O objetivo geral deste procedimento é monitorar o vasospasmo cerebral após hemorragia subaracnóide em camundongos in vivo. Isso é feito pela aplicação de sonografia duplex codificada por cores de alta frequência sob anestesia com isoflurane. Os dados de imagem são processados para determinar as velocidades de fluxo sanguíneo nas artérias carótidas internas intra e extracranais.
Uma velocidade acelerada de fluxo sanguíneo intracraniano indica vasospasmo cerebral. Neste estudo, foram realizadas medições de velocidades de fluxo sanguíneo de artérias intracranianas e extracranianas em camundongos do sexo feminino, C57BL/6N com idade entre 11 e 12 semanas. Os camundongos foram submetidos à indução sah ou à cirurgia falsa que foi descrita em detalhes em outros lugares.
Para preparar o interruptor do exame de ultrassonografia na máquina de ultrassom e digitar o Y animal.Aqueça a placa de aquecimento do sistema de ultrassom a 37 graus Celsius. Certifique-se de que a sonda de temperatura retal está pronta para uso. Use um banho de água morna para aquecer o gel de ultrassom a 37 graus Celsius.
Prepare o creme de depilação, creme de contato para os eletrodos e pomada ocular. Certifique-se de que o transdutor está devidamente montado no braço mecânico e certifique-se de que a câmara de indução de anestesia esteja lavada com 4% de isoflurano e 40% de oxigênio. Induzir anestesia colocando o rato na câmara por um minuto.
Proteja os olhos com pomada. Continue somente depois que uma anestesia suficientemente profunda for alcançada. Mantenha anestesia com isoflurano de 1,5% e 40% de oxigênio usando uma máscara de anestesia durante todo o procedimento.
No primeiro passo, as velocidades de fluxo sanguíneo das artérias carótidas internas intracranianas são determinadas com sonografia duplex transcraniana de alta frequência. Coloque o mouse na posição propensa na placa de aquecimento do sistema de ultrassom para manter uma temperatura corporal de 37 graus Celsius. Aplique pomada ocular em ambos os lados.
Antes do primeiro exame encurte a pele na occiput com uma máquina de barbear elétrica. Em seguida, remova o cabelo restante quimicamente usando creme de depilação. Use um cotonete para espalhar e esfregue o creme por dois minutos até que o cabelo comece a cair.
Depois de dois minutos adicionais, retire o creme e o cabelo com uma espátula e desinfete a pele com um antisséptico de pele alcoólica. Cubra as quatro extremidades do animal com pasta condutora e fixe-as com fita nos eletrodos ECG embutidos na placa. Coloque o lubrificante em uma sonda de temperatura retal e insira-o cuidadosamente para monitorar a temperatura corporal, usando lâmpada de aquecimento adicional, se necessário.
Verifique se os parâmetros fisiológicos, ECG e sinal de respiração são exibidos corretamente na tela do sistema de ultrassom. Se necessário, o nível de anestesia pode ser ajustado para obter a frequência cardíaca alvo de 4 a 500 batimentos por minuto. Cubra-o com gel de ultrassom.
Use um transdutor de matriz linear e uma taxa de quadros acima de 200 quadros por segundo para adquirir imagens de ultrassom e montá-lo no braço mecânico. Coloque o transdutor na occiput inclinada para trás em 30 graus. Use o modo B e o modo CW-Doppler para visualizar a artéria carótida interna intracraniana direita e mover o transdutor com a unidade de controle para frente e para trás até encontrarmos o fluxo máximo das artérias.
Para coletar informações anatômicas, use o modo B tradicional e o modo CW-Doppler e comece a aquisição clicando no botão de aquisição. Para registrar informações sobre as características de fluxo dos vasos intracranianos clique no botão doppler de onda de pulso, coloque um volume de amostra no centro da embarcação e adquira um loop cine por mais de três segundos. Prossiga de forma idêntica com o lado esquerdo.
No próximo passo, as velocidades de fluxo sanguíneo das artérias carótidas internas extracranais são determinadas com sonografia duplex de alta frequência. Coloque o mouse na posição supina na placa de aquecimento do sistema de ultrassom para manter uma temperatura corporal de 37 graus Celsius. Antes do primeiro exame, remova o cabelo da frente do pescoço com uma máquina de barbear elétrica.
Em seguida, remova o cabelo restante quimicamente usando creme de depilação como descrito anteriormente. Cubra as quatro extremidades do animal com pasta condutora e fixe-as com fita nos eletrodos ECG embutidos na placa. Coloque o lubrificante em uma sonda de temperatura retal e insira-o cuidadosamente para monitorar a temperatura corporal.
