Bu videoda sürekli kan örneklemesi için bir protokol sağlanmıştır. Kan radyoaktivitesi ekstrakorporeal arteriovenöz şant kullanılarak PET/BT'ye paralel olarak ölçülecektir. Bunu yaparak, PET / CT verilerinin sonraki nicelleştirme için arteriyel giriş fonksiyonu oluşturulur ve daha sonra kesin bir biyokinetik modelleme sağlar.
Bu protokolün başlıca avantajları, tekrarlanabilir olması, minimal kan kaybı yaratması ve arteriyel giriş fonksiyonunun zamansal çözünürlüğünde yüksek bir doğruluk sağlamasıdır. Kanın aktivite konsantrasyonunun belirlenmesinde kullanılacak tüm ölçüm cihazlarının çapraz kalibre edilmesi esastır. Prosedürü gösteren Anne Moller, laboratuarımızdan bir teknisyen.
12 saatlik oruç tutmuş bir sıçanda ayak ucuna yanıt eksikliğini doğruladıktan sonra, hayvanın cerrahi tarafında bacak ve kasık tıraş ve ek dezenfektan ile maruz kalan cildi temizlemek. Merhemi hayvanın gözüne uygulayın ve vücut ısısının sürekli izlenmesi ve bakımı için rektal bir prob yerleştirin. Farenin uzuvlarını çalışma yüzeyine bantlayın ve çalışma bölgesini mukozal bir dezenfektanla dezenfekte edin.
Kasık yaklaşık 20 milimetrelik bir kesi yapmak ve femoral ven ortaya çıkarmak için ince deri katmanları incelemek, arter, ve sinir. Femoral ven ve arter altında iki ince filamentler yerleştirin ve distal filamentler ile damarları ligate. Bir bulldog kelepçe ile gerginlik altında damarları tutarak, bir düğüm olmadan bulldog kelepçe ile gemi gergin damar proksimal dikiş filamentler kullanın.
Ven'i, buldokle ile sütürden 2-3 milimetre distal proksimal anevrizma kelepçesi ile kapatın ve damar çapının 1/3'ü olan bir kesi yapmak için kornea makası kullanın. Damar kesiği protokolümüzdeki en kritik adım. Lütfen kornea makasgibi mikrocerrahi aletler kullandığınızdan emin olun ve damarı 45 derecelik açıyla dikkatlice kestiklerinden emin olun.
Sızan kanı çıkarmak için steril pamuklu bir bez kullanın ve ve damarı donuk bir forceps ile azledin. Damarı açık tutarak, keskinleştirilmiş kateteri proksimal yöndeki damara, anevrizma klibine kadar takın. Anevrizma klibini açın ve kateteri 2-3 santimetre daha itin.
Kateter doğru yerleştirilmişse, kan katetere akar. Kateteri iki proksimal düğümle sabitle. Kateterin işlevselliğini kontrol etmek için kateterden 100 mikrolitre heparinize tuzlu yu sifonu çekmek ve aspire etmek için bir insülin şırınga kullanın.
Sonra arter içine bir kateter yerleştirin, sadece damar için gösterildiği gibi, ve dikişler ile bacak kapatın. Prosedürü gösteren Joanna Forster, laboratuarımızdan bir teknisyen olacak. Görüntü edinimi için, mekik yatak palet üzerinde baş eğilimli bir pozisyonda hayvan yerleştirin ve enjeksiyon için genişletilmiş yatak konumuna mekik yatağı taşıyın.
Kateterleri şant sistemine bağlayın ve şant sistemini hayvanın kanıyla doldurmak için peristaltik pompayı dakikada 1,52 mililitre akış hızıyla çalıştırın. Mekik yatağını pozitron emisyon tomografisinin veya PET,algılama halkasının görüş alanının merkezine taşıyın ve çevrimiçi kan örnekleme sistemini başlatın. Ardından PET/bilgisayarlı tomografiyi veya BT iş akışını başlatın.
60 saniye sonra, T-parça ile 18F-fluorodeoxyglucose intravenöz yaklaşık 22 megabecquerel doz 0.5 ila bir mililitre enjekte. T parçasını yaklaşık 150 mikrolitre heparinize tuzlu çözeltiile temizle. PET emisyon edinimi için, zaman seçeneğine göre elde edilen ieldeyi 3, 600 saniyeye ayarlayın ve çalışma izotopu olarak F-18'i seçin.
Enerji seviyesi olarak 350 ila 650 kiloelektron volt ve zamanlama penceresi olarak 3, 438 nanosaniye kullanın. CT edinimi için, satın alma seçeneğinde zayıflama taraması'nı seçin ve projeksiyon ayarları alanında yarım toplam dönüş için 180 projeksiyon seçin. Görüş ve çözünürlük ayarları alanı için, 275 milimetrelik eksenel tarama uzunluğuna sahip bağlama için büyütme ve dörte dört olarak düşük ve transaksiyel yük eşlenmiş aygıt boyutu olarak 3, 328 piksel'i seçin.
