Gostaríamos de agradecer a Silvia Durand, Teri Allen, Jose Alegria e Alejandra Canon pela assistência no processamento da goiaba na Universidade da Flórida, a Rick Kurashima, Jean Auth e Bruce Inafuku pela ajuda na avaliação da fruta artificialmente infestada no Havaí, e a Michael Stulberg pelos comentários úteis sobre versões anteriores do manuscrito. Este projeto foi financiado em parte pelo USDA APHIS e University of Florida Cooperative Agreement e apoiado em parte pelo USDA-ARS (projeto 2040-22430-027-00D). Os resultados e conclusões desta publicação preliminar não foram formalmente divulgados pelo USDA e não devem ser interpretados como representando qualquer determinação ou política da agência. A menção de nomes comerciais ou produtos comerciais nesta publicação é exclusivamente com o propósito de fornecer informações específicas e não implica recomendação ou endosso pelo USDA. O USDA é um provedor e empregador de oportunidades iguais.

1. Seleção de Frutas
<ol><li>Determinar quais frutos estão disponíveis na área a ser pesquisada.</li>
	<li>Selecione o fruto hospedeiro com base na lista de hospedeiros conhecidos para a espécie de tefritídeo alvo.</li>
	<li>Escolha frutas maduras e de polpa macia, como manga, mamão e goiaba. Frutos de polpa madura ou dura, como amêndoas tropicais, devem ser inspecionados com um método diferente, como o corte de frutas.</li>
	<li>Selecione frutos caídos, supermaduros ou maduros em árvores que tenham sinais de danos, cicatrizes de oviposição e pontos moles.</li>
	<li>Processar aproximadamente 2 L de frutos de uma só vez (por exemplo, 5 goiabas ou 5 mangas de tamanho médio constituem amostras adequadas para este método). O número de frutos que podem ser processados de uma só vez depende do tamanho dos frutos (Figura 1A).</li>
</ol>2. Mushing
<ol><li>Corte a fruta em pedaços grandes e coloque-a em um saco zip lock de 4 L (Figura 1B).</li>
	<li>Adicione água ao saco até que a água cubra a fruta picada em 25-50 mm (Figura 1C).</li>
	<li>Esprema a fruta suavemente com a mão até que toda a polpa tenha se deslocado da casca e tenha uma consistência lisa (ou seja, sem grandes pedaços) (Figura 1D).</li>
</ol>3. Peneiramento para coleta de ínstar tardio
<ol><li>Empilhe as peneiras. Use peneiras grandes (457 mm de diâmetro) para processar grandes quantidades de frutas (~ 5 frutas de uma só vez) e peneiras menores (305 mm de diâmetro) para frutas individuais ou amostras menores (< 5 frutas).</li>
	<li>Empilhe a peneira com uma peneira de malha grande (nº 8; 2,36 mm) sobre uma peneira de malha pequena (nº 20; 0,85 mm). Para a detecção dos primeiros ínstares, colocar uma terceira peneira (nº 45; 0,35 mm) no fundo da pilha (Figura 1E).</li>
	<li>Despeje a polpa na peneira superior (Figura 1F).</li>
	<li>Lave bem a polpa através da pilha de peneiras usando água de uma torneira, mangueira ou garrafa até que a polpa fina tenha passado pelas peneiras (Figura 1G).</li>
	<li>Examinar visualmente as peneiras superiores em busca de larvas de ínstar tardio que possam ter sido retidas com a casca ou qualquer pedaço grande de fruto (Figura 1H).</li>
	<li>Inspecione cuidadosamente a segunda peneira em busca de larvas de ínstar tardio. Com grandes quantidades de polpa fina, pode ser necessário enxágue adicional.</li>
	<li>Recolher as larvas das peneiras com pinças larvais e colocá-las em frascos com EtOH 70%.</li>
</ol>4. Flutuação de açúcar para coleta antecipada de ínstar
<ol><li>Pré-misturar a solução de açúcar dissolvendo 453 g (1 caixa) de açúcar mascavo escuro em 2 L de água da torneira, o que resulta numa leitura Brix de 19°10.</li>
	<li>Lave a polpa das peneiras de malha mais fina (por exemplo, nº 20 e nº 45) até a borda da peneira com água da torneira e, em seguida, mova o material para um dishpan plástico (11 L).</li>
	<li>Adicione a solução de açúcar mascavo até cobrir a polpa em 25-50 mm e adicione 2 gotas de antiespumante. Deixe a polpa descansar na solução de açúcar mascavo por cerca de 5 min.</li>
	<li>Coletar larvas que flutuam até a superfície da solução com pinças de larva em frascos com EtOH 70%.</li>
</ol>5. Curadoria larval
<ol><li>Rotule um frasco com o local de coleta, data, tipo de fruta e coletor para posterior exame e identificação.</li>
</ol>

