Ламинотомия для поясничного спинной ганглий суперпользователя и инъекций в свиней

Резюме

Мы описываем метод ламинотомия в свиней, которая обеспечивает доступ к поясничной Спинной корень ганглиев (DRG) для инъекций intraganglionic. Инъекции прогресс отслеживается интраоперационно и гистологически подтвердили до 21 дней после операции. Этот протокол может использоваться для будущих доклинические исследования с участием DRG инъекций.

Аннотация

Спинной корень ганглиев (DRG) являются анатомически четко определенной структуры, которые содержат все первичных сенсорных нейронов ниже головы. Этот факт делает DRG привлекательных объектов для инъекций Роман терапии, направленной на лечение хронической боли. В небольших животных моделях Ламинэктомия использовалась для облегчения DRG инъекции, потому что она включает в себя хирургическое удаление позвоночной кости, окружающих каждый DRG. Мы продемонстрировать технику для intraganglionic введения поясничного DRG в крупных видов животных, а именно, свиней. Ламинотомия выполняется для прямого доступа к DRG, с использованием стандартных нейрохирургических методов, инструментов и материалов. По сравнению с более обширной удаление кости через ламинэктомии, мы реализуем ламинотомия сохранение анатомии позвоночника при достижении достаточного доступа DRG. Интраоперационная хода DRG инъекции контролируется с помощью нетоксичных красителей. После эвтаназии на послеоперационный 21 день успех инъекционного определяется гистологии intraganglionic распределения 4', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI). Мы вводим биологически неактивный решение продемонстрировать протокол. Этот метод может быть прикладной в будущем доклинические исследования целевых терапевтических решений DRG. Наша методология должна облегчить тестирование переводимости intraganglionic мелких животных парадигмы в крупных видов животных. Кроме того этот протокол может служить ключевым ресурсом для тех, кто планирует доклинические исследования DRG инъекций в свиней.

Введение

Спинной корень ганглиев (DRG) являются анатомически дискретных, нейронов коллекции, расположенных вдоль позвоночного столба. Каждый DRG содержит первичных сенсорных нейронов, которые кодируют и реле периферические раздражители для центральной нервной системы (ЦНС) из тела конкретных регионов. К примеру боль остеоартрита начинается, когда болевых рецепторов, расположенных о совместном воспринимают вредных раздражителей. Этот процесс называется Ноцицепция. Долгосрочный осведомленности о вредных раздражителей приводит к хронической боли ¹.

Хроническая боль является предметом частых доклинические исследования ² , где одна цель заключается в разработке полезных методов для целенаправленной доставки анальгетиков DRG, например intraganglionic впрыск ³. Однако DRG трудно добраться, потому, что они проживают в пределах Бони межпозвоночных отверстий ⁴. Несколько групп успешно преодолеть это препятствие путем использования хирургии позвоночника в грызунов ^5,6,,78,9,10.

В клинике Ламинэктомия — это распространенная операция позвоночника и относится к хирургическому удалению позвоночной пластинки, тем самым unroofing позвоночного канала ¹¹. Включение хирургических методов, чтобы позволить прямой доступ DRG была успешной в грызунов ^5,12, однако, перевод может быть нереально рассматривать различия в размерах соответствующих структур и как это влияет на Фармакокинетика или технической осуществимости ^13,14. Например в одном исследовании определяется поперечной спинного диаметр T10 3.0, 7.0, и 8,2 мм для крысы, свиньи и человека, соответственно ¹⁵. Таким образом крупных животных моделей лучше приблизительное человеческого измерения нервных структур.

В свиней Raore et al. используется многоуровневая Ламинэктомия для получения доступа к шейного отдела спинного для нескольких межпозвонковым инъекции ¹⁶. Процедура хорошо переносится и привело к фазе я клинических испытаний где сопоставимых хирургические исходы были документально ¹⁷. Эти результаты поощрять продолжение использования доклинических крупных животных моделей как предикторы технической осуществимости и безопасности людей.

На сегодняшний день, никакой подробной методологии существует для хирургического доступа и инъекций DRG в крупных видов животных. Для этого трансляционного разрыва, мы приводим протокол для DRG экспозиции и инъекции через ламинотомия в свиней. Стандартные нейрохирургические методы, инструменты и материалы были использованы, и метод был разработан для имитации современной хирургической практике. Мы продемонстрировать intraganglionic инъекции, используя водный раствор для поясничного DRG и подтверждение успешной доставки через гистологии после послеоперационного дня 21.