Usando lâmpada de aquecimento adicional, se necessário. Verifique novamente se há uma exibição correta dos parâmetros fisiológicos na tela. Cubra a frente do pescoço com gel de ultrassom aquecido a 37 graus Celsius.
Coloque o transdutor paralelamente ao animal e ajuste a posição para obter imagens longitudinais da artéria carótida direita. Use o modo B CW-Doppler para visualizar a artéria carótida direita. A imagem deve conter a artéria carótida comum direita, a artéria carótida interna direita e a artéria carótida externa direita.
Para coletar informações anatômicas, use o modo B tradicional e o modo CW-Doppler e comece a aquisição clicando no botão de aquisição. Para registrar informações sobre as características de fluxo da artéria carótida extracranal clique no botão doppler de onda de pulso, coloque o volume da amostra no centro da artéria carótida comum, a artéria carótida interna e a artéria carótida externa e adquira um laço cine por mais de três segundos. Prossiga de forma idêntica com o lado esquerdo.
Termine a anestesia e retire o animal da placa de aquecimento e coloque-o em uma gaiola, colocado em uma incubadora aquecida a 36 graus Celsius por uma hora para evitar hipotermia e verificar se há recuperação completa. O próximo passo é processar os dados da ultrassonografia. Utilização de estação de trabalho externa para pós-processamento dos dados de ultrassom de alta frequência.
Exporte as imagens do modo B, do modo CW-Doppler e do modo PW-Doppler e loops cine para o software Vevo LAB. Abra o estudo de ultrassom exportado. Selecione um animal e abra o laço cine PW-Doppler da artéria carótida intracraniana.
Neste protocolo normalmente são registrados sete a oito batimentos cardíacos em curvas correspondentes de velocidade de fluxo. Pausa o laço do cine e clique no botão de medição. Escolha o pacote vascular e clique em PSV RICO para medir o pico de pressão sistólica da artéria carótida intracraniana direita.
Agora clique à esquerda no pico de uma curva de velocidade e puxe a linha reta para a linha zero. Determine a medição por um clique com o botão direito do mouse. Agora escolha rica EDV para medir a velocidade diastólica final.
Clique à esquerda na erupção cutânea mínima da curva de velocidade no final da diastole. Puxe a linha diretamente para a linha zero e determine a medição por um clique com o botão direito do mouse. Escolha o RICO VTI para medir o tempo de velocidade integral.
Clique à esquerda no início de uma curva de velocidade e siga a curva com um mouse até o final do planalto diastólico. E, em seguida, clique à direita novamente para determinar a medição. Exporte os dados das artérias carótidas internas intracerebral usando o botão de relatório.
Pressione a exportação e salve os dados como um arquivo de relatório VSI. Use a mesma abordagem para medir PSV, EDV e VTI das artérias carótidas internas extracranais certas e exportar os dados em conformidade. Proceda de forma idêntica com o lado esquerdo e use LICA PSV, EDV e VTI.
Em cinco camundongos e três dos quais a HAS foi induzida enquanto dois obtêm uma cirurgia falsa as velocidades de fluxo sanguíneo da artéria interna intracraniana e da artéria carótida interna extracraniana foi determinada um dia antes da cirurgia e um, três e sete dias após a cirurgia. Antes da cirurgia, as velocidades de fluxo sanguíneo extra e intracraniano, bem como a razão do fluxo sanguíneo intra e extracraniano eram semelhantes entre os animais SAH e sham. No primeiro dia após a indução da HAS não houve grandes alterações nas velocidades de fluxo sanguíneo intra ou extracranal ou nas relações entre o fluxo sanguíneo intra e extracranário.
Nos dias três e sete, as velocidades intracranianas de fluxo sanguíneo da artéria carótida interna aumentaram acentuadamente e dois dos animais sah indicando vasospasmo cerebral após SAH. Como as velocidades de fluxo sanguíneo extracrania permaneceram quase inalteradas, as proporções de velocidades de fluxo sanguíneo intra e extracranal também aumentaram significativamente no sétimo dia nos animais da HAS indicando vasospasmo cerebral. Em conclusão, a sonografia duplex transcraniana codificada por cores de alta frequência pode ser usada para realizar medições in vivo das velocidades do fluxo sanguíneo intracraniano em camundongos.
Semelhante à situação em pacientes humanos, as velocidades de fluxo sanguíneo intracraniano aceleram em camundongos após a SAH indicar vasospasmo. O método ultra sonográfico mostrado aqui é rápido e de pouca invasividade. Permite estudos longitudinais de vasospasmo em modelos murine SAH.
