JoVE Logo
АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Effector translocation into host cells via a type III secretion system is a common virulence strategy among gram-negative bacteria. A beta-lactamase effector fusion based assay for quantitative analysis of translocation was applied. In Yersinia infected cells, conversion of a FRET reporter by the beta-lactamase is monitored using laser scanning microscopy.

Аннотация

Многие грамотрицательные бактерии, включая патогенную Yersinia SPP. Использовать тип III секреции систем транслоцироваться эффекторные белки в эукариотических клетках-мишенях. Внутри клетки-хозяина эффекторных белков в клеточных функций манипулирования в интересах бактерий. Чтобы лучше понять, контроль типа секреции III во время взаимодействия клетки-хозяина, чувствительный и точный анализов для измерения транслокации требуется. Мы здесь описывать применение в анализе на основе слияния фрагмента эффектор белка Yersinia энтероколитные (Yersinia белка наружной; YopE). ПЭМ-1 бета-лактамазы для количественного анализа транслокации Анализ опирается на расщеплении клетки проникающего FRET краситель (CCF4 / AM) по транслоцируется бета-лактамаз слияния. После расщепления ядра цефалоспоринов CCF4 по бета-лактамазы, FRET из кумарина с флуоресцеином нарушается и возбуждение кумарина фрагмента приводит к синей флуоресценции.Различные приложения этого метода были описаны в литературе подсветки его универсальность. Способ позволяет проводить анализ транслокации в пробирке, а также в в естественных условиях, например, в мышиной модели. Обнаружение сигналов флуоресценции можно проводить с использованием пластин читателей, анализ FACS или флуоресцентной микроскопии. В установке, описанной здесь, в пробирке транслокации эффекторных слитых клеток HeLa в различных мутантов по Yersinia контролируется лазерной сканирующей микроскопии. Запись внутриклеточного преобразования лада репортера по бета-лактамаз эффекторной слияния в режиме реального времени обеспечивает надежную количественные результаты. Мы здесь, показывают примерные данные, демонстрируя повышенную перемещение по Y. энтероколитные YopE мутант по сравнению с штаммом дикого типа.

Введение

Типа III секреции системы специализированные белок-экспорт машины, используемые различным родам грамотрицательных бактерий непосредственно доставить бактериально закодированные эффекторные белки в эукариотические клетки-мишени. Хотя сам секреции техника высоко консервативен, специализированные наборы эффекторных белков развивались среди различных видов бактерий, чтобы манипулировать клеточные сигнальные пути и облегчают определенные бактериальные стратегии вирулентности 1. В случае Yersinia, до семи эффекторных белков, так называемых Yops (Yersinia внешние белки), которые перемещаются по клетки-хозяина контакта и действовать вместе, чтобы разрушить ответов иммунных клеток, таких как фагоцитоз и продукции цитокинов, т.е. разрешить внеклеточный выживаемость бактерий 2-4. Процесс транслокации строго контролируется на разных этапах 5. Установлено, что основным активации T3SS инициируется ее контакта с целевой CELL 6. Однако точный механизм этого возбуждения еще не выяснены. В Yersinia второй уровень так называемого тонкой настройки транслокации достигается вверх или вниз регулирующие деятельность клеточных Ро ГТФ-связывающих белков Rac1 или RHOA. Активация Rac1 например invasin или цитотоксический некротизирующий фактор (CNF Y-Y) приводит к увеличению транслокации 7-9, в то время GAP (ГТФ активации белка) функцию транслоцируется YopE вниз регулирует Rac1 деятельность и, соответственно, уменьшается перемещение отрицательной обратной связи типа механизма 10,11.