O método de mushing, peneiramento e flutuação para detectar larvas de moscas-das-frutas

<ol>
	<li>White, I. M., Elson-Harris, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Fruit Files of Economic Significance: Their Identification and Bionomics. , (1992).</li><li>Papadopoulos, N. T., Plant, R. E., Carey, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+trickle+to+flood:+the+large-scale,+cryptic+invasion+of+California+by+tropical+fruit+flies.">From trickle to flood: the large-scale, cryptic invasion of California by tropical fruit flies.</a> Proceedings of the Royal Society B: Biological Sciences. 280 (1768), 20131466 (2013).</li><li>Suckling, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eradication+of+tephritid+fruit+fly+pest+populations:+outcomes+and+prospects.">Eradication of tephritid fruit fly pest populations: outcomes and prospects.</a> Pest Management Science. 72 (3), 456-465 (2016).</li><li>Mcinnis, D. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+polyphagous+invasive+tephritid+pest+populations+escape+detection+for+years+under+favorable+climatic+and+host+conditions.">Can polyphagous invasive tephritid pest populations escape detection for years under favorable climatic and host conditions.</a> American Entomologist. 63 (2), 89-99 (2017).</li><li>Mutamiswa, R., Nyamukondiwa, C., Chikowore, G., Chidawanyika, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overview+of+oriental+fruit+fly,+Bactrocera+dorsalis+(Hendel)+(Diptera:+Tephritidae)+in+Africa:+From+invasion,+bio-ecology+to+sustainable+management.">Overview of oriental fruit fly, Bactrocera dorsalis (Hendel) (Diptera: Tephritidae) in Africa: From invasion, bio-ecology to sustainable management.</a> Crop Protection. 141, 105492 (2021).</li><li>Steck, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oriental+fruit+fly+eradication+in+Florida+2015-2016:+program+implementation,+unique+aspects,+and+lessons+learned.">Oriental fruit fly eradication in Florida 2015-2016: program implementation, unique aspects, and lessons learned.</a> American Entomologist. 65 (2), 108-121 (2019).</li><li>Alvarez, S., Evans, E., Hodges, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimated+costs+and+regional+economic+impacts+of+the+oriental+fruit+fly+(Bactrocera+dorsalis)+outbreak+in+Miami-Dade+County,+Florida.">Estimated costs and regional economic impacts of the oriental fruit fly (Bactrocera dorsalis) outbreak in Miami-Dade County, Florida.</a> University of Florida Institute of Food and Agricultural Sciences Extension. , (2016).</li><li>Gould, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probability+of+detecting+Caribbean+fruit+fly+(Diptera:+Tephritidae)+infestation+by+fruit+dissection.">Probability of detecting Caribbean fruit fly (Diptera: Tephritidae) infestation by fruit dissection.</a> Florida Entomologist. 73 (3), 502-507 (1995).</li><li>Yee, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+Rhagoletis+indifferens+(Diptera:+Tephritidae)+larvae+using+brown+sugar+flotation+and+hot+water+methods.">Detection of Rhagoletis indifferens (Diptera: Tephritidae) larvae using brown sugar flotation and hot water methods.</a> Journal of Applied Entomology. 136 (7), 549-560 (2012).</li><li>Yee, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+brown+sugar,+hot+water,+and+salt+methods+for+detecting+western+cherry+fruit+fly+(Diptera:+Tephritidae)+larvae+in+sweet+cherry.">Comparison of the brown sugar, hot water, and salt methods for detecting western cherry fruit fly (Diptera: Tephritidae) larvae in sweet cherry.</a> Florida Entomologist. 97 (2), 422-430 (2014).</li><li>Van Timmeren, S., Diepenbrock, L. M., Bertone, M. A., Burrack, H. J., Isaacs, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+filter+method+for+improved+monitoring+of+Drosophila+suzukii+(Diptera:+Drosophilidae)+larvae+in+fruit.">A filter method for improved monitoring of Drosophila suzukii (Diptera: Drosophilidae) larvae in fruit.</a> Journal of Integrated Pest Management. 8 (1), 23 (2017).</li><li>Van Timmeren, S., Davis, A. R., Isaacs, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+a+larval+sampling+method+for+monitoring+Drosophila+suzukii+(Diptera:+Drosophilidae)+in+blueberries.">Optimization of a larval sampling method for monitoring Drosophila suzukii (Diptera: Drosophilidae) in blueberries.</a> Journal of Economic Entomology. 114 (4), 1690-1700 (2021).</li><li>Balagawi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+brown+sugar+flotation+for+detecting+Queensland+and+Mediterranean+fruit+fly+(Diptera:+Tephritidae)+infestation+in+Australian+cherries.">Evaluation of brown sugar flotation for detecting Queensland and Mediterranean fruit fly (Diptera: Tephritidae) infestation in Australian cherries.</a> Crop Protection. 151, 105823 (2022).</li><li>CFIA (Canadian Food Inspection Agency). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directive+D-02-04:+The+Blueberry+Certification+Program+and+domestic+phytosanitary+requirements+to+prevent+the+spread+of+blueberry+maggot+(Rhagoletis+mendax)+within+Canada.+2+Revision+10.">Directive D-02-04: The Blueberry Certification Program and domestic phytosanitary requirements to prevent the spread of blueberry maggot (Rhagoletis mendax) within Canada. 2 Revision 10.</a> CFIA (Canadian Food Inspection Agency). , (2020).</li><li>Kendra, P. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gas+chromatography+for+detection+of+citrus+infestation+by+fruit+fly+larvae+(Diptera:+Tephritidae).">Gas chromatography for detection of citrus infestation by fruit fly larvae (Diptera: Tephritidae).</a> Postharvest Biology and Technology. 59 (2), 143-149 (2011).</li><li>SAS Institute Inc. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SAS+9.4+Guide+to+Software+Updates+and+Product+Changes.">SAS 9.4 Guide to Software Updates and Product Changes.</a> SAS Institute Inc. , (2013).</li></ol>

Os autores declaram não haver conflitos de interesse.

Nosso objetivo foi desenvolver uma maneira eficiente e eficaz de encontrar larvas de tefritídeos no campo. A motivação para iniciar um programa de erradicação ou estabelecer uma área de quarentena é a detecção de fêmea(s) ou larva acasalada(s)6, o que indica uma população reprodutora. O método atual de corte e busca visual de frutos é ineficiente na localização de larvas, pois geralmente há muito mais frutos hospedeiros presentes do que podem ser inspecionados individualmente. Além disso, as populações dos tefritídeos são provavelmente baixas em uma área de nova invasão, tornando as chances de encontrar larvas em uma grande quantidade de frutos incrivelmente difíceis. Por exemplo, no programa de erradicação da Bactrocera dorsalis de 2015 na Flórida, 54 espécies diferentes de hospedeiros foram identificadas e mais de 4.000 frutos foram cortados. Neste programa de erradicação, apenas algumas larvas foram encontradas na manga, e nenhum outro hospedeiro foi encontrado infestado6. Verificou-se que o método MSF/MS foi mais sensível e mais rápido na detecção de larvas de A. suspensa e B. dorsalis ao processar frutos que apresentaram grande quantidade de polpa (manga, goiaba e mamão) a granel em comparação com o corte dos frutos. A maior quantidade de frutos hospedeiros que é possível inspecionar usando o método de cogumelo e peneiramento, combinada com o aumento da detecção de uma larva rara, poderia aumentar a probabilidade de que uma infestação fosse encontrada precocemente. A detecção precoce de uma população reprodutora poderia aumentar a probabilidade de erradicação e reduzir os custos do programa.
Nossos experimentos mostraram que o número de larvas detectado pelos trabalhadores que cortam e inspecionam visualmente os frutos variou consideravelmente. As operárias que cortavam os frutos perderam 50% e 75% das larvas de B. dorsalis colocadas em mangas e mamão, respectivamente. Em contraste, apenas 5% e 15% das larvas foram perdidas usando o método MS para processar manga e frutos de mamão, respectivamente. Da mesma forma, um estudo que avaliou o corte de frutos nos portos de entrada mostrou que houve uma variação considerável no número de frutos infestados e larvas encontradas pelos inspetores8. O estudo mostrou que inspetores portuários experientes perderam 64%-99% das larvas de A. suspensa e 16%-82% dos frutos infestados quando os frutos foram cortados e inspecionados visualmente8. Nossos resultados sugerem que o método de cogumelo e peneiramento pode diminuir a probabilidade de um trabalhador deixar de detectar um fruto infestado.
A flutuação de açúcar e água quente são protocolos aceitos em um método de abordagem sistêmica para garantir que cerejas e mirtilos estejam livres de moscas-das-frutas14. Um subconjunto de uma remessa é esmagado na solução, após o que um inspetor filtra visualmente a superfície da solução de açúcar para a presença de ovos e larvas. Embora um maior número de frutos possa ser processado em comparação com o corte de frutos individuais, a probabilidade de encontrar larvas usando essas técnicas ainda é afetada pela habilidade do inspetor, o estágio e o número de larvas presentes e o tipo de fruto8. Verificamos que, como outros tefritídeos, B. dorsalis e A. suspensa se deslocam da polpa do fruto e flutuam para a superfície. Curiosamente, descobrimos que com larvas de ínstar tardio maiores, que são o alvo em programas de emergência e erradicação, pois podem ser identificadas morfologicamente, incluindo a flutuação de açúcar, não aumentou a precisão do método. De fato, a adição do método de flutuação aumentou o tempo de processamento em 90% para o mamão e em 48% para a manga. O aumento do tempo de processamento mais os materiais adicionais (por exemplo, água, lixeiras, açúcar, etc.) não suportam operacionalmente a adição desta etapa ao procurar grandes ínstares no campo. O método de flutuação do açúcar pode ser apropriado quando o objetivo é detectar todos os estágios, incluindo os primeiros ínstares, como nos portos de entrada e nos packing houses. A filtragem da solução de açúcar com uma peneira de malha fina provavelmente proporcionaria a detecção mais precisa de ovos e estádios larvaisprecoces 11,12.
As técnicas de MS e MSF funcionam bem com frutas que podem ser facilmente cozidas e têm um grande volume de polpa. Larvas de tefritídeos tendem a se enterrar na polpa do fruto, o que dificulta a detecção visual. Um aspecto crítico dos métodos MS e MSF é separar as larvas da polpa. O processo de peneiramento remove a polpa, expondo as larvas em peneiras. Da mesma forma, o método da água com açúcar separa as larvas da polpa, fazendo com que as larvas flutuem, enquanto a polpa afunda para o fundo da panela. Larvas separadas da polpa pelos métodos MS ou MSF são prontamente observadas movendo-se na peneira ou na superfície da água. Embora o método de cogumelo, peneiramento e, opcionalmente, flutuação tenha melhorado muito a velocidade e a precisão da detecção de larvas de tefritídeos em importantes frutos hospedeiros, o processo pode não ser apropriado para todos os frutos. Por exemplo, frutas hospedeiras com polpa dura, como abacates verdes ou frutas com uma grande semente/caroço e quantidade relativamente pequena de polpa, como amêndoas tropicais, podem ser mais fáceis de processar por corte manual e inspeção visual.
Descobrimos que os métodos MS e MSF foram mais rápidos quando um número relativamente pequeno de frutas (5-10) foi processado. A diferença provavelmente seria maior se maiores quantidades de frutos fossem processadas, o que pode ser necessário e típico de programas emergenciais de moscas-das-frutas. A remoção da etapa de flutuação aumentou ainda mais a velocidade de detecção sem comprometer a precisão de encontrar larvas grandes de tefritídeos (>3 mm). Mostramos que essas técnicas poderiam ser levadas a campo, simulando as condições vivenciadas pelos trabalhadores durante um programa emergencial de moscas-das-frutas. Nossos estudos indicam que os métodos de EM podem permitir uma detecção mais oportuna de larvas de ínstar tardio e subsequente erradicação de populações reprodutoras de tefritídeos. MSF poderia ser usado para detectar ovos e ínstares precoces atualmente não visados por programas de erradicação.

