Препарирование 6,5 Эмбрионы DPC мышь

Резюме

Выделение постимплантационных стадии эмбрионов позволяет исследовать геном структурирования и анализа клеточных линии процессах принятия решений во время эмбрионального развития, но надлежащего вскрытия раннего эмбриона может оказаться непростой задачей. Этот протокол описывает метод выделения ранних примитивных-штрих стадии эмбрионов (~ 6,5 дней после coitum [DPC]).

Аннотация

Анализ моделей экспрессии генов на ранних стадиях эмбрионального развития млекопитающих может предоставить важную информацию о функции гена, межклеточных взаимодействий и сигнальных механизмов, которыми руководствуются эмбриональных кучность стрельбы. Тем не менее, рассечение эмбриона мыши с децидуальной вскоре после имплантации может быть сложной процедурой, а также подробные шаг за шагом документации этого процесса отсутствует.

Здесь показано, как после имплантации (6,5 DPC) эмбрионы выделяли первых рассекает матку беременных мышей (обнаружение вагинальные плагин был назначен день 0,5 poist coitum), а затем рассекает эмбриона от материнского децидуальной. Рассечение мембраны Reichert это описано, а также удаление ectoplacental конуса.

протокол

Препарирование репродуктивных органов у женщин мыши

1. Беременных животных усыпляют СО ₂ удушение с помощью сжатого газа.
2. Положите животное на спине на абсорбирующую прокладку и положите его в 70% этанола, чтобы уменьшить риск загрязнения вскрытия с помощью мыши волос.
3. Сожмите кожу и сделать небольшой боковой разрез на средней линии с регулярными хирургические ножницы. Держите кожу твердо выше и ниже разреза и потяните кожу в разные стороны в сторону головой и хвостом, чтобы разоблачить живота.
4. Возьмитесь брюшины щипцами и сократить, чтобы разоблачить брюшной полости.
5. Найдите репродуктивных органов в грудном отделе полости тела: два рога матки, маточных труб и яичников.

Примитивные подряд стадии (6,5 DPC) Препарирование

1. Удалить рога матки, держа матки ниже яйцевода и разрезать его свободным вдоль mesometrium. Место расчлененный матки в ледяной PBS.
   
   
   
   Рисунок 1
   
   
2. Отдельные каждого эмбриона, сокращая между имплантации участков вдоль рога матки.
   
   
   
   Рисунок 2
   
   
   
3. Возьмитесь мышечной оболочки матки, сдвинув пинцетом часовщика в период с окружающим слоем мышц и тканей децидуальной окутан. Пил назад мышечного слоя, обнажая децидуальной.
   
   
   
   Рисунок 3
   
   
4. Клип от части обнаженной децидуальной на вершине (примерно 1 / 5 часть децидуальной ткани), которая подвергнет midventral или дистального кончика заключен зародыш.
   
   
   
   Рисунок 4
   
   
5. Эмбриона могут быть обстреляны с помощью кончиков пинцета. Пирс децидуальной щипцами окружающих эмбрион и открытые щипцы рвать децидуальной друг от друга.
   
   
   
   Рисунок 5
   
   
6. Как только эмбрион удаляется, мембранные Reichart может все еще быть прикреплен, а также конус ectoplacental (трофобласта). Эмбриона можно разрезать дальнейшего тщательного вскрытия.
   
   
   Рисунок 6
   

Обсуждение

Постимплантационных у мышей происходит между 4,5 DPC и рождения. Это рассечение метод может быть применен, по существу, как описано, чтобы изолировать раньше или поздней стадии эмбрионов на 5.5-8.5 DPC.

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
Micro Dissecting Forceps serrated, straight	Tool	Roboz Surgical Instruments Co.	RS-5130	2 pairs
Micro Dissecting Tweezers Pattern #55 INOX	Tool	Roboz Surgical Instruments Co.	RS-5010	2 pairs
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline (1x)	Reagent	Invitrogen	14190
Fisherbrand Sterile Polysytrene Petri Dish	Tool	Fisher Scientific	08-757-12
4% Paraformaldehyde in PBS	Reagent
Straight Sharp-Pointed Dissecting Scissors	Tool	Fisher Scientific	08-940
Pregnant female mice	Animal
Dissecting Microscope	Microscope