Допустимые и точные методы являются необходимым условием для расследования, как перемещение регулируется во Yersinia взаимодействия клетки-хозяина. Много различных систем были использованы для этой цели, каждый из которых имеет свои преимущества и недостатки. Некоторые подходы опираются на лизис инфицированных клеток, но не бактерий различными детергентами с последующим вестерн-блоттинга. Чте Общим недостатком этих методов является то, что незначительные, но неизбежно лизису бактерий потенциально загрязняет клеточного лизата с бактериями-связанные эффекторных белков. Однако обработка клеток протеиназой К деградировать внеклеточных белков эффекторные и последующего использования дигитонина селективного лизиса эукариотических клеток были предложены для минимизации этой проблемы 12. Важно отметить, что эти анализы в решающей зависит от высокого качества анти-эффекторных антител, которые в основном не в продаже. Попытки использовать поступательные слитые белки эффекторных и флуоресцентные белки, как GFP контролировать перемещение не увенчались успехом вероятно, связано с шаровидным третичной структуры флуоресцентных белков и неспособности секреции аппарата разворачиваться их перед секрецией 13. Тем не менее, несколько различных репортер теги, как СуА (кальмодулинзависимой аденилатциклазу) домен токсина Bordetella коклюша cyclolysin 14 или флэшТег были успешно использованы для анализа транслокации. В первом тесте ферментативная активность СуА используется для усиления сигнала внутриклеточного слитого белка, в то время как флэш-тега, очень короткий tetracysteine ​​(4Cys) мотив тег, позволяет маркировки со вспышкой biarsenical красителя, не нарушая процесс секреции 15.

Подход применяется здесь сообщалось, впервые с Charpentier др., И основана на внутриклеточного превращения красителя CCF4 Фёрстера резонансной энергии передачи (FRET) по перемещаются эффектор ТЕМ-1 бета-лактамазы слитых 16 (фиг.1А). CCF4 / АМ представляет собой клетку проникающий соединение, в котором производное кумарина (донор) и флуоресцеин фрагмент (акцептор) связаны сердечника цефалоспоринов. При пассивном вступления в эукариотической клетке, не-флуоресцентного этерифицированный CCF4 / АМ соединение обрабатывается сотовой эстераз в заряженном и флуоресцентного CCF4 и тем самым в ловушкев клетке. Возбуждение кумаринового фрагмента при 405 нм приводит к FRET флуоресцеина фрагмента, который испускает зеленую сигнала флуоресценции при 530 нм. После расщепления ядра цефалоспоринов по бета-лактамаз FRET нарушается и возбуждение кумарина фрагмента приводит к синей флуоресценции at460 нм. Различные приложения этого метода были описаны в литературе подсветки его универсальность. Способ позволяет проводить анализ транслокации в пробирке, а также в в естественных условиях, например, метод был использован в качестве модели инфекции мыши, чтобы определить популяции лейкоцитов, предназначенные для транслокации в естественных 17-19. Считывание сигналов может быть проведено с использованием пластин читателей, анализ FACS или флуоресцентной микроскопии. Следует отметить, что метод также дает возможность контролировать перемещение в в режиме реального времени по живых клеток микроскопии в течение инфекционного процесса 20,21. Вот флуоресценции лазерной сканирующей микроскопии был применен для readouт флуоресцентных сигналов, поскольку она обеспечивает высокую чувствительность и точность. В частности, способность регулировать окно излучения с нанометровым точностью в сочетании с высокой чувствительных детекторов облегчает оптимизированный обнаружение флуоресценции и свернутое перекрестных помех. Кроме того, это настройка микроскопии могут быть адаптированы для мониторинга в режиме реального времени транслокации и потенциально позволяет для одновременного анализа хозяин-патоген взаимодействия на клеточном уровне.

В этом исследовании ставок транслокации У. энтероколитные штамм дикого типа и мутанта YopE удаление демонстрируя hypertranslocator фенотип 10,11 были образцово проанализированы.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

протокол

1. Пик выбросов и определение кросс-разговоры (смотри также рисунок 2)

  1. Для того чтобы определить пики выбросов и количество перекрестных помех между донором (кумарин производное V450) и акцептор (флуоресцеин) красителей, выполнять спектральные сканы клеток, меченных как отдельных флуорофоров при возбуждении 405 нм.
  2. Определить пропускную способность 10 нм в пределах пика каждого красителя, который будет использоваться для донорных и акцепторных каналов (здесь 455-465 нм и 525-535 нм). Участок нормированной интенсивности на длине волны и вычислить средний процент перекрестного разговора доноров красителя в канал акцепторной и наоборот (рис 2).

2. Подготовка Y. энтероколитные Штаммы для клеточных культур инфекции

  1. Используйте следующие штаммы: WA-314 ПМК-ова (WA-314 трансформировали плазмидами ПМК-бла 17 и ПМК-OVA 17, соответственно) и WA-314ΔYopE ПМК-бла (wa-314ΔYopE трансформировали плазмидой ПМК-бла 17)
  2. По крайней мере, за два дня до инфекции полоса Y. энтероколитные штаммы WA-314 ПМК-ова, WA-314 ПМК-бла и WA-314ΔE ПМК-бла от крио акции на LB-агаром, содержащих необходимые антибиотики (канамицин для WA-314 ПМК-бла и WA-314 ПМК-ова ; канамицина и тетрациклина для WA-314ΔE ПМК-бла) и расти O / N на 27 ° C. Впоследствии держать пластины до одной недели при 4 ° С.
  3. За один день до инокуляции инфекции 3 мл LB-среды, содержащей необходимые антибиотики с одной колонии соответствующих штаммов и инкубируют O / N при 27 ° С в шейкере при 180 оборотах в минуту.
  4. В день инфицирования прививку 2 мл o / n культуры в 40 мл свежей LB-среде без антибиотиков и инкубируют в течение 90 мин при 37 ° С в шейкере при 180 оборотах в минуту для индукции экспрессии секреции системы типа III.
  5. Передача культуры в подходящую пробирку и хранить культур на льду или при 4 ° Свпредь. Центрифуга культур в течение 10 мин при 5000 х г и 4 ° С.
  6. Ресуспендируют бактериальных гранул в 2-3 мл охлажденной льдом PBS. Развести бактериальной суспензии до концентрации 8 х 10 8 КОЕ / мл при использовании спектрофотометра. Определите соответствующий оптической плотности индивидуально. Держите эту подвеску на льду до заражения клеток HeLa в.

3. Покрытие HeLa Клетки

  1. За один день до инфицирования семян 1,5 х 10 4 клеток HeLa клетки в 200 мкл DMEM, содержащей 10% инактивированной нагреванием фетальной телячьей сыворотки (FCS) в лунки 96-луночного планшета и культивировать в 5% CO 2 инкубаторе при температуре 37 ° С. Семенной три скважины для каждого штамма (три разных времени инкубации).

4. Заражение клеток HeLa и загрузка с CCF4

  1. Infect клетки HeLa путем добавления 3,5 мкл бактериальной суспензии на носителе и соединение, осторожно пипеткой среду дважды. Разрешить бактерии оседают наК клеткам в множественности заражения (фрагмента) инфекции около 100 бактерий на клетку. В течение некоторого времени, конечно начать инфекции при -90 мин, -60 мин и -30 мин и не инкубировать при 37 ° С в 5% СО 2 инкубаторе до 0 мин для достижения общей конечной точки.
  2. При инкубации завершена, тщательно аспирации среды без удаления клеток HeLa и добавить 50 мкл PBS, содержащей 20 мкг / мл хлорамфеникола, чтобы остановить экспрессию эффекторов и 2,5 мМ пробенецида, чтобы уменьшить экспорт CCF4.
  3. В этот момент передача 96-луночный планшет в столике микроскопа и определяют соответствующие места для последующего анализа в каждую лунку. Закончите этот шаг в 10 мин (подробности приобретения раздел 5.1).
  4. На лунку, добавить 70 мкл CCF4 / АМ загрузки раствора (0,24 мкл раствора А, 1,2 мкл раствора Б, 18.56 мкл раствора С (раствор А, В и С при условии, внутри CCF4 / АМ загрузки набора) и 50 мкл PBS (содержащий от 20 мкг / мл хлорамфеникола, и 2,5 мМ пробенецида) с использованием мульти рipette и инкубировать в течение 5 мин при комнатной температуре. Отныне работы без перерывов.
  5. Аспирируйте загрузки раствора и добавить 100 мкл PBS, содержащего 20 мкг / мл хлорамфеникола и 2,5 мм с использованием пробенецид мульти пипетки. Затем быстро передавать пластину 96 также в стадии микроскопа и начать приобретение течение 10 мин аспирации загрузочного раствора.