As moscas-das-frutas tefritídeos estão entre as pragas agrícolas mais destrutivas, sendo os gêneros Anastrepha, Bactrocera e Ceratitis os de maior risco1. Muitas áreas estão em alto risco para o estabelecimento de moscas-das-frutas exóticas, com base em 1) incursões históricas e programas de delimitação e erradicação associados, 2) a alta taxa de chegada de material hospedeiro de moscas-das-frutas nos portos de entrada e 3) condições climáticas favoráveis para o estabelecimento de populações reprodutoras. O estado da Califórnia experimenta múltiplas incursões e detecções de tefritídeos anualmente2. Houve mais de 200 incursões e programas de erradicação contra os tefritídeos em todo o mundo no último século, e isso se acelerou significativamente nas últimas décadas3. Embora a grande maioria desses programas seja bem-sucedida na erradicação da mosca-das-frutas invasora3,4, a carga econômica e ambiental dessas invasões ainda é alta, e a possibilidade de estabelecimento está sempre presente; um exemplo catastrófico recente é a infecção por Bactrocera dorsalis no continente africano5.
Durante os programas emergenciais de moscas-das-frutas, um esforço concentrado é feito para detectar e controlar as populações reprodutoras das espécies invasoras. Por exemplo, o estado da Flórida responde às incursões tefritídeos aplicando drenos de solo (sob a gotejamento de plantas hospedeiras frutíferas) e removendo frutos hospedeiros em um raio de 200 m ao redor de locais onde fêmeas e/ou larvas acasaladas são encontradas6. Essas ações e táticas servem para matar larvas e pupas no solo e remover quaisquer ovos e larvas de frutos dentro da área. Em alguns programas de erradicação, uma quantidade significativa de frutos hospedeiros é removida. Em 2015, mais de 100.000 kg de frutos foram destruídos durante o programa de erradicação do B. dorsalis na Flórida6. As perdas econômicas para os produtores e indústrias associadas somente na área de quarentena foram estimadas em mais de US$ 10,7 milhões7.
Para encontrar larvas de tefritídeos nas áreas de quarentena, uma pequena equipe de entomologistas coleta frutos hospedeiros em um raio de 200 m ao redor de uma área de detecção de moscas fêmeas e corta e inspeciona visualmente cada fruto em busca de larvas6. Com recursos humanos limitados e centenas de possíveis anfitriões, a tarefa torna-se difícil, particularmente nas áreas onde a diversidade de plantas em áreas de produção comercial e pátios residenciais é alta. Além disso, as larvas podem ser perdidas ao cortar frutos hospedeiros. Em um estudo que avaliou o corte de frutos nos portos de entrada, o corte de frutos não foi tão eficaz na detecção de A. suspensa quando comparado à retenção dos frutos infestados por várias semanas e à contagem de larvas e pupas encontradas no substrato de pupação8.
Existem alternativas ao corte dos frutos para a detecção de uma infestação 9,10,11,12,13. Por exemplo, uma flutuação de açúcar mascavo e um método de água quente são procedimentos aceitos usados para detectar moscas da cereja ocidental em cerejas colhidas 9,10. O método do açúcar mascavo envolve a colocação dos frutos triturados em solução de água com açúcar e a coleta de larvas que flutuam até o topo. O método de flutuação do açúcar mascavo foi desenvolvido especificamente para atender às regras regulatórias para cerejas exportadas, que exigem que os packing houses monitorem a presença de pragas de moscas-das-frutas em quarentena. Há também um programa de certificação de mirtilo aprovado nos EUA e Canadá que inclui flutuação de água de açúcar mascavo, flutuação de água salgada ou fervura para apoiar o fitossaneamento14. Ao testar a precisão da flutuação de açúcar e água quente, os pesquisadores usaram o método de peneiramento para determinar quantas larvas são perdidas 9,10,11,12,13. Um estudo mostrou que misturar mirtilos triturados em uma solução salina e filtrar a solução através de um filtro de café reutilizável foi quatro vezes melhor na detecção de larvas de Drosophila suzukii do que inspecionar visualmente a superfície de soluções de sal e açúcar14. Além disso, cromatografia gasosa foi utilizada para a detecção de larvas de A. suspensa em citros15. Essas abordagens não foram testadas quanto à aplicabilidade em levantamentos de campo.
Nosso objetivo foi desenvolver e testar um método para encontrar larvas de tefritídeos no campo usando peneiramento e flutuação de água com açúcar. Este método permite a detecção mais eficiente de moscas-das-frutas imaturas do que o método tradicional de corte de frutos, apoiando o controle oportuno das populações de reprodutores durante programas de erradicação de moscas-das-frutas.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
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			<td>4221</td>
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			<td>No. 8 Mesh sieves</td>
			<td>Hogentogler &#38; Co. Inc.</td>
			<td>4215</td>
			<td>U.S. Standard&#160;Testing Sieves, https://www.hogentogler.com/sieves/18-inch-sieves.asp</td>
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sieving fruit pulp to detect immature tephritid fruit flies in the field