Pozlama ayarları alanında, akım için 500 mikroam, voltaj için 80 kilovolt ve pozlama süresi için 180 milisaniye ayarlayın. Ardından 60 dakika boyunca dinamik bir PET elde edin ve ardından PET görüntülemenin sonunda ct taraması yapabilirsiniz. PET emisyon histogramı için, dinamik çerçeveleme olarak 20 karelik bir seri ayarlayın ve gecikmeler için çıkarma seçin.
Gelişmiş ayarlar alanında, sinogram genişliği olarak 128, açıklık olarak üç ve halka farkı ve ölü zaman düzeltme olarak 79'u seçin. PET rekonstrüksiyonu için, iki boyutlu sıralı alt küme beklentisi en üst düzeye çıkarma kullanın ve yeniden yapılandırma algoritması olarak rebinning için dört yineleme ve Fourier ile dağılım sonogramı uygulayın ve kaydedin. Ardından matris boyutu olarak 128'e 128'i seçin, görüntü yakınlaştırma olarak birini kullanın ve çerçeveler ve tüm segmentler için tümünü seçin.
Manuel kan örneklemesi için 30, 60, 90, 600 ve 1, 800 saniye görüntüleme edinimi başladıktan sonra, ilk üç yönlü vanaaçın açın. Bir EDTA kılcal kan toplama tüpü içine arteriyel kan 100 mikrolitre toplamak 30 saniye tracer enjeksiyonsonra. Tam kanın aktivitesini ölçmek için, mililitre başına kilobecquerel manuel kan örnekleme her zaman noktası için tam kan aktivitesinin hesaplanmasına izin vermek için iyi bir sayaç içine örnek yükleyin.
Çevrimiçi kan örneklemesi için tüpü dedektöre yerleştirmek ve kan örnekleyici yazılımını başlatmak için tüp kılavuzunu kullanın. Edinme arabirimini açın ve çevrimiçi kan örnekleme kurulumunun ve PET/CT'nin bilgisayarının zaman senkronize edildiğini doğrulayın. Arka plan düzeltmesi için yeterli veri elde etmek için izleyicinin enjekte edilmesinden tam 60 saniye önce Başlat düğmesine basın.
Ölçümden sonra PMOD veritabanındaki Kaydet düğmesi aracılığıyla ham verileri kaydedin. Çevrimiçi kan verilerinin düzeltilmesi ve kalibrasyonu için düzeltme arabirimine geçin ve çürüme düzeltmesini etkinleştirin. 18 F'yi seçin ve görüntü edinmenin başlangıç saatini tanımlayarak Ortalama düğmesinin arka plan düzeltmesini gerçekleştirmesini sağlar.
Kalibrasyonu etkinleştirin ve kalibrasyon faktörünü girin. Düzeltilmiş ve kalibre edilmiş kan verilerini TAC Kaydet düğmesini kullanarak kaydedin ve kanı seçin. crv dosyası.
Sürekli kan örneklemesinin başlangıcında, online analizde tracer enjeksiyonundan yaklaşık beş saniye sonra radyoaktivite konsantrasyonunda ilk zirve görülebilir. Bu zirveden sonra kandaki aktivite hızla azalır ve yaklaşık 15 dakikada bir platoya ulaşır. Manuel kan örnekleme verilerinde tespit edilen tepe daha küçüktür ve plato kolayca tanımlanamaz.
Görüntüden türetilen verilerde platonun tepe noktası ve başlangıç noktası açıkça görülebilir. Bununla birlikte, maksimum tepe sürekli kan örnekleme verilerine göre daha küçüktür. Bu alt-optimal sürekli kan örneklemesinde, kan pıhtılaşması nedeniyle numunenin ilk 3,5 dakikasında veri elde edilmesi mümkün değildi.
Pıhtı boşaltıldıktan sonra tüp sistemindeki akış yeniden başlatıldı ve ölçüme devam edildi ve yaklaşık dört dakikada kandaki maksimum radyoaktiviteyi kaydetmedi. Ancak bu alt-optimal örneklemede manuel kan örneklemesi ve görüntü kaynaklı analizler hala mümkün oldu ve doğru sürekli kan örnekleme sonuçları için gözlenen sonuçlarla karşılaştırılabilir sonuçlar gösterdi. Tüm işlem sırasında hayvanın refahını göz önünde bulundurun, şant sistemini tam olarak tavsiye edilen gibi hazırlayın ve tüpün uzunluğunu azaltmaya çalışın.
Protokol, yeni tanısal PET izlerinin değişimi, yeni hastalık modellerinin karakterizasyonu ve preklinik ortamda yeni terapötiklerin tedavi yanıtının değerlendirilmesi için kullanılabilir.