5. лазерной сканирующей микроскопии и анализа данных

  1. Получение изображений
    1. Установите условия визуализации таким образом, чтобы максимизировать общее количество фотонов и минимизации фототоксичность, фотообесцвечивания и кросс-возбуждение.
      1. В современном конфокальной лазерной сканирующей микроскопии, используйте 20X высокой числовой апертурой погружения цели, откройте детектор крошечное отверстие 2,5 Эйри единиц (т.е., широкоугольный оптический секционирования), выбрать высокую чувствительность GaAsP-детекторы с одновременно активных доноров и акцепторов каналов, 8 бит глубины ~ 750 нм Размер пикселя, 3-кратный кадров усреднения и excitе с 10% диодного лазера в 405 нм.
      2. Чтобы обеспечить правильное количественное установки усиления детектора обоих каналов в то же значение, и, чтобы избежать каких-либо насыщенные пиксели.
        Примечание: В данном случае рост был установлен на 150%.
    2. Обеспечить постоянный погружение, распространяя иммерсионной среды на дне лунок, например, с 1 мл шприца, и избежать захват пузырьков воздуха.
    3. Активируйте проходящий свет и найти репрезентативную поле зрения в каждую лунку. Используйте правильно калиброванного автоматический этап и отметьте положение в программном обеспечении.
    4. После удаления пластины для окрашивания (см раздел 4.3), вставьте пластину и добавить вес на вершине, чтобы избежать дрейф фокусное. Просмотрите сохраненные позиции в режиме лазерного сканирования и настроить фокус и боковое положение должным образом.
    5. Установите промежуток времени до 2 мин, продолжительность 2 ч и начать приобретение.
  2. Изображение количественное (примеры будут приведены для битовой плоскости метакие, как Imaris)
    1. Импорт набора данных в программное обеспечение, что позволяет арифметические расчеты пиксельных матриц. Сделайте это с помощью перетаскивания исходный файл, содержащий как донора и акцептора канал на иконку программного обеспечения.
    2. Вычтите фон в обоих каналах, используя то же смещение. Чтобы сделать это, нажмите Меню, а затем нажмите изображение> Обработка> Вычитание. Выберите каждый канал и введите базовое значение.
    3. Исправьте проступание донора канала (CH1) в акцепторной канала (CH2) с заранее определенной коррекции коэффициента F (см 1.1), создавая новый канал:
      Ch2 = CH2 - канал 1 * е
      Примечание: стравливающего через акцептора в донорской канала обнаружен не был на уровне шума.
      1. Нажмите Меню> Обработка изображения> Channel арифметики и введите абс (CH 2 (CH1 * 0,33)). После удаления канала 2, нажав Меню> Изменить> Удалить каналы. Убедитесь, чтопроступание скорректированной акцепторной канала остается как новый канал 2. Необязательно: Измените цвет канала от серого до первоначального цвета, перейдя в Меню> Изменить свойства> Image. Выберите канал 4> Mapped Цвет> основного цвета и изменить ее, например,, зеленый.
    4. Создать новый канал с помощью следующей операции, чтобы определить относительный коэффициент FRET:
      Ch3 = CH2 "/ (CH1 + Ch2 ')
      1. Перейти к Меню> обработка изображений> Channel арифметики и введите ch2 ./ (CH1 + CH2)
    5. Для правильной визуализации канала FRET в 8-битное изображение, создайте четвертый канал:
      Ch4 = 255 * Ch3
      1. Перейти к Меню> обработка изображений> Channel арифметики и введите 255 * ch3. Измените цвет канала, выбрав Меню> Изменить свойства> Image. Выберите канал 4> Mapped Цвет> Color Table File> джет.
    6. Нанесите медианный фильтр 3x3 для каналов CH3 и CH4 тхат снизит шум на изображениях. Чтобы сделать это, нажмите Меню> обработка изображений>> Сглаживание медианный фильтр. Выберите оба канала и применять размер фильтра "3x3x1".
    7. Для количественного определения сигналов сотовой, обнаружить клетки в СН4, должным образом установка смещения и фильтр структуры по размеру, чтобы исключить слишком малые структуры.
      1. Выберите Surpass Фото и нажмите на иконку "Добавить новые поверхности". Определить параметры алгоритма обнаружения в окне Surface. Для более быстрой обработки, активировать две галочки "сегмент только область интереса» и «весь процесс изображение окончательно". Определите область интереса путем редактирования ее размеров.
      2. Выберите канал 4 в качестве исходного канала и установить порог по Thresholding> вычитание фона (локальный контраст) и установить диаметр до 10 мкм. Установите минимальный порог интенсивности вручную на 0 и максимальный порог максимальной IntensiТай. Фильтр структуры по площади и установить минимальное значение, например, 187 μm². Закончить обнаружения поверхности.
    8. Выписка средние значения для интенсивности флуоресценции донора (Ch1) и коэффициента относительной FRET (CH 3) и их стандартных отклонений в клеточном лица. Чтобы сделать это, перейдите к свойствам покрытий. Изменение внешнего вида структур, выбрав поверхностей стиль / качество> Surface. Выберите все структуры, нажав на вкладке фильтров. Объединение обнаруженные структуры, перейдя на процесс отбора> Unify. Экспорт статистики в поверхностные MS Excel, нажав на вкладке Статистика> Экспорт всю статистику в файл.
    9. Участок эти значения с течением времени. Определить 10 мин интервал максимального наклона увеличения флуоресценции донора канала для каждого состояния в разумные параметра представлять количество транслоцируется эффектора. Рассчитайте наклон, т = Δ интенсивности флуоресценции донора / Δ времени (мин).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Результаты