As moscas-das-frutas da família Tephritidae estão entre as pragas agrícolas mais destrutivas e invasoras do mundo. Muitos países empreendem programas dispendiosos de erradicação para eliminar populações incipientes. Durante os programas de erradicação, um esforço concentrado é feito para detectar larvas, pois isso indica fortemente uma população reprodutora e ajuda a estabelecer a extensão espacial da infestação. A detecção de estágios de vida imaturos desencadeia ações adicionais de controle e regulamentação para conter e prevenir qualquer propagação adicional da praga. Tradicionalmente, a detecção de larvas é realizada cortando frutos hospedeiros individuais e examinando-os visualmente. Este método é trabalhoso, pois apenas um número limitado de frutos pode ser processado, e a probabilidade de perder uma larva é alta. Foi testada uma técnica de extração que combina i) cogumelo de frutos hospedeiros em um saco plástico, ii) coação da polpa através de uma série de peneiras, iii) colocação da polpa retida em solução de água com açúcar mascavo e iv) coleta de larvas que flutuam até a superfície. O método foi avaliado na Flórida com goiabas naturalmente infestadas por Anastrepha suspensa. Para mimetizar populações baixas mais representativas de um programa de erradicação de moscas-das-frutas, mangas e mamão no Havaí foram infestados com um número conhecido e baixo de larvas de Bactrocera dorsalis . A aplicabilidade do método foi testada em campo em goiabas naturalmente infestadas por B. dorsalis para avaliar o método nas condições experimentadas pelos trabalhadores durante um programa emergencial de moscas-das-frutas. Tanto nos ensaios de campo quanto de laboratório, o cogumelo e o peneiramento da polpa foram mais eficientes (demandaram menos tempo) e mais sensíveis (mais larvas encontradas) do que o corte dos frutos. A flutuação da polpa em solução de água com açúcar mascavo ajudou a detectar larvas de ínstar mais precoces. O cogumelo e o peneiramento da polpa de frutos de importantes hospedeiros tefritídeos podem aumentar a probabilidade de detecção de larvas durante programas de emergência.

Tephritid fruit flies are among the most destructive agricultural pests, with the genera Anastrepha, Bactrocera, and Ceratitis posing the greatest risk1. Many areas are at high risk for exotic fruit fly establishment, based on 1) historical incursions and associated delimitation and eradication programs, 2) the high arrival rate of fruit fly host material at ports of entry, and 3) climatic conditions favorable for the establishment of reproducing populations. The state of California experiences multiple incursions and detections of tephritids annually2. There have been more than 200 incursions and eradication programs against tephritids globally over the last century, and this has accelerated significantly in recent decades3. Though the vast majority of these programs are successful in eradicating the invading fruit fly3,4, the economic and environmental burden of these invasions remains still high, and the possibility of establishment is always present; a recent catastrophic example is the infection of Bactrocera dorsalis in the African continent5.
During emergency fruit fly programs, a concerted effort is made to detect and control breeding populations of the invading species. For example, the state of Florida responds to tephritid incursions by applying soil drenches (under the dripline of fruit-bearing host plants) and removing host fruit in a 200 m radius around sites where mated females and/or larvae are found6. These actions and tactics serve to kill larvae and pupae in the soil and remove any eggs and larvae from fruit within the area. In some eradication programs, a significant amount of host fruit is removed. In 2015, over 100,000 kg of fruit was destroyed during the B. dorsalis eradication program in Florida6. The economic losses to growers and associated industries in the quarantined area alone were estimated to be over $10.7 million7.
To find tephritid larvae in the quarantine areas, a small team of entomologists collect host fruits in a 200 m radius around a female fly detection area and cut and visually inspect each fruit for larvae6. With limited staff resources and hundreds of possible hosts, the task becomes difficult, particularly in the areas where plant diversity in both commercial production areas and residential yards is high. In addition, larvae may be missed when cutting host fruits. In a study evaluating fruit cutting at the ports of entry, cutting fruit was found not to be as effective in detecting A. suspensa when compared to holding the infested fruits for several weeks and counting the larvae and pupae found in the pupation substrate8.
There are&#160;alternatives to&#160;fruit cutting for detecting an infestation9,10,11,12,13. For example, a brown sugar floatation and a hot water method are both accepted procedures used to detect western cherry fruit flies in harvested cherries9,10. The brown sugar method involves placing crushed fruit in sugar water solution and collecting larvae that float to the top. The brown sugar floatation method was developed specifically to meet regulatory rules for exported cherries, which require packing houses to monitor for quarantine fruit fly pests. There is also an approved US-Canada blueberry certification program that includes brown sugar water floatation, salt water floatation, or boiling to support phytosanitation14. When testing the accuracy of sugar and hot water floatation, researchers used the sieving method to determine how many larvae are missed9,10,11,12,13. A study showed that mixing crushed blueberries in a salt solution and filtering the solution through a reusable coffee filter was four times better in detecting Drosophila suzukii larvae than visually inspecting the surface of salt and sugar solutions14. In addition, gas chromatography was used for the detection of A. suspensa larvae in citrus15. These approaches have not been tested for applicability in field surveys.
Our goal was to develop and test a method to find tephritid larvae in the field using sieving and sugar water floatation. This method allows the more efficient detection of immature fruit flies than the traditional fruit cutting method, supporting the timely control of breeding populations during fruit fly eradication programs.