протокол

все методы, описанные здесь были одобрены институциональный уход животных и использование Комитет (IACUC) клиники Майо.

1. предпосылки строгости и воспроизводимость

1. для обеспечения строгость дизайна, следовать национальные стандарты надлежащей лабораторной практики во все времена и получить внутреннего утверждения IACUC (или аналогичный комитет) до любых животных участие в экспериментах.
   Примечание: Этот протокол был разработан для поддержания клинически верный подход. Таким образом материалы, инструменты и методы участвующих описаны в моде, идентичные по самым высоким стандартам клинической в организме человека. Например, следуют строгим стерильных и никогда не должны использоваться материалы истек.
2. Для поддержки воспроизводимость этой методологии в экспериментальных условиях, разрабатывать внутренние стандартные оперативные процедуры и управления для изменчивости в свиней породы, вес, пол и возраст между отдельных когорт.
   Примечание: Дизайн этого протокола был основан на использовании свиней весом 38-53 кг

2. Предоперационное животное уход

1. управлять профилактическое Цефтиофур внутримышечно (IM), учитывая на 5 мг/кг, за 1 день до процедуры.
2. Быстро животных твердой пищи и ограничить животных от косметические процедуры, то есть масла ванны, 12 ч до процедуры.
3. Общая анестезия вызывают в течение 1 ч процедуры, с помощью IM tiletamine и zolazepam, как телазол на 5 мг/кг и IM Ксилазина, на 2 мг/кг.
4. После индуцированного, администрировать подкожной (SC) бупренорфин устойчивый выпуск (SR), на 0,18 мг/кг.
5. Поместить катетер уха вен и выполнения быстрой последовательности интубации поставить эндотрахеальную трубку.
6. Прикрепить пульсоксиметр с сердечного ритма, мониторинг функции к языку для мониторинга кислородом и частоты пульса.
7. Место животного в лежачем положении и клип кожу на тыльной поверхности с помощью электрической машинки. Клип волос над большой, двусторонние район, простирающийся от сагиттальной плоскости срединной плоскости корональных срединной и продольно сакрального Апекс к лопаточный колючки. Для удаления волос и свободно плавающего кожи использовать скотч.
8. Скраб отрезанной области до 3 раз теплой водой с мылом и сухой кожи с помощью безворсовой полотенце.
9. Марк двусторонних анатомические ориентиры, с помощью хирургического маркером. Марк последнего ребра, подвздошные гребни, остистых отростков и поперечных отростков.
   Примечание: По маркировке последнего ребра, подвздошные гребни и поперечных отростков, поясничного отдела позвоночника является демаркация вдоль его улучшенный, нижней и боковой границ, соответственно. Этот протокол был разработан для доступа и введения любых поясничного DRG интерес. Для справки, Улучшенный подвздошные гребни выровнять уровень позвонка L3 и L4.
10. Покрытия животное с теплое одеяло для транспортировки постановляющей части люкс.

3. Позиционирование в постановляющей части люкс

1. осторожно Лифт и положение животных склонны в модифицированных большое Гуманное животное слинг с мягкой брюшной полости диафрагмой.
   Примечание: Брюшной полости диафрагма позволяет снижением внутрибрюшного давления похож на Уилсон кадр, используемый во время человека хирургии позвоночника. В свою очередь это уменьшает, интраоперационная кровотечение из позвоночника кровеносных сосудов. Слинг выгодно, потому что ноги могут висеть свободно через проложенный отверстия, которые защиты животных от периферических нервных покушение. Однако поскольку рамка строп изготовлен из металла, следует мягкий с изоляцией во избежание электрического замыкания и случайного животных сжечь. Рулон одеяло могут быть размещены в положение головы и шеи в удобном положении, в зависимости от размера животного.
2. Поддержания общей анестезии с помощью 1-3% вдыхании (IH) изофлюрановая, титруемая для эффекта. Смочить глаза глазной мазью и осторожно лента их отключение.
3. Место линии для жизненно важных признаков мониторинга в документе температуры, артериального давления, частоты сердечных сокращений и оксигенации. Контролировать вентиляции capnography.
4. Место клей, одноразовые электрохирургическое дисперсионные электрода над левой или правой лопатки.
5. Администрирование утепленные лактат Рингера ' s, как содержание жидкости через катетер ухо вен. Дайте жидкости со скоростью 5-10 мл/кг/ч
6. Место Устройство приточно-потепления над районом грудного и шейного и избежать покрытия последнего ребра.

4. Стерильные подготовка операционного поля для левосторонней инъекций

Примечание: из этой точки вперед, проходить в строго стерильных моды.

1. Подготовить кожа начала поясничного отдела позвоночника с широким применением 0,7% йода povacrylex и 74% изопропиловый спирт, по словам производителя ' s инструкции. Для обеспечения соответствия руководство иглу может позднее быть в стерильных моды, lateralize приложение в сторону запланированных инъекции путем расширения антисептического сторону срединной корональных плоскости мимо отмеченные поперечных отростков.
2. Место Одноразовые хирургические полотенца в прямоугольной моды изложить запланированные разрез сайт, который находится над средней линии вдоль заметное остистого отростка поясничного.
3. Применить клей антимикробной надрезать драпировка над постановляющей части полотенца и подвергаются кожи. Зажим шторы на месте и продлить драпировки краю покинуть поле постановляющей.
4. Обеспечить вертикальный Пелерина поляков во главе строп между операционного поля и мониторинга техник.
5. Secure линии всасывания и электрохирургия в пределах операционного поля путем зажима для стерильных шторы. Пройти свободные концы труб и проводов из поле стерильным.

5. Разрез и Поднадкостничный рассечения кожи

1. пальпировать остистых отростков поясничных вдоль средней линии и определить 3 последовательных позвоночного уровня.
2. Использовать #15 скальпеля для открытия 8-12 см срединной Сагиттальный разрез через incise драпировка непосредственно кзади остистого отростка. Поддерживать гемостаза с помощью Марли тампонады и монополярных электрохирургии.
   Примечание: Следует позаботиться не отклоняться от средней линии, как разрез продвигается в направлении передней, потому что это ограничивает, кровотечение из paraspinal мышц. Периодические пальпация для остистого отростка способствует улучшению. Самостоятельно сохранение втягивающих устройств Weitlaner, Meyerding или Gelpi могут быть размещены и перемещать при необходимости для облегчения вскрытия. Всасывания используется для сохранения видимости.
3. Вскрыть подкожной клетчатки и жира с помощью монополярной электрохирургии, пока не будет достигнуто грудо фасции. Ощупывайте остистого отростка глубоких в грудо фасции и вырезать фасции вдоль средней линии подвергать надостной связки, охватывающих между остистых отростков.
   Примечание: Грудо фасции идентифицируется как организованные, апоневротической оболочка с соединительной ткани зерна, который переплетает в косой, боковые медиального направлении. На данный момент, разрез может быть продлен в либо вышестоящее или уступает направлении для обеспечения полностью видны 3 остистого отростка с пища остистого отростка, выровнены в центре поля диссекции.
4. Использовать лезвие #15 поставить 2-мм глубокая парасагиттальных разрез через надостной связки кзади каждого остистого отростка. Место каждого разреза вдоль левой трети задняя поверхность остистого отростка.
5. Осторожно отпустите надостной связки на каждом уровне вдоль каждой incконцепции, с помощью 5-мм Фрир Лифт.
6. Идентифицировать Поднадкостничный плоскости и вскрыть в этой плоскости вдоль боковой поверхности каждого остистых процесса.
7. Выполнять Поднадкостничный рассечение на каждом остистого отростка в параллельной моды для обеспечения того, чтобы нежные, достигается даже диссекции.
8. Надрезать вложение paraspinal мышцы вдоль межостистой пространств, с помощью монополярной электрохирургии в концерте с Поднадкостничный диссекции.
9. Определить пластинки на каждом уровне и продолжают Поднадкостничный рассечение боково достичь боковые границы 2 zygapophyseal суставов, которые соединяют 3 подвергается позвонок и достичь бокового края пластинки между суставами, называется Парс interarticularis.
   Примечание: Pars interarticularis является задняя граница межпозвонковых отверстий, где проживает DRG. Иногда мелких вен возникает из отверстия, расположенные на задней поверхности пластинки. Эти Вены имеют тенденцию к разрыву во время Поднадкостничный рассечение. Гемостаз легко достигается с помощью комбинации биполярной электрохирургии и кости воск применяется к отверстия.