Чтобы продемонстрировать способность описанного метода количественного анализа эффекторной транслокацию в клетки-мишени, два штамма Yersinia с различной кинетикой транслокации изучали: Y. энтероколитные штамм дикого типа WA-314 (серогруппы O8, укрывательство плазмиды вирулентнос?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Обсуждение

Мы здесь успешно применяется на основе анализа ПЭМ-1 бета-лактамаз репортер для количественного анализа эффекторных транслокации по Y. энтероколитные. Много различных вариантов этой чувствительной, конкретной и относительно простой методики были описаны в литературе. В этом иссл...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Раскрытие информации

The authors declare that they have no competing financial interests.

Благодарности

We thank Dr. Antonio Virgilio Failla for providing the FRET acquisition quantification algorithm and Erwin Bohn for providing the pMK-bla and pMK-ova constructs.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
LB-AgarRothX969.2
LB-MediumRothX968.2
Dulbecco’s Phosphate Buffered SalineSigma-AldrichD8662-500ML
96-well plate (black, clear bottom)Greiner Bio One655087
DMEM, high glucose, GlutaMAX Supplement, pyruvateGibco/Life Technologies31966-047
ProbenecidSigma-AldrichP8761-25G
LiveBLAzer FRET-B/G Loading Kit with CCF4-AMLife TechnologiesK1095
Lectin from Triticum vulgaris (wheat) FITC conjugateSigma-AldrichL4895Used for peak emission and cross-talk determination
V450 Rat anti-Mouse CD8aBD Bioscience560469Used for peak emission and cross-talk determination
Immersol W immersion oil Zeiss444969-0000-000Refractive index = 1.3339 @ 23 °C
TCS SP5 II confocal laser scanning microscopeLeica microsystems2x GaAsP-Hybrid detectors, 4 channel spectrometer, acusto optical beam spliter, motorized XY stage, adjustable pinhole, objective 20X HC PL APO CS IMM/CORR, 405 nm diode laser 50 mW
Imaris 7.6 softwareBitplanePlugins included ImarisXT and MeasurementPro
MatLab compiler runtimeMathWorks
Prism 5GraphPad software