Autor em destaque: peneirando polpa de frutas para detectar moscas de frutas tefritídeas imaturas no campo  

Peneiramento de polpa de frutas para detecção de moscas tefritídeos imaturas no campo

We are developing a method to find tephritid fruit fly larvae that is faster and more accurate than the current method of cutting and visually inspecting each fruit. We want to develop a simple technique that can be used in the field to process large amounts of fruit. A challenge of this study was finding fruit with a low infestation, which would likely represent what we see during an emergency or eradication program.As we cannot see into the fruit, we use methods to artificially infest key hosts with a low number of larvae. In both field and laboratory trials, mushing and sieving the pulp require less time, and more larvae were found than cutting fruit. Floating the pulp in a brown sugar water solution helped detect earlier instar larvae.Mushing and sieving fruit pulp of important tephritid hosts may increase the probability of detecting larvae during emergency programs. We'll continue to optimize the protocol to determine the optimal sieve size for different species of regulated fruit flies and establish criteria such as the type of fruit, the quantity of fruit, et cetera, that will help decide whether the use of the larval destruction method or standard fruit cutting is warranted.

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Aumentar a detecção de moscas-das-frutas tefritídeos imaturas no campo pode desencadear esforços oportunos para eliminar populações dessas pragas destrutivas. A detecção de larvas de ínstar tardio é mais rápida e precisa ao acumular frutos hospedeiros em um saco e passar a polpa por uma série de peneiras do que o corte manual e a inspeção visual.

Fruit flies of the Tephritidae family are among the most destructive and invasive agricultural pests in the world. Many countries undertake expensive ...

Estamos desenvolvendo um método para encontrar larvas de moscas-das-frutas tefritídeos que é mais rápido e preciso do que o método atual de corte e inspeção visual de cada fruto. Queremos desenvolver uma técnica simples que possa ser usada no campo para processar grandes quantidades de frutas. Um desafio deste estudo foi encontrar frutos com baixa infestação, o que provavelmente representaria o que vemos durante uma emergência ou programa de erradicação.Como não podemos ver no fruto, usamos métodos para infestar artificialmente hospedeiros-chave com um baixo número de larvas. Tanto em campo quanto em laboratório, o cogumelo e o peneiramento da polpa demandaram menos tempo, e mais larvas foram encontradas do que o corte dos frutos. A flutuação da polpa em uma solução de água com açúcar mascavo ajudou a detectar larvas de ínstar mais precoces.O cogumelo e o peneiramento da polpa de frutos de importantes hospedeiros tefritídeos podem aumentar a probabilidade de detecção de larvas durante programas de emergência. Continuaremos a otimizar o protocolo para determinar o tamanho ideal da peneira para diferentes espécies de moscas-das-frutas regulamentadas e estabelecer critérios como o tipo de fruto, a quantidade de frutos, etc., que ajudarão a decidir se o uso do método de destruição larval ou corte padrão do fruto é justificado.

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Research

JoVE Journal

Biology

Sieving Fruit Pulp to Detect Immature Tephritid Fruit Flies in the Field

1.1K visualizações.  United States Department of Agriculture (USDA). Estamos desenvolvendo um método para encontrar larvas de moscas-das-frutas tefritídeos que é mais rápido e preciso do que o método atual de corte e inspeção visual de cada fruto. Queremos desenvolver uma técnica simples que possa ser usada no campo para processar grandes quantidades de frutas. Um desafio deste estudo foi encontrar frutos com baixa infestação, o que provavelmente representaria o que vemos durante uma emergência ou programa de erradicação.Como não podemos v...