6. Одного уровня ламинотомия

1. определить цель ламинотомия как пища пластинки расположен между и медиальнее 2 zygapophyseal суставов.
2. След пластинки его нижнего края, до точки просто медиальнее смежных нижнего суставного процесса хвостового zygapophyseal сустава.
3. Использовать 5-мм Фрир Лифт или кюретка, чтобы пальпировать переход между caudalmost края пластинки и Центральный канал.
   Примечание: Осторожность не заставить palpating инструмент передней, как это будет связаться с дурального мешка и спинного мозга. Обратите внимание, что спинной мозг в свином расширяет мимо поясничного отдела позвоночника ¹⁸. Межпозвонкового диска rongeur может использоваться для удаления дополнительных мягких тканей, обволакивающие этой области для содействия пальпацию.
4. Использование 2-мм вверх кусаться, 45-градусная Керрисон rongeur для извлечения костей в кусочно моды. Удаление кости вдоль основания остистого отростка главно до уровня просто каудально к хвостовой поверхности ножке и вне боково в полной мере.
5. Использование угловой кости rongeurs для оказания помощи с удаления костей. Оставьте нижнего суставного процесса, который был подключен к пластинки на месте до тех пор, пока в основном завершено ламинотомия.
6. Подтверждают, что нижнего суставного процесса является свободно мобильных и придает только по zygapophyseal капсулы сустава. Надрезать капсула с помощью #15 и #11 лезвие.
7. Удалить нижнего суставного процесса в кусочно моды, но затрагивает смежные улучшенные суставного процесса.
   Примечание: Как ламинотомия завершена, гемостаз выполняется с биполярной электрохирургии. Монополярная электрохирургии не используется из-за близости нейронных структур. Воск кости могут быть размещены вдоль сайты кровотечения из подвергаются кости и рассасывающиеся желатин губки могут использоваться для получения гемостаза у мягких тканей. Cottonoid является полезным инструментом для фитиля Серозная жидкость и кровь от рассечения.

7. Рассечение DRG

1. откачать эпидуральной жира в кусочно моды от поверхностного глубокой начало медиально и латерально исходя. Удалить жир, нежный диссекции с помощью биполярного пинцета и всасывания всасывания кончиками французский Фрейзер 6-10.
   Примечание: Увеличение лупы или использование микроскопом рассечения полезен в предоставлении уровень детализации, необходимо безопасно эвакуировать эпидуральной жира и достижения тщательного гемостаза эпидуральной венозного сплетения, с помощью биполярного электрохирургии.
2. Идентифицировать дурального мешка вдоль средней линии, в superoinferior направлении, параллельном оси разрез кожи. Удалить эпидуральной жир вдоль дурального мешка до тех пор, пока дурального мешка можно увидеть привести к корень рукав дурального нерва.
3. Отслеживать дурального рукава боков и книзу, эпидуральной жировой эвакуации пока не видно, чтобы увеличить вокруг DRG.
   Примечание: Определение DRG для его овальной формы и желтого до оранжевого цвета. В середине поясничного отдела позвоночника DRG является обычно 4-6 мм, длинной в медиальной боковой направлении и расположен непосредственно подчиненного или 2-3 мм медиальнее своих соответствующих ножке. Крючок тупым, прав-angled нерва может использоваться для осторожно ощупывать для ножке.
4. Эвакуировать эпидуральной жира боков, мимо DRG, до тех пор, пока видел прилегающих спинного нерва.
   Примечание: Если durotomy возникает, починить водонепроницаемые закрытия с помощью швом нейлона 6-0 и гладкой микро иглы водителя в простой запуск Стич.