Ссылки

  1. Galan, J. E., Lara-Tejero, M., Marlovits, T. C., Wagner, S. Bacterial Type III Secretion Systems: Specialized Nanomachines for Protein Delivery into Target Cells. Annu Rev Microbiol. 68, 415-438 (2014).
  2. Aepfelbacher, M., Trasak, C., Ruckdeschel, K. Effector functions of pathogenic Yersinia species. Thromb Haemost. 98 (3), 521-529 (2007).
  3. Heesemann, J., Sing, A., Trulzsch, K. Yersinia's stratagem: targeting innate and adaptive immune defense. Curr Opin Microbiol. 9 (1), 55-61 (2006).
  4. Viboud, G. I., Bliska, J. B. Yersinia outer proteins: role in modulation of host cell signaling responses and pathogenesis. Annu Rev Microbiol. 59, 69-89 (2005).
  5. Dewoody, R. S., Merritt, P. M., Marketon, M. M. Regulation of the Yersinia type III secretion system: traffic control. Front Cell Infect Microbiol. 3, 10-3389 (2013).
  6. Pettersson, J., et al. Modulation of virulence factor expression by pathogen target cell contact. Science. 273 (5279), 1231-1233 (1996).
  7. Schweer, J., et al. The cytotoxic necrotizing factor of Yersinia pseudotuberculosis (CNFY) enhances inflammation and Yop delivery during infection by activation of Rho GTPases. PLoS Pathog. 9 (11), e1003746(2013).
  8. Wolters, M., et al. Cytotoxic necrotizing factor-Y boosts Yersinia effector translocation by activating Rac protein. J Biol Chem. 288 (32), 23543-23553 (2013).
  9. Mejia, E., Bliska, J. B., Viboud, G. I. Yersinia controls type III effector delivery into host cells by modulating Rho activity. PLoS Pathog. 4 (1), e3(2008).
  10. Aili, M., et al. Regulation of Yersinia Yop-effector delivery by translocated YopE. Int J Med Microbiol. 298 (3-4), 183-192 (2008).
  11. Gaus, K., et al. Destabilization of YopE by the ubiquitin-proteasome pathway fine-tunes Yop delivery into host cells and facilitates systemic spread of Yersinia enterocolitica in host lymphoid tissue. Infect Immun. 79 (3), 1166-1175 (2011).
  12. Nordfelth, R., Wolf-Watz, H. YopB of Yersinia enterocolitica is essential for YopE translocation. Infect Immun. 69 (5), 3516-3518 (2001).
  13. Radics, J., Konigsmaier, L., Marlovits, T. C. Structure of a pathogenic type 3 secretion system in action. Nat Struct Mol Biol. 21 (1), 82-87 (2014).
  14. Sory, M. P., Cornelis, G. R. Translocation of a hybrid YopE-adenylate cyclase from Yersinia enterocolitica into HeLa cells. Mol Microbiol. 14 (3), 583-594 (1994).
  15. Schlumberger, M. C., et al. Real-time imaging of type III secretion: Salmonella SipA injection into host cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 102 (35), 12548-12553 (2005).
  16. Charpentier, X., Oswald, E. Identification of the secretion and translocation domain of the enteropathogenic and enterohemorrhagic Escherichia coli effector Cif, using TEM-1 beta-lactamase as a new fluorescence-based reporter. J Bacteriol. 186 (16), 5486-5495 (2004).
  17. Koberle, M., et al. Yersinia enterocolitica targets cells of the innate and adaptive immune system by injection of Yops in a mouse infection model. PLoS Pathog. 5 (8), e1000551(2009).
  18. Geddes, K., Cruz, F., Heffron, F. Analysis of cells targeted by Salmonella type III secretion in vivo. PLoS Pathog. 3 (12), e196(2007).
  19. Marketon, M. M., DePaolo, R. W., DeBord, K. L., Jabri, B., Schneewind, O. Plague bacteria target immune cells during infection. Science. 309 (5741), 1739-1741 (2005).
  20. Mills, E., Baruch, K., Aviv, G., Nitzan, M., Rosenshine, I. Dynamics of the type III secretion system activity of enteropathogenic Escherichia coli. MBio. 4 (4), (2013).
  21. Mills, E., Baruch, K., Charpentier, X., Kobi, S., Rosenshine, I. Real-time analysis of effector translocation by the type III secretion system of enteropathogenic Escherichia coli. Cell Host Microbe. 3 (2), 104-113 (2008).
  22. Heesemann, J., Laufs, R. Construction of a mobilizable Yersinia enterocolitica virulence plasmid. J Bacteriol. 155 (2), 761-767 (1983).
  23. Zumbihl, R., et al. The cytotoxin YopT of Yersinia enterocolitica induces modification and cellular redistribution of the small GTP-binding protein RhoA. J Biol Chem. 274 (41), 29289-29293 (1999).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

104IIIYersiniaYersiniaYopYopE

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены