral, artéria e nervo. Coloque dois filamentos finos sob a veia femoral e artéria, e ligate os vasos com os filamentos distais. Segurando os vasos sob tensão com um grampo de buldogue, use os filamentos de sutura proximal para tensionar o vaso com os grampos bulldog sem um nó.
Bloqueie a veia com um grampo de aneurisma proximal de dois a três milímetros distal da sutura com o grampo bulldog, e use uma tesoura córnea para fazer uma incisão que é 1/3 do diâmetro do vaso. A incisão da nave é o passo mais crítico em nosso protocolo. Certifique-se de usar instrumentos microcirúrgicos, como a tesoura da córnea, e certifique-se de cortar o vaso cuidadosamente em um ângulo de 45 graus.
Use um cotonete estéril para remover o sangue que vaza e dilatar a veia com um fórceps maçante. Segurando o vaso aberto, insira o cateter afiado na veia na direção proximal, até o clipe do aneurisma. Abra o clipe de aneurisma e empurre o cateter mais dois ou três centímetros.
Se o cateter tiver sido colocado corretamente, o sangue fluirá para dentro do cateter. Fixar o cateter com os dois nós proximais. Use uma seringa de insulina para lavar e aspirar 100 microliters de soro fisiológico heparinizado através do cateter para verificar a funcionalidade do cateter.
Em seguida, coloque um cateter na artéria, como apenas demonstrado para a veia, e feche a perna com suturas. Demonstrando o procedimento estará Joanna Forster, uma técnica do nosso laboratório. Para aquisição de imagem, coloque o animal em uma posição propensa à cabeça na pálete da cama de transporte e mova a cama de transporte para a posição estendida da cama para injeção.
Conecte os cateteres ao sistema de desvio e inicie a bomba peristáltica com uma taxa de fluxo de 1,52 mililitros por minuto para encher o sistema de desvio com o sangue do animal. Mova a cama de transporte para o centro do campo de visão da tomografia de emissão de pósitrons, ou PET, anel de detecção, e inicie o sistema de amostragem de sangue on-line. Em seguida, inicie a tomografia PET/computadorizada, ou Tomografia Computadorizada.
Após 60 segundos, injete 0,5 a um mililitro de uma dose de aproximadamente 22 megabecquerel de 18F-fluorodeoxyglucose por via intravenosa através da peça T. Lave a peça T com cerca de 150 microliters de solução salina heparinizada. Para a aquisição de emissões PET, defina a opção de aquisição por tempo para 3.600 segundos e selecione F-18 como isótopo do estudo.
Use 350 a 650 volts de quiloeleron como nível de energia e 3.438 nanossegundos como a janela de tempo. Para a aquisição do CT, selecione a atenuação na opção de aquisição e, nas configurações de projeção, selecione a projeção de 180 para uma rotação total de metade. Para o campo de exibição e configurações de resolução, selecione baixo como a ampliação e quatro por quatro para a ligação com um comprimento de digitalização axial de 275 milímetros e 3.328 pixels como a carga transaxial acoplado tamanho do dispositivo.
No campo de configuração de exposição, ajuste 500 microamps para a corrente, 80 kilovolts para a tensão e 180 milissegundos para o tempo de exposição. Em seguida, adquira um PET dinâmico durante os próximos 60 minutos, seguido de uma tomografia computadorizada no final da imagem PET. Para um histograma de emissão PET, defina uma série de 20 quadros como o enquadramento dinâmico e selecione subtrair para os atrasos.
No campo de configurações avançadas, selecione 128 como a largura do sinograma, três como o vão e 79 como diferença de anel e correção de tempo morto. Para a reconstrução pet, use uma maximização de expectativa de subconjunto ordenado bidimensional e aplique e salve o ultrassom de dispersão com quatro iterações e Fourier para rebinamento como algoritmo de reconstrução. Em seguida, selecione 128 por 128 como o tamanho da matriz, use um como zoom de imagem e selecione tudo para os quadros e tudo para os segmentos.
Para amostragem manual de sangue 30, 60, 90, 600 e 1.800 segundos após iniciar a aquisição de imagens, abra a primeira válvula de três vias. Colete 100 microliters de sangue arterial em um tubo de coleta de sangue capilar EDTA 30 segundos após a injeção do rastreador. Para medir a atividade de todo o sangue, carregue a amostra em um balcão de poços para permitir o cálculo da atividade de todo o sangue para cada ponto de tempo da amostragem manual de sangue em kilobecquerel por mililitro.
Para a amostragem de sangue on-line, use a guia do tubo para colocar o tubo no detector e iniciar o software amostrador de sangue. Abra a interface de aquisição e confirme que o computador da configuração de amostragem de sangue on-line e do PET/CT estão sincronizados pelo tempo. Pressione o botão Iniciar exatamente 60 segundos antes que o rastreador seja injetado para adquirir dados suficientes para a correção de fundo.
Salve os dados brutos através do botão Salvar no banco de dados PMOD após a medição. Para correção e calibração dos dados sanguíneos on-line, mude para a interface de correção e habilite a correção da decomposição. Selecione 18 F e defina o tempo de início da aquisição de imagens, permitindo que o botão Média realize a correção em segundo plano.
Ative a calibração e digite o fator de calibração. Salve os dados sanguíneos corrigidos e calibrados usando o botão Salvar TAC e selecione o sangue. arquivo crv.
No início da amostragem contínua do sangue, um pico inicial na concentração de radioatividade pode ser observado a partir de cerca de cinco segundos após a injeção de rastreador na análise on-line. Após esse pico, a atividade no sangue diminui rapidamente, atingindo um platô em cerca de 15 minutos. Nos dados manuais de amostragem de sangue, o pico detectado é menor e o platô não é facilmente definido.
Nos dados derivados da imagem, o pico e o ponto de partida do planalto são claramente visíveis. No entanto, o máximo do pico é menor em comparação com os dados contínuos de amostragem de sangue. Nesta amostragem contínua sub-ideal, não foi possível a aquisição de dados durante os primeiros 3 minutos e meio da amostragem devido à coagulação sanguínea.
Após a limpeza do coágulo, o fluxo no sistema do tubo foi reiniciado e a medição foi continuada, revelando um pico de cerca de quatro minutos que não registrou a radioatividade máxima no sangue. No entanto, a amostragem manual de sangue e as análises derivadas da imagem ainda eram possíveis nesta amostragem sub-ideal, no entanto, e demonstraram desfechos comparáveis aos observados para desfechos corretos de amostragem contínua do sangue. Mantenha o bem-estar do animal em mente durante todo o procedimento, prepare o sistema de desvio exatamente como recomendado e tente reduzir o comprimento da tubulação.
O protocolo pode ser utilizado para a variação de novos traços de PET diagnóstico, a caracterização de novos modelos de doenças e a avaliação da resposta terapêutica de novas terapêuticas no cenário pré-clínico.