8. Инъекции DRG

1. использования 22-го калибра спинальной иглы для руководства Траектория иглы расширенной доставки (КНИ) 32-калибруйте конвекции. Прокол иглой 22-го калибра руководство через кожу и paraspinal мышцы.
   Примечание: CED Игла предназначена для достижения конвекции жидкости в тканях, также известный как объемного потока, из-за давления градиенты ^{19 , 20}.
2. Целью руководство иглы вдоль траектории, что приближается к продольной оси DRG и приводит в кончик иглы, возникающих от стены боковых paraspinal поля, рассечение.
3. Изобразительных настроить иглы путь до тех пор, пока игла люмен выравнивает по центру DRG.
   Примечание: Иглы руководство должно никогда не будет позволено связаться DRG.
4. Составить стерильные injectate в стерильный шприц и подключить шприц для стерильных инфузионных труб.
5. Безопасный труб CED иглы и руки шприц из стерильных поля. Подключите шприц к программируемым шприцевый насос.
   Примечание: Трубы готовы длиной 5 футов для сохранения стерильности и мобильность. Кроме того, это чрезвычайно важно включить в решение без воздушных пузырей.
6. Заранее injectate до тех пор, пока выражение видно из кончик иглы CED.
7. Место CED иглы в Люмене руководство иглу и медленно заранее CED иглы, до тех пор, пока она вытекает из кончик иглы руководство. Убедитесь, что DRG не пробили во время выравнивания иглы.
8. Изобразительных настроить положение иглы руководство вдоль длинной оси его траектории для определения окончательного местоположения кончик CED.
9. Обеспечить руководство иглы и КНИ иглы, вместе с помощью взаимосвязанных узлов иглы, достижении глубины и выравнивание руководстве и КНИ иглы.
10. Убедитесь, что все соединения инъекции аппарат полностью обеспечены, включая руководство иглы, CED иглы, и подключенные труб загружен с injectate.
11. Заранее гид иглу вдоль его длинной оси для приближенного CED кончик иглы и DRG.
12. Пункции DRG с кончик иглы CED.
13. Погружать кончик иглы КНИ в трехмерной центр DRG.
    Примечание: потому что DRG трехмерную структуру переменного размера и формы, DRG выдержка должна быть полной для того, чтобы точно поместите кончик иглы КНИ в настоящий центр DRG. Истинный DRG центр расположен на пересечении ее три анатомические осей, а именно, передней к задней, боковые до медиальной и превосходит уступает осей.
14. Доставить 100 мкл injectate, КНИ, используя окончил курс и объем 3 шагов.
15. Доставить 4 мкл на 2 мкл/мин для первого шага. Доставить 8 мкл в 4 мкл/мин на втором шаге. Доставить 88 мкл 8 мкл/мин для третьего и заключительного шага.
    Примечание: Разрешить 3-мин паузу между шагами и после последний шаг, чтобы позволить для уравновешивания давления.
16. Снять инъекции аппарат после окончательного инъекции шаг и пауза 3-мин вдоль длинной оси в движение, гладкой, нежной.
    Примечание: Вводят решений, которые бесцветны, цветной краситель входит в растворе в концентрации 0,1% вес/объем для оказания помощи в визуальной оценки распределения injectate ¹². Кроме того, жизненно краситель 4 ', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) включен в решение в концентрации 0,25 мкг/мкл, когда дизайн исследования требует гистологического оценки injectate распределение ⁵.

9. Закрытие

1. Применить 3 раундов теплой соленой орошения хирургической сайта до закрытия для мобилизации и флеш сайт мусора, т.е. костных фрагментов. Для восстановления физиологического раствора и мусора использовать всасывания.
   Примечание: Тщательный гемостаз обеспечивается при ирригации остается ясным. Кровоостанавливающие препараты (желатина Губка) и cottonoid удаляются в это время. Убедитесь, что все материалы и инструменты были удалены из узла разрез до закрытия.
2. 3-х слойный метод использовать для закрытия.
3. Шов грудо фасции, с помощью 0 шва в простой, прерванные, noninverted моды. Место Стич каждые 5-8 мм для достижения герметичность закрытия.
4. Шов, подкожной клетчатки, используя швом 2-0 в простой, прерванные, Перевернутый моды с стежок помещены каждые 5 - до 8-мм для достижения достаточной прочности.
5. Закройте кожи, с помощью 0 шва в простой, работает или прервана моды.
6. Иглы счетчик используется для обеспечения того, чтобы не Шарпс неучтенной for.
7. Орошения кожи с соленой, сухой кожи и помещать пластырь полоски перпендикулярно разрез.
8. Место поверх Повязки марлевые полоски и придают окончательный клей антимикробной надрезать пелерина.

