Este protocolo descreve um método para medir a pressão intracraniana, a pressão arterial média e a pressão de perfusão cerebral após hemorragia intraventricular não traumática em roedores. As pressões arteriais intracraniana e média podem ser medidas com precisão e confiabilidade com um sensor de fibra óptica inserido no córtex do rato e na artéria femoral, respectivamente. As técnicas aqui descritas são traduzidas para o cenário clínico quando pacientes com hemorragia intraventricular necessitam de monitorização invasiva da pressão intracraniana.
Os objetivos deste estudo foram estabelecer um modelo animal de IVH com monitoramento objetivo de PICs, MAPs e CCPs após IVH intraventricular, para que os autores possam aplicá-lo ainda mais em experimentos futuros que enfocarão os efeitos das PIC induzidas pela IVH na disfunção de memória subsequente. Grandes dificuldades podem incluir precisão, já que os sensores de fibra óptica são pequenos. A dissecção da artéria femoral também pode representar um desafio para alguns, particularmente aqueles não utilizados em habilidades microcirúrgicas.
Depois de anestesiar o rato, insira o termômetro retal para monitorar a temperatura continuamente. Prenda o cabelo na cabeça e na região femoral e prepare a pele com três esfoliantes alternados de Betadine e álcool a 70% antes da cirurgia. Aspirar quaisquer secreções respiratórias acumuladas removendo temporariamente o rato do ventilador e aspirando as secreções com tubos PE-50 conectados a uma seringa de 10 mililitros.
Proteja os olhos com pomada de olho de lágrimas artificiais estéreis. Antes da incisão do couro cabeludo, injete bupivacaína local na pele e nos tecidos subcutâneos. Coloque o rato em uma posição prona em uma estrutura estereotáxica e a barra de orelha.
Faça uma incisão no couro cabeludo de 1,5 centímetros ao longo da linha média com um bisturi de 15 lâminas. Aplique pressão leve com gaze para hemostasia. Usando um aplicador de ponta de algodão estéril, separe o periósteo do crânio até que o ponto de referência do bregma seja visível.
Localize e marque o bregma usando estereotaxias e marque a localização de dois orifícios bilaterais de rebarbas 1,4 milímetros laterais e negativos 0,9 milímetros posteriores ao bregma. Usando uma broca portátil, crie esses dois pequenos orifícios de rebarbas cranianas nos hemisférios direito e esquerdo. Irrigar qualquer excesso de lascas ósseas com solução estéril de Ringer lactado.
No hemisfério direito, posicione uma cânula guia de calibre 22 no nível do orifício da rebarba para inserir a agulha de calibre 28 através da cânula até a profundidade do ventrículo lateral direito para criar hemorragia intraventricular. Conecte o sensor de pressão de fibra óptica à unidade de leitura. Ligue a unidade de leitura e verifique se as unidades selecionadas estão em milímetros de mercúrio.
Em seguida, prima o sensor submergindo sua ponta em um pequeno copo com a solução de Ringer lactato até que a unidade de leitura leia zero e esteja pronta para uso. No hemisfério esquerdo, insira suavemente o sensor de pressão a dois a três milímetros de profundidade no córtex para monitoramento em tempo real da PIC. Após a inserção do monitor de PIC, gire o tronco inferior do rato para facilitar o acesso à área da coxa esquerda e da virilha.
Após a preparação estéril e a administração local de bupivacaína, faça uma incisão cutânea de 1,5 centímetros sobre o membro posterior com um bisturi de 15 lâminas. Dissecar a artéria femoral esquerda superficialmente com um hemostato e, em seguida, camadas mais profundas usando pinça com pontas finas sob um microscópio. Identifique a veia femoral azul profunda para ajudar a localizar a artéria adjacente.
Amarre a artéria femoral distal usando uma sutura de seda 3-0 e coloque um clipe de metal temporário na porção proximal da artéria femoral. Tenha um segundo sensor de pressão de fibra óptica conectado à unidade de leitura já preparada. Insira o sensor de pressão na tubulação PE-50, que é inserida em um Tuohy Borst que é então fechado.
Conecte o Tuohy Borst a uma torneira de três vias conectada a uma seringa de um milímetro em uma extremidade e a uma agulha de calibre 22 com tubulação PE-50 na outra extremidade. Sob o microscópio, faça uma arteriotomia femoral de dois milímetros com micro tesoura e canule-a com tubos PE-50 conectados ao resto da configuração. Aspirar 500 microlitros de sangue usando uma seringa de um milímetro e gire a torneira de três vias para que o sensor de pressão leia MAP.
Prima a agulha intraventricular de calibre 28 conectada ao tubo PE-50 com o sangue aspirado para animais IVH e o Ringer lactato para os animais controle do veículo. Em seguida, insira esta agulha na cânula guia até a profundidade do ventrículo lateral direito. Usando 100 microlitros por minuto, injete o sangue, ou 200 microlitros estéril lactato solução de Ringer no ventrículo lateral direito, bombeando a seringa de um milímetro com o polegar.
Monitorar e registrar a PIC, a pressão arterial e a temperatura retal. Monitore e registre os valores de ICP e MAP pós-injeção. Após completar a injeção intraventricular, retire o tubo PE-50 contendo o sensor de pressão inserido na artéria femoral e aplique o clipe temporário na artéria femoral para evitar sangramento.
Amarre a porção proximal da artéria femoral usando a sutura de seda 3-0 e feche a incisão femoral de forma interrompida usando seda 3-0. Remova a cânula guia com a agulha intraventricular no monitor de PIC. Sele os orifícios da rebarba com cera óssea.
E feche a incisão craniana com sutura de seda 3-0 interrompidamente. Aplique bupivacaína tópica na incisão e injete 0,5 miligramas por quilograma de carprofeno. Não deixe os animais sozinhos até que eles tenham recuperado a consciência suficiente para manter a decúbito esternal.
Permita que os ratos se recuperem totalmente após a cirurgia sob supervisão e devolva-os às gaiolas de casa com acesso gratuito a alimentos e água após a recuperação. Excluindo o grupo simulado, as PIC aumentaram significativamente durante a injeção intraventricular nos grupos IVH e controle de veículos. As PIC foram maiores no grupo IVH em comparação com o controle do veículo.
As CIPs então diminuíram rapidamente e se normalizaram dentro de cinco minutos após a injeção intraventricular nesses grupos de animais. Observou-se que as PAM permaneceram semelhantes durante todo o procedimento, enquanto as PPCs diminuíram durante a injeção intraventricular de sangue ou da solução de Ringer lactato. As etapas vitais da cirurgia incluem localização correta e perfuração de orifícios de rebarbas e arteriotomia femoral.
As etapas mencionadas acima devem ser seguidas de perto para garantir que os sensores realizem seu trabalho na leitura precisa das mudanças de pressão.
