A medição da dor em modelos pré-clínicos de artrite é difícil, mas é essencial para a avaliação de tratamentos regenerativos e analgésicos. Nosso protocolo é sensível e reprodutível para a medição de comportamentos de dor evocados e espontâneos. E é simples e relativamente barato.
A artrite é o maior contribuinte para a incapacidade, e a dor é a principal causa de incapacidade. O tratamento da artrite é atualmente inadequado. Modelos pré-clínicos são uma parte importante do desenvolvimento do tratamento.
Demonstrando este procedimento estarão Christopher Dorman, um técnico, e Sandra Frizelle, uma cientista do meu laboratório. Para evitar que a agulha seja inserida muito profundamente e saia da articulação posteriormente, cubra uma agulha de 5 polegadas com uma baia de tubos de polietileno até que apenas 2,5 milímetros da agulha se projetem para fora da baia. Em seguida, raspe a pele do joelho do camundongo anestesiado para ser injetado, e esterilize a pele exposta com esfoliação de iodo povidone.
Em seguida, insira a agulha em bainha na articulação na linha média através do tendão patelar apenas inferior à borda inferior da patela, e injete a substância de interesse. Antes de avaliar a dor articular evocada, use um altímetro nível 4 para praticar a aplicação de 700 gramas de forças por centímetro quadrado de pressão consistente e firme. O dispositivo emitirá 4 bipes quando o nível de pressão apropriado for aplicado.
Quando a pressão apropriada pode ser aplicada de forma confiável, esmague o mouse no pescoço com o dedo indicador e o polegar firmemente o suficiente para evitar movimentos casuais. E use o quarto e o quinto dedos para conter a cauda. O mouse deve ser capaz de fazer movimentos discretos e breves com esforço e quando estimulado, mas não deve ser capaz de se mover livremente ou continuamente.
Administrar palpações firmes repetidas simultaneamente aos lados laterais e medial de cada joelho com o polegar e o dedo indicador da mão livre aproximadamente na linha articular uma vez por segundo durante 1 minuto. E que um observador conte o número de vezes que o animal vocaliza e luta para escapar da contenção durante este período de aplicação de pressão de 1 minuto. A soma das mordidas e vocalizações é considerada a Partitura de Dor Evocada.
Abra o programa avançado de software de rolamento de peso dinâmico e selecione Mouses como o tipo de sensor. Antes de cada experimento, selecione a calibração completa"sob o menu de calibração. E digite zero"pelo valor tare.
E o peso da almofada de espuma, placa de fibra de densidade média, béquer plástico e água como peso de calibração. Selecione o next"e o tare"E cubra a almofada do sensor com a almofada de espuma, placa de fibra de densidade média e béquer de água de plástico. Quando todos os materiais tiverem sido colocados na almofada do sensor, selecione a visualização de ganho"E ajuste o peso de calibração até que seja distribuído uniformemente pelos sensores individuais.
Quando o valor do indicador de calibração estiver acima de noventa e cinco, selecione a definição de ganho"para produzir uma média normalizada para os sensores individuais e confirmar a integridade dos sensores. Em seguida, selecione o próximo"e salve o arquivo de calibração na pasta de calibração. Selecione novos"e digite o projeto e nomes de animais para o primeiro mouse a ser testado.
Selecione procurar"e abra o arquivo de calibração criado para o projeto. Em seguida, selecione o próximo"confirmar que ativar a captura de vídeo" é selecionado e selecionar ok"Em seguida, pese o animal. Selecione a captura e grave o peso no software.
Depois de selecionar ok"coloque o mouse na câmara por 5 minutos. E selecione o lançamento"O software gravará a atividade do animal, capturará um vídeo e sincronizará com os dados do sensor e dividirá automaticamente o vídeo em segmentos analisáveis e não analisáveis. No final do período de ensaio, selecione a configuração de pausa fácil e independente "E selecione avançar rapidamente" para passar para o primeiro segmento analisável.
Se uma zona estável não tiver a pata correta identificada, segure o cursor sobre essa zona e pressione a tecla de atalho apropriada correspondente à parte correta do corpo. O software avançado de rolamento de peso dinâmico calculará automaticamente a porcentagem do tempo analisado e a porcentagem do peso corporal colocado em cada um dos 4 membros. Em seguida, selecione os resultados "exportar" e sim" para exportar as primeiras 5 linhas de dados sumários para o programa de planilha apropriado.
Para cada animal adicional no mesmo grupo, selecione novo"e digite um nome animal único sem alterar o nome do projeto. Em seguida, capture a atividade de cada animal na câmara como apenas demonstrado. Escores de dor evocados para cuidados inflamatórios agudos- um gene-a artrite induzida, inflamatório crônico completo f-roy-nes add-jav-ent artrite induzida, e crônico não-inflamatório cole-ag-in-a induzido artrite aumenta sobre aqueles observados para animais ingênuos não injetados para todos os três tipos de dor articular.
As fêmeas, mas não os machos com dor lombar degenerativa crônica, demonstram reduções semelhantes nas medidas de rolamento de peso dinâmico avançadas em comparação com camundongos ingênuos em dores articulares inflamatórias agudas e crônicas. Machos com dor articular inflamatória aguda transferem mais peso para os 4 membros do que animais ingênuos. A influência do peso nos 4 membros aumenta em camundongos fêmeas em comparação com animais ingênuos, mas não em machos com dor lombar degenerativa crônica.
Tanto em machos quanto em fêmeas com dor lombar degenerativa crônica, não há diferença no tempo gasto nos membros traseiros esquerdos em comparação com animais ingênuos. E fêmeas com dor articular degenerativa crônica passam mais tempo no membro traseiro direito não artrítico em comparação com camundongos não injetados. Finalmente, camundongos machos com dor articular inflamatória aguda, e fêmeas com dor articular degenerativa crônica, gastam significativamente mais tempo em seus 4 membros do que animais ingênuos.
A identificação correta do posterior dos pés do animal em relação ao seu corpo é muito importante. Concentre-se na parte posterior do animal ao invés da cabeça. Com este método, somos capazes de testar a afetividade de novos analgésicos inter-articular.