10. Послеоперационный уход животных

1. экстубаций, накрыть теплые одеяла и транспортировки животного для восстановления.
2. Следовать стандартным институциональных оперативные процедуры для послеоперационного мониторинга и восстановление после хирургии выживания. Как минимум, наблюдать животных каждые 15 мин до возвращения сознания, почасовая, пока не будет достигнуто полной анестезии восстановления и два раза в день после этого.
3. Предоставляют послеоперационные боли управления управляющей IM или устные carprofen, на 4 мг/кг, один раз в день на 5 дней, начинающийся послеоперационный день 0. Администрировать SC бупренорфин SR, учитывая на 0,18 мг/кг, один раз на послеоперационный день 2.
4. Администрирование послеоперационные антисептического, давая им Цефтиофур, учитывая на 5 мг/кг, один раз на послеоперационный день 4.
5. Снять повязку на послеоперационный день 5-7. Удаление швов после заживления ран, обычно на послеоперационный день 10-14.
6. Гуманно усыпить животных согласно институциональных стандартные оперативные процедуры по достижении конечной исследования.

Результаты

Гистологический оценки распространения injectate
Успешной доставке injectate к DRG определяется гистологических оценки DAPI распространения. Этот метод предполагает, позиционирование кончик иглы в центре трехмерной DRG. Таким образом успешной доставки определяется путем оценки степен...

Обсуждение

Мы стремились описать метод хирургического воздействия DRG через ламинотомия и intraganglionic инъекции в здоровых крупных видов животных, в частности, свиней. Грызунов подобный метод был подробно ¹² и используются для предоставления обычных фармакологических агентов

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
Large humane animal sling	Britz & Company	002539	Modified to include abdominal aperture
Adhesive patient return electrode - 9 inch	Medtronic	E7506	-
Ranger blood & fluid warming system	3M	24500	-
Lactated Ringer's fluid	Hospira	0409-7953-09	-
Force air warming device	3M	77500	-
Duraprep solution with applicator, 26 mL (0.7% iodine povacrylex, 74% isopropyl alcohol)	3M	8630	-
Sterile disposable surgical towels	Medline	MDT2168286	-
Ioban 2 incise drape	3M	6651EZSB	-
Disposable suction canister and tubing	Medline	DYND44703H	-
Button switch electrosurgical monopolar pencil	Medtronic	E2450H	-
Fine smooth straight bipolar electrosurgical forceps, 4 1/2 inch	Bovie	A826	-
#15 blade	Miltex	4-315	-
#11 blade	Miltex	4-311	-
4 x 4 surgical gauze	Dynarex	3262	-
Weitlaner self-retaining retractor, 8 inch	Miltex	11-618	-
Meyerding self-retaining retractor, 1 x 2 3/8 inch	Sklar	42-2078	-
Gelpi self-retaining retractor, 7 inch	Sklar	60-6570	-
Freer elevator, 5 mm	Medline	MDS4641518F	-
Bone wax	Ethicon	W31G	-
Spurling intervertebral disc rongeur, 3 mm	Sklar	42-2852	-
Spurling 45-degree, up-biting Kerrison rongeur, 2 mm	Medline	MDS4052802	-
Leksell angled rongeur, 2 mm	Sklar	40-4097	-
Gelfoam, size 50	Pfizer	AZL32301	-
Cottonoid patty	Medtronic	8004007	-
Frazier suction tip, 6 Fr	Sklar	50-2006	-
Frazier suction tip, 10 Fr	Sklar	50-2010	-
Dandy blunt right angle nerve hook	Medline	MDS4005220	-
Nylon suture, 6-0	Ethicon	697G	-
Castroviejo smooth micro needle holder	Medline	MDG2428614	-
22 gauge Quinke point spinal needle	Halyard Health	18397	-
32 gauge CED needle with locking Luer hub	See comments	n/a	As in: Pleticha, J., Maus, T.P., Christner, J.A., Marsh, M.P., Lee, K.H., Hooten, W.M., Beutler, A.S. Minimally invasive convection-enhanced delivery of biologics into dorsal root ganglia: validation in the pig model and prospective modeling in humans. Technical note. J Neurosurg. 121(4), 851-8 (2014).
Polyethylene tubing, 5 feet	Scientific Commodities	BB31695-PE/05	-
Monoject syringe, 3 mL	Kendall	SY15352	-
NanoJet syringe pump	Chemyx	10050	-
DAPI	Sigma-Aldrich	D9542	-
Fast Green FCF	Sigma-Aldrich	F7252	-
Bulb irrigation syringe	Medline	DYND20125	-
Fine-toothed Adson forceps	Medline	MDS1000212	-
Vicryl suture, 0	Ethicon	J603H	-
Vicryl suture, 2-0	Ethicon	J317H	-
Needle counter	Medline	NC20FBRGS	-
Steri-strip skin closure, 1/2x4 inch	3M	R1547	-