Method Article
Мы представляем протокол для гибки нитевидные клетки бактерий придает покрытие скольжения поверхности с оптической ловушки для измерения сотовой жесткость на изгиб.
Мы разработали протокол для измерения жесткость при изгибе нитчатых палочковидные бактерии. Силы применяются с оптической ловушки, микроскопические трехмерные весной из легких, которая образуется при высокой интенсивности лазерного луча ориентирован на очень маленькое пятно на объектив микроскопа. Чтобы согнуть клетки, мы прежде не свяжет живых бактерий в химически обработанных покровное. Поскольку эти клетки растут, в середине клетки остается связанным с покровным но растущие концы свободны от этого ограничения. По вызывающих рост нитчатых с наркотиками цефалексин, мы можем идентифицировать клетки, в которых один конец ячейки прилипла к поверхности, а другой конец остались одинокие и чувствительны к изгибу сил. Изгибающего усилия затем применяется с оптической ловушки, связывая полилизином покрытием шарик на кончике растущих клеток. Обе силы и перемещения шарика записываются и жесткость на изгиб ячейка склоне этой связи.
Секреты успеха: В шаге 8), нужно найти ячейки с четко определенными застряли конца. Некоторые клетки просто застрял на один наконечник, и изгибающего усилия на другом кончике приводит к цельноклеточная поворотным, а не гибки. Подходящей пары находят изгиба каждой клетки быстро вручную с помощью джойстика контролируемой стадии движения.
Представитель Результаты:
Рисунок 1. На этом рисунке показана сила-смещение данных по одной ячейке. Наклон этой линии изгибной жесткости клетки.
Протокол, представленные здесь, предназначены для количественного измерения изгиба свойства бактериальных клеток. Эксперимент установка может быть применена к любому палочковидные элемент, который может быть сделан расти filamentously. Мы успешно использовали эту установку, чтобы исследовать последствия цитоскелета нитей на жесткость на изгиб Е. кишечной клетки. Эта же методика может быть использована для оценки роли давления, сотовые жесткость стен и других внутриклеточных компонентов в определении общей изгибной жесткости клеток.
Видео-продукции этой статьи был организован Безумный город Labs, которая производит инструменты, используемые в этих исследованиях.
Мы признаем, полезные советы от Mingzhai Солнца на обязательную клетки на поверхности. Мы благодарим Нед Wingreen и Земер Gitai за ценные обсуждения. Это исследование было поддержано Национальным институтом здоровья грант P50GM07150, Национальный научный фонд КАРЬЕРА награду PHY-0844466 и Альфреда Слоуна.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
cephalexin | Sigma-Aldrich | C4895-5G | |
polyethylenimine | Sigma-Aldrich | 181978-5G | |
polylysine | Sigma-Aldrich | P8920 | |
0.5-μm-diameter polystyrene beads | Bangs Laboratories | PS03N | |
Nano-LP Series nanopositioning system | Mad City Labs | NanoLP series | http://www.madcitylabs.com/nanolpseries.html |
Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи
Запросить разрешениеThis article has been published
Video Coming Soon
Